Фотометрический метод определения белка в моче

Патологическая протеинурия является одним из наиболее важных и постоянных признаков заболеваний почек и мочевых путей. Определение концентрации белка в моче является обязательным и важным элементом исследования мочи. Выявление и количественная оценка протеинурии важна не только в диагностике многих первичных и вторичных заболеваний почек, оценка изменения выраженности протеинурии в динамике несет информацию о течении патологического процесса, об эффективности проводимого лечения. Обнаружение белка в моче даже в следовых количествах должно настораживать в отношении возможного заболевания почек или мочевых путей и требует повторного анализа. Особо следует отметить бессмысленность исследования мочи и, в частности, определения белка мочи без соблюдения всех правил ее сбора.

Все методы определения белка в моче можно разделить на:

Качественные,
Полуколичественные,
Количественные.

Все качественные пробы на белок в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. При наличии белка в исследуемом образце мочи появляется либо помутнение, либо выпадение хлопьевидного осадка.

Условия определения белка в моче на основе реакции коагуляции:

Моча должна иметь кислую реакцию. Мочу щелочной реакции подкисляют несколькими (2 — 3) каплями уксусной кислоты (5 – 10%).
Моча должна быть прозрачной. Помутнение устраняется через бумажный фильтр. Если помутнение не исчезает, добавляют тальк или жженую магнезию (около 1 чайной ложки на 100 мл мочи), взбалтывают и фильтруют.
Качественную пробу следует проводить в двух пробирках, одна из них – контрольная.
Искать помутнение следует на черном фоне в проходящем свете.

К качественным методам определения белка в моче относятся:

Как показывают многочисленные исследования, ни один из большого числа известных методов качественного определения белка в моче не позволяет получать надежные и воспроизводимые результаты. Несмотря на это, в большинстве КДЛ в России эти методы широко используются в качестве скрининга – в моче с положительной качественной реакцией в дальнейшем проводят количественное определение белка. Из качественных реакций чаще используют пробу Геллера и пробу с сульфосалициловой кислотой, однако пробу с сульфосалициловой кислотой большей частью считают наиболее подходящей для выявления патологической протеинурии. Проба с кипячением в настоящее время практически не используется в связи с ее трудоемкостью и длительностью.

В основе метода Брандберга-Робертса-Стольникова лежит кольцевая проба Геллера, поэтому при данном методе наблюдаются те же ошибки, что и при пробе Геллера.

В настоящее время для определения белка в моче все чаще используются диагностические полоски. Для полуколичественного определения белка в моче на полоске в качестве индикатора чаще всего используется краситель бромфеноловый синий в цитратном буфере. О содержании белка в моче судят по интенсивности сине-зеленой окраски, развивающейся после контакта реакционной зоны с мочой. Результат оценивается визуально или с помощью анализаторов мочи. Несмотря на большую популярность и очевидные преимущества методов сухой химии (простота, скорость выполнения анализа) данные методы анализа мочи в целом и определения белка в частности не лишены серьезных недостатков. Одним из них, приводящих к искажению диагностической информации, является большая чувствительность индикатора бромфенолового синего к альбумину по сравнению с другими белками. В связи с этим, тест-полоски в основном приспособлены к обнаружению селективной гломерулярной протеинурии, когда практически весь белок мочи представлен альбумином. При прогрессировании изменений и переходе селективной гломерулярной протеинурии в неселективную (появление в моче глобулинов) результаты определения белка оказываются заниженными по сравнению с истинными значениями. Данный факт не дает возможности использовать данный метод определения белка в моче для оценки состояния почек (гломерулярного фильтра) в динамике. При тубулярной протеинурии результаты определения белка также оказываются заниженными. Определение белка с помощью диагностических полосок не является надежным индикатором низких уровней протеинурии (большинство выпускаемых в настоящее время диагностических полосок не обладают способностью улавливать белок в моче в концентрации ниже, чем 0,15 г/л). Отрицательные результаты определения белка на полосках не исключают присутствия в моче глобулинов, гемоглобина, уромукоида, белка Бенс-Джонса и других парапротеинов.

Хлопья слизи с высоким содержанием гликопротеидов (например, при воспалительных процессах в мочевых путях, пиурии, бактериурии) могут оседать на индикаторной зоне полоски и приводить к ложноположительным результатам. Ложноположительные результаты могут также быть связаны с высокой концентрацией мочевины. Плохое освещение и нарушение цветоощущения может быть причиной неточного результата.

В связи с этим, использование диагностических полосок следует ограничить скринирующими процедурами, а результаты, полученные с их помощью, следует рассматривать лишь как ориентировочные.

Корректное количественное определение белка в моче в ряде случаев оказывается непростой задачей. Трудности ее решения определяются следующим рядом факторов:

низким содержанием белка в моче здорового человека, часто находящимся на пороге чувствительности большинства известных методов;
присутствием в моче множества соединений, способных вмешиваться в ход химических реакций;
значительными колебаниями содержания и состава белков мочи при различных заболеваниях, затрудняющими выбор адекватного калибровочного материала.

В клинических лабораториях преимущественно применяются так называемые «рутинные» методы определения белка в моче, однако они далеко не всегда позволяют получать удовлетворительные результаты.

С точки зрения специалиста-аналитика, работающего в лаборатории, метод, предназначенный для количественного определения белка в моче, должен отвечать следующим требованиям:

обладать линейной зависимостью между поглощением образовавшегося в ходе химической реакции комплекса и содержанием белка в пробе в широком диапазоне концентраций, что позволит избежать дополнительных операций при подготовке пробы к исследованию;
должен быть прост, не требовать высокой квалификации исполнителя, выполняться при малом количестве операций;
обладать высокой чувствительностью, аналитической надежностью при использовании небольших объемов исследуемого материала;
быть устойчивым к воздействию различных факторов (колебаниям состава образца, присутствию лекарственных препаратов и др.);
обладать приемлемой стоимостью;
быть легко адаптируемым к автоанализаторам;
результат определения не должен зависеть от белкового состава исследуемого образца мочи.

Ни один из известных к настоящему времени методов количественного определения белка в моче не может в полной мере претендовать на роль «золотого стандарта».

Количественные методы определения белка в моче можно разделить на турбидиметрические и колориметрические.

К турбидиметрическим методам относятся:

определение белка с сульфосалициловой кислотой (ССК),
определение белка с трихлоруксусной кислотой (ТХУ),
определение белка с бензетоний хлоридом.

Турбидиметрические методы основаны на снижении растворимости белков мочи вследствие образования суспензии взвешенных частиц под воздействием преципитирующих агентов. О содержании белка в исследуемой пробе судят либо по интенсивности светорассеяния, определяемого числом светорассеивающих частиц (нефелометрический метод анализа), либо по ослаблению светового потока образовавшейся суспензией (турбидиметрический метод анализа).

Величина светорассеяния в преципитационных методах обнаружения белка в моче зависит от множества факторов: скорости смешивания реактивов, температуры реакционной смеси, значения pH среды, присутствия посторонних соединений, способов фотометрии. Тщательное соблюдение условий реакции способствует образованию стабильной суспензии с постоянным размером взвешенных частиц и получению относительно воспроизводимых результатов.

Некоторые лекарственные препараты влияют на результаты турбидиметрических методов определения белка в моче, приводя к так называемым «ложноположительным», либо «ложноотрицательным» результатам. К ним относятся некоторые антибиотики (бензилпенициллин, клоксациллин и др.), рентгеноконтрастирующие йодсодержащие вещества, сульфаниламидные препараты.

Турбидиметрические методы плохо поддаются стандартизации, часто приводят к получению ошибочных результатов, но, несмотря на это, в настоящее время они широко используются в лабораториях из-за невысокой стоимости и доступности реактивов. Наиболее широко в России используется метод определения белка с сульфосалициловой кислотой.

Наиболее чувствительными и точными являются колориметрические методы определения общего белка мочи, основанные на специфических цветных реакциях белков.

биуретовая реакция,
метод Лоури,
методы, основанные на способности различных красителей образовывать комплексы с белками:
- Понсо S (Ponceau S),
- Кумасси бриллиантовый синий (Coomassie Brilliant Blue)
- пирогаллоловый красный (Pyrogallol Red).

