Меню Рубрики

Гексокиназный метод определения глюкозы в моче

Более 90% всех растворимых низкомолекулярных углеводов крови приходится на глюкозу, кроме того, в небольших количествах могут присутствовать фруктоза и пентозы, а при патологии и галактоза.

Глюкоза распределена почти равномерно между плазмой и эритроцитами, поэтому может определяться в цельной крови, плазме и сыворотке крови. Нормальное содержание в крови составляет 3,3-5,5 мМ/л. В физиологических условиях в крови может повышаться после обильной углеводной пищи, физиологических нагрузок, сильных эмоций.

Гипергликемия наблюдается при многих патологических состояниях: сахарном диабете, панкреатите, травмах и сотрясениях головного мозга, энцефалите, муковисциидозе, психическом возбуждении, отравлениях окисью углерода, ртутью. В зависимости от тяжести сахарного диабета уровень глюкозы натощак составляет : при легкой степени – 6,7-7,8 мМ/л.

Гипогликемия бывает при передозировке инсулина, заболеваниях поджелудочной железы, злокачественных заболеваниях, некоторых инфекционных и токсических поражениях печени, гипотириозе, наследственных заболеваниях, связанных с дефицитом ферментов.

Глюкозурия отмечается при сахарном диабете, гиперплазии коры надпочечников, нарушениях функции почек, сепсисе, травмах и опухолях головного мозга,отравлениях морфином, панкреатите, синдроме Фанкони.

Однократная нагрузка глюкозой вызывает у больных сахарным диабетом медленное нарастание гликемической кривой, при этом гипогликемическая фаза обычно не выявляется, понижение кривой очень медленное. В моче также определяется сахар.

В соременной диагностике сахарного диабета критерием является повышение содержания глюкозы в крови натощак до 7, 0 мМ/л, проводят пробу на выявление нарушения толерантности к глюкозе. Пробу проводят с сахарной нагрузкой, исследуют содержание глюкозы в крови натощак после приема внутрь 75 г глюкозы, растворенной в 200-300 мл воды. Кровь из пальца для определения содержания глюкозы берут каждые 30 минут в течение 2 часов. Проводится также тест на определение гликозилированного гемоглобина. В крови глюкоза связывается с молекулой гемоглобина (НвАIс) внутри эритроцитов. Число, связанных частиц глюкозы с молекулой гемоглобина напрямую связано с концентрацией глюкозы в крови, так как эритроциты живут 90 дней. По анализу гликозилированного гемоглобина можно установить концентрацию глюкозы за 3 месяца. Повышение уровня с определенного уровня на 5% говорит о хорошо скомпенсированном сахарном диабете, на 10% — частично компенсированный диабет, на 12% и более – некомпенсированный сахарный диабет.

Важно также для диагностики сахарного диабета определение концентрации инсулина и С-пептида. В молекуле преинсулина есть С-пептид, состоящий из 31 аминокислоты, соединяющий А и В цепи. При синтезе инсулина он вырезается пептидазами и вместе с инсулином он попадает в кровоток. До отщепления пептида инсулин не активен. Это позволяет поджелудочной железе образовывать запасы инсулина. С-пептид и инсулин выделяется в равных количествах, поэтому по С-пептиду можно оценить секрецию инсулина. Но надо знать, что скорость выведения из кровотока этих веществ разная. С-пептид дольше находится в крови, чем инсулин и он стабильнее инсулина в 5 раз. У здоровых С-пептид находится в пределах 1-4 нг/мл, инсулин от 6 до 27 мЕ/ мл. Повышение уровня С-пептида может свидетельствовать о гипертрофии В-клеток, об инсулин независимом сахарном диабете (ИНСД). Понижение С-пептида отмечается при инсулинзависимом сахарном диабете (ИЗСД).

В диагностике сахарного диабета применят определение концентрации альбумина в моче. В суточной моче у здоровых людей может обнаруживаться до 8 мг белка. При сахарном диабете белок повышается до 20-300 мг/л.

Дополнительным критерием на риск возникновения сахарного диабета является определение липидного обмена. Уровень триглицеридов в крови изменяется параллельно повышению содержания сахара в крови.

Методы определения глюкозы разделяют на три группы:

· методы с использованием цветных реакций, в которых участвуют продукты, образующиеся при нагревании углеводов с концентрированными кислотами.

Ферментативные методы исследования сочетают в себе высокую точность, они основываются на одной из двух реакций – гексокиназной или глюкоооксидазной. При гексокиназной глюкоза сначала фосфорилируется за счет АТФ благодаря действию гексокиназы; образовавшийся глюкозо-6-фосфатный эфир в присутствии глюкозо- 6- фосфат-дегидрогеназы восстанавливает NADP, количество которого определяется по увеличению светопоглощения в ультрафиолетовой области.

Легче выполнимы глюкозооксидазные методы, в которых глюкозоксидаза окисляет глюкозу кислородом воздуха с образованием перекиси водорода, количество которой определяется или химическим путем, или по ее способности в присутствии пероксидазы окислять диамины с образованием окрашенных продуктов.

Принцип метода: Глюкозооксидаза окисляет глюкозу с образованием перекиси водорода, которая под действием пероксидазы окисляет ортотолидин с образованием синего хромогена.

1.Натрия хлорид 9 г/л (0,9г NaСI в 100 мл воды).

2. Сульфат цинка, 50 г/л: 5г сульфата цинка растворяют в воде, объем доводят до 100 мл.

3. Натр едкий, 0,3 моль/л: готовят, растворяя 1,2 NaOH в 100 мл воды.

4. Ортотолиидин, 1% раствор: 1г препарата растворяют в 100 мл абсолютного спирта.

5. Ацетатный буферный раствор рН 4,8: смешивают 4 части 0,25 Н уксусной кислоты и 6 частей 0,25 Н ацетата натрия.

8. Рабочий реактив в 80 мл ацетатного буфера растворяