Бактериологическое исследование на аэробную микрофлору мочи для чего

Посев на флору и восприимчивость антибиотиков – исследование, которое позволяет выявить степень инфицирования органов мочеполовой системы.

Посев мочи на флору представляет собой анализ по методу микробиологического исследования мочи под микроскопом. Его принято собирать при диагностированных воспалительных заболеваниях с подозрением на инфекционную природу. Суть посева мочи на флору заключена в выявлении микроорганизмов и установлении четкой связи их присутствия с развитием болезни. Изучению подвергаются:

• Виды выявленных бактерий, микробов и другой микрофлоры;
• Концентрация их по отношению к общему объему жидкости;
• Восприимчивость выделенных микроорганизмов к воздействию антибиотиков.

Последний пункт актуален если выявлены микроорганизмы с патогенными свойствами.

Бак посев мочи при воспалениях мочеполовых органов чаще всего обнаруживает:

• Стрептококки;
• Стафилококки;
• Coli – эшерихии;
• Протей;
• Клебсиеллы;
• Энтерококки;
• Кандиды.

Бак посев мочи на флору, как промежуточную процедуру контроля терапии, проводят только на 5-7 день с момента последнего приема антибиотиков.

Анализ мочи общий лабораторный, а также бак посев – процедуры, которым нет альтернативы при диагностировании инфекций мочеточников, а особенно мочевого пузыря. В нормальной ситуации весь тракт мочевыделения, от почек и до уретры, не содержит бактерии – моча стерильна. Если все – же, в ней выявляется некоторое количество микроорганизмов, это можно объясниться их попаданием в урину с наружных половых органов. Нередко наружная микрофлора проникает также в уретру, поэтому исследование, практически всегда, показывает положительный результат. Однако это вовсе не говорит о каком-либо заболевании. Если же обнаруживают опасное количество микроорганизмов, говорят о бактериурии. Один из явных признаков бактериурии – явное преобладание в урине какого-то одного вида бактерий, если же видов несколько то, вероятно, произошло засорение образца внешней инфекцией с кожи. В связи с этим, довольно часто, проводят повторное исследование для уверенности в корректности его результатов. Подсчет количества микроорганизмов принято проводить в пробе мочи объемом 1 мл.

В особых ситуациях, если есть сомнения в результатах анализа серединной пробы мочи, и при невозможности определить клиническую картину болезни четко и однозначно, прибегают к взятию пробы урины путем надлобковой пункции. Такой метод применяют также при обнаружении полимикробного заражения.

Главное условие достоверного результата – стерильность образца, поэтому следует серьезно отнестись к правилам подготовки образца исследования:

• Емкость должна быть стерильной и плотно закрывающейся;
• Перед сдачей пробы, пациент должен провести туалет наружных половых органов, и дезинфекцию наружных тканей уретры. Это можно сделать теплой водой без антибактериальных средств.
• Для анализа нужна серединная порция мочи – сначала, на протяжении пары секунд спускают мочу в унитаз, и только затем, набирают необходимое количество для бака посева;
• Набрав нужный объем жидкости, контейнер плотно закрывают, избегая при этом касания пальцами внутренних ее стенок и, отправляют в лабораторию.

Для этого исследования принято брать утреннюю мочу, но можно брать пробу и на протяжении дня. В этом случае обязательно соблюдать правило – брать мочу на анализ можно не ранее, чем через два, три часа с момента предыдущего мочеиспускания. Достаточной, считается порция мочи от 5 до 10 мл.

Если есть подозрения на туберкулез, анализ проводят утром на протяжении трех дней кряду.

Если у пациента стоит катетер, медработник проводит его перекрывание путем зажимания пинцетом, затем стерилизацию медицинским спиртом и с помощью иглы проводят отбор нужного количества мочи (4 мл) для бак посева, после чего, сливают в контейнер и отправляют в лабораторию.

Обязательно проследите, чтобы на бланке, сопровождающем пробу, помимо фамилии и имени, были указаны – время отбора пробы, метод, который при этом использовали, а также предполагаемый диагноз и данные о принимаемом лечении.

Уровень развития бактериурии определяют по показателю КОЭ – количество образующих бактериальные колонии единиц на один мл жидкости.

Согласно мнению авторитетных микробиологов, результаты бак посева мочи трактуют так:

• Этиологически значимым, выявленный возбудитель, считается, даже, если не наблюдаются четкие клинические симптомы заражения мочеточных путей при показателях КОЕ более 10 5 на мл исследуемой жидкости. Это относится как к монокультуре, так и к титру;
• При явно выраженных симптомах цистита, уретрита и инфекционного поражения мочевых путей, особенно верхних его отделов КОЕ считаются этиологически значимым при его показателях от 10 2 на 1 мл. Это же относится к ситуациям исследования во время антимикробного курса процедур;
• Выявление двух микроорганизмов при инфекционных процессах мочевыводящих путей при условии хронического их протекания, этиологически значимыми принимают значения КОЕ более 10 5 на 1 мл если выделенные микроорганизмы не принадлежат к группе контаминантов;
• Исследование проводят повторно, если выделены 2 и более видов микроорганизмов – КОЕ в титрах 10 4 на 1 мл. Такие показатели могут быть вследствие засорения пробы сторонней микрофлорой.

Альтернативные методы исследования оценивают 10 3 -10 5 КОЕ одного вида как бактериурию или высокую ее вероятность, а КОЕ менее 10 3 на мл принимают за ложноположительный результат, говорящий о загрязнение пробы. Для женщин значения КОЕ 10 2 на 1 мл принимают значимым свидетельством бактериурии, при условии дизурического синдрома острого характера.

Касаемо достоверности полученных результатов исследования одной пробы, статистика показывает – при соблюдении правил отбора пробы для анализа, такая вероятность для женщин около 80% и приближающаяся к 100% у мужчин. Бак посев, проведенный два-три раза, существенно увеличивает степень достоверности результата, вплотную приближая ее к 100%.

Основные ошибки, приводящие к недостоверным результатам:

• Игнорирование правил подготовки к анализу и отбора пробы;
• Игнорирование влияния медикаментозной антимикробной терапии, если таковая имеет место;
• Несоблюдение правил хранения образца и несвоевременная его доставка в лабораторию. Длительное, более 1 – 2 часов хранение мочи в теплом месте, приводит к активному размножению комменсалов и скудному росту патогенов, что кардинально искажает результаты исследования.

Посев мочи на флору проводят для определения вида микроорганизмов, степени их размножения и выбора препаратов для борьбы с ними. Такие исследования применяют также для контроля обсемененности урины после проведенной катетеризации.

источник

Анализ мочи на бакпосев (бактериологическое исследование) используется для обнаружения в моче бактерий, подбора антибактериальных препаратов и контроля лечения инфекционно-воспалительных заболеваний органов малого таза.

Для постановки диагноза обычно используются данные не только бакпосева мочи, но и других исследований, а также учитываются клинические признаки патологии.

Инфекционно-воспалительным процессам в мочевыводящих путях свойственно рецидивирующее течение с высокой вероятностью развития осложнений. Чаще всего поражаются мочеиспускательный канал и мочевой пузырь, нередко инфекция распространяется на мочеточники и почки. Исчезновение клинических признаков острой бактериальной инфекции в мочевыводящих путях нередко говорит не о выздоровлении, а о хронизации процесса, т. е. переходе его в вялотекущую хроническую форму. Воспаление и бактериурия (наличие бактерий в моче) при этом сохраняется, что помогает выявить бакпосев мочи.

В норме в мочевыводящих путях микроорганизмы отсутствуют, исключение составляет только дистальный отдел уретры, который заселен микрофлорой с кожных покровов промежности (у женщин также из вульвы).

95% всех воспалительных заболеваний органов малого таза вызвано микроорганизмами. Возбудителями инфекции мочевыводящих путей обычно являются кишечная палочка (Escherichia coli), клебсиелла пневмонии (Klebsiella pneumoniae), синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa), цитробактер (Citrobacter), протей мирабилис (Proteus mirabilis), серрация (Serratia). Кроме того, инфекционными агентами становятся стафилококки (S. epidermidis, S. aureus, S. saprophyticus), стрептококки (S. pyogenes), микоплазма (Mycoplasma) и пр. При некомпенсированном сахарном диабете в мочевых путях часто обнаруживаются микроскопические грибы рода Candida.

