Флоры и титры в моче

Посев на флору и восприимчивость антибиотиков – исследование, которое позволяет выявить степень инфицирования органов мочеполовой системы.

Посев мочи на флору представляет собой анализ по методу микробиологического исследования мочи под микроскопом. Его принято собирать при диагностированных воспалительных заболеваниях с подозрением на инфекционную природу. Суть посева мочи на флору заключена в выявлении микроорганизмов и установлении четкой связи их присутствия с развитием болезни. Изучению подвергаются:

• Виды выявленных бактерий, микробов и другой микрофлоры;
• Концентрация их по отношению к общему объему жидкости;
• Восприимчивость выделенных микроорганизмов к воздействию антибиотиков.

Последний пункт актуален если выявлены микроорганизмы с патогенными свойствами.

Бак посев мочи при воспалениях мочеполовых органов чаще всего обнаруживает:

• Стрептококки;
• Стафилококки;
• Coli – эшерихии;
• Протей;
• Клебсиеллы;
• Энтерококки;
• Кандиды.

Бак посев мочи на флору, как промежуточную процедуру контроля терапии, проводят только на 5-7 день с момента последнего приема антибиотиков.

Анализ мочи общий лабораторный, а также бак посев – процедуры, которым нет альтернативы при диагностировании инфекций мочеточников, а особенно мочевого пузыря. В нормальной ситуации весь тракт мочевыделения, от почек и до уретры, не содержит бактерии – моча стерильна. Если все – же, в ней выявляется некоторое количество микроорганизмов, это можно объясниться их попаданием в урину с наружных половых органов. Нередко наружная микрофлора проникает также в уретру, поэтому исследование, практически всегда, показывает положительный результат. Однако это вовсе не говорит о каком-либо заболевании. Если же обнаруживают опасное количество микроорганизмов, говорят о бактериурии. Один из явных признаков бактериурии – явное преобладание в урине какого-то одного вида бактерий, если же видов несколько то, вероятно, произошло засорение образца внешней инфекцией с кожи. В связи с этим, довольно часто, проводят повторное исследование для уверенности в корректности его результатов. Подсчет количества микроорганизмов принято проводить в пробе мочи объемом 1 мл.

В особых ситуациях, если есть сомнения в результатах анализа серединной пробы мочи, и при невозможности определить клиническую картину болезни четко и однозначно, прибегают к взятию пробы урины путем надлобковой пункции. Такой метод применяют также при обнаружении полимикробного заражения.

Главное условие достоверного результата – стерильность образца, поэтому следует серьезно отнестись к правилам подготовки образца исследования:

• Емкость должна быть стерильной и плотно закрывающейся;
• Перед сдачей пробы, пациент должен провести туалет наружных половых органов, и дезинфекцию наружных тканей уретры. Это можно сделать теплой водой без антибактериальных средств.
• Для анализа нужна серединная порция мочи – сначала, на протяжении пары секунд спускают мочу в унитаз, и только затем, набирают необходимое количество для бака посева;
• Набрав нужный объем жидкости, контейнер плотно закрывают, избегая при этом касания пальцами внутренних ее стенок и, отправляют в лабораторию.

Для этого исследования принято брать утреннюю мочу, но можно брать пробу и на протяжении дня. В этом случае обязательно соблюдать правило – брать мочу на анализ можно не ранее, чем через два, три часа с момента предыдущего мочеиспускания. Достаточной, считается порция мочи от 5 до 10 мл.

Если есть подозрения на туберкулез, анализ проводят утром на протяжении трех дней кряду.

Если у пациента стоит катетер, медработник проводит его перекрывание путем зажимания пинцетом, затем стерилизацию медицинским спиртом и с помощью иглы проводят отбор нужного количества мочи (4 мл) для бак посева, после чего, сливают в контейнер и отправляют в лабораторию.

Обязательно проследите, чтобы на бланке, сопровождающем пробу, помимо фамилии и имени, были указаны – время отбора пробы, метод, который при этом использовали, а также предполагаемый диагноз и данные о принимаемом лечении.

Уровень развития бактериурии определяют по показателю КОЭ – количество образующих бактериальные колонии единиц на один мл жидкости.

Согласно мнению авторитетных микробиологов, результаты бак посева мочи трактуют так:

• Этиологически значимым, выявленный возбудитель, считается, даже, если не наблюдаются четкие клинические симптомы заражения мочеточных путей при показателях КОЕ более 10 5 на мл исследуемой жидкости. Это относится как к монокультуре, так и к титру;
• При явно выраженных симптомах цистита, уретрита и инфекционного поражения мочевых путей, особенно верхних его отделов КОЕ считаются этиологически значимым при его показателях от 10 2 на 1 мл. Это же относится к ситуациям исследования во время антимикробного курса процедур;
• Выявление двух микроорганизмов при инфекционных процессах мочевыводящих путей при условии хронического их протекания, этиологически значимыми принимают значения КОЕ более 10 5 на 1 мл если выделенные микроорганизмы не принадлежат к группе контаминантов;
• Исследование проводят повторно, если выделены 2 и более видов микроорганизмов – КОЕ в титрах 10 4 на 1 мл. Такие показатели могут быть вследствие засорения пробы сторонней микрофлорой.

Альтернативные методы исследования оценивают 10 3 -10 5 КОЕ одного вида как бактериурию или высокую ее вероятность, а КОЕ менее 10 3 на мл принимают за ложноположительный результат, говорящий о загрязнение пробы. Для женщин значения КОЕ 10 2 на 1 мл принимают значимым свидетельством бактериурии, при условии дизурического синдрома острого характера.

Касаемо достоверности полученных результатов исследования одной пробы, статистика показывает – при соблюдении правил отбора пробы для анализа, такая вероятность для женщин около 80% и приближающаяся к 100% у мужчин. Бак посев, проведенный два-три раза, существенно увеличивает степень достоверности результата, вплотную приближая ее к 100%.

Основные ошибки, приводящие к недостоверным результатам:

• Игнорирование правил подготовки к анализу и отбора пробы;
• Игнорирование влияния медикаментозной антимикробной терапии, если таковая имеет место;
• Несоблюдение правил хранения образца и несвоевременная его доставка в лабораторию. Длительное, более 1 – 2 часов хранение мочи в теплом месте, приводит к активному размножению комменсалов и скудному росту патогенов, что кардинально искажает результаты исследования.

Посев мочи на флору проводят для определения вида микроорганизмов, степени их размножения и выбора препаратов для борьбы с ними. Такие исследования применяют также для контроля обсемененности урины после проведенной катетеризации.

источник

Бактериурия — наличие бактерий в моче. В норме моча стерильна. Бактериурия — симптом воспалительных заболеваний почек и мочевыводящих путей. Однако не всякое обнаружение микроорганизмов в центрифугированном осадке мочи клинически значимо.

Общепринятый показатель, отражающий истинный характер бактериурии, — титр микробных тел, составляющий 10 4 -10 5 КОЕ в 1 мл мочи. Титр, достигающий 10 4 КОЕ/мл. трактуют как бактериальную загрязнённость мочи.