С точки зрения исполнителя, в повседневной работе лаборатории при большом потоке исследований биуретовый метод является неудобным из-за большого числа операций. В то же время, метод характеризуется высокой аналитической надежностью, позволяет определять белок в широком диапазоне концентраций и выявлять альбумин, глобулины и парапротеины со сравнимой чувствительностью, вследствие чего биуретовый метод рассматривают в качестве референтного и рекомендуют для сравнения других аналитических методов обнаружения белка в моче. Биуретовый метод определения белка в моче предпочтительно выполнять в лабораториях, обслуживающих нефрологические отделения, и использовать в тех случаях, когда результаты определения с помощью других методов представляются сомнительными, а также для определения величины суточной потери белка у нефрологических больных.

Метод Лоури, обладающий более высокой чувствительностью по сравнению с биуретовым методом, сочетает биуретовую реакцию и реакцию Фолина на аминокислоты тирозин и триптофан в составе белковой молекулы. Несмотря на высокую чувствительность, данный метод не всегда обеспечивает получение надежных результатов при определении содержания белка в моче. Причиной тому служит неспецифическое взаимодействие реактива Фолина с небелковыми компонентами мочи (чаще всего аминокислотами, мочевой кислотой, углеводами). Отделение этих и других компонентов мочи путем диализа или осаждения белков позволяет с успехом использовать данный метод для количественного определения белка в моче. Некоторые лекарственные препараты – салицилаты, хлорпромазин, тетрациклины способны оказывать влияние на данный метод и извращать результаты исследования.

Достаточная чувствительность, хорошая воспроизводимость и простота определения белка по связыванию красителей делают эти методы перспективными, однако высокая стоимость реактивов препятствует более широкому их использованию в лабораториях. В настоящее время в России все большее распространение получает метод с пирогаллоловым красным.

Проводя исследование уровня протеинурии, нужно иметь ввиду, что различные методы определения протеинурии имеют разную чувствительность и специфичность к многочисленным белкам мочи.

Исходя из эмпирических данных, рекомендуется определять белок двумя разными методами и рассчитывать истинное значение по одной из приведенных формул:

протеинурия = 0,4799 B + 0,5230 L;
протеинурия = 1,5484 B – 0,4825 S;
протеинурия = 0,2167 S + 0,7579 L;
протеинурия = 1,0748 P – 0,0986 B;
протеинурия = 1,0104 P – 0,0289 S;
протеинурия = 0,8959 P + 0,0845 L;

где:
B – результат измерения с Кумасси G-250;
L — результат измерения с реактивом Лоури;
P — результат измерения с молибдатом пирогаллола;
S — результат измерения с сульфосалициловой кислотой.

Учитывая выраженные колебания уровня протеинурии в различное время суток, а также зависимость концентрации белка в моче от диуреза, различное его содержание в отдельных порциях мочи, в настоящее время при патологии почек принято оценивать выраженность протеинурии по суточной потере белка с мочой, то есть определять так называемую суточную протеинурию. Она выражается в г/сут.

При невозможности сбора суточной мочи рекомендуется определять в разовой порции мочи концентрации белка и креатинина. Поскольку скорость выделения креатинина в течение дня достаточно постоянна и не зависит от изменения скорости мочеотделения, отношение концентрации белка к концентрации креатинина постоянно. Данное отношение хорошо коррелирует с суточной экскрецией белка и, следовательно, может использоваться для оценки выраженности протеинурии. В норме отношение белок/креатинин должно быть менее 0,2. Белок и креатинин измеряют в г/л. Важным достоинством метода оценки выраженности протеинурии по соотношению белок-креатинин является полное исключение ошибок, связанных с невозможностью или неполным сбором суточной мочи.

О. В. Новоселова, М. Б. Пятигорская, Ю. Е. Михайлов, «Клинические аспекты выявления и оценки протеинурии», Справочник заведующего КДЛ, № 1, январь 2007 г.
А. В. Козлов, «Протеинурия: методы ее выявления», лекция, Санкт-Петербург, СПбМАПО, 2000 г.
В. Л. Эмануэль, «Лабораторная диагностика заболеваний почек. Мочевой синдром», — Справочник заведующего КДЛ, № 12, декабрь 2006 г.
В.И. Пупкова, Л.М. Прасолова — Определение белка в моче и спинномозговой жидкости. Кольцово, 2007 г.
Справочник по клиническим лабораторным методам исследования. Под ред. Е. А. Кост. Москва, «Медицина», 1975 г.

Для количественного определения белка пригоден любой образец мочи. Большинство исследователей для выяснения величины суточной потери белка предпочитают определять содержание белка в моче, собранной за сутки.

Раздел: Анализ мочи

Все качественные пробы на белок в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. При наличии белка в исследуемом образце мочи появляется либо помутнение, либо выпадение хлопьевидного осадка.

Раздел: Анализ мочи

Проба с 20% сульфосалициловой кислотой относится к качественным реакциям определения белка в моче. Так как она основана на реакции коагуляции, то исследуемая моча должна соответствовать определенным требованиям: быть прозрачной и иметь кислую реакцию.

Раздел: Анализ мочи

Кольцевая проба Геллера относится к качественным реакциям определения белка в моче. Так как она основана на реакции коагуляции, то исследуемая моча должна соответствовать определенным требованиям: быть прозрачной и иметь кислую реакцию.

Раздел: Анализ мочи

источник

В состав рабочего места по определению белка в моче входят следующие элементы:

Пробирки химические, агглютинационные.
Набор градуированных пипеток.
Пипетки с узким оттянутым концом.
Спиртовки или газовая горелка.
Черная бумага.
Ледяная уксусная кислота.
Сульфосалициловая кислота.
Концентрированная азотная кислота.
Дистиллированная вода.

Все методики, применяющиеся для качественного определения белка в моче, основаны на свертывании белка. Свертывание белка проявляется выраженным в разной степени помутнением (от опалесценции до большой мутности) или выпадением хлопьев.

Качественное определение белка в моче может быть проведено одним из следующих способов:

кипячением с 10% раствором уксусной кислоты;
реакцией с 20% раствором сульфосалициловой кислоты;
реакцией с 50% раствором азотной кислоты (проба Геллера);
реакцией с 1% раствором азотной кислоты в насыщенном растворе поваренной соли (видоизмененная проба Геллера по Ларионовой).

Перед качественным определением белка в моче проводят следующую подготовительную работу:
1. Мутную мочу фильтруют через бумажный фильтр. Если получить прозрачный фильтрат не удается, производят повторное фильтрование через тот же фильтр или же смешивают мочу с небольшим количеством инфузорной земли или талька, после чего ее фильтруют.
2. Если моча имеет щелочную реакцию, ее подкисляют 10% раствором уксусной кислоты до слабокислой реакции под контролем лакмусовой или универсальной индикаторной бумажки.
3. При малом содержании солей (светло-желтая или бледно-желтая моча с малым удельным весом) к каждой
пробе добавляют несколько капель насыщенного раствора поваренной соли, так как недостаток солей обусловливает свертывание белка.
4. Степень помутнения наблюдают с помощью черного фона. В качестве фона используют черный картон или черную бумагу, применяемую в фотографии. Учет реакции на черном фоне позволяет выявить малейшую степень помутнения.

В отдельном штативе располагают пронумерованные пробирки. В них производят одну из описанных ниже реакций.

1. Проба кипячением с 10% раствором уксусной кислоты. Для постановки этой пробы необходим 10% раствор уксусной кислоты, который готовят следующим образом: 10 мл ледяной уксусной кислоты помещают в цилиндр и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл.

Техника определения белка. В химическую пробирку помещают 10—12 мл отфильтрованной мочи слабокислой реакции. Затем верхнюю часть пробирки с мочой осторожно нагревают до кипения и добавляют в нее 8—10 капель 10% раствора уксусной кислоты. Пробирку с мочой рассматривают на черном фоне в проходящем свете. При наличии белка в моче появляется мутность разной степени (от опалесценции до большой мутности) или выпадают хлопья. Контролем служит нижняя часть пробирки, не подвергавшаяся нагреванию. Этой пробой обнаруживают количество белка, начиная с 0,015%о (%о — promille).

2. Реакция с 20% раствором сульфосалициловой кислоты. 20 % раствор сульфосалициловой кислоты готовят следующим образом: 20 г сульфосалициловой кислоты растворяют в 70-80 мл дистиллированной воды, переводят в цилиндр емкостью 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки. Приготовленный реактив хранят в посуде из темного стекла.

Техника определения белка. В две пробирки одинакового диаметра помещают по 2—3 мл отфильтрованной мочи слабокислой реакции, в одну из пробирок к моче прибавляют 3—4 капли 20% раствора сульфосалициловой кислоты, другая пробирка служит контролем. При наличии белка в пробирке с реактивом появляется мутность или выпадают хлопья свернувшегося белка. В контрольной пробирке жидкость остается прозрачной. Сульфосалициловая кислота наряду с белком сыворотки осаждает альбумозы (пептиды), представляющие собой продукт распада белка. С целью уточнения причины помутнения мочи пробирку с мочой подогревают. Мутность, причиной образования которой оказались сывороточные белки, усиливается, мутность же, обусловленная присутствием альбумоз, исчезает. Эта проба имеет ту же чувствительность, что и предыдущая.

3. Реакция с 50 % раствором азотной кислоты (проба Геллера). 50% раствор азотной кислоты готовят следующим образом: к 50 мл азотной кислоты удельного веса 1,2-1,4 приливают 50 мл дистиллированной воды (разведение 1:1).

Техника определения белка. В узкую небольшую пробирку (тина агглютинационной) наливают 1 мл 50% азотной кислоты. В пипетку с узким оттянутым концом набирают 1 мл отфильтрованной исследуемой мочи, наслаивают на реактив и пробирку переводят в вертикальное положение. При наличии белка на границе жидкостей появляется белое кольцо. Время появления кольца, его свойства зависят от количества белка: если белка мало, то кольцо появляется не сразу, поэтому за его появлением следят в течение 2,5-3 минут. Минимальное количество белка, определяемое этим методом, 0,033°/оо. При меньшем содержании белка в моче кольцо не образуется. Учет результатов реакции производят на черном фоне в проходящем свете.

4. Реакция с 1% раствором азотной кислоты на насыщенном растворе поваренной соли — видоизмененная проба Геллера (по Ларионовой). Для проведения пробы используют 1 % раствор азотной кислоты, приготовленный на насыщенном растворе поваренной соли (реактив Ларионовой). 35 г поваренной соли растворяют в 100 мл дистиллированной поды, раствор фильтруют, к 1 мл концентрированной азотной кислоты удельного веса 1,2-1,4 приливают 99 мл приготовленного насыщенного раствора поваренной соли.

Техника определения белка такая же, как и при реакции с 50% раствором азотной кислоты (проба Геллера), но вместо 1 мл 50% раствора азотной кислоты в пробирку наливают 1 мл реактива Ларионовой и на него наслаивают 1 мл мочи. Появление белого кольца на границе жидкостей указывает на наличие белка в исследуемой моче. Проба по Ларионовой так же чувствительна, как и проба Геллера.

5. Колориметрическая (сухая) проба качественного определения белка. Колориметрическая (сухая) проба качественного определения белка в моче основана на воздействии, которое оказывает белок на цвет индикатора в буферном растворе.

Техника определения белка. Кусочек индикаторной бумаги, предназначенный для определения белка погружают в мочу на короткое время. Пробу считают положительной, если бумажка окрашивается в сине-зеленый цвет.

Количественное определение белка в моче основано на том, что при наслаивании мочи, содержащей белок, на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой на границе двух жидкостей образуется белое кольцо, причем если четкое белое кольцо появляется к 3 минутам, то содержание белка равно 0,033%о или 33 мг в 1000 мл мочи. Появление кольца ранее 3 минут свидетельствует о большем содержании белка в моче.
При количественном определении белка в моче выполняют следующие правила:

Количественное определение белка производят только в тех порциях мочи, где он был обнаружен качественно.
Определение производят с тщательно отфильтрованной мочой.
Точно соблюдают технику наслаивания исследуемой мочи на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой в соотношении реактива с мочой (1:1).
Время появления кольца определяют по секундомеру: при окончательном расчете количества белка учитывают время наслаивания мочи на азотную кислоту, которое равно 15 секундам.
Разведение мочи производят исходя из свойства кольца. При этом каждое последующее разведение мочи готовят из предыдущего.
Определение колец производят на черном фоне.

Наиболее распространены два метода количественно¬го определения белка в моче: метод Робертса — Стольникова — Брандберга и метод С. Л. Эрлиха и А. Я. Альтгаузена.

Метод Робертса-Стольникова-Брандберга. По этому способу количество белка в моче определяют путем разведения ее до тех пор, пока при очередном наслаивании мочи на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой кольцо появится точно к 3 минутам. Расчет количества белка производят, умножая 0,033%о на степень разведения мочи. Полученный результат выражает количество белка в миллиграммах на 1000 мл мочи, т. е. в promille (%о).
Метод С. Л. Эрлиха и А. Я. Альтгаузена. В штатив помещают ряд агглютинационных пробирок, в которые предварительно наливают по 1 мл 50% раствора азотной кислоты или реактива Ларионовой. Исследуемую мочу берут отдельной чистой, сухой пипеткой с узким оттянутым концом и наслаивают на реактив, после чего включают секундомер. За временем появления кольца следят, располагая пробирку на черном фоне. При появлении кольца секундомер выключают.

При наслаивании мочи в зависимости от количества белка может появиться компактное, широкое или нитевидное кольцо. Компактное, широкое кольцо появляется тотчас же после наслаивания мочи на реактив. Нитевидное кольцо может появиться сразу, до истечения одной минуты, или в промежутке от одной до 4 минут.

При появлении нитевидного кольца в пределах от одной до 4 минут производить разведение мочи не нужно!
Для вычисления количества белка в этом случае достачно использовать предложенную авторами таблицу-план (табл. 1).

Пример 1. При наслаивании мочи на реактив нитевидное кольцо образовалось через 2 минуты. Если бы кольцо образовалось к 3 минутам, то количество белка было было бы равно 0,033%о.

В данном же случае кольцо образовалось раньше. Соответственная поправка, согласно таблице-плану, для времени в 2 минуты равна 1+1/8. Это значит, что белка в данной порции мочи будет в 1+1/8 раза больше, чем 0,033°/оо, т. е. 0,033%о X(1+1/8) = 0,037°/оо.

При появлении нитевидного кольца до 1 минуты, т. е. через 40-60 секунд, производят одно разведение мочи в 1,5 раза (2 части мочи + 1 часть воды), а затем вновь наслаивают разведенную мочу на реактив и регистрируют появление кольца. При расчете результатов учитывают, что моча была разведена в 1,5 раза.

Пример 2. После наслаивания разведенной в 1,5 раза мочи нитевидное кольцо появилось к 2 минутам. Если бы кольцо появилось к 3 минутам, то белка было бы 0,033%. Соответственная поправка согласно таблице-плану, для времени в 2 минуты равна 1+1/8. Белка в моче содержится 0,033%оX1,5X(1+1/8) = 0,056%о.

Если нитевидное кольцо появляется сразу, мочу разводят в 2 раза (1 часть мочи + 1 часть воды). Разведенную мочу вновь наслаивают на реактив и отмечают появление кольца по истечении 1 минуты.

Пример 3. При наслаивании разведенной в 2 раза мочи на реактив нитевидное кольцо появилось через 1 минуту 15 секунд. Тогда количество белка в исследуемой моче по аналогии с прежними расчетами будет равно
0,033%оХ2Х(1+3/8) = 0,091%.
В случае появления широкого кольца мочу разводят в 4 раза (1 часть мочи + 3 части воды).
При последующем наслаивании разведенной мочи нитевидное кольцо может образоваться как до, так и по истечении одной минуты. В таких случаях расчет количества белка производят по аналогии с предыдущими примерами, т. е. 0,033% о умножают на степень разведения и на соответственную поправку.

Пример 1. Кольцо после разведения мочи в 4 раза появилось сразу же. Мочу разводят в 2 раза. После наслаивания мочи, разведенной в 8 раз (4X2), нитевидное кольцо образовалось через 1,5 минуты. В таком случае количество белка равно 0,033%оХ8X1,25 = 0,33%о и т. д.
При появлении компактного кольца мочу разводят в 8 раз (1 часть мочи+ 7 частей воды). При последующем наслаивании разведенной мочи на реактив может образоваться либо компактное, либо широкое, либо нитевидное кольцо.

Пример 2. При наслаивании мочи на азотную кислоту тотчас же образовалось компактное кольцо. Мочу разводят в 8 раз (1 часть мочи + 7 частей воды) и вновь производят ее наслаивание. При этом опять получилось компактное кольцо. Тогда мочу разводят еще в 8 раз (для этого в цилиндр или в пробирку берут 1 часть разведенной мочи и прибавляют к ней 7 частей воды). После очередного наслаивания разведенной мочи нитевидное кольцо образовалось сразу. Мочу разводят в 2 раза (1 часть мочи + 1 часть воды). После очередного наслаивания разведенной мочи нитевидное кольцо образовалось к 2 минутам. Расчет количества белка данной порции мочи производят так: 0,033,%оX8X8X2X(1+1/8) = 4,8%о.

Помимо таблицы-плана, имеется таблица с рассчитанными цифрами белка (табл. 2). Если моча не разведена, то количество белка отыскивают в графе «Цельная неразведенная моча». При разведении мочи в целое число раз (8,4,2) используют табл. 1. При разведении мочи в 1,5 раза используют табл. 2.

В соответствующих графах таблицы наводят время появления кольца и степень разведения мочи.
Цифра, находящаяся в точке пересечения горизонтальной и вертикальной линий, проведенных от этих двух показателей, указывает на количество белка в исследуемой моче (%о).

Возможно, что при положительной качественной пробе на белок кольцо при наслаивании на 50% раствор азотной кислоты не образуется. Это значит, что в моче белка меньше 0,033%о. В таких случаях количество белка в бланке анализа обозначают термином «следы».

Если белок определен количественно, в бланке анализа мочи отмечают содержание белка в promille, например «белок — 0,66%о».

Помимо количественного определения белка в отдельной порции мочи, рассчитывают суточное его количество в граммах. С этой целью собирают суточную мочу, измеряют ее количество и определяют содержание белка в promille. Затем производят расчет. Например, суточное количество мочи равно 1800 мл, белок — 7°/оо. Значит, белка в суточном количестве мочи содержится: 1,8X7 = 12,6 г.

источник

Р-вы 50% р-р азотной к-ты или р-в ларионовой. Ход определения: в штатив ставят ряд пробирак и наливают по 1 мл р-ра азотной к-ты доб-ть 1 мл мочи наслаивают на реактив и засекают время, при появлении кольца записываем время появления кольца. Если кольцо широкое делают разведение мочи.

4.Определение концентрации белка в моче с 3% сульфосалициловой кислотой.

Р-вы: 3% сск, хлорид натрия 9%, ст р-р альбумина 10%.Ход определения: В две мерные центрифужные пробирки «О» – опыт и «К» — контроль помещают по 1,25мл прозрачной мочи. В опытную прибавляют 3,75мл 3% раствора сульфосалициловой кислоты, в контрольную 3,75мл 0,9% раст-вора хлорида натрия. Оставляют на 5 мин., а затем фотометрируют на ФЭКе при длине во-лны 590 – 650нм (оранжевый или красный светофильтр) в кювете с толщиной слоя 5мм опыт против контроля. Расчет ведут по калиб-ровочному графику ил таблице. Принцип метода основан на том, что белок с сульфосалици-ловой кислотой дает помутне-ние, интенсивность которого прямо пропорционально концентрации белка.

5.обнаружение глюкозы в моче проба Гайнеса-Акимова. Принцип: Глюкоза при нагревании в щелочной среде восстанавливает дигидроксид меди (желтого цвета) в моногидроксид меди (оранжево-красного цвета).Приготовление реактива: 1) 13,3 г хим. чистого кристаллического сульфата меди(СиSO₄. 5 Н₂О) раствор. в 400мл воды. 2) 50г едкого натра растворяют в 400мл воды. 3) 15г чистого глицерина разводят в 200мл воды. Смешивают первый и второй растворы и тотчас приливают третий. Реактив стоек. Ход определения: В пробирку вносят 1 каплю мочи и 9 капель реактива и кипятят на водяной бане 1-2 мин. Положительная проба: желтая или оранжевая окраска жидкости или осадка.

6. Качественное определение глюкозы в моче глюкооксидазным методом. Принцип метода: глюкоза окисляется в присутствии глюкозооксидазы, согласно реакции: Глюкоза + О₂ гликонолантом + Н₂О₂.Образующаяся перекись Н под действием перексидазы окисляет субстрат с образованием окрашенного продукта.

Растворы	Опыт	Стандарт	Контроль
Моча	0,02мл	—	—
Стандарт глюкозы	—	0,02мл	—
Дист.вода	—	—	0,02мл
Рабочий р-р.	2мл	2мл	2мл

Приливаем и инкубируем 15 минут при 37 0 С. Смотреть на КФК, кювета 5мм.

Затем производят расчёты по формуле: С _оп = Ext _оп. Cст/ Ect _cт.

7.Обнаружение кетоновых тел в моче пробой Лестраде. На предметное стекло наносят (на кончике скальпеля) порошка или таблетку р-ра Лестраде, а на него 2-3 капли мочи. При наличии кетоновых тел появится окраска от розового до фиолетового. Пробу оценивают на белом фоне.

8.Обнаружение кровяного пигмента в моче пробой с 5 % спиртовым раствором амидопирина.

1.5% спиртовой р-р амидопирина(0,5 г амидопирина растворяют в 10 мл спирта 96%)2.3% р-р перекиси водорода 1,5 г гидропирита растворяют в 50 мл воды)Ход методики:в пробирку наливают 2-3 мл уксусно-эфирной вытяжки или взболтанной не фильтрованной мочи.добавляют 8-10 капель 5 % р-ра амидопирина и 8-10 капель 3% р-ра перекиси водорода;учитывают результат не позднее 2-3 мин.Проба считается положительной при наличии серо-фиолетового окрашивания.

Обнаружение уробилина в моче пробой Нейбауэра.

Основана на цветной реакции уробилиногена с реактивом Эрлиха,который сост.из 2 г парадиметиламинобенальдегида и 100 мл р-ра хлористоводородной к-ты(200 г.л).Ход определения.К нескольким мл свежевыделенной мочи приливают несколько капель р-ра Эрлиха(на 1 мл мочи и на 1 мл р-ра.Появление красного цв.в первые 30 с указывает на повыш.сод.уробилиногена.В норме окраска появляется позже или вообще отсут.При стоянии мочи уробилиноген превращается в уробилин и проба может быть ложноотрицательной.Пробу нельзя нагревать,т.к можно могут образоваться побочные комплексные соед,альдегида с порфиринами,индолом и лек.препаратами.

Обнаружение билирубина в моче пробой Розина.

Спиртовой р-р йода(10г.л):1 г кристаллического йода растворяют в цилиндре вместимостью 100 мл в 20-30 мл 96 гр.спирта-ректификата,а затем доб.доливают спиртом до метки.Ход определения.В хим.пробирку наливают 4-5 мл исследуемой мочи и осторожно наслаивают на нее спиртовой р-р йода(если моча имеет низкую относительную плотность,то следует наслаивать ее на спиртовой р-р йода).При наличии билирубина на границе между жидкостями обр.зелёное кольцо(при приёме антипирина,а также при сод.в моче кровяного пигмента проба оказывается положительной).У здорового человека эта проба отрицательна.

Исследование мочи методом сухой химии (моно- политестами).

Принцип. Метод основан на воздействии, оказываемом белком на цвет индикатора, находящегося в буферном растворе, в результате чего краситель изменяет цвет с желтого на синий.

При проведении реакции на присутствие белка в моче и определении pH с помощью индикаторной бумаги рекомендуется выполнить следующие указания:

Собрать мочу в тщательно вымытую посуду.
Использовать свежесобранную, не содержащую консервантов мочу.
Тщательно закрыть пенал после извлечения из него необходимого количества индикаторных полосок бумаги.
Не захватывать пальцами индикаторные зоны.
Использовать только в пределах указанного на этикетке срока годности.
Соблюдать правила хранения индикаторной бумаги.
Проводить оценку результатов в соответствии с указаниями, имеющимеся в инструкции.

Выполнение анализа мочи на анализаторе сухой химии мочи.

Ход определения. Из пенала извлекают полоску индикаторной бумаги и погружают ее в исследуемую мочу так, чтобы одновременно смочить обе индикаторные зоны. Через 2-3 с полоску помещают на белую стеклянную пластинку. Немедленно проводят оценку pH, пользуясь цветной шкалой, нанесенной на пенале. Значение pH на цветной шкале соответствуют 6,0 (или меньше); 7,0; 8,0; 9,0.

Оценку содержания белка проводят через 60 с после смачивания полоски мочой, пользуясь цветной шкалой, нанесенной на пенале. Градациями цветной шкалы : 0 (отрицательная), 1 (следы), 2 (слабо положительная), 3 (положительная), 4 (резко положительная)- соответствуют концентрации белка : 0,1; 1; 3; 10 г/л.

Подготовка мочи, приготовление препаратов из осадка мочи микроскопического исследования ориентировочным способом.

Микроскопическое исследование осадка мочи проводят ориентировочным методом при общем анализе и количественным подсчетом форменных элементов для более точной оценки степени луйкоцитурии и гематурии.

Правила подготовки осадка мочи для микроскопирования.

Микроскопическому исследованию подлежит первая утренняя порция мочи.

После предварительного перемешивания берут 10 мл мочи, центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин.

Затем центрифужную пробирку с мочой резким движением опрокидывают, быстро сливают надосадочную жидкость в пустую банку.

Перемешивают, каплю помещают на предметное стекло и осторожно прикрывают покровным.

Если осадок состоит из нескольких слоев, то готовят препарат, а затем вновь центрифугируют и готовят препараты из каждого слоя в отдельности.

При отсутствии видимого на глаз осадка каплю мочи наносят на предметное стекло и мокроскопируют.

В начале материал рассматривают при малом увеличении (окуляр 7-10, обьектив 8), конденсор при этом опускают, несколько суживают диафрагму, затем препарат детально изучают при большом увеличении (окуляр 10,7 ; обьектив 40).

На малом увеличении обнаруживают цилиндры, комплексы клеток, яйца паразитов, крупные кристалы. Розовый осадок бывает за счет уратов, эритроцитов. Белый осадок может быть в присутствии аморфных фосфатов, лейкоцитов. Элементы осадка делятся на организованные (эпителий, элементы крови, цилиндры) и неорганизованные (соли).

14.Количественное исследование осадка мочи по Нечипоренко.

Метод используется при скрытых вялотекущих воспалительных процессах (пиелонефрит, гломерулонефрит), скрытая пиурия. Для исследования патологического процесса в динамике. Для оценки эффективности проводимого лечения. Достоинства метода: технически прост, не требует большого кол-ва мочи и длитель. его хранения, применяется в амбулаторной практике. Обяз. условия: утренняя моча, средняя порция, кислая р-ция (в щелочной может быть частичный расспад клеточных элементов). 1. Перемешивают мочу.2.В мерную центрифужную пробирку помещают 10 мл мочи и центрифугируют 10 мин 1500 об/мин. 3. После центриф. отсасыв. Пипеткой верхнюю часть жидкости, оставл. ровно 1 мл осадка. 4.Осадок тщательно перемешивают и заполняют камеру Горяева. 5. Через 3-5 мин после заполн, приступают к подсчёту форменных элементов. 6.Подсчёт лейкоцитов,Er, цилиндров с окуляром 15 объективом 8 при опущ. конденсоре, в 100 больших квадратах камеры. Считают отдельно лейкоциты, Er, цилиндры (счит. не менее 4 камер Горяева) выводят сред. ариф. Х=А х 0,25х 10 6 /л. Норма: лейк. 2-4х 10 6 /л, Er до 1 х 10 6 /л, цилиндров до 0,02 х 10 6 /л (один на 4 камеры). У детей: лейк. до 2-4х 10 6 /л, Er до 0,75 х 10 6 /л, цилиндров до 0,02 х 10 6 /л.

15. Исследование мочи по Зимницкому

Этой пробой устанавливают способность почек концентр. и разводить мочу. Сущность пробы закл. в динамическом определении относительной плотности и кол-ва мочи в трёхчасыв порциях в течение суток. Проведение пробы: после опорожнения мочевого пузыря в 6 часов утра в унитаз, пациент через каждые три часа собирает мочу в отдельные банки в течение суток. Всего 8 порций. Ход исслед.: 1. Доставл. Мочу расставляют по часам и в каждой порции определяют кол-во и относительную плотность. 2. Сравнивают суточное кол-во мочи и кол-во выпитой жидкости, чтобы опред. % её выведения. 3. Вычисляют дневной и ночной диурез, суммируют, получают суточный диурез. 4. Устанавливают диапазон колебаний кол-ва и относительн. плотности мочи за сутки т.е. какова разница между самой малой порцией и большой. Показ. пробы у здор. людей: 1. Суточный диурез 800-1500 мл. 2. Дневной диурез значительно преобладает над ночным. 3.Колебания объёма мочи в отдельных порциях значительные (от 50 до 400 мл). 4. Колебания р от 1,003 до 1,028, должно быть более 0,008. При функ. недостаточности почек: гипостенурия, гипоизостенурия, изостенурия, гиперстенурия, олигурия, анурия, никтурия.

16. Описание общих свойств кала.

В норме кал состоит из продуктов секреции и экскреции пищеварит тракта, остатков неперевар или частично перевар пищевых продуктов, микробной флоры. Количество кала 100-150 г. Консистенция-плотная. Форма-цилиндрическая. Запах-каловый обычный. Цвет-коричневый. Р-ция- нейтральная, слабощелочная или слабокислая (рН 6,5-7,0-7,5). Слизь-отсутствует. Кровь-отсутствует. Остатки непереваренной пищи-отсутствует.

источник

Азотометрические методы

Азотометрические методы определения общего белка сыворотки основаны на определении количества белкового азота, образующегося при разрушении аминокислот, входящих в состав белков. Впервые метод был предложен Кьельдалем в 1883 году. В методе Кьельдаля, в настоящее время представляющем в целом исторический интерес, азот, содержащийся в составе белков, окисляют до иона аммония и его количество определяют титрованием точным раствором соляной кислоты. Кроме того, ион аммония может быть определен реактивом Несслера, манометрическим методом после превращения иона аммония в молекулярный азот под действием гипобромита или с помощью оптического теста Варбурга при участии фермента глутаматдегидрогеназы. Исходя из того, что белки из биологических объектов содержат в среднем 16 % азота, полученное в результате анализа количество азота умножают на коэффициент 6,25. Исторически используют фактор 6,25, хотя его величина зависит от белкового состава исследуемого образца. Для отдельных фракций белка в сыворотке или плазме величина фактора колеблется в диапазоне от 5,69 до 6,52.

( Метод Дюма, метод Кьельдаля)

Недостатком азотометрических методов является длительность и сложность процедуры, даже при том, что аммиак, образующийся в реакции, можно определять ферментативным методом. Автоматизация позволяет использовать этот метод в ряде случаев в качестве метода сравнения из-за его достаточной точности и воспроизводимости.

Преципитационные» методы

«Преципитационные» методы определения общего белка основаны на снижении растворимости белков и образовании суспензии взвешенных частиц под воздействием различных агентов. О содержании белка в исследуемой пробе судят либо по интенсивности светорассеяния (нефелометрический метод анализа), определяемого числом светорассеивающих частиц, либо по ослаблению светового потока образовавшейся суспензией (турбидиметрический метод анализа).

Результаты данной группы методов зависят от множества факторов: скорости смешивания реактивов, температуры реакционной смеси, значения рН среды, присутствия посторонних соединений, способов фотометрии. Тщательное соблюдение условий реакции способствует образованию стабильной суспензии с постоянным размером взвешенных частиц и получению воспроизводимых результатов. «Преципитационные» методы для определения белка в сыворотке крови не получили признания и нашли применение при определении белка в моче, спинномозговой жидкости и многих индивидуальных белков с использованием специфических антител.

Колориметрические (фотометрические) методы

Колориметрические методы определения общего белка основаны на цветных реакциях белков с хромоген-образующими реактивами или на неспецифическом связывании красителя.

Среди колориметрических методов определения концентрации общего белка сыворотки наиболее распространенным считается биуретовый метод, основанный на так называемой «цветной биуретовой реакции», в ходе которой белки реагируют в щелочной среде с сульфатом меди с образованием соединений, окрашенных в фиолетовый цвет, интенсивность окраски зависит от концентрации общего белка в сыворотке

Колориметрические методы определения общего белка достаточно просты и относительно дешевы. К недостатку метода относится интерферирующее действие некоторых веществ (в том числе лекарств).

Наиболее распространённым количественными методами являются метод Кьельдаля, Лоури с реактивом Фолина, Войвуда в модификации Т.А. Глагоревой, К.А. Мерка.