Инфекциям мочевыводящих путей способствуют патологии, при которых нарушается отток мочи, а также системные заболевания. У детей, лиц преклонного возраста и ослабленных пациентов инфекционный процесс нередко протекает в латентной форме или имеет неспецифические проявления (нарушение пищеварения, потеря веса и пр.).

Для сбора мочи на бакпосев не следует пользоваться стеклянными банками, бытовыми пластиковыми емкостями, нельзя использовать нестерильные одноразовые контейнеры.

Для определения возбудителя проводится бактериальный посев мочи. Направление на исследование обычно выдает терапевт, уролог, акушер-гинеколог. При необходимости врач подробно объяснит, что такое анализ мочи на бакпосев, что показывает данное исследование, как собирать материал, сколько делается тест. Расшифровывать полученный результат должен только специалист.

В отличие от клинического анализа мочи, бактериологический анализ не проводится в профилактических целях, а назначается при наличии признаков инфекции мочевыводящих путей. Поводом к назначению бактериального посева мочи может быть обнаружение бактерий или грибов при проведении общего анализа мочи. Кроме того, данное исследование обычно назначается пациентам с рецидивами цистита, паранефритом, пиелонефритом, хроническим уретритом, сахарным диабетом, а также при мониторинге состояния ВИЧ-инфицированных пациентов и пр. Анализ мочи на бакпосев относится к обязательным исследованиям, которые проводятся беременным, в 3–10% случаев определяется бессимптомная бактериурия.

Мочу для бактериологического анализа сдают до начала или через 7–14 дней после завершения антибактериальной терапии (контрольное исследование), если лечащим врачом не указаны другие условия.

Существует ряд правил подготовки к сдаче мочи для бактериологического исследования, соблюдение которых позволяет получить максимально достоверный результат.

За неделю до анализа из рациона рекомендуется исключить соленую, острую и жирную пищу, а также спиртные напитки.

При острых инфекционно-воспалительных процессах обычно выделяется монокультура на фоне бактериурии высокой степени, а при хронических – ассоциации микроорганизмов на фоне бактериурии низкой степени.

Женщинам не следует сдавать мочу на бакпосев во время менструации и еще двое суток после ее окончания, так как менструальные выделения, которые с высокой вероятностью могут попасть в собранный материал, повлияют на результат исследования. Также за два дня перед исследованием не рекомендуется использовать противозачаточные или лекарственные препараты в форме вагинальных суппозиториев. Перед взятием материала на анализ нельзя делать спринцевание.

Перед сбором мочи проводят тщательный туалет наружных половых органов без использования антибактериального мыла. Мужчинам для предотвращения контаминации мочи перед сбором материала рекомендуется тщательно промыть половой член и складку крайней плоти. Для исследования необходимо собрать среднюю порцию первой утренней мочи (то есть начальная и последняя порция спускаются в унитаз). Моча собирается в специальный стерильный одноразовый контейнер, который выдается в лаборатории перед проведением анализа или приобретается в аптеке. В некоторых лабораториях можно приобрести транспортную пробирку с консервантом (обычно с борной кислотой). Набирая мочу, не следует прикасаться к внутренней стенке контейнера.

Материал для бактериологического исследования у грудных детей собирают при помощи мочеприемника, который можно приобрести в аптеке, а потом переливают в стерильный контейнер.

Для сбора мочи на бакпосев не следует пользоваться стеклянными банками, бытовыми пластиковыми емкостями, так как обеспечить стерильность подобной тары в домашних условиях, как правило, не представляется возможным. Кроме того, нельзя использовать нестерильные одноразовые контейнеры.

Доставить в лабораторию материал необходимо не позднее двух часов после сбора.

В норме в мочевыводящих путях микроорганизмы отсутствуют, исключение составляет только дистальный отдел уретры, который заселен микрофлорой с кожных покровов промежности.

Основной задачей анализа является выявление в моче микроорганизмов и определение их этиологической роли. Во внимание принимается вид инфекционного агента, степень бактериурии, обнаружение микроорганизмов в повторных исследованиях и т. д.

Бактериальный посев мочи производится на питательные среды при помощи бактериологической петли, тампона или шпателя. В норме рост микроорганизмов отсутствует, признаки микробного роста говорят о наличии бактериальной инфекции в моче, т. е. бактериурии.

Степень бактериурии позволяет провести дифференциальную диагностику инфекционного процесса от контаминации урины нормальной микрофлорой. Так, бактериурия до 10 3 микробных клеток в 1 мл мочи обычно указывает на отсутствие инфекционно-воспалительного процесса и, как правило, определяется в случае контаминации урины, при бактериурии 10 4 результат является сомнительным и появляется необходимость в повторном исследовании, 10 5 и более – инфекционно-воспалительный процесс.

С целью контроля проводимой терапии оценивается изменение степени бактериурии, ее уменьшение свидетельствует об эффективности применяемых лекарственных средств. Однако при расшифровке анализа мочи на бакпосев следует учитывать, что в ряде случаев (при проведении антибактериальной терапии, низких значениях pH и/или удельного веса мочи, нарушенном пассаже мочи и пр.) низкая степень бактериурии может определяться и при наличии патологического процесса. По этой причине немаловажное значение имеет также идентификация обнаруженных в моче инфекционных агентов (повторное выделение бактерий одного вида, как правило, указывает на наличие инфекции).

В отличие от клинического анализа мочи, бактериологический анализ не проводится в профилактических целях, а назначается при наличии признаков инфекции мочевыводящих путей.

Диагностическое значение имеет выявление в моче монокультуры или ассоциации микроорганизмов. При острых инфекционно-воспалительных процессах обычно выделяется монокультура на фоне бактериурии высокой степени, а при хронических – ассоциации микроорганизмов на фоне бактериурии низкой степени.

Помимо выявления инфекционного агента при проведении анализа мочи на бакпосев может определяться чувствительность к антибиотикам выделенных штаммов микроорганизмов.

Для постановки диагноза обычно используются данные не только бакпосева мочи, но и других исследований, а также учитываются клинические признаки патологии.

Видео с YouTube по теме статьи:

источник

Заболевания мочеполовой системы по праву считаются бичом современной действительности, об этом красноречиво свидетельствуют статистические показатели. Так, различными воспалениями и инфекциями мочевыделительных и половых органов во всем мире страдает более 12% человек, в то время как один только цистит ежегодно поражает каждую пятую представительницу женского пола.

В 21 столетии выявление подобных отклонений уже не считается проблемой, ведь на страже людского здоровья находится ряд медицинских исследований – среди них почетное место занимает именно посев мочи на флору и чувствительность к антибиотикам (бакпосев). Такой тест является незаменимым помощником в попытке обнаружить мочеполовые болезни.

Более того, еще не разработан более достойный аналог, который позволял бы с высокой точностью идентифицировать как аэробные, так и анаэробные вредоносные микроорганизмы в моче. Первой группе микробов для полноценного размножения требуется кислород, а второй группе он вовсе не нужен.

В лабораторных условиях урина проходит несколько этапов исследования на пути к конечному результату:

1. К анализу мочи подготавливается несколько чаш Петри, в каждую из которых помещена определенная питательная среда. К более популярным диагностическим веществам относятся сахарный бульон, Сабуро, а также желточно-солевой, шоколадный, энтерококковый и кровяной агар.
2. Контейнер с биоматериалом вскрывается, затем с помощью стерильной бактериологической петли малое количество мочи наносится по определенной схеме на все выбранные ранее среды с предварительным прокаливанием прибора между перерывами.
3. Все пробы, располагающиеся в специальных сосудах, прикрываются крышками и помещаются на некоторое время в термостат – аппарат, способствующий поддержанию постоянной температуры.
4. После этого осуществляется визуальный осмотр содержимого чаш Петри: в зависимости от того, на какой питательной среде образовались колонии анаэробных микробов, делается вывод об их разновидности. Например, шоколадный агар создает благоприятный микроклимат для разрастания гемофильной палочки.
5. Происходит детальное изучение инородных «поселенцев» в урине с уточнением их формы, внешнего вида (включая наличие жгутиков), цвета, размера, способности к окрашиванию и пр.
6. Заполняется бланк в соответствии с полученными в ходе исследования мочи данными.

Очень часто при обнаружении патологических микроорганизмов специалисты проводят и анализ мочи на чувствительность данных чужаков к ряду антибиотиков. Это означает, что разросшиеся в питательном веществе колониальные бактерии будут соединяться с отдельными противомикробными препаратами вроде Оксациллина и Клиндамицина, наблюдая за реакцией.

Далее в результирующую таблицу внесутся сведения, которые позволят оценить представленные антибиотики на предмет их эффективности при борьбе с возникшей инфекцией или воспалением мочеполовой системы. В бланке микробиологического исследования мочи напротив каждого наименования препаратов устанавливается одна из трех букв – R, I и S.

Первая литера указывает на устойчивость к антибиотику, вторая – на устойчивость умеренного типа, а третья – на чувствительность по отношению к используемым средствам с антимикробным действием. И также в случае необходимости лаборанты могут провести анализ мочи на чувствительность микроорганизмов к бактериофагам. Речь идет о своеобразных ручных вирусах, призванных ликвидировать вредоносную флору.

В итоге подобные данные могут оказать значительную помощь лечащим докторам в формировании конкретного плана лечения. Посев мочи на флору и чувствительность к антибиотикам позволяет обнаружить дрожжевые грибки (кандиду), простейших паразитов (трихомонаду), а также множество бактерий, среди которых:

• хламидия;
• спирохета;
• стафилококк;
• эшерихия коли (кишечная палочка);
• микоплазма;
• лактобактерия;
• бацилла Коха;
• стрептококк;
• гонококк;
• клебсиелла;
• протей;
• энтерококк фекальный;
• сальмонелла;
• клостридия;
• лептоспира;
• коринебактерия;
• синегнойная палочка;
• цитобактер фреунди;
• бактерия Моргана.

На самом деле, список выявляемых в моче микроорганизмов более обширен, однако на вышеперечисленных представителей мира микробов приходится большая часть заболеваний. Умеренное содержание лактобактерий в моче никак не вредит организму, наоборот, данные бациллы принимают активное участие в расщеплении холестерина, купировании инфекций (например, вагиноза) и канцерогенов.

А вот переизбыток лактобактерий нередко провоцирует кандидоз (молочницу). Нужно упомянуть о том, что бакпосев мочи направлен преимущественно на поиск аэробных (развивающихся при поступлении кислорода) бактерий, а анаэробы, в свою очередь, выискиваются специалистами факультативно (избирательно).

Забор мочи на флору рекомендуется проводить людям с характерными признаками воспалительного или инфекционного поражения органов мочевыделения и половой системы.

• частые позывы к мочеиспусканию;
• отечность конечностей;
• ложное ощущение наполненности мочевого пузыря;
• постоянная одышка;
• кровянистые или творожистые сгустки в моче;
• поясничные боли;
• повышенное артериальное давление;
• низкий уровень работоспособности;
• апатия;
• головная боль;
• острая резь, зуд и жжение во время опорожнения мочевого пузыря;
• попадание в мочу гнойных включений и хлопьев неизвестного генеза;
• высокая температура;
• резкий запах при мочеиспускании;
• появление папул (мелких узелков) на внешних половых органах, а также их покраснение;
• тошнота;
• помутнение мочи;
• головокружение.

Многие пациенты с соответствующим диагнозом наряду с данными нарушениями самочувствия испытывают слабость во всем теле, разбитость и хроническую усталость.

Показаниями к анализу мочи на микрофлору также служат:

• ВИЧ;
• эндокринные нарушения (сахарный диабет);
• мочекаменная болезнь;
• планирование беременности и вынашивание ребенка;
• подозрение на развитие инфекций (микоплазмоза) и воспалений (цистита, пиелонефрита);
• сомнительные результаты общего анализа мочи;
• уточнение поставленного ранее диагноза относительно недугов, которые были вызваны микробами;
• необходимость комплексного обследования перед хирургическим вмешательством на органах мочевой системы;
• серьезные сбои в иммунных реакциях организма;
• предполагаемая устойчивость вредных микроорганизмов по отношению к используемым антибиотикам;
• рецидив воспалительного процесса в мочеточниках, почках, уретре, простате и мочевом пузыре.

Благодаря данной диагностике мочи уточняется эффективность методики лечения патологий мочеполовых органов. При необходимости назначенная терапия корректируется. В процессе наблюдения за состоянием пациента во время борьбы с воспалительными очагами лечащий врач может выдать направление на посев более 2–3-х раз.

Исследование мочи на флору предполагает 3 варианта итоговых результатов:

Таблица с обозначением чувствительности к некоторым антибиотикам прилагается только в 3-ем случае. Иногда в бланках указывают абсолютно все обнаруженные микробы вне зависимости от их концентрации в моче, однако в итоговой графе все-таки будет фигурировать четкий диагноз. В ряде медицинских лабораторий прописываются только те бактерии, которые наносят существенный урон здоровью, а неопасные организмы остаются «за бортом».

Посев мочи на микрофлору способен распознать самые распространенные бактериологические болезни. В их рядах:

• цистит;
• простатит;
• вагинит;
• гломерулонефрит;
• уретрит;
• пиелонефрит;
• уретерит (воспаление мочеточников);
• молочницу;
• уреаплазмоз;
• гонорея
• бактериальный сепсис;
• туберкулез почек или мочевого пузыря;
• сальмонеллез;
• хламидиоз;
• трихомониаз;
• дифтерия;
• сахарный диабет.

Если одновременно с микробами в моче проявились лейкоциты при проведении общего анализа, тогда можно обнаружить аномалии почек:

• интерстициальный нефрит (воспаление почечной волокнистой ткани и канальцев без нагноения);
• нефросклероз (деформация почки из-за патологического перерождения её паренхимы в плотную соединительную ткань);
• атероэмболия почечных артерий (закупорка артериол).

Если на то имеются веские основания, назначить диагностику могут преимущественно нефрологи, урологи, гинекологи, инфекционисты, фтизиатры и гастроэнтерологи. Терапевты и педиатры тоже достаточно часто направляют пациентов по показаниям на анализ мочи.

Для того чтобы анализ мочи на флору показал достоверные результаты требуется ознакомиться с некоторыми правилами по подготовке урины к диагностике. К сожалению, некоторые люди игнорируют их, и зря, ведь если собрать материал неправильно, то в итоге параметры получатся искаженными.

Итак, наиболее важные положения:

• Крайне необходимо обеспечить стерильность тары, которую предполагается наполнить мочой. Лучше приобрести в аптеке чистый пластмассовый стаканчик, предназначенный как раз для анализов, нежели применять не столь чистые баночки из-под солений и детского питания, тубы из-под косметики и пр.
• До взятия биоматериала следует подмыться, не используя никаких отваров, мыльных эмульсий и антибактериальных средств.
• Нужно осуществлять процедуру, предварительно вымыв руки. После снятия с контейнера крышки в емкости должна оказаться средняя часть мочи (первая и третья пропускаются). Минимальный объем жидкости составляет 10 мл.
• В процессе наполнения сосуда стоит следить за тем, чтобы не произошло контакта между кожей внешних половых органов и краев стаканчика. Далее тара плотно закупоривается крышкой без прикосновений с внутренней стенкой флакона.
• Емкость требуется донести до пункта назначения максимум за 2 часа.

Во время подготовки к посеву мочи на флору следует все-таки отдавать предпочтение утренней урине. Если заполучить её вовремя не получается, то можно собрать и дневную порцию биоматериала. В таком случае учитывается один нюанс – с последнего опорожнения мочевого пузыря должно пройти не менее 2-х часов.

В течение 2-х недель в организм не должны поступать диуретики и антибиотики, так как они сильно деформируют показатели диагностики. На протяжении недели из рациона искореняются алкоголесодержащие напитки, а красящую еду вроде свеклы стоит исключить за 2–3 дня до посещения медиков.

Женщинам не рекомендуется проходить анализ мочи при менструации. Подобное явление значительно осложняет процесс объективного исследования биоматериала. Накануне бакпосева следует воздержаться от интимной близости, а также применения спринцовок и вагинальных свеч. Если ранее имело место быть прохождение цистоскопии, то посев мочи на флору необходимо назначать минимум на 6–7-й день после первой диагностики.

Теперь кратко о факторах, влияющих на объективность теста урины. Ложные результаты часто объясняются такими причинами:

• пренебрежительное отношение к подготовительному этапу (несоблюдение правил интимной гигиены или использование нестерильной емкости);
• употребление антибиотиков незадолго до процедуры;
• несвоевременная доставка биоматериала в лабораторию;
• передержка изучаемой жидкости в термостате;
• допущенная со стороны лаборантов ошибка при работе с питательными средами или интерпретацией показателей.