Необходимо иметь в виду, что эти параметры носят условный характер. Каждая клиническая ситуация требует их коррекции. При снижении показателей клеточного и гуморального иммунитета, обусловленном различными факторами (включая иммуносупрессивную терапию), в условиях гемодилюции полиурии об активности воспалительного процесса в почках и мочевыводящих путях может свидетельствовать и более низкий уровень титра микробных тел — до 10 4 КОЕ/мл.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12]

Если почки человека здоровы и ткани их не повреждены, бактерии не смогут проникнуть из кровотока в мочу. Бактериурия наблюдается при воспалении в почках, когда почечная паренхима поражена бактериями, при инфицировании мочевого пузыря, воспалительном процессе в предстательной железе, также ее провоцирует катетеризация мочеточников и мочевого пузыря, введение бужей в уретру, цистоскопия.

Степень бактериурии может быть разной и становиться тяжелой при следующих патологических состояниях:

1. Обтурация (закрытие) мочеточника конкрементом, когда формируется патологическое нарушение сокращений и моча возвращается в почку, уже инфицированная бактериями. Также возможны и другие причины нарушения оттока из верхней зоны мочевыводящих путей.
2. Аденома предстательной железы, которая становится источником воспалительного процесса и соответственно провоцирует бактериурию. Также увеличить степень бактериурии может значительное сужение мочеиспускательного канала (стриктура) и задержка мочи.

[13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22]

Нисходящий способ попадания инфекции в урину – это проникновение бактерий в мочу из воспаленного vesica urinaria — мочевого пузыря, из инфицированной ткани почки, из предстательной железы, которая имеет гиперплазированную железистую ткань. Восходящий путь инфицирования мочи – это проникновение микроорганизмов в урину в результате неудачной катетеризации, урологической эндоскопии – цистоскопии, бужирования, а также из толстого кишечника или вульвы, если не соблюдены правила личной гигиены (лимфогематогенный путь).

Бактериурия наблюдается при проникновении в мочу различных видов бактерий – это могут быть стрептококки, кишечная и синегнойная палочки, стафилококки или бактерии из рода proteus – протеи. Любой вид бактерии, попадая в мочеполовую сферу, вызывает воспаление мочевыделительной системы или почек, но также инфицирование микроорганизмами возможно и в отдельных участках толстой кишки, провоцируя проктиты. Бактериурия наблюдается у тех людей, которые страдают от хронических запоров, геморроя, гораздо реже у пациентов с бруцеллезом, брюшным тифом, паратифом и лептоспирозом в силу малой распространенности этих заболеваний.

[23], [24], [25], [26], [27], [28], [29], [30]

Бактериурия – это наличие микроорганизмов (бактерий) в моче, которые выявляются при микроскопическом исследовании урины, как правило, по поводу воспалительного заболевания мочевыводящих путей, почек и половых органов у мужчин.

Моча у здоровых людей в принципе не должна содержать бактерий, в бактериальном смысле стерильность урины – показатель здоровья почек и мочевого тракта. Однако при их инфицировании микроорганизмы попадают в мочу, развивается бактериурия, возможна лейкоцитурия и пиурия. Не каждое загрязнение мочи можно считать бактериурией, в микроскопической идентификации есть четкие границы – превышение показателя 105 на 1 миллилитр урины является признаком воспалительного бактериологического процесса. Чем дольше инфицированная бактериями моча находится в мочевом пузыре, тем больше выражена степень бактериурии.

[31], [32], [33], [34], [35], [36], [37], [38], [39], [40]

Бактериурия симптомы демонстрирует в соответствии с основным заболеванием. Бактериурия встречается (диагностируется) чаще всего при пиелонефрите, уретрите и цистите.

Также бактериурия может быть симптомом следующих патологий:

• Аденома предстательной железы.
• Простатит, как хронический, так и в стадии обострения.
• Сахарный диабет.
• Бактериальный сепсис.
• Уретрит.

Бактериурия симптомы проявляет характерные для пиелонефрита, уретрита и цистита, остальные заболевание не имеют специфической симптоматики, позволяющей дифференцировать нозологию только по лабораторному анализу урины.

Бактериурия, симптомы схожие с признаками пиелонефрита:

• Дизурия – учащенное или замедленное мочеиспускание, жжение, боль.
• Самопроизвольное выделение урины.
• Преходящая тошнота, внезапные позывы к рвоте.
• Резко повышающаяся температура тела, озноб.
• Субфебрильная температура в течение 1-2-х недель.
• Боль в поясничной области.
• Боль внизу живота, в области мочевого пузыря.
• Мутная моча, часто с вкраплениями гноя, с неприятным, нехарактерным для урины запахом.

Бактериурия, симптомы схожие с признаками уретрита:

• Выделения уз уретры, часто с гноем.
• Болезненное мочеиспускание, дизурия.
• Гиперемированные края уретры, раздражение, жжение.
• Боль в промежности.
• Повышенная температура тела, озноб.
• Общее ухудшение состояния, слабость.

Бактериурия, симптомы идентичные признакам цистита:

• Дизурия – учащенное, болезненное мочеиспускание.
• Жжение во время мочеиспускания.
• Частые позывы к мочеиспусканию с малым выделением мочи.
• Нехарактерный запах урины.
• Мутная моча изменение ее цвета.
• Хроническая ноющая боль внизу живота.
• Возможно повышение температуры тела.
• Выделения из уретры, часто с гноем.

[41], [42], [43], [44], [45]

Истинная бактериурия – это бактерии, которые не просто попадают в мочевые пути, но и размножаются там, провоцируя сильное воспаление. Ложная бактериурия – бактерии проникают в мочевой пузырь, мочевыводящие пути, но распространиться и размножиться не успевают в силу того, что у человека либо активен иммунитет, либо он принимает антибактериальную терапию по поводу воспалительного заболевания.

Если бактерии принимают мочу как питательную среду, где есть необходимые для них слабощелочные и нейтральные условия, они начинают размножаться, порой их количество превышает 100000 в одном миллилитре урины. Истинная бактериурия или значительная бактериурия, как ее называли еще в середине прошлого века микробиологи Касс и его коллега Финленд, является неоспоримым доказательством для диагностики инфекции мочевыводящих путей. Несмотря на то, что признаки воспаления в мочевом пузыре могут появиться и ранее при гораздо меньших показателях, параметр Касса и Финленда является единственным статистически подтвержденным и используется в лабораторной практике в наше время в качестве основного критерия.

[46], [47], [48], [49], [50], [51], [52], [53]

Скрытая бактериурия чаще всего определяется при плановой диспансеризации у людей, которых не беспокоит ни мочевой пузырь, ни почки, ни нарушенное мочеиспускание. Особенно часто в том смысле выявляется бессимптомная бактериурия у беременных.

Кроме того, что хронический асимптомный воспалительный процесс представляет угрозу для здоровья человека, скрытая бактериурия несет в себе угрозу инфицирования и передачи бактерий окружающим лицам при условии, что возбудитель является представителем семейства Enterobacteriaceae – то есть возбудитель тифа. О том, что у пациента выявлена асимптомная бактериурия, можно говорить после положительного двухэтапного исследования урины. Сбор материала должен происходить с интервалом в сутки, а бактериальный показатель должен быть дважды подтвержденным в границах 100000 на один миллилитр урины.