1) Б и у р е т о в ы й м е т о д- по пептидным связям белковой молекулы;

Принцип метода. Метод основан на способности белков давать с раствором сернокислой меди фиолетовое окрашивание в щелочной среде. Для биуретовой реакции необходимо наличие двух ОН-групп и трех атомов азота, находящихся в полипептидной цепи. Группа, образующая пептидную связь (– ОС – NH –) в щелочной среде, присутствует в своей таутомерной форме. В избытке щелочи происходит диссоциация водорода енольной ОН-группы, при этом возникает отрицательный заряд, с помощью которого кислород, взаимодействуя с медью, образует соль; кроме того, медь образует дополнительные (дативные) связи с атомами азота пептидных связей. Возникший комплекс характеризуется высокой стабильностью.

Чувствительность данного метода позволяет определять белок в диапазоне концентраций от 2 до 10 мг в пробе.

Реактивы: 1. Раствор сывороточного альбумина, содержащий 10 мг белка в 1 мл (стандартный раствор).

2. Биуретовый реактив: 0,15 г СuSО4∙5Н2О и 0,6 г натрий-калия виннокислого (NаКС4Н4О6•4Н2О) растворяют в 50 мл Н2О, при энергичном перемешивании приливают 30 мл 10 % раствора NаОН, затем добавляют 0,1 г КI. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 100 мл. Реактив хранят в парафинированной или полиэтиленовой склянке в течение 1 мес. Ход работы. Для построения калибровочного графика из стандартного раствора альбумина готовят растворы белка, содержащие 2, 4, 6, 8 и 10 мг альбумина в 1 мл. В каждую пробирку, содержащую 1 мл раствора белка соответствующего разведения добавляют 4 мл биуретового реактива, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 30 мин. Измеряют оптическую плотность раствора на ФЭК при 540 нм в 1 см кювете.

На каждую точку проводят два определения, для построения калибровочного графика используют среднее арифметическое.

Содержание белка в исследуемых растворах рассчитывают по калибровочному графику.

Б и у р е т о в ы й м е т о д.Основан на образовании биуретового комплекса (имеет фиолетовый цвет) пептидных связей белков с двухвалентными ионами меди. В методе используют т. н. биуретовый реактив, состоящий из KOH, CuSO4 и цитрата натрия (или тартрата натрия). В образовавшемся комплексе медь связана с 4 азотами координационными связями, а с 2 кислородами — электростатическими. Полноценный комплекс образуется лишь с пептидами, состоящими более чем из 4 остатков.

Интенсивность окраски раствора прямо пропорциональна концентрации белка в сыворотке и определяется фотометрически.

К достоинствам метода стоит отнести его низкую чувствительность к посторонним веществам, невысокую погрешность.

Комплексной медно-натриевой соли пептидов приписывают следующее строение:

Биуретовая реакция на белок

Пептидные связи белка с солями меди в щелочной с образуют комплекс фиолетового цвета. Белки предварительно осаждают трихлоруксусной кислотой.

I. 10%-ный раствор трихлоруксусной кислоты.

II. 20%-ный раствор меди (CuSO4∙5H2O).

М е т о д Л о у р и. Метод количественного определения белка, основанный на измерении концентрации окрашенных продуктов, образующихся в результате сочетания двух химических реакций: биуретовой реакции на пептидную связь и взаимодействия реактива Фолина-Чокалтеу с ароматическими аминокислотами.

Фолина — Чокалтеу реактив смесь растворов вольфрамовокислого и молибденовокислого натрия, к которой добавляют последовательно фосфорную, соляную кислоту и, после кипячения, сульфат лития, а также несколько капель бромной воды;

Метод Лоури

Метод Лоури объединяет биуретовый реагент с другим (реагент Фолина), последний реагирует с остатками тирозина и триптофа в белках. Это дает синеватый цвет, который поглощает в область между 500 — 750 нм в зависимости от того, какая требуется чувствительность. Существует небольшой пик поглощения около 500 нм, который может быть использован для определения высоких концентраций белка и интенсивный пик около 750 нм, который может быть использован для определения низких концентраций белка. Этот метод является более чувствительной к низкому содержанию белков, чем просто метод с биуретовым реактивом.

Принцип В щелочной среде ионы Cu+2 образуют комплекс с пептидными связями, переходя в Cu+. Одновалентные ионы меди реагируют с реактивом Фолина (фосфомолибденовая кислота с фенолом), образуя нестабильный продукт, переходящий в молибденовую синь, с максимумом адсорбции при 750 нм. Увеличение адсорбции при 750 нм пропорционально концентрации белка. Метод очень чувствителен к наличию в растворе посторонних восстановителей (что затрудняет его использование при определении белка в неочищенных препаратах), чувствительность к белку — 10 — 100 мкг/мл.

источник

Нормальные показатели: белок в норме в моче содержится в минимальных количествах, которые не обнаруживаются обычными качественными реакциями. Верхняя граница нормы белка в моче – 0,033 г/л. Если содержание белка выше этого значения, то качественные пробы на белок становятся положительными.

Клиническое значение определения:

Появление белка в моче называется протеинурия. Протеинурии могут быть ложными и почечными. Экстраренальные протеинурии могут быть при наличии примесей белкового происхождения из половых органов (вагинитах, уретритах и др.), количество белка при этом незначительно – до 0,01 г/л. Почечные протеинурии могут быть функциональными (при переохлаждении, физических нагрузках, лихорадке) и органическими — при гломерулонефрите, пиелонефрите, нефрите, нефрозах, почечной недостаточности. При почечных протеинуриях содержание белка может быть от 0,033 до 10 – 15 г/л, иногда выше.

Принцип метода: основан на том, что белок под действием неорганических кислот коагулирует (становится видимым). Степень помутнения зависит от количества белка.

Обнаружение белка в моче с 20% сульфосалициловой кислотой.

Реактивы: 20% р-р сульфосалициловой кислоты. Оборудование: темный фон.

1. Требования к моче: моча должна быть кислой (или слабокислой) рН, должна быть прозрачной, для этого мочу центрифугируют. Щелочную мочу подкисляют до слабокислой реакции среды, используя для контроля индикаторную бумагу.

2. В 2 пробирки одинакового диаметра наливают по 2 мл подготовленной мочи. 1 пробирка – контроль, 2 – опыт. В опытную пробирку добавляют 4 капли 20% сульфосалициловой кислоты.

3. Результат отмечают на темном фоне.

4. При наличии белка, моча в опытной пробирке мутнеет.

Качественное определение белка в моче тест – полосками.

Для выявления протеинурий используют различные монотест – полоски: Альбуфан, Альбустикс, Биофан Е и политесты: Трискан, Нонафан и др.

Обнаружение белка в моче по методу Робертса – Стольникова.

Принцип метода: основан на том, что белок под действием неорганических кислот коагулирует (становится видимым). Степень помутнения зависит от количества белка (т.е. кольцевая проба Геллера). При концентрации белка в моче 0,033 г/л к концу 3 минуты после наслаивания мочи появляется тонкое нитевидное белое кольцо.

Реактивы: 50% р-р азотной кислоты или реактив Робертса (98 частей насыщенного раствора поваренной соли и 2 части концентрированной соляной кислоты) или реактив Ларионовой (98 частей насыщенного р-ра поваренной соли и 2 части концентрированной азотной кислоты).

2. В пробирку наливают 2 мл 50% р-ра азотной кислоты или один из реактивов, затем осторожно по стенке пробирки с помощью пипетки наслаивают такой же объем подготовленной мочи

3. Пробу оставляют на 3 минуты

4. Через 3 минуты отчитывают результат. Результат отмечают на темном фоне в проходящем свете. Если кольцо широкое, компактное, то мочу разводят дистиллированной водой и вновь наслаивают на реактив.

5. Мочу разводят до тех пор, пока через 3 минуты не образуется тонкое нитевидное кольцо.

6. Расчет содержания белка в моче производят по формуле:

С = 0,033г/л х степень разведения.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

Сделайте, пожалуйста, заказ

(495) 734-91-31
Пн-Пт 09:00-18:00

Мы рады Вас приветствовать на сайте www.unimedao.ru!

Спасибо, что ответили на наш вопрос

Куриляк О.А., к.б.н.

В норме белок выделяется с мочой в относительно небольшом количестве, обычно не более 100–150 мг/сут.