Следовательно, вина за недостоверные результаты может возлагаться как на пациентов, так и на самих медиков. Для того чтобы избежать подобного казуса, в сомнительных случаях и проводится повторный посев мочи на флору и дополнительные исследования.

Цена анализа мочи напрямую зависит как от географического расположения лабораторных центров, так и от комплектации самого исследования. В таблице приведены примерные показатели стоимости данной медицинской услуги:

Немалая часть коммерческих лабораторий предлагает оплачивать анализ мочи на конкретный микроорганизм отдельно, например, ценник бакпосева на стафилококк приравнивается приблизительно к 220–310 рублям.

А вот современная методика по автоматическому посеву мочи, предполагающая расширенную антибиотикограмму и идентификацию микробов за счет применения Масс-спектрометрии, по стоимости может превышать 2000–2500 рублей в зависимости от используемых аппаратов. На подготовку результатов бактериологической диагностики обычно уходит от 2–3-х до 7–8 дней. Иногда ждать итоговых показателей приходится порядка 10–12 дней.

источник

Бактериологическая диагностика анаэробной инфекции. Принципы забора материала на исследование. Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам. Выделение чистой культуры анаэробной бактерии. Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам.

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Размещено на http: //www. allbest. ru/

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кемеровская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Бактериологическое исследование на анаэробные бактерии и чувствительность к антибиотикам

Науменко Николай Петрович

1. Бактериологическое исследование

1.2 Принципы забора материала на исследование

1.3 Метод выделения чистой культуры анаэробной бактерии

1. Бактериологическое исследование

• бактериологический анаэробный инфекция антибиотик

Бактериологическое исследование — совокупность методов, применяемых для обнаружения и установления природы бактерий, выделенных от больных, бактерионосителей или из объектов окружающей среды. Б. и. проводят с диагностической целью при инф. болезнях, а также при обследовании на бактерионосительство и определении сан.-гиг. состояния объектов окружающей среды.

Для бактериологического исследования определяется целью исследования, биологическими свойствами микробов, условиями обитания их в исследуемом объекте, патогенезом заболевания (с учетом места наибольшей концентрации возбудителя и путей его выведения из организма).

Так, при сепсисе или болезни, сопровождающейся бактериемией (напр., прибрюшном тифе), для обнаружения возбудителя берут кровь, при дизентерии — испражнения, при пневмонии — мокроту, при подозрении на анаэробную инфекцию — материал из глубоких слоев тканей и т. д. Успех бактериологического исследования в значительной степени зависит от правильности взятия материала и соблюдения определенной осторожности при его транспортировке. У больного материал для исследования рекомендуется брать до начала лечения химиотерапевтическими препаратами!

1.1 Бактериологическая диагностика анаэробной инфекции

Анаэробные микроорганизмы, являясь представителями нормальной микрофлоры, в то же время они имеют потенциальные способности для развития инфекционного процесса практически в любом органе. Вследствие разных причин, например, при длительной терапии иммунодепрессантами, антибиотиками, а также в результате травмы, хирургического вмешательства, эти микроорганизмы попадают в кровяное русло, брюшную полость, различные органы и ткани и становятся причиной тяжелых гнойно-воспалительных процессов, сопровождающихся высокой смертностью, особенно при анаэробном сепсисе.

Важную роль анаэробы играют при развитии осложнений после хирургических вмешательств. В амбулаторной практике анаэробные инфекции с большой частотой встречаются у стоматологических, гинекологических больных, у женщин с отягощенным акушерским анамнезом.

Анаэробы являются участниками гнойно- воспалительных процессов, возникающих во всех отделах генитального тракта женщин. Их выделяют как единственного возбудителя или в составе ассоциации с аэробами при таких распространенных заболеваниях, как вагинит, вагиноз, послеродовый эндометрит. Установлена этиологическая роль анаэробов при возникновении воспалительных заболеваний придатков матки и околоматочного пространства, которые часто являются следствием абортов, инструментальных диагностических мероприятий, применения внутриматочных спиралей, хирургических вмешательств. Анаэробы также играют важную роль при возникновении пародонтоза — воспалительного процесса в тканях, прилегающих к зубам. По данным ВОЗ, около 95% взрослого населения планеты и 80% детей имеют признаки пародонтоза. Воспалительный процесс в тканях десны изначально возникает из-за массивных микробных скоплений и выделяемых ими ферментов и токсинов.

Бактериологическая диагностика при подозрении на анаэробную инфекцию весьма актуальна поскольку позволяет назначить наиболее эффективное лечение.

1.2 Принципы забора материала на исследование

Материал для исследования следует брать по возможности до начала химиотерапии и лучше во время вскрытия или дренирования гнойного очага.

Особенно актуально проведение бактериологического анализа при неэффективности антимикробной терапии и при неблагоприятном течении заболевания и возникновении осложнений.

Отбор проб клинического материала при подозрении на анаэробную инфекцию и транспортировка этих образцов в бактериологическую лабораторию имеет ряд трудностей, связанных с необходимостью избежать агрессивного действия кислорода воздуха на строгие анаэробы.

Так как анаэробы являются представителями нормальной микрофлоры человека, материал для исследования следует брать с соблюдением правил асептики и строго с места локализации очага, чтобы исключить загрязнение посторонней микрофлорой.

Оптимальным способом получения проб материала является его аспирация с помощью шприца. Материал, забранный в шприц, должен быть доставлен в лабораторию для исследования в максимально короткий срок. Транспортные среды позволяют сохранить жизнеспособность анаэробных бактерий в течение достаточно продолжительного срока, указанного в инструкции.

Исследование клинического материала на анаэробы включает в себя все этапы культурального исследования, принятого в бактериологии, в том числе: выделение анаэробных микроорганизмов на искусственных питательных средах, изучение их свойств и идентификацию. Однако, учитывая физиологические особенности этой обширной группы микроорганизмов и их высокие питательные потребности, культивирование этих микробных патогенов представляется сложным и недоступным для большинства бактериологических лабораторий.

В лабораториях клинической микробиологии проводятся исследования на анаэробную инфекцию с использованием специального оборудования , импортных питательных сред и тест-систем для идентификации изучаемых микроорганизмов до рода и вида.

1.3 Метод выделения чистой культуры анаэробной бактерии

Выращивание чистой культуры анаэробов производят путем посева материала из изолированной колонии на среду Китта-Тароцци, в составе мясной бульон, глюкоза и кусочки печени или фарша. Для предотвращения доступа кислорода среда покрыта слоем вазелинового масла.

Метод Цейсслера-исследуемый материал рассевают штрихами по поверхности плотной питательной среды, помещают в анаэростат и выдерживают в термостате при 37°С в течение 24-72 часов.

Метод Вейнберга- несколько капель исследуемого материала вносят в пробирку с 4-5 мл изотонического раствора хлористого натрия, перемешивают запаянным капилляром и переносят в пробирку с расплавленным и охлажденным до 45-50°С сахарным агаром, разлитым высоким столбиком. После перемешивания этим же капилляром последовательно засевают еще две пробирки с сахарным агаром и быстро охлаждают. Пробирки инкубируют в обычном термостате. Метод Виньяля-Вейона.

2. Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам

Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам и химиопрепаратам — это свойство микроорганизмов реагировать на действие данных препаратов приостановкой размножения или гибелью. Каждый вид или близкая группа видов имеют характерный спектр и уровень природной чувствительности по отношению к определенному препарату или группе препаратов.

Для успешного проведения лечения антибиотиками, особенно в случаях хронической инфекции, необходимо предварительно определить степень чувствительности к антибиотикам микробов, вызвавших заболевание.

Мерой чувствительности микробов является минимальная концентрация препарата (мкг/мл), которая подавляет рост микробов на питательных средах в стандартных условиях постановки опыта. Выделяют 3 категории чувствительности-устойчивости микробов:

а) чувствительные подавляются при назначении обычных доз антибиотиков;

б) умеренно-устойчивые штаммы микробов подавляются при введении максимальных доз препарата;

в) устойчивые штаммы микробов не подавляются при введении в организм человека максимально допустимых доз.

2.1 Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам

Современные стандартизованные методы определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам подразделяют на две группы:

2. Методы серийных разведений антибиотика в питательной среде:

-разведение препарата в жидкой питательной среде;

-разведение препарата в плотной питательной среде.