Чаще всего бессимптомная бактериурия выявляется у женщин, девочек. У мужчин при скрининговом обследовании выявленная асимптомная бактериурия – это повод к дальнейшим диагностическим поискам по поводу скрытого простатита. Также достаточно часто скрытая бактериурия определяется у пациентов старше 65-ти лет, когда бактериальная колонизация выявляется хронической, длящейся многими годами. Чаще всего бессимптомная бактериурия встречается у мужчин, имеющих гиперплазию простаты и нарушение процесса оттока мочи, в которой размножаются бактерии. В большинстве случаев у лиц пожилого возраста такой показатель не является угрожающим, поскольку выделенные микроорганизмы при исследовании не определяются как патогенные.

Бактериурия в моче определяется с помощью забора свежей урины, как правило, собирается средняя порция. Анализ мочи на бактериурию проводят после соблюдения всех гигиенических процедур во избежание искажения полученных результатов, особенно это важно для пациентов женского пола. Также важна скорость исследования, то есть от момента сбора материала до попадания его непосредственно в лабораторию, это необходимо для снижения риска размножения флоры в теплых условиях при доступе воздуха. Разумеется, наиболее «чистыми» в этом смысле являются анализы, собранные путем катетеризации или аспирации, но эти методы также могут являться провоцирующими бактериурию, поэтому их используют только в исключительных случаях, по строгим показаниям, например, при неподвижности больного или атонии мочевого пузыря.

Анализ мочи на бактериурию может проводиться несколькими способами.

Бактериурия в моче выявляется либо при плановых диспансерных обследованиях, либо при уже развившемся воспалительном процессе. В зависимости от цели и ургентности диагностики могут быть использованы как высокочувствительные методы, такие как посев мочи на бактериурию, требующие много времени на обработку результатов, либо быстрые, но не совсем точные способы, с помощью которых определяется бактериурия в моче.

В качестве экспресс-метода используются ориентировочно-химические способы:

• ТТХ-тест или методика восстановления трифенилтетразолия хлорида, при котором используется свойство бактерий преобразовывать цвет бесцветных солей тетразолия в синий (производное формазана).
• Тест Грисса – нитритный способ, когда нитраты при взаимодействии с присутствующими бактериями трансформируются в нитриты. Нитриты в свою очередь выявляются с помощью специальных реактивов Грисса. Тест подходит для материала (мочи) взрослых людей, так как у детей урина обычно не содержит нитратов.
• Глюкозный редукционный тест, когда используется способность микроорганизмов редуцировать глюкозу в небольших количествах. В утреннюю порцию урины опускают реактив (бумажную полоску), который и показывает наличие или отсутствие глюкозы. Если определенного количества глюкозы нет, это означает, что ее «поглотили» бактерии. Тест не информативен на все 100%, однако в качестве экспресс-метода считается допустимым на начальном диагностическом этапе.

Наиболее информативен посев мочи на бактериурию, когда подсчитывается количество размножающихся бактерий в определенных границах норм. Этот способ считается наиболее чувствительным, особенно для определения степени колонизации бактерий, однако требует от 24 до 48 часов на выполнение. Менее длителен и более упрощен метод Гоулда. Посев мочи на бактериурию по Гоулду — это способ, когда материал высевают на агар, в специальную чашку Петри, в 4 сектора. Каждый раз в очередной сектор моча переносится с помощью стерильной платиновой петли. Для определения степени бактериурии нужно всего 24 часа, этого времени достаточно для инкубации бактерий при комфортной для них температуре – 37 градусов. Далее вычисляют количество бактерий по специальной таблице. Также к более быстрым посевам относится метод, при котором покрытые питательной средой пластинки погружаются в урину. После погружения в мочу пластинки быстро перемещают в специальные контейнеры, где бактерии инкубируются в теплой температуре 12-16 часов. Степень бактериурии определятся с помощью сравнения результатов со шкалой нормы. Это наиболее точный тест, достоверность которого находится в пределах 95%.

Любой анализ на бактериурию желательно проводить дважды, так как даже при ложной бактериурии второй посев может показать значительное увеличение количество бактерий. Объясняется это тем, что первое исследование, возможно, было проведено с материалом, который был собран при обильном питье или дизурии, искажение возможно также при приеме антибиотиков или антисептических препаратов. Кроме того, бактериурия в моче при правильно подобранном методе исследования позволяет выявить истинного возбудителя, определить его чувствительность к медикаментам и подобрать адекватное лечение.

[54], [55], [56], [57], [58], [59], [60]

Любой вид бактерий в урине – это сигнал о возможном воспалении в мочеполовой сфере, терапевтические мероприятия и выбор препаратов зависит от того, насколько выражена степень бактериурии, от возраста пациента и его физиологического состояния.

Острое инфекционное воспаление лечится с помощью антибиотиков последнего поколения с широким спектром действия и минимальными побочными эффектами. Для лечения хронических инфекций нужен повторный посев на бактериурию и проведение антибиотикограммы для определения чувствительности возбудителя к определенной группе препаратов.

Бактериурия при беременности – довольно распространенное явление, не всегда связанное с воспалением. Часто бактерии в моче появляются по причине элементарного застоя мочи, также растущая матка может давить на почки и мочевой пузырь, вызывая слабость почечной деятельности и физиологические изменения структуры мочи, кроме того, на состав мочи влияет и гормональная система, которая все девять месяцев находится в нестабильном состоянии. Поэтому бактериурия у беременных требует повторного исследования и подтверждения или опровержения первичных результатов. Если же количество микроорганизмов действительно превышает норму, лечение бактериурии у беременных проводят максимально щадящим, но в то же время эффективным способом.

Первое, что нужно предпринять – активизировать мочевыведение (пассаж) и снизить pH урины с помощью мочегонных асептических напитков, например, клюквенного морса. Далее, как правило, назначаются препараты группы цефалоспоринов, реже пенициллинов, в таблетированной форме на курс, не превышающий 3-5 дней. Именно этот срок считается в клинической практике достаточным для однократной атаки на бактерии и щадящим для организма матери и плода. Первые месяцы беременности допускают назначение полусинтетических препаратов — амоксициллина, ампициллина, второй триместр допускает применение макролидов. Результативность лечения антибиотиками контролируется повторными посевами на бактериурию. Необходимо избегать назначения всей группы тетрациклинов, фторхинололов, противогрибковых препаратов. В качестве поддерживающей терапии показано назначение препаратов группы нитрофуранов, обычно они принимаются на ночь.

Бессимптомная бактериурия при беременности лечится более щадящими, скорее превентивными способами, включающими в себя фитотерапию, гомеопатические средства, такие как Канефрон, Цистон. Бактериурия при беременности лечение предполагает и с помощью очень мощных активных препаратов, которые принимаются однократно. К таким средствам относится Монурал – эффективный уроантиспетик, который назначается в режиме 2-3 раза в день по 3 грамма в течение суток. Если массированный однократный прием препарата не дает результата, необходимо лечение цефалоспоринами в течение одной недели, а возможно и более длительное время. Также важно весь период лечения следить за своевременным опорожнением мочевого пузыря и не допускать застоя мочи, для этого в меню беременной должны входит клюквенный и шиповниковый морс, мочегонные настои.

Бессимптомная бактериурия при беременности опасна не сама по себе, а тем, что может спровоцировать инфицирование мочевыводящего канала и формирования условий для развития пиелонефрита. Кроме этого, асимптомная бактериурия является фактором риска рождения ребенка с дефицитом веса, преждевременного отхождения вод, анемии, гестоза, плацентарной недостаточности. Именно поэтому лечение бактериурии у беременных должно быть максимально эффективным, чтобы своевременно предотвратить возможные осложнения.