калибровочная кривая строится по водному раствору альбумина. Моча по своему составу очень сильно отличается от воды: рН, соли, низкомолекулярные соединения (креатинин, мочевина и др). Вследствие этого по данным Альтшулера, Ракова и Ткачева ошибка определения белка в моче может быть 3-х кратной и более! Т.е. корректные результаты определения могут быть получены только в тех случаях, когда моча имеет очень низкий удельный вес и по своему составу и рН приближается к воде;
более высокая чувствительность сульфосалицилового метода к альбумину в сравнении с другими белками (в то время, как было упомянуто выше, альбумин в нормальных образцах мочи составляет не более 30% от общего белка мочи);
если pH мочи сдвинута в щелочную сторону, происходит нейтрализация сульфосалициловой кислоты, что так же является причиной занижения результатов определения белка;
скорость седиментации преципитатов подвержена значительной вариации — при невысоких концентрациях белка преципитация замедлена, и ранняя остановка реакции приводит к занижению результата;
скорость реакции преципитации существенно зависит от перемешивания реакционной смеси. При высоких концентрациях белка активное встряхивание пробирки может приводить к образованию крупных хлопьев и их быстрому осаждению.

Альтшулер Б.Ю., Раков С.С., Ткачев Г.А. // Вопр. мед. химии. – 2001. – № 4. – C.426-438.
Ким Ю.В., Потехин О.Е., Токар М.И., Шибанов А.Н. // Лаб. мед. – 2003. – № 6. – C.94-98.
Клиническое руководство по лабораторным тестам, под ред. Н. Тица.- М.- Юнимед-пресс.-2003.- 942 с.
Козлов А.В., Слепышева В.В. Методы определения белка в моче: возможности и перспективы // Сборник трудов VII ежегод. СПб нефрол. семинара. – СПб: ТНА. – 1999. – C.17-28.
Пупкова В.И., Пикалов И.В., Хрыкина Е.Н., Харьковский А.В. // Новости «Вектор-Бест». – 2003. – № 4 (30).
Chambers R.E., Bullock D.G., Whicher J.T. // Ann. Clin. Biochem. – 1991. – Vol. 28 (Pt 5). – P.467-473.
Clinical Laboratury Medicine. Ed. by Kenneth D. McClatchey. – 2nd ed.-2001.- 1993p.
Eppel G.A., Nagy S., Jenkins M.A., Tudball R.N., Daskalakis M., Balazs N.D.H., Comper W.D. // Clin. Biochem. – 2000. – Vol. 33. – P.487-494.
Franke G., Salvati M., Sommer R.G. Composition and device for urinary protein assay and method of using the same // ПатентСША № 5326707. – 1994.
Kaplan I.V., Levinson S.S. // Clin. Chem. – 1999. – Vol. 45. – P.417-419.
Kashif W., Siddiqi N., Dincer H.E., Dincer A.P., Hirsch S. // Cleveland Clin. J. of Med. – 2003. – Vol. 70 (6). – P.535-547.
Koerbin G, Taylor L, Dutton J, Marshall K, Low P, Potter JM. // Clin. Chem. – 2001. – Vol. 47. – P.2183-2184.
Le Bricon T., Erlich D., Dussaucy M., Garnier J.P., Bousquet B. // Article in French. – Ann. Biol. Clin. (Paris). – 1998. – Vol. 56 (6). – P.719-723.
Marshall T., Williams K.M. // Clin. Chem. – 2003. – Vol. 49 (12). – P.2111-2112.
Pugia M., Newman D.J., Lott J.A., D’Mello L., Clark L., Profitt J.A., Cast T. // Clin. Chim. Acta. – 2002. – Vol. 326 (1-2). – P.177-183.
Ringsrud K.M., Linne J.J. Urinalysis and body fluids: A ColorText and Atlas // Mosby. – 1995. – P.52-54.
Shepard M.D., Penberthy L.A. // Clin. Chem. – 1987. – Vol. 33. – P.792-795.
Williams K.M., Marshall T. // J. Biochem. Biophys. Methods. – 2001. – Vol. 47. – P.197-207.
Williams K.M., Arthur S.J., Burrell G., Kelly F., Phillips D.W., Marshall T. // J. Biochem. Biophys. Methods. – 2003. – Vol. 57 (1). – P.45-55.

Мы рады сообщить Вам, что во втором выпуске журнала «Справочник Заведующего КДЛ», Вы можете ознакомиться со статьей А.Н. Шибанова «Определение референтного интервала концентрации белка в моче»

На прошедшей неделе генеральный директор А/О Юнимед посетил один из самых популярных курортов Кавказских Минеральных вод — г. Ессентуки. Подробнее о визите Александра Николаевича читайте в нашем репортаже.

В Медицинском Университете им.И.М.Сеченова состоялась научно-практическая конференция. Помимо интереснейших докладов от ведущих специалистов, собравшихся объединил ещё один очень приятный повод. Подробности читайте в нашем репортаже.

Из этого репортажа Вы узнаете о том, почему специалисты компании Юнимед на два дня сменили место работы на клинико-диагностическую лабораторию крупнейшего стационара города Москвы, и что из этого получилось.

Цель настоящей статьи — помочь заведующим КДЛ решить задачу оптимального выбора метода диагностики протеинурии. Сложность проблемы состоит в том, что метод должен иметь большой диапазон определения концентрации белка и при этом быть максимально простым и дешевым.

Ратуете за внедрение прогрессивных методик в практику лабораторной диагностики? — Нам с Вами по пути!

Фотометры биохимические Микролаб 540 и Микролаб 600, анализатор показателей гемостаза Минилаб 704, а также набор для определения белка в моче Юни-Тест-БМ зарегистрированы в Федеральной службе по надзору в сфере здравоохранения и социального развития РФ.

В 2009 году компания Юнимед провела ряд благотворительных акций в поддержку российских лабораторий. О том, как фирме удается реализовывать такие проекты в экономически сложный период, рассказывает специалист по товарам для анализа мочи Ирина Елькина.

27 и 28 октября 2009 года в Нижнем Новгороде состоялся научно-образовательный форум «Современные лабораторные тесты: новые технологии и клиническая значимость». Репортаж.

Сразу две крупнейшие больницы Нижнего Новгорода получили в подарок от компании Юнимед современные анализаторы мочи Uriscan PRO.

Общий клинический анализ мочи является одним из наиболее часто выполняемых видов лабораторных исследований в поликлинике.

28 и 29 мая 2009 года в Москве состоялась II научно-практическая конференция «Современные технологии и методы диагностики различных групп заболеваний, лабораторный анализ».

Клиническое значение протеинурии – это тема, которая уже не одно десятилетие вызывает активную дискуссию врачей разных стран. В данной статье, опубликованной в «Американском журнале семейных врачей», изложено мнение наших зарубежных коллег о проблеме диагностики протеинурии у взрослых.

Альбуминурия (albuminuria; альбумин + греч. uron моча) — выделение с мочой альбумина.

Клинические испытания набора реагентов для определения белка в моче «Юни-Тест-БМ» проводились на 4-х клинических базах.

источник

Белур 600 — это единственный в России универсальный анализатор общего белка в моче.

Белур 600 разработан на основе гемоглобинометра МиниГЕМ+ и имеет аналогичный ему интерфейс пользователя. Владельцы МиниГЕМ+ могут работать на анализаторе Белур 600 без какой-либо подготовки.

Гемоглобинометры МиниГЕМ – уникальная разработка мирового уровня (фото).

Белур 600 – экспортная продукция.

Определение общего белка в моче.

Определение белка в анализаторе Белур 600 производится фотометрическими методами на длине волны 600 нм: с пирогаллоловым красным, с сульфосалициловой кислотой, с Кумасси бриллиантовым синим (Бредфорд).

Пирогалоловый метод обладает высокой линейной зависимостью оптической плотности от концентрации общего белка, что позволяет проводить измерения с единственной калибровкой по фактору во всем диапазоне концентраций (0-10 г/л с минимальным дискретом 0,001 грамм/литр). Этим Белур 600 отличается от ближайших аналогов.

В анализаторе Белур 600 предусмотрена калибровка по фактору с повышенной в 4 раза точностью.

Для измерений сульфосалициловым методом требуется калибровка по нескольким значениям концентрации.

Для измерения пирогаллоловым методом необходимо 20 мкл биопробы.