Несомненным достоинством диффузионных методов является простота тестирования и доступность выполнения в любой бактериологической лаборатории. Однако с учетом высокой стоимости Е-тестов для рутинной работы обычно используют диско-диффузионный метод.

Диффузные методы определения чувствительности основаны на диффузии антибактериальных препаратов из носителя в плотную питательную среду. Стандартизованную суспензию исследуемого микроорганизма, соответствующую стандарту мутности 0,5 по MсFarland, засевают «газоном» на питательную среду. На поверхность посева укладывают стандартные бумажные диски, пропитанные антибиотиками, концентрации которых соответствуют требованиям ВОЗ. Диффузия антибиотика в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. После инкубирования посева в термостате оценивают чувствительность микроорганизма (рис. 5). Если исследуемый микроорганизм чувствителен к одному из препаратов, вокруг соответствующего диска образуется зона задержки роста, где концентрация антибиотика превосходит минимальную подавляющую концентрацию (МПК). Устойчивые к препарату культуры не образуют стерильных зон. Однако диффузный метод позволяет лишь косвенно судить о величине МПК, а результатом исследования является отнесение микроорганизма к одной из категорий чувствительности (устойчивый, малоустойчивый, чувствительный, высокочувствительный штамм).

Это модификация диско-диффузного метода, однако, пользуясь этим методом, можно определить МПК. Для реализации этого метода используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной. Полоски помещают на поверхность засеянной питательной среды. Если бактерии чувствительны к действию препарата, вокруг участков полоски, содержащих его ингибирующие концентрации, образуется эллипсовидная зона задержки роста, в месте пересечения которой с полоской Е-теста получают значение МПК.

Методы серийных разведений

Основаны на прямом определении основного количественного показателя, характеризующего микробиологическую активность антибактериальных препаратов — величины его МПК. МПК — минимальная концентрация, подавляющая видимый рост исследуемого микроорганизма в бульонной культуре или на плотной питательной среде.

Метод серийных разведений в жидкой питательной среде

Антибиотик в различных концентрациях вносят в жидкую питательную среду (бульон). Затем бактериальную суспензию определенной плотности, соответствующую стандарту мутности 0,5 по MсFarland, помещают в бульон с антибиотиком. После инкубации при температуре 37 С проводят учет полученных результатов. Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной концентрацией, подавляющая видимый рост исследуемого микроорганизма. Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл (рис. 6). МПК — наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий

Метод серийных разведений в плотной питательной среде

Этот метод аналогичен методу серийных разведений в жидкой питательной среде, однако определение МПК требует более сложных манипуляций. Готовят двойные серийные разведения препарата от 1:10000 до 1:320000, затем вносят по 1 мл каждого разведения в пробирки, содержащие расплавленный и остуженный до 45 С агар. Затем содержимое пробирок быстро выливают в стерильные чашки Петри и после застывания питательной среды засевают исследуемый микроорганизм. После инкубации определяют МПК по отсутствию роста на чашках, содержащих наименьшие концентрации препарата.

1. Методичка по антибиотикам авторы : Нечаева О.В., Швиденко И.Г., Шуб Г.М.. Информация взята со страниц 59-65

2. Медицинская микробиология ,вирусология и иммунология — под редакцией академика РАММ А.А. Воробьева — Взята информация (Метод выделения чистой культуры анаэробной бактерии)

источник

Анализ мочи на посев имеет большое значение в эффективной диагностике заболеваний почек и мочевыводительной системы. Мочевыделительная система представляет собой, на первый взгляд, довольно простой процесс: в почках образуется моча (это вид экскрементов, продукт жизнедеятельности животных и человека), которая затем поступает в мочевой пузырь и из него через мочеиспускательный канал выводится из организма. Этот процесс настолько обыденный для человека, что последний до определенного момента не придает ему значения. Значение возрастает только при сбое этого процесса (при заболевании почек), и тогда человек обращается ко всевозможным медицинским исследованиям.

ОАМ (или еще его называют клинический анализ мочи) — это лабораторное исследование, которое позволяет оценить физические и химические характеристики мочи и микроскопию осадка. К физическим характеристикам относятся количество мочи, ее цвет, прозрачность, реакция (pH), удельный вес (относительная плотность). К химическим характеристикам относятся белок, глюкоза, кетоновые тела, желчные пигменты. Ну и микроскопия осадка — это количество гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, клеток эпителия и цилиндры. Диагнозы после проведения данного исследования могут быть разнообразными, например, лейкоцитарная эстераза. Если тест положительный, то это означает наличие лейкоцитов в данном виде экскрементов. В противном случае лейкоцитарная эстераза ставит инфекцию в моче под сомнение и говорит о необходимости проведения других видов исследования.

Данный анализ является одним из самых применяемых (начинают выявлять то или иное заболевание чаще всего именно с него), который помогает обнаружить отклонения в работе как мочевыводительной системы, так и почек.

Анализ мочи по Нечипоренко (идея данного исследования принадлежит советскому врачу А.З. Нечипоренко) — это лабораторное исследование, которое заключается в определении содержания в 1 мл мочи лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров. Данный вид исследования получил широкое распространение благодаря относительной простоте и широкой информативности. Целью данного исследования является выявление скрытого воспалительного процесса в мочевыводительной системе или дисфункции почек, и, как правило, проводят его при выявлении отклонений от нормы показателей в ОАМ. Нормальными пределами считаются следующие пропорции:

1. Лейкоциты — до 2000 (у мужчин), до 4000 (у женщин).
2. Эритроциты — до 1000.
3. Цилиндры — до 20.

Посев мочи — это лабораторное исследование, которое позволяет выявить наличие микроорганизмов в моче. Основной задачей анализа (посев мочи на стерильность) является доказательство этиологической (причинной) роли микроорганизмов в развитии заболевания (их вид, степень бактериурии (наличие бактерии в моче), а также периодичность выделения бактерий). У здорового человека этот вид является стерильным, т. е. в ней отсутствуют какие-либо бактерии, в противном случае это свидетельствует о наличии инфекции в мочевыделительной системе. Посев мочи на флору назначают после наличия отклонений в ОАМ и анализе мочи по Нечипоренко.

Показания для направления на сдачу анализа на бактериологический посев мочи следующие:

1. Болезненность при мочеиспускании в области лобка, а также рези при мочеиспускании.
2. Боли в поясничном отделе.
3. Нарушение мочеиспускания.
4. Изменения в ОАМ.
5. Контроль эффективности лечения.
6. Определение чувствительности к антибиотикам микроорганизмов, которые паразитируют в органах мочевыделения.

Данные симптомы возникают у людей, подверженных следующим заболеваниям: острый и хронический цистит, уретрит, пиелонефрит, а также сахарный диабет и иммунодефицит.

Результат исследования указывается в наличии или отсутствии роста бактерии, степени мочи на бактериурию, выраженной в КОЕ/мл, наименовании возбудителя, чувствительности к антимикробным препаратам (определяется при бактериурии в титре 10*4 кое/мл). Итак, при анализе мочи на бак посев концентрация (количество) микроорганизмов в одной единице объема биоматериала устанавливается на колониеобразующих единицах (КОЕ).

КОЕ — это одна живая микробная клетка (или группа клеток), которая вызывает рост видимой колонии микробов. Если выявленное количество бактерий в моче до 1000 КОЕ/мл, то это означает, что бактерии туда попали случайным образом, например, с наружных половых органов, что лечения не требует.

Но если количество микробов равно или превышает 100 000 КОЕ/мл, то в этом случае ни о каких случайно попавших бактериях и речи быть не может: это инфекция, и за лечением необходимо обратиться к специалисту.

При промежуточном же результате 10-1000 КОЕ/мл анализ считается сомнительным, и его необходимо пересдать. Но, несмотря ни на что, не пытайтесь самостоятельно расшифровать тот или иной анализ (расшифровка неспециалистом ведет к неэффективному лечению).Обратитесь за этим непосредственно к врачу.

Правило 1. Биоматериал (мочу), как правило, собирают утром после сна. Но бывают и отдельные экстренные случаи, при которых сбор материала для исследования собирается через 2-3 часа после последнего мочеиспускания.

Правило. Непосредственно перед сбором мочи необходимо вымыть руки и половые органы. Эта мера необходима для предотвращения попадания в биоматериал ложных микробов, что может повлечь за собой искажение конечного результата анализа.