В целом лечение бактериурии у беременных должно придерживаться следующих принципов:

• Назначаются только те препараты, которые гарантировано безопасны и соответствуют критериям биодоступности.
• При выборе препаратов необходимо учитывать триместр беременности, особенно срок до 5 месяцев.
• Весь процесс лечения должен проходить под регулярным и строгим врачебным контролем, включающим скрининговые исследования крови и мочи.

Бактериурия у детей, особенно в бессимптомной форме, не требует самостоятельной отдельной терапии. Достаточно устранить основной источник инфицирования, а это в действительности достигается антибактериальной терапией и активизацией иммунитета. Кроме того лечение бактериурии у детей часто связано с соблюдением элементарных правил гигиены, за которыми должны следить родители заболевшего ребенка. Также нередко бактерии в моче имеют возможность размножаться по причине редкого мочеиспускания: ребенок «забывает» помочиться, заигравшись. Эти моменты кажутся не столь важными, однако по статистике около 25-30% случаев выявления микроорганизмов в моче у детей связаны именно с такими причинами, практически не требующими лечения. Наладить режим питания, следить за своевременным мочеиспусканием, ликвидировать запоры и регулярно принимать ванны, душ – порой этого вполне достаточно, для того, чтобы бессимптомная бактериурия ушла бесследно. Если же бактериурия у детей является следствием цистита или пиелонефрита, лечение должно быть адекватным основному заболеванию.

Терапевтические действия устранения бактериальной инфекции при цистите направлены на улучшение мочеиспускания и нейтрализацию инфекционного возбудителя. Из медикаментов предпочтение отдается уроспетикам и спазмолитикам, антибактериальные препараты назначают лишь в случае, когда подтверждается высокая степень бактериурии. В качестве препаратов, относительно безопасных в смысле наличия побочных эффектов, выбираются ингибиторзащищенные пенициллины – амоксициллин, в качестве альтернативы выбирают цефалоспорины третьего поколения. Антимикотические средства и макролиды назначают лишь в ситуациях, когда определяется атипичная флора в моче. Как и любая другая антибактериальная терапия, прием антибиотиков длится не менее 7-ми дней. Из фитосредств хорошо принимать отвары листа брусники, календулы или подорожника. Кроме того, диетотерапия, которая является неотъемлемой частью лечения бактериурии у детей, должна быть длительной и ее следует придерживаться не менее трех месяцев после окончания курса лечения.

источник

Инфекция мочевыводящих путей является одним из самых распространенных бактериальных заболеваний человека. Практически половина женщин и четверть мужчин хоть раз в жизни сталкивались с урологической инфекцией. Но следует понимать, что возбудитель может быть и другой природы:

• трихомонадной;
• вирусной;
• грибковой;
• невыясненной этиологии.

Бактериально обусловленное воспаление верхнего отдела урологической системы (почек и мочеточников), а также нижнего мочевыделительного тракта (мочевого пузыря и уретры) характеризуется появлением бактерий в моче, что определяется с помощью лабораторных исследований.

Можно определить следующие причины бактерий в моче.

Бактерии могут проникать в мочевыделительную систему восходящим путем, а также из кровеносной или лимфатической системы. Наибольшее значение имеет восходящий путь попадания бактерий из кишечника. Особенно это касается кишечной палочки и бактерий семейства Enterobacteriaceae. Частые рецидивы заболеваний обусловлены особенностями слизистого слоя уретры. У некоторых бактерий есть сродство к рецепторам этого слоя и они способны хорошо цепляться и удерживаться внутри мочеиспускательного канала и не вымываться мочой.

Задержка мочи в пузыре при спазме или обструкции мочевыводящих путей создает благоприятные условия размножению бактериальных колоний. Патологические состояния:

• рефлюкс на различных уровнях (обратный заброс мочи);
• доброкачественная гиперплазия предстательной железы и другие опухоли мочевых путей;
• последствия мочекаменной болезни в виде нефроптоза;
• беременность.

Запоры создают «резервуар» для бактерий и к тому же раздутая прямая кишка давит на органы мочеполовой системы, способствуя застойным явлениям в них. Сюда же можно отнести и недержание кала, вследствие чего увеличивается загрязнение перианальной области.

Мужской мочеиспускательный канал намного длиннее женского, а секрет предстательной железы обладает некоторой антибактериальной активностью. Это формирует дополнительные препятствия на восходящем пути проникновения бактерий. Вместе с тем у мальчиков без обрезания кишечную флору в уретре можно обнаружить в 10 раз чаще, чем у обрезанных.

Из которых возбудитель способен попасть в почки. Часто это воспаление репродуктивных органов малого таза. Особенно если они сочетаются с иммунодефицитным состоянием.

Установка временного или постоянного катетера; введение рентгеноконтрастного вещества; операции на органах мочеполовой системы.

Нарушение состояния эпителиального покрова мочевыводящих путей, изменение свойств защитной слизи, ослабление местного иммунитета.

Чаще всего встречаются такие жалобы пациентов:

• Позывы к мочеиспусканию учащенные, сопровождаются болью или резью, иногда присоединяется рефлекторная задержка мочи или другие расстройства мочеиспускания.
• Температура тела чаще нормальная, но при активном инфекционном процессе может быть лихорадка.
• Появляется неприятный запах у мочи.

Те или иные симптомы являются проявлением основного заболевания.

Основываясь на особенностях анатомии мочеполовой системы, а также на клиническом опыте, можно предположить, что у женщин будут преобладать цистит, уретрит и пиелонефрит, а у мужчин чаще всего появляются уретрит и простатит.

Если в моче определяется много бактерий, а клинической симптоматики нет, то говорят о явлении бессимптомной бактериурии. Почему такое возможно? Скорее всего, непатогенные микроорганизмы попадают в мочу из нестерильного нижнего отдела уретры. Или же их размножение связано с длительным стоянием пробы мочи до анализа, несоблюдением техники забора этой биологической жидкости.

С большой вероятностью причиной бессимптомной бактериурии являются:

• Высокая сексуальная активность. Шансы попадания бактерий в уретру повышены у женщин по причине более короткого и широкого канала.
• Беременность. Снижение защитных сил организма позволяет микрофлоре с области промежности колонизировать мочевыделительные пути.
• Сахарный диабет. «Сладкая» моча является хорошей питательной средой для бактерий.
• Диализ и установка урологического катетера создают условия для снижения диуреза и уменьшения ополаскивания мочевого пузыря. Таким образом, невозможно вовремя избавиться от занесенной флоры.

Существует несколько способов провести анализ мочи на бактерии.

Одним из ориентировочных методов определения является нитритный тест. Бактерии выступают в роли маленькой химической лаборатории. Они восстанавливают нитраты мочи в нитриты. На основании того, как взаимодействуют нитриты и реагент, делают вывод о присутствии бактерий. Тест доступен в виде полосок, пропитанных реагентом и цветовой шкалы для определения концентрации нитритов. Однако тест может давать ложноотрицательную реакцию, например, у детей. О причинах бактериурии у детей можно узнать в этой статье.