Открытая система избавляет лабораторию от использования реагентов лишь одного производителя (далеко не всегда оптимальных по цене и качеству). В анализаторе применяются РЕАГЕНТЫ РАЗЛИЧНЫХ АВТОРИТЕТНЫХ ОТЕЧЕСТВЕННЫХ И ЗАРУБЕЖНЫХ ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ: «Вектор-Бест», «Диакон Диагностикс», «Bayer Diagnostics», «Beckman», «Biocon Diagnostic», «Biodirect», «Bio-Rad», «Kone», «Merck», «Randox», «Sigma», «Chronolab», «DiaSys», «Serono», «Sentinel CH», «Sigma». Разработанный в ЗАО «Вектор-Бест» набор «Белок-ПГК- Ново» сравним по правильности определения белка в моче с наборами реагентов фирм «Biocon», «Bio-Rad» и «Chronolab».

При выборе реагентов необходимо обращать внимание на значение оптической плотности холостой пробы, которое должно находиться в пределах 0.12 — 0.35 Б, а также на значение получающегося после калибровки фактора, которое не должно превышать 4 при разведении 1:50. Несоответствие этим требованиям может привести к неправильным результатам измерений.

Для измерения концентрации общего белка достаточно опустить в фотометрическую ячейку прибора кювету с приготовленным раствором биопробы и через мгновение на дисплее появится значение концентрации. Пересчет оптической плотности раствора в концентрацию гемоглобина производится автоматически. Прибор не нужно включать, «прогревать. При опускании кюветы в фотометрическую ячейку Белур 600 автоматически включается, производит измерение и индицирует измеренную концентрацию. После извлечения кюветы из фотометрической ячейки, анализатор переходит в режим «ожидания» до следующего измерения.

Повторные измерения возможны через каждые 2 секунды.

Автокалибровка.

Анализатор Белур 600 обладает функцией автоматической подстройки оптико-электронных параметров (автокалибровки).

Белур 600 сохраняет калибровку (фактор) неограниченно долго, в том числе при отключении питания. Это позволяет изменять калибровку только при смене партии используемых реагентов.

Экономичность.

Белур 600 потребляет энергию только во время измерения, что обеспечивает долговременное использование элементов питания — до 1 миллиона измерений от одного комплекта из 3 свежих элементов DURASEL в течение срока службы элементов (4-5 лет). Элементы питания размещены в корпусе анализатора Белур 600 (фото), однако при желании можно использовать сетевой адаптер, для которого имеется гнездо подключения на тыльной стороне прибора (фото).

Контроль работоспособности анализатора Белур 600 производится посредством оптических контрольных мер (фото). Свойства стеклянных мер отличаются многолетней стабильностью. Никакие традиционные средства — возобновляемые жидкие контрольные растворы с незначительным временем годности — не нужны.

Средство измерения.

Белур 600 является средством измерения. Для поверки анализатора используется набор стеклянных мер оптической плотности НОСМОП-7. Поверка производится метрологическими службами, которые обеспечены этим набором мер. Набор выпускается ЗАО НПП «ТЕХНОМЕДИКА».

Удобная конструкция.

Белур 600 имеет привлекательный внешний вид. Корпус выполнен из светлого химически стойкого пластика. Лицевая панель покрыта износоустойчивой ламинирующей пленкой, легко поддающейся стандартной санитарной обработке. В анализаторе Белур 600 используется высококонтрастный жидкокристаллический индикатор с крупными цифрами (фото). Для защиты от возможного загрязнения фотометрическая ячейка снабжена удобной задвижкой. Размеры Белур 600 составляют 178х128х43 мм, масса без батарей не превышает 300 граммов. Несмотря на малые размеры и вес прибор надежно фиксируется на рабочем столе резиновыми ножками. Для фотометрирования используются стандартные стеклянные фотометрические кюветы с длиной оптического пути 10 мм. Допускается использование одноразовых пластиковых кювет и стеклянных пробирок. В корпус анализатора Белур 600 встроен выдвигающийся пенал для хранения кюветы и контрольных мер (фото).

Минимум обслуживания.

Тщательное соблюдение указаний по эксплуатации анализатора Белур 600, своевременный уход за его оптическими поверхностями обеспечивают многолетнюю безотказную работу прибора без привлечения сервисных инженеров.

Обозначение прибора при его заказе и в документации других изделий:

Анализатор общего белка в моче фотометрический портативный АОБМФ-01-«НПП-ТМ»ТУ 9443-020- 11254896-2009, торговое наименование «Белур 600».

Смотрите также:

МиниГЕМ+. Гемоглобинометр с расширенными возможностями определения гемоглобина любыми методами на рабочей длине волны 540 нм.

МиниГЕМ 540. Измерение общего гемоглобина в крови гемиглобинцианидным методом АГФ-03/540-«Минигем» на рабочей длине волны 540 нм.

МиниГЕМ 523. Измерение общего гемоглобина в крови модифицированным методом Дервиза-Воробьёва АГФ-03/523-«Минигем» на рабочей длине волны 523 нм.

Микрола. Микрофотометр для лабораторных исследований.

Рабочая длина волны определяется спектральной полосой излучения светодиода: (600 ± 5) нм.
Прибор определяет концентрацию общего белка в моче с реагентами различных производителей, использующих фотометрирование на длине волны 600 нм с калибровкой по стандарту или калибратору или фактору, указанному в инструкции на набор.
Диапазон измерений:
- Нормированный диапазон измерений зональной оптической плотности составляет от 0 до 0,999 Б (бел — единица оптической плотности). Ненормированный диапазон составляет от 1 до 3 Б.
- Вывод на индикацию концентрации общего белка и оптической плотности раствора.
- Автоматическое вычисление фактора по стандартному раствору или калибратору с известной концентрацией белка (калибровка по стандартному образцу или калибратору).
Предел допускаемой погрешности при измерении оптической плотности стеклянных мер из набора НОСМОП-7 составляет ±0,04 Б — в диапазоне от 0 до 0,999 Б. В диапазоне от 1 до 3,0 Б погрешность не нормируется.
Прибор работает от источника питания ДГВИ.436615.004, преобразующего сетевое переменное напряжение (220±22 В) в постоянное напряжение (5±1) В, 0,3 А или от трех элементов питания 1,5 В типоразмера АА.
Ток потребления прибора при напряжении питания 6 В — не более 20 мА.
Порог срабатывания индикации разряда внутреннего источника питания -от 2 В до 3,6 В.
Примечание. Индикацией разряда внутреннего источника питания является показания приборов «ЦЦЦ».
Длительность измерения не более 2 секунд.
Объем пробы для фотометрирования — не менее 1 мл.
Длина оптического пути кюветы: 10,0 ±0,1 мм.
Габаритные размеры прибора, не более — 130x180x50 мм.
Масса прибора без комплекта запасных частей и принадлежностей (ЗИП) не более 0,5 кг, в полном комплекте поставки — не более 2 кг.
Средний срок службы прибора — не менее 4 лет. Время непрерывной эксплуатации прибора -7 ч. в сутки.
Гарантийный срок 4 года.

Базовый комплект поставки

Принадлежности

Кювета 10 мм оптическая стеклянная

Эксплуатационная документация

№	Наименование	Шифр конструкторской документации	Кол-во
1	Анализатор общего белка в моче фотометрический портативный АОБМФ-01-«НПП-ТМ»	ТУ 9443-020-11254896-2009	1
7	Руководство по эксплуатации с методикой поверки	ДГВИ.941416.011 РЭ	1

Заключения испытательных медицинских центров.

Институт Клинической Кардиологии им. А.Л. Мясникова
Российского Кардиологического Научно- Производственного Комплекса МЗ РФ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Результаты медицинских испытаний показали, что анализатор общего белка в моче фотометрический портативный АОБМФ-01-«НПП-ТМ», производства НПП» Техномедика» г. Москва , является удобным прибором для измерения белка в моче и может быть рекомендован для применения в клинико-диагностических лабораториях поликлиник, экспресс-лабораторий стационаров и ЛПУ РФ.

Состав и последовательность испытаний.
1. Определить возможности применения прибора для определения общего белка мочи.
Мы проводили испытания прибора, определяя общий белок мочи методом с пирогаллолом красным производства ЗАО » Вектор-Бест» » Белок-ПКГ-Ново».
Контролями служили контрольные образцы мочи производства » Био-Рад» и «Биосистемс» с содержанием белка в диапазоне от 0.04 г/л до 1. 44 г/ л, т.е. в диапазоне линейности определения белка данным реактивом.
Данные воспроизводимости и правильности в одной серии ( п= 10) представлены в таблице 1.

источник