Правило 3. Экскремент должен быть собран в специальную и, что очень важно, стерильную емкость (их можно приобрести в аптечных пунктах). Кроме того, необходимо собрать именно среднюю порцию мочи, т. е. первые и последние капли не должны попасть в емкость. Это необходимо, для того чтобы бактерии в анализе мочи сконцентрировались в максимальном количестве (если, конечно, они в ней имеются).

Правило 4. Не рекомендуется сдавать данный анализ, если в период менее чем за две недели до сдачи в организм поступали антибиотики. Такие препараты могут поставить результат под сомнение.

После непосредственного сбора мочи анализ доставляется в лабораторию, где находятся различные питательные среды, на которые и наносится некоторое количество материала. Соблюдая определенные благоприятные условия для каждого типа бактерии, выращиваются их колонии. На основании этих данных и выносится результат анализа о микробе, который вызвал заболевание. Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам на их колонии наносят несколько таких препаратов, для того чтобы был некий выбор в подборе препарата для борьбы с заболеванием. Анализ мочи на бак посев готовится от 1 до 10 дней (в зависимости от типа бактерий).

источник

Посев на аэробную и факультативно-анаэробную флору с определением чувствительности к расширенному списку антибиотиков и подбором минимальной эффективной дозировки препарата

Микробиологическое исследование на анализаторе VITEK bioMerieux, позволяющее с более высокой чувствительностью и специфичностью, чем обычный посев, идентифицировать около 200 видов клинически значимых бактерий и подобрать антибиотикотерапию с расчетом минимальной эффективной дозировки препарата. Преимущества исследования по сравнению с обычным посевом: срок выполнения короче на 24 часа; чувствительность определяется к расширенному списку антибиотиков (до 20 шт.); результат выдается как в виде критических значений (чувствителен, умеренно-устойчив, устойчив), так и в виде значений минимальных ингибирующих концентраций антибиотика (МИК). Что, в свою очередь, позволяет выбрать наиболее эффективную минимальную дозу антибиотика, снизив его негативное влияние на человеческий организм. * Чувствительность к антибиотикам будет определена при выявлении патогенных и/или условно-патогенных микроорганизмов. При обнаружении микроорганизмов, составляющих нормальную микрофлору, чувствительность к антибиотикам не определяется, т.к. не имеет диагностического значения.

Бактериологическое исследование клинического материала с определением чувствительности к антибиотикам на анализаторе VITEK bioMerieux; посев на микрофлору в аэробных условиях.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Грудное молоко, мазок из десневого кармана, мазок из зева, мазок с конъюнктивы, мазок из носа, мазок из носоглотки, мазок урогенитальный (с секретом предстательной железы), мокроту, отделяемое уха, рвотные массы, синовиальную жидкость, смыв из бронхов, среднюю порцию утренней мочи, эякулят.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Рекомендуется употребить большой объем жидкости (чистой негазированной воды) за 8-12 часов до сбора мокроты.
• За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.
• Женщинам исследование (процедуру взятия урогенитального мазка или сбор мочи) рекомендуется производить до менструации или через 2-3 дня после её окончания.
• Мужчинам — не мочиться в течение 3 часов до взятия урогенитального мазка или сбора мочи.

Общая информация об исследовании

Анаэробная микрофлора – это микроорганизмы, для жизнедеятельности и размножения которых не требуется кислород, для многих из них он, наоборот, является губительным. Анаэробы населяют организм человека в норме (в пищеварительном тракте, органах дыхания, мочеполовой системе). При снижении иммунитета или травмах, повреждениях возможна активация инфекции с развитием воспалительного процесса. Организм человека тогда может становиться по сути источником заражения сам для себя (эндогенное инфицирование). Реже анаэробы попадают в организм снаружи (глубокая колотая рана, инфицированный аборт, ранения брюшной и грудной полости, введение спиц и протезов). Развиваясь в толще кожи, мягких тканей и мышц, анаэробные организмы способны вызывать целлюлиты, абсцессы, миозиты. Симптомы, позволяющие заподозрить анаэробную инфекцию мягких тканей: плотный отёк, газообразование (ощущение, что лопаются пузырьки воздуха под кожей при надавливании), гнилостное воспаление, зловонный запах.

Основное лечение анаэробного воспаления – хирургическое. При этом необходимо устранить источник воспаления либо раскрыть рану, обеспечив доступ кислорода, губительного для анаэробов.

Жизнедеятельность аэробной флоры возможна лишь при наличии свободного кислорода. В отличие от анаэробов, у них он участвует в процессе выработки энергии, необходимой им для размножения. Эти бактерии не имеют выраженного ядра. Они размножаются почкованием или делением, при окислении образуя токсичные продукты. Культивирование аэробных бактерий подразумевает не только использование подходящей для них питательной среды, но также и количественный контроль кислородной атмосферы и поддерживание оптимальных температур. Для каждого микроорганизма данной группы существует минимум и максимум кислородной концентрации в среде, окружающей его, необходимой для его нормального размножения и развития.

Факультативные анаэробы – организмы, которые существуют и выполняют все энергетические и репродуктивные циклы по анаэробному пути, но при этом при этом способны существовать и развиваться в присутствии кислорода. Последней характеристикой облигатные и факультативные анаэробы и отличаются, т.к. облигатные не способны существовать в условиях кислорода и при его появлении гибнут. Всю необходимую для своего существования, развития и размножения энергию факультативные анаэробы получают с помощью расщепления органических и неорганических соединений.

Для дифференциальной диагностики анаэробной и аэробной инфекции проводят посев биоматериала на флору, так как принципы лечения в том или ином случае будут разные. По выросшей культуре определяется вид микроорганизмов, которые участвуют в формировании воспалительной реакции. Зная вид возбудителя, можно подобрать антибактериальный препарат, который способен успешно влиять на данные микроорганизмы.

В ходе данного исследования определяется наличие аэробной и факультативно-анаэробной флоры.

Микробиологическое исследование на анализаторе VITEK bioMerieux позволяет с более высокой чувствительностью и специфичностью, чем обычный посев, идентифицировать около 200 видов клинически значимых бактерий и подобрать антибиотикотерапию с расчетом минимальной эффективной дозировки препарата. Система анализатора предназначена для идентификации грамотрицательных палочек, грамположительных кокков, анаэробных бактерий, нейссерий, гемофильных палочек, других прихотливых бактерий, коринбактерий, лактобактерий, бацилл, грибов (более 450 таксонов). Система анализатора состоит из анализатора бактериологического и персонального компьютера. Автоматизация процесса снижает риск контаминации материала и ошибок в результатах исследования.

После выявления культуры бактерий целесообразно провести определение их чувствительности к разным антибиотикам. Зная вид возбудителя, можно подобрать антибактериальный препарат, который способен успешно влиять на данные микроорганизмы. В связи с тем что все чаще наблюдается развитие антибиотикорезистентности микроорганизмов, подбор антибиотиков по их спектру действия на бактерии может привести к малоэффективному или вообще безрезультатному лечению. Преимуществом метода определения чувствительности к антибиотикам является точное определение антибактериального препарата, имеющего наивысшую эффективность в конкретном случае.

Для чего используется исследование?

• Дифференциальная диагностика анаэробной и аэробной инфекций, подбор адекватного терапевтического лечения с учетом обнаруженной микрофлоры.
• Диагностика латентных, скрытых и хронических инфекций: обнаружение персистирующих, труднокультивируемых и/или некультивируемых форм микроорганизмов.
• Для выбора антибиотика для успешного лечения инфекции.

Когда назначается исследование?

• При различных патологиях воспалительно-инфекционного генеза — для своевременной, быстрой идентификации возможного возбудителя.
• При симптомах, позволяющих заподозрить анаэробную инфекцию (газообразование, гнилостное воспаление).

Причина выявления микроорганизмов — присутствие роста колоний данного вида микроорганизмов на питательной среде (при этом данная микрофлора может быть нормальной: Streptococcus mitis, Neisseria mucosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus viridans group).

Данное исследование не предусматривает выделение анаэробной микрофлоры, вирусов, хламидий, а также микроорганизмов, требующих особых условий культивирования, таких как Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae, Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, Corynebacterium diphtheriae, Mycoplasma spp, Ureaplasma spp, Mycobacterium tuberculosis. При отсутствии роста диагностически значимой микрофлоры при бактериологическом посеве и наличии клинической картины рекомендуется назначение дополнительных исследований.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, терапевт, гинеколог, врач общей практики, оториноларинголог, педиатр.