Метод также ориентировочный, со специфичностью до 90%. При исследовании мочи бактериурией считается обнаружение одной и более бактерий в поле зрения при увеличении в 400 раз. Сами бактерии идентифицируют по внешнему виду.

Подтверждение догадок врача о наличии инфекционно-воспалительного заболевания мочевыделительной системы дает общий анализ мочи. В таком случае выше нормы будут показатели лейкоцитов и большое количество бактериальных клеток в поле зрения.

Но для выяснения причины инфекции этого будет мало. Необходимо установить микроорганизм – возбудитель, провести бактериологический анализ мочи. Это микробиологический метод, благодаря которому узнают качественный и количественный состав бактерий. Его точность зависит от того, насколько правильно выполнен сбор мочи на бактериологическое исследование.

Важные моменты при сборе пробы мочи:

• половые органы тщательно обмывают. Делать это нужно без мыла или растворов антисептика. Женщинам рекомендуют вставить во влагалище тампон, это снизит риск попадания вагинальной флоры в мочу;
• нужно предоставить среднюю порцию утренней мочи, или как минимум 3-4 часа до этого воздержаться от мочеиспускания;
• собирается урина для анализа в стерильный пластиковый контейнер. Во время процедуры важно не касаться горлышка и крышки руками;
• образец должен быть доставлен в лабораторию не позже чем через два часа с момента сбора.

Анализ мочи на бактериурию покажет либо отрицательный результат, либо числовое выражение количества бактерий каждого вида в единицах измерения КОЕ – колониеобразующая единица. Колония – это скопление бактерий, которое вырастает в виде пятна на питательно среде, после того, как на нее перенесли пробы биологического материала. Вот эти колонии и подсчитывают в лаборатории.

Интерпретация данных показателей:

• КОЕ 10 5 /мл – бактерии в анализе мочи. Дальше необходимо провести определение культуры возбудителя и его чувствительность к антибиотикам.
• КОЕ 10 4 -10 5 /мл – «серая зона». Что это значит: результат не может расцениваться никак норма, и никак патология. Так называют сомнительные данные, требующие повторить лабораторные исследования после более тщательной подготовки. Особенно если выделилась смешанная флора. Это говорит о попадании в пробу мочи загрязнения извне.
• КОЕ 4/мл – незначительная бактериурия, скорее всего, вызвана смыванием вместе с мочой нормальной флоры с нижнего отдела уретры.

Тест на чувствительность флоры называется антибиотикограмма. Выделение каждого вида бактерии найдет свое место в списке бланка анализа. Их названия пишут на латыни. Какие чаше всего бывают возбудители инфекций мочевыделительной системы? Это условно-патогенная флора bact. Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Klebsiella spp и Proteus, Lactobacillus. Патогенные Staphylococci, Streptococci, Pseudomonas spp. После каждого наименования бактерии лаборант указывает количество в единицах КОЕ в мл.

Также в бланке представлены антибиотики, к которым определяется чувствительность.

На пересечении названия бактерии и препарата ставят обозначение в виде «+». Расшифровка анализа антибиотикограммы: один плюс указывает, что бактерия невосприимчива к действию антибиотика. Соответственно «++» – имеют низкую восприимчивость, а «+++» – хорошую. В зависимости от вида бланка могут быть и другие значения – «R» означает устойчивость бактерий (резистентность), «S» – чувствительность.

Бактерии в моче могут быть единственным отклонением от нормальных показателей организма. В урологии в ходу понятие «бессимптомной бактеруирии» (см. выше). Лечение бактерий в моче антибактериальными препаратами в таком случае не проводят. Разве что пациенту будет предстоять урологическая операция, или развивается обструкция мочевыводящих путей, или состояние иммунодефицита. Профилактический прием антибиотиков при бессимптомной бактеруирии неоправдан, ведь часто риск побочных эффектов превышает пользу терапии. А как говорил великий врач Гиппократ: «Не навреди!»

Существует несколько подходов к тому, чем лечить бактерии в моче. Эмпирический основан на теоретическом знании, какие возбудители чаще всего вызывают то или иное заболевание. Так, при неосложненных инфекциях предполагают причиной кишечную палочку и подбирают препараты, максимально активные в ее отношении — Амоксициллин и Ко-тримоксазол.

Для лечения хронических заболеваний ввиду того, что основной причиной являются грамм «-» микроорганизмы и стафилококки, прописывают защищенные бета-лактамные антибиотики, группы фторхинолонов и цефалоспоринов 2-го и 3-го поколения.

Если определены в моче бактерии синегнойной палочки, то в ход идут антибиотики активные именно против этого возбудителя – Ципрофлоксацин, Офлоксацин, Цефтазидим.

Другой подход – получение результатов чувствительности бактерии перед тем как лечить заболевание. Такой принцип позволяет использовать препараты с узким спектром действия, что уменьшает вероятность побочных эффектов терапии.

Также выбирая антибиотик, важно учитывать опыт предыдущего применения и переносимости.

Длительность курса антибиотикотерапии зависит от производимого эффекта и исчезновения бактерий из мочи. Поэтому лечение следует контролировать бактериологическим исследованием урины.

источник

Возможность ПЦР-диагностики инфекций мочевыводящих путей, вызванных бактериальными возбудителями.

Инфекции мочевыводящих путей (ИМП) продолжают оставаться одними из самых распространенных бактериальных инфекций человека. Наиболее частыми возбудителями являются Escherichia coli, реже встречаются другие представители семейства Enterobacteriaceae, бактерии родов Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus, Pseudomonas, Acinetobacter. Роль грамположительной флоры увеличивается при развитии хронических заболеваний или госпитальных инфекций. Более чем у 20% больных наблюдается ассоциация микробов, при этом грамотрицательные бактерии чаще сочетаются с грамположительными (например: E. сoli и E. faecalis).

ИМП у женщин встречаются гораздо чаще, чем у мужчин, что обусловлено анатомическим строением мочевыделительной системы. В год в среднем 8–15% взрослых женщин страдают от ИМП, тогда как встречаемость ИМП у мужчин той же возрастной группы примерно 1% в год. Серьезную проблему представляет ОИМП (осложненные инфекции мочевыводящих путей), к которым относятся заболевания, характеризуемые наличием функциональных или анатомических патологий в организме. Пациенты, страдающие ОИМП, более остальных склонны к быстрому развитию инфекционного процесса, который, в свою очередь, требует принятия быстрого решения о назначении адекватной терапии.

Диагноз ИМП ставится на основании клинических симптомов и результатов лабораторной диагностики. В качестве методов диагностики ИМП в клинических лабораториях используют проточные цитометры, микроскопию с окрашиванием по Граму, микробиологические методы исследования мочи. Посев мочи на наличие бактерий остается референсным методом исследования, давая представление о качественном и количественном составе микрофлоры, а также чувствительности выделенного микроорганизма к антибиотикам. Однако, данный метод является достаточно длительным и трудоемким, помимо того существует ряд возбудителей (анаэробная флора, L-формы микроорганизмов), культивирование которых представляет особенную сложность и часто не доступно для клинических лабораторий.

С диагнозом ИМП в микробиологическую лабораторию для рутинной обработки поступает большое количество анализов, требующих разработки и применения быстрых и чувствительных методов обнаружения бактерий в моче. В первую очередь это относится к таким группам пациентов, как беременные, пациенты с бессимптомной бактериурией, дети. Для сокращения времени выдачи результатов актуальной задачей является разработка нового скринингового метода, который позволит быстро выявить отрицательные образцы мочи и даст представление о видовом составе патогенов в исследуемом материале. В этой связи наиболее перспективным выглядит метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), который позволяет быстро и точно проводить идентификацию бактерий путем анализа генетического материала микроорганизмов.

Принцип действия тест-систем по обнаружению основных возбудителей ИМП и бактериурии основан на обнаружении специфичных участков геномной ДНК бактерий с детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени. ПЦР «в реальном времени» характеризуется возможностью проведения качественного и количественного анализа.

Целью данной работы была оценка возможности нового скринингового метода идентификации патогенов в моче путем количественной ПЦР в режиме реального времени и сравнение полученных результатов с микробиологическими методами исследования.

Материалы и методы

Клинические образцы. Клинико-лабораторное исследование для оценки диагностической чувствительности и специфичности тест-системы проведено на 200 клинических образцах мочи в группе 200 пациентов. Из них 154 (77%) женщины и 46 (23%) мужчин. Средний возраст пациентов составил 30 лет (от 0 до 89). В 20 случаях моча поступала от беременных, 125 образцов поступили с отметкой «обследование», и для 55 пациентов был известен предварительный диагноз: ИМП (n = 11), мочекаменная болезнь, МКБ (n = 9), хронический пиелонефрит (n = 5), почечная колика (n = 4), острый пиелонефрит (n = 3), хронический цистит (n = 3), внутрижелудочковое кровоизлияние (n = 3), пиелонефрит (n = 2), гестационный пиелонефрит (n = 2), нейрогенный мочевой пузырь (n = 2), гидронефроз (n = 3), острый цистит (n = 1), хронический цистит/пиелонефрит (n = 1), хроническая болезнь почек (n = 1), цистит (n = 1), гломерулонефрит (n = 1), гипербилирубинемия (n = 1), острый синусит (n = 1), гепатоспленомегалия (n = 1), врожденная пневмония (n = 1), множественные пороки развития (n = 1).

Микробиологические исследования. Образцы мочи поступали в микробиологическую лабораторию для посева на микрофлору. Посев производили на неселективную среду Уриселект 4 (Bio-Rad, США) для изолирования и подсчета микроорганизмов из мочевого тракта; прямой идентификации E. coli (розовые колонии), Enterococcus spp (синие колонии), Proteus mirabilis (коричневые колонии); предварительной идентификации KES-группы (Klebsiella, Enterobacter, Serratia). Также посев производили на 5% кровяной агар для выделения бактерий рода Streptococcus и определения гемолитических свойств микроорганизмов.

Культивировали при 37 °С в течение 24 часов при аэробных условиях. Выросшие бактерии, количество которых на чашке превышало 10*4 КОЕ/мл, считались возбудителями инфекции. При наличии роста проводили идентификацию выросших микроорганизмов методом MALDI ToF масс-спектрометрии с применением анализатора Autoflex III Smartbeam (Bruker Daltonics, Германия)и программного пакета MALDI Biotyper 3.1 (Bruker Daltonics, Германия).

Количественная ПЦР в режиме реального времени. Для определения концентрации микробной ДНК в исследуемом образце использовали плазмидные конструкции с клонированной последовательностью целевого продукта ДНК соответствующего возбудителя, растворенные в ТЕ-буфере (10mM Tris-HCl, pH 8,0; 1mM EDTA). Количество копий (геном-эквивалентов) плазмидной ДНК в стоковом растворе соответствовали концентрации 10*10 копий/мл. Затем путем 10-кратных разведений были приготовлены растворы с концентрацией ДНК 10*8—10*2 копий/мл, которые использовали для построения калибровочных кривых. Постановку ПЦР и интерпретацию полученных данных проводили на приборе iCycler IQ5 (BioRad, США) по следующей программе: 94 °С – 1,5 минуты, затем 40 циклов: 95 °С – 10 секунд (денатурация), 64 °С – 11 секунд (отжиг праймеров), 72 °С – 20 секунд (элонгация). Детекция продуктов прибором осуществляется автоматически в каждом цикле амплификации. На основе этих данных управляющая программа строит кривые накопления флуоресцентного сигнала по каждому из заданных для образцов каналу. Для расчета количества геном-эквивалентов соответствующих микроорганизмов в клинических образцах параллельно проводили реакцию амплификации с калибровочными образцами в концентрации от 10*8 до 10*2 копий/мл гена 16S rRNA.

Перерасчет количества геном-эквивалента в анализируемых образцах проводили с учетом копийности гена 16S rRNA для каждого детектируемого микроорганизма: Enterococcus sp, Streptococcus sp , Pseudomonas aeruginosae – 4 копии гена, Staphylococcus aureus – 5 копий, E. coli, Proteus sp, Serratia sp – 7 копий и Enterobacter sp – 8 копий гена. Все образцы, цикл выхода которых был ниже 35, считались отрицательными. По завершении всех действий программа автоматически рассчитывает точки пересечения кривых накопления флуоресцентного сигнала каждого образца с пороговой линией, строит калибровочную кривую и рассчитывает концентрацию ДНК в исследуемых образцах.

В ходе клинических испытаний были проанализированы 200 образцов мочи. Все образцы после проведения микробиологических исследований поступали в лабораторию ПЦР для выделения ДНК и тестирования на наличие ДНК возбудителей методом количественной ПЦР в режиме реального времени с применением набора «Септоскрин».

Согласно результатам микробиологических посевов в 95 образцах мочи (95/200, 47,5%) роста микроорганизмов не наблюдалось, в 70 образцах (70/200, 35%) обнаружен один бактериальный возбудитель. В 35 образцах мочи (35/200, 17,5%) выявлены полимикробные инфекции, из них в 7 образцах (7/35, 20%) обнаружено более двух патогенов. В случаях мономикробной инфекции наиболее часто выявлялись Escherichia coli (27/70, 38,6%), Enterococcus faecalis (20/70, 28,6%) и Enterococcus faecium (8/70, 11,4%). В 4,3% (3/70) единственным выявленным возбудителем были коагулазонегативные стафилококки, в 2,9% (2/70) — Streptococcus spp. Бактерии KES-группы (Klebsiella, Enterobacter, Serratia) в моноинфицированных образцах обнаруживались в 10% случаев (7/70). В оставшихся образцах 4,3% выделенных возбудителей пришлось на долю Candida spp (2/70, 2,9%) и Pseudomonas mosselii (1/70, 1,4%). Среди образцов с полимикробными инфекциями в случаях выявления двух возбудителей доминировало сочетание E. сoli и E. faecalis (11/35, 31,4%). В 6 случаях обнаруживались сочетания бактерий E. coli/K. pneumonia (4/35, 11,4%), и E . faecаlis /Streptococcus spp. (2/35, 5,7%). При выявлении трех и более возбудителей сочетание E. coli / E. faecalis /Staphylococcus spp. было наиболее часто встречаемым (3/7, 42,9%).