• Fermin A Carranza, Paulo M. Camargo. The Periodontal Pocket. / Carranza’s Clinical Periodontology, 2012, 127-139.
• Mirela Kolakovic, Ulrike Held, Patrick R Schmidlin, Philipp Sahrmann. An estimate of pocket closure and avoided needs of surgery after scaling and root planing with systemic antibiotics: a systematic review. / BMC Oral Health. 2014; 14: 159.

источник

Известно, что микроорганизмы, невзирая на свой «малый рост», тоже имеют пищевые «пристрастия», температурный оптимум, в общем, среду, которая им идеально подходит, где они чувствуют себя комфортно и хорошо, а поэтому начинают интенсивно размножаться и расти.

Бактериологический посев или, как принято называть короче – бак посев, применяется для получения большого количества микробов одного вида (чистая культура) с целью изучения их физико-химических и биологических свойств, чтобы затем полученные данные использовать для диагностики инфекционных заболеваний.

К сожалению, даже популярные нынче иммуноферментный анализ (ИФА), полимеразная цепная реакция (ПЦР) и другие методы, основным недостатком которых являются ложноположительные или ложноотрицательные результаты, не всегда могут идентифицировать возбудителя. Кроме того, они не способны подобрать антибактериальные препараты направленного действия. Подобную задачу решает бак посев, который часто не спешат назначать, ссылаясь на то, что, например, уреа- микоплазмы медленно культивируется, а стоимость анализа немалая. Однако ведь и здоровье того стоит!

Микробиологи нынче знают, что каждому возбудителю нужна своя «родная» среда с учетом ее рН, окислительно-восстановительных потенциалов, вязкости, влажности и осмотических свойств. Среды могут быть мягкими и твердыми, простыми и сложными, универсальными и не очень, однако во всех случаях они должны обеспечивать питание, дыхание, размножение и рост бактериальной клетки.

пример роста микроорганизмов после бак-посева в питательную среду

Некоторые среды (тиогликолевая, Сабуро) подходят для широкого круга микроорганизмов и называются универсальными. Другие же предназначены только для определенных видов, например, пневмококк и золотистый стафилококк, продуцирующие гемолизины, растут на кровяном агаре, который служит для выделения особо «капризных» и, вместе с тем, опасных штаммов. Таким образом, разновидностей сред множество, где каждая из них выращивает свой круг микроорганизмов.

Кроме воды, воздуха, почвы, содержащие в тех или иных концентрациях различные микроорганизмы, в том числе и приносящие болезнь (патогенные), многие отрасли медицинской науки интересуют микробы, живущие на коже и слизистых человеческого организма, которые могут быть представлены:

• Постоянными обитателями, не несущими никакой опасности человеку, то есть, нормальной микрофлорой организма, без которой мы просто жить не можем. Например, исчезновение бактерий, живущих в кишечнике и участвующих в процессе пищеварения, приводит к дисбактериозу, лечить который – дело непростое. Так же происходит и с исчезновением вагинальной микрофлоры. Ее тут же заселяют условно-патогенные микроорганизмы, гарднереллы, например, которые вызывают бактериальный вагиноз (гарднереллез);
• Условно-патогенной флорой, которая приносит вред лишь в больших количествах при определенных условиях (иммунодефицит). Вышеназванная гарднерелла – представитель такого типа микроорганизмов;
• Наличием патогенных микробов, которые в здоровом теле не присутствуют. Они чужды человеческому организму, куда попадают случайно при контакте с другим (больным) человеком и вызывают развитие инфекционного процесса, порой, довольно тяжелого или даже смертельного. Например, встреча с возбудителями сифилиса – еще куда ни шло, на первых порах лечится, а вот (упаси Бог!) выпустит на волю холеру, чуму, черную оспу и др.

К счастью, многие из них побеждены и в настоящее время находятся «за семью печатями» в специальных лабораториях, однако человечество в любой момент должно быть готово к нашествию невидимого врага, способного уничтожить целые народы. Бактериологический посев в подобных случаях играет, пожалуй, главную роль в идентификации микроорганизма, то есть, определении рода, вида, типа и т.д. (токсономическое положение), что очень важно для диагностики инфекционных процессов, в том числе и заболеваний, передающихся половым путем.

Таким образом, методы посева, как и питательные среды, бывают разными, тем не менее, цель у них одна: получить чистую культуру без посторонних примесей в виде микробов других классов, которые обитают повсеместно: в воде, в воздухе, на поверхностях, на человеке и внутри его.

Бактериологический анализ пациенты сами себе не назначают, это делает врач, если у него есть подозрения, что проблемы больного, предъявляющего различные жалобы, связаны с проникновением в организм патогенного возбудителя или с усиленным размножением микроорганизмов, постоянно живущих с человеком, но проявляющих патогенные свойства только в определенных условиях. Сдав анализ и через некоторое время получив на руки ответ, человек теряется, а порой и пугается, увидев непонятные слова и обозначения, поэтому, чтобы этого не произошло, хочется дать краткое разъяснение по данному вопросу:

1. Первым пунктом заключения, как правило, стоит название возбудителя на латинском языке, например, Escherichiacoli. Это – кишечная палочка, она является естественным обитателем кишечника и в допустимых количествах никакого вреда не приносит;
2. Следующий пункт – концентрация микроорганизма. Е.coli– обильный рост (1х10^ 6 и более) норма – менее 1x10^ 4 ;
3. Далее – патогенность: флора условно-патогенная.

При исследовании биологического материала на присутствие патогенных микроорганизмов ответ может быть отрицательным или положительным («плохой бак посев»), поскольку организм человека является для них лишь временным пристанищем, а не естественной средой обитания.

Иной раз, в зависимости от того, какой материал подлежит посеву, можно увидеть количество микроорганизмов, выраженное в колониеобразующих единицах на мл (одна живая клетка даст рост целой колонии) – КОЕ/мл. Например, посев мочи для бактериологического исследования при норме дает до 10 3 КОЕ/мл всех выявленных бактериальных клеток, в сомнительных случаях (анализ повторить!) – 10 3 – 10 4 КОЕ/мл, при воспалительном процессе инфекционного происхождения – 10 5 и выше КОЕ/мл. О двух последних вариантах в разговорной речи, порой, выражаются просто: «Плохой бак посев».

Одновременно с посевом материала в таких ситуациях производится посев микрофлоры на чувствительность к антибиотикам, который даст четкий ответ врачу – какие антибактериальные препараты и в каких дозах «испугают» «незваного гостя». Здесь тоже есть своя расшифровка, например:

• Вид микроорганизма, допустим, та же Е.coli в количестве 1х10^ 6 ;
• Название антибиотика с обозначением (S) указывает на чувствительность возбудителя к этому препарату;
• Вид антибиотиков, не действующих на микроорганизм, обозначается символом (R).

Бактериологический анализ представляет особую ценность в определении чувствительности к антибиотикам, поскольку основной проблемой в борьбе с хламидией, микоплазмой, уреаплазмой и др. остается подбор действенного лечения, не приносящего вред организму и не ударяющего по карману пациента.

Бактериологическому анализу может подвергаться любой биологический материал, взятый у человека (кожа, кровь, сперма, слизистые ротовой полости, дыхательных и мочеполовых путей, желудочно-кишечного тракта, органов зрения, слуха и обоняния и др.). Чаще всего бак посев назначают гинекологи и урологи, поэтому на нем следует несколько остановиться.

Правильная подготовка к бактериологическому посеву будет залогом правильного результата, потому что в противном случае, анализ придется сдавать заново и ждать назначенное время. Как сдать кровь на стерильность из вены – это задача медработников. От больного здесь, как правило, ничего не зависит, он просто предоставляет локтевой сгиб, а медсестра производит забор в стерильную пробирку с соблюдением всех правил асептики и антисептики.

Другое дело – моча или мазок из половых путей. Здесь пациент должен обеспечить первый этап (забор), соблюдая предписанные правила. Следует заметить, что моча женщин и мужчин несколько отличается, хотя в мочевом пузыре у обоих полов она стерильна:

• У женщин при прохождении через мочеиспускательный канал может захватить небольшое количество непатогенных кокков, хотя в целом, часто остается стерильной;
• У мужчин все несколько по-другому. Передняя часть уретры может снабдить проходящую мочу находящимися там:
  1. дифтероидами;
  2. стафилококками;
  3. некоторыми непатогенными грамотрицательными бактериями, что и покажет впоследствии бактериологический анализ.