Результаты ПЦР. Методом количественной ПЦР в режиме реального времени в 123 образцах (123/200, 61,5%) возбудителей не обнаружено. Из 77 положительных образцов (77/200, 38,5%) один бактериальный возбудитель выявлен в 48 образцах мочи (48/77, 62,3%), два возбудителя — в 16 образцах (16/77, 20,8%), три и более — в 13 образцах (13/77, 16,9%). Среди мономикробных образцов мочи согласно результатам ПЦР бактерии E. coli детектированы в 28 образцах (28/48, 58,3%), в 10 образцах (10/48, 21,8%) обнаружены бактерии рода Enterococcus, в 8 — бактерии группы KES (8/48, 16,7%), в 1 — Staphylococcus aureus (1/48, 2,1%), в 1 – Pseudomonas aeruginosa (1/48, 2,1%). При полимикробных инфекциях методом ПЦР сочетания E. coli и бактерий рода Enterococcus выявлены в 6 образцах (6/16, 37,5%). Сочетания E. coli и бактерий родов Enterobacter/Klebsiella, а также Enterobacter spp/Klebsiella spp и Enterococcus spp обнаруживались с одинаковой частотой – 3/16, 18,75%. При выявлении трех возбудителей одновременно доминирующим сочетанием было E. coli/Enterococcus spp/(Enterobacter spp/Klebsiella spp) – 7/13, 53,8%.

Обсуждение результатов

В последнее время появляется все больше информации об успешном применении метода ПЦР в качестве быстрой диагностики заболеваний, причиной которых являются бактериальные возбудители. В представленном исследовании рассмотрена возможность применения количественной ПЦР в режиме реального времени для быстрого обнаружения патогенов в моче пациентов с ИМП и бактериурией. Сравнение нового скринингового и традиционного культурального методов исследования мочи показало как сравнительное преимущество, так и ограничения в применимости обоих методов.

Основным недостатком стандартного бактериологического метода диагностики является длительность его исполнения, иногда превышающая 48 часов. В связи с долгосрочностью анализов зачастую пациентам назначается эмпирическая, часто неадекватная антибактериальная терапия либо до получения результатов идентификации патогена в моче, либо вообще без проведения каких-либо процедур, направленных на выявление возбудителя, а также установления его лекарственной чувствительности. Подобная терапия может увеличивать риск развития осложнений. Например, проведенные ранее исследования доказали, что каждый час задержки адекватной противобактериальной терапии пациентов с септическим шоком снижает уровень выживаемости на 8 %. Особенно критично данное положение у пациентов пожилого возраста, детей и лиц с иммунодефицитом.

В сравнении с культуральным методом получение результатов идентификации патогенов методом ПЦР занимает 4–5 часов, что может способствовать раннему назначению этиотропного лечения.

Важным критерием для постановки правильного диагноза является точность идентификации и подсчет количества микроорганизмов в клиническом материале. При подозрении на ИМП и бактериурию нередко в моче обнаруживается полиинфекция. Культуральный метод с применением селективных сред при полимикробной инфекции не лишен погрешностей в связи с невозможностью подбора оптимальных условий культивирования всех возбудителей инфекции, а проведение дополнительных биохимических тестов для определения видовой принадлежности бактерии является процессом трудоемким, дорогостоящим и долговременным.

Преимуществами метода ПЦР, позволяющего выявлять генетические маркеры любых микроорганизмов, является высокая чувствительность и специфичность. В наших исследованиях мы столкнулись с погрешностью идентификации патогенов культуральным методом. В 4-х случаях (4/200, 2,0%) идентификация выявленного возбудителя была проведена некорректно. В 3 мономикробных и 1 полимикробном образцах мочи культуральным методом идентифицированы патогены рода Enterococcus, однако с помощью системы «Энкопол» (Enterococcus faecalis/E. faecium) из набора «Септоскрин» идентифицировать данные микроорганизмы в образцах не удалось. Дополнительная идентификация выросшей мономикробной культуры методом масс-спектрометрии на приборе Autoflex III Smartbeam подтвердила принадлежность данных микроорганизмов к бактериям вида Aerococcus viridans и Lactobacillus crispatus. В одном мономикробном образце по результатам ПЦР тестирования набором «Колипол» была идентифицирована E. coli в количестве 5*103 геном-эквивалентов/мл. В 1 полими-кробном образце мочи согласно результатам ПЦР система «Энтеропол» (Enterobacter spp/Klebsiella spp) указала на присутствие в образце бактерий семейства

Enterobacteriaceae. При дальнейшем исследовании культура была идентифицирована как Escherichia coli в первом случае и Klebsiella pneumoniae во втором методом масс-спектрометрии.

Традиционно, клинически значимым количеством патогенов в моче является 10*4 КОЕ/мл. В последние годы согласно рекомендациям Американского Сообщества Микробиологов (ASM, American Society for Microbiology) и European urinalysis guideline количество патогенов в моче ≥103 КОЕ/мл может интерпретироваться как причина возникновения ИМП или бактериурии, особенно если в моче присутствуют грамотрицательные бактерии (E. coli, Enterobacter spp, P. mirabilis, P. aeruginosa, Serratia marcescens, K. pneumoniae и др.). Мы также проверили значимость полученных данных, принимая во внимание содержание клеток в моче от 10*3 КОЕ/мл и выше.

Количество идентифицированных E. coli в качестве единственного возбудителя, возросло незначительно (с 27 до 29), значительно увеличилось число случаев (с 28 до 36) выявления E. coli методом ПЦР в количестве 10*3геном-эквивалентов/мл и более. Такие же результаты получены при сопоставлении результатов идентификаций бактерий рода Enterococcus. В моноинфицированных пробах при снижении клинически значимого порога до 10*3 КОЕ/мл количество детектированных Enterococcus spp увеличилось с 29 до 33, тогда как с помощью ПЦР «в реальном времени» энтерококки удалось обнаружить в 16 образцах при снижении порога до 10*3 геном-эквивалентов. Остальные выделенные патогены при снижении порога обнаруживались с одинаковой частотой.

Более значимые изменения в результатах наблюдались при исследовании полимикробных образцов с учетом снижения порога до 10*3. Частота обнаружения ДНК E. coli в смешанных образцах возросла с 21 до 29, тогда как результаты микробиологических посевов мочи не изменились. Значительно увеличилось количество детектированных бактерий рода Enterococcus (с 22 до 34 методом ПЦР), Enterobacter spp и Klebsiella spp (с 16 до 25 методом ПЦР) в полимикробных пробах. Также почти в 2 раза возросла частота обнаружения бактерий рода Serratia (с 3 до 7).

Таким образом, при использованием диагностических тест-наборов «Септоскрин» с учетом снижения порога клинической значимости выделенных патогенов до 10*3 геном-эквивалентов/мл частота выявления грамотрицательных патогенов в моче увеличилась на 25%, а грамположительной — на 36,8%.