Однако, если они находятся в допустимой концентрации (до 10 3 КОЕ/мл), то пугаться нечего, это вариант нормы.

Чтобы избежать присутствия других микроорганизмов и максимально обеспечить стерильность взятого материала, перед сдачей анализа производится тщательный туалет половых органов (вход во влагалище у женщин закрывается ватным тампоном – защита от попадания отделяемого половых органов). Для анализа берется средняя порция мочи (начало мочеиспускания в унитаз, приблизительно 10 мл средней порции в стерильную баночку, окончание в унитаз). Пациентам необходимо знать: моча, взятая на посев, должна быть обработана не позднее, чем через два часа при хранении не выше 20°С, поэтому следует рассчитывать время на транспортировку.

Кроме этого материал на бак посев при необходимости берут из уретры и прямой кишки у мужчин, из уретры, прямой кишки, влагалища, шейки матки и цервикального канала – у женщин, но это происходит в медицинском учреждении, куда пациент должен прибыть. Подмывание, спринцевание и использование антисептических средств в таких случаях запрещено.

Многие пациенты интересуются, сколько дней делается анализ. Однозначно на этот вопрос ответить нельзя, все зависит от того, какой материал подвергается исследованию и какой возбудитель нужно искать. Иногда ответ готов через 3 дня, иногда через неделю или даже дней 10 – 14, поскольку некоторые образцы требуют пересева на другую среду.

Не обходят стороной люди, направляющиеся на бак посев и вопрос о цене анализа. Примерная стоимость в Москве составляет порядка 800 – 1500 рублей. Разумеется, она может быть выше и зависит от широты спектра бактериологического поиска. Бесплатно анализ, наверное, можно сдать при беременности в женской консультации, или в поликлинике по особым медицинским показаниям.

Для беременных бак посев является обязательным, сдается 2 раза (при постановке на учет и в 36 недель), при этом, мазок берется не только из половых путей, но и со слизистых носа и зева. Объектом поиска в данном случае, кроме урогенитальных инфекций, будет золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus), который в послеродовом периоде может натворить много бед (гнойный мастит и др). Кроме этого, беременным в обязательном порядке делается посев мочи, соскоба влагалищного эпителия и мазки из шейки матки и цервикального канала.

Многие женщины, перед тем как отправиться на процедуру очень боятся таких страшных слов и начинают раздумывать: «А нужно ли это? Может, не пойти». Спешим заверить, что анализы абсолютно безболезненны. Мазок из шейки матки и цервикального канала берется стерильной цитощеткой, не причиняя женщине абсолютно никакой боли, зато впоследствии бак посев из ш/м и ц/к защитит и будущую мать, и плод от возможных осложнений. Объектом поиска при беременности являются возбудители хламидиоза, уреа- и микоплазмы, дрожжеподобный грибок рода Candida (обычно это Candida albicans), трихомонады и другие условно-патогенные и патогенные микроорганизмы.

Попав в половые пути патогенные микроорганизмы, через самое короткое время осваиваются и начинают свою вредную деятельность. Например, всегда патогенные гонококки (Neisseria), являющиеся виновниками довольно неприятной болезни, называемой гонореей и относящейся к ЗППП, чувствуют себя «как дома» буквально на 3 день. Они начинают активно размножаться и смело двигаться по половым путям вверх, захватывая все новые территории. Всем известно, что гонорея нынче неплохо лечится и ее уже почти никто не боится. Но для начала ее нужно найти. Основным методом поиска этой инфекции считается бак посев, культивирование, идентификация с помощью окрашивания по Граму, микроскопия.

Найденные в мазке, взятом «на флору» из половых путей, попарно лежащие «кофейные зерна» (диплококки), не указывают на наличие венерического заболевания. Такая микрофлора влагалища часто появляется в постменопаузе и ни о чем плохом не говорит. Отобранный в нестерильных условиях на предметное стекло и окрашенный метиленовым синим или по Романовскому (цитология) мазок, не может дифференцировать микроорганизм. Он может только предположить и направить пациентку на дополнительное исследование (получение изолированной культуры).

Следует заметить, что, если соскоб со слизистых мочеполовых путей, взятый для посева на уреаплазму, является не таким уж редким явлением, то посева мочи сами врачи часто избегают, поскольку с ней работать сложнее.

Трудности в диагностике создает хламидийная инфекция, приносящая большой вред не только при беременности. Кроме этого, хламидия вызывает множество заболеваний, свойственных не только женщинам, но и мужскому населению тоже, поэтому ее сеют, культивируют, изучают, определяют чувствительность к антибактериальной терапии и, таким образом, борются с ней.

При беременности вообще без бактериологического посева трудно обойтись, поскольку многие микроорганизмы, маскируясь в цитологическом мазке, могут быть пропущены. Между тем, влияние некоторых возбудителей ЗППП на плод бывает губительным. К тому же лечить беременную женщину значительно сложнее, а назначать антибиотики «на глаз» просто недопустимо.

Для выделения чистых культур возбудителей на первом этапе прибегают к их посеву на соответствующие среды, который проводится в специальных (стерильных!) условиях. В основном, перенос материала на среду осуществляется с помощью приспособлений, применяемых еще в 19 века великим Луи Пастером:

• Бактериальной петлей;
• Пастеровской пипеткой;
• Стеклянной палочкой.

Конечно, многие инструменты за 2 столетия претерпели изменения, на смену пришли пластиковые стерильные и одноразовые, однако и старые не остались в прошлом, продолжая и поныне служить микробиологической науке.

Первый этап получения колоний требует соблюдения определенных правил:

1. Посев осуществляется над спиртовкой в боксе, предварительно обработанном дезинфектантами и кварцеванием, или в ламинарном шкафу, обеспечивающем стерильность в рабочей зоне;
2. Одежда медработника, перчатки и среда также должны быть стерильными, поскольку обратное мешает выделению изолированных штаммов;
3. Работать в боксе нужно быстро, но аккуратно, нельзя разговаривать и отвлекаться, при этом – необходимо помнить о личной безопасности, ведь материал может быть заразным.

Выделение штаммов не всегда одинаково, поскольку некоторые биологические среды, находящиеся в человеческом организме требуют индивидуального подхода, например, гемокультуру (кровь) сначала в жидкой среде (соотношение 1 : 10) немного «подращивают», поскольку кровь (неразведенная) может убить микроорганизмы, а затем, через сутки или больше, пересевают на чашки Петри.

Посев мочи, промывных желудочных вод и других жидких материалов тоже имеет свои особенности, где для получения чистой культуры, жидкость сначала следует центрифугировать (условия – асептические!), а уж затем сеять, причем не саму жидкость, а ее осадок.

Культивирование и выращивание колоний осуществляют на чашках Петри или помещают сначала в жидкую среду, разлитую в стерильные флакончики, а затем изолированные колонии еще раз высевают, но уже на скошенный агар и помещают материал на сутки в термостат. Убедившись в чистоте полученной культуры, штаммы переносят на предметное стекло, делают мазок и окрашивают по Граму (чаще всего), Цилю-Нильсену и др. и для дифференцировки изучают морфологию микроба под микроскопом:

• Размер и форму бактериальной клетки;
• Наличие капсул, жгутиков, спор;
• Тинкториальные свойства (отношение микроорганизма к окрашиванию)*.

*Читатель, вероятно, слышал о таком возбудителе, как бледная трепонема? Это – возбудитель сифилиса, а ее название (бледная) поэтому и появилось, что она плохо воспринимает краски и остается слегка розоватой при окрашивании по Романовскому. Микроорганизмы, невоспринимающие анилиновые красители называются грамотрицательными, а воспринимающие – грамположительные. Грамотрицательным бактериям придают розовый или красный цвет при окраске по Граму дополнительные красители (фуксин, сафранин).

Бак посев можно назвать древним анализом, однако его популярность от этого отнюдь не падает, хотя современная бактериология имеет возможности выделения не только штаммов, но и отдельной клетки из него, которая называется клоном. Однако для получения клона необходим специальный прибор – микроманипулятор, который в обычных лабораториях отсутствует, поскольку применяется, в основном, в научно-исследовательских целях (генетические исследования).

источник