В 29 образцах при отсутствии роста микроорганизмов на питательных средах методом ПЦР-диагностики дополнительно было выявлено 42 патогена в количестве 10*3 – 10*4 геном-эквивалентов/мл. Из них 13 были мономикробные образцы и 16 — полимикробные. Среди моноинфицированных проб чаще всего выявляли представителей семейства Enterobacteriaceae (3 E. coli, 6 бактерий KES-группы), энтерококки детектировали в 3 случаях, стрептококки — в 2 случаях, P. aeruginosa – 1, и S. aureus – 1. При анализе 16 полимикробных образцов мочи дополнительно методом ПЦР выявлены бактерии семейства Enterobacteriaceae (E. coli – в 4 случаях, бактерии группы KES – в 9), Enterococcus spp – в 6 случаях, P. aeruginosa — в 3, S. aureus – в 2, Proteus spp — в 1 и стрептококки – в 1. Согласно данным, представленным в ASM

и European urinalysis guideline, титр клеток 10*5 КОЕ/мл и выше обнаруживается у пациентов с ИМП, однако, когда диагноз ИМП является предварительным, и клинические проявления заболевания сохраняются, наличие единственного бактериального возбудителя в моче в количестве менее 10*4 в мл приобретает клиническое значение. Опираясь на данное утверждение, моноинфицированные образцы мочи с низким содержанием бактериальных возбудителей, особенно грамотрицательной флоры, также следует рассматривать как клинически значимые. Вопрос о важности роли грамположительной инфекции в патогенезе ИМП и бактериурии стоит остро при ассоциации микробов, выявлении госпитальных инфекций или при осложненных инфекциях мочевыводящих путей. В нашем исследовании в виде моноинфекции бактерии рода Enterococcus в высоком титре встречались преимущественно у пациентов с диагнозом ОИМП. Грамположительная флора с низким титром часто выявлялась у пациентов с пометкой «обследование», беременных или новорожденных в мономикробных образцах, а также в качестве сопутствующей в полимикробных пробах мочи. Обнаружение стрептококков и энтерококков в невысоком титре в качестве сопутствующей флоры в посевах оставляет вопрос о контаминации мочи и отсутствии значимости данных бактерий в этиологии заболевания. Принимая во внимание сложность забора мочи у грудных детей, а также высокий риск контаминации кишечной флорой, полученные результаты микробиологических посевов мочи можно рассматривать как недостоверные. Стрептококки группы Б, обнаруженные в основном у беременных в малом количестве, не являются сами по себе патогенами, а чаще всего их титр в моче увеличивается на фоне развития грамотрицательной или анаэробной флоры. Грамотрицательная флора, обнаруженная в полимикробных образцах мочи, с низким содержанием клеток в мл также оставляет дискутабельным вопрос о контаминации.

Опираясь на количественные данные, мы сопоставили количество КОЕ/мл, полученные при культуральном методе идентификации, и количество геном-эквивалентов/мл каждого микроорганизма, полученных при пересчете данных после ПЦР. В 11 случаях количество геном-эквивалентов E. coli в мл превышало количество КОЕ, выросших на чашках, на 1,5–2 порядка, других патогенов семейства Enterobacteriaceae — в 9 пробах, энтерококки — в 8 образцах мочи, Proteus spp — в 2, S. aureus и P. aeruginosa – в 1. Мы полагаем, что подобные результаты могут быть получены вследствие начала приема антибактериальных препаратов, назначенных до сдачи мочи на анализ и получения результатов выделения патогенов в моче. При наличии инфекции прием антибактериальных препаратов приводит к уменьшению количества заселяющих мочевыводящий тракт микроорганизмов, вследствие чего титр жизнеспособных клеток в моче при микробиологическом посеве будет ниже. Так как при выделении ДНК все бактериальные клетки подвергаются лизису, количество геном-эквивалентов рассчитывается, исходя из тотального количества ДНК в пробе, что не отражает жизнеспособности бактерий. Принимая во внимание, что моча является достаточно агрессивной средой, не пригодной для нормальной жизнедеятельности микроорганизмов, количество мертвых клеток в моче могло увеличится также вследствие несоблюдения правил хранения и транспортировки проб мочи с момента взятия материала до момента проведения анализа. Полагая, что бактерии могли погибнуть в моче вследствие длительной транспортировки или при неправильном хранении пробы, можно ожидать, что первоначальный титр жизнеспособных клеток в моче был выше, что дает основания рассматривать результаты ПЦР как истинные, а результаты посевов как ложноотрицательные или заниженные. Особенно актуальным остается этот вопрос при выявлении грамотрицательной флоры. В 12 образцах при наличии роста микроорганизмов на питательных средах методом ПЦР искомых патогенов обнаружено не было. В 8 случаях преобладала грамположительная флора: в 1 полимикробной пробе мочи, поступившей от беременной, были детектированы 2 патогена в количестве 10*4 КОЕ/ мл: E. faecalis и Streptococcus agalactiae, у 6 пациентов обнаружен энтерококк в титре от 10*4 до 10*5, в 2 пробах детектированы S. agalactiae 10*5 КОЕ/ мл.

Среди оставшихся 4 образцов мочи в 2 пробах зафиксирован рост E. coli и в 2 — представители семейства Enterobacteriaceae. В обоих случаях обнаружения E. coli образцы мочи поступили от женщин 1933 и 1991 года рождения, бактерии выявлены в титрах 10*5 и 10*4 соответственно. Высокий титр дает основание предполагать наличие инфекции в обоих случаях. Из 2 оставшихся проб мочи с выделенными бактериями рода Enterobacter, первый образец получен с пометкой «обследование» от мужчины 65 лет, титр возбудителя составил 10*4 КОЕ/мл. Вторая проба поступила от новорожденного также с пометкой «обследование», титр составил 10*7 КОЕ/мл. При обнаружении в моче новорожденного бактерий в количестве, превышающем 10*4 КОЕ/мл, наиболее вероятно наличие воспалительного процесса. Обнаружение в моче мужчины представителей рода Enterobacter в титре 10*4 и выше указывает на инфекцию мочевыводящих путей. Несмотря на отрицательные результаты ПЦР-тестов и, основываясь на свидетельствах об инфекции согласно полученным положительным результатам микробиологических посевов, данная проблема получения ложноотрицательных результатов ПЦР остается актуальной.

Наиболее важным вопросом при принятии решения о назначении адекватного лечения остается лекарственная чувствительность выделенных бактериальных возбудителей, которая на сегодняшний день может быть определены лишь микробиологическими методами исследования. Методом ПЦР возможно определение только генетически обусловленной устойчивости патогена. Вариантами такой устойчивости среди грамотрицательных микроорганизмов является устойчивость к β-лактамным антибиотикам (гены TEM, SHV, CTX-M, OXA, VIM, NDM) и фторхинолонам (гены GyrA, ParC, QnrA), среди грамположительных микроорганизмов — устойчивость Enterococcus spp к гликопептидам (гены VanA, VanB), устойчивость стафилококков к β-лактамным антибиотикам (ген MecA), устойчивость стрептококков к макролидам (гены Mef и Erm) и фторхинолонам. Из-за долгосрочности выполнения посевов для определения антибиотикоустойчивости выделенных патогенов, наборы для определения чувствительности бактерий методом ПЦР в режиме реального времени представляют собой хорошее дополнение к имеющейся панели реактивов. Разработка и тестирование серии ПЦР-наборов для обнаружения детерминант резистентности является темой для дальнейших исследований. Несмотря на высокую специфичность и чувствительность систем и значительное сокращение времени проведения анализа, очень важным ограничением остается то, что не все патогены, встречаемые в моче, можно детектировать методом ПЦР. Такие возбудители, как Candida sp, Acinetobacter spp, коагулазонегативные стафилококки, Citrobacter spp, Stenotrophomonas maltophilia, Morganella morganii и др., обнаруженные в моче культуральным методом, пропущены при исследовании мочи методом ПЦР «в реальном времени». Подобное ограничение возможно устранить путем создания новых тест-систем.

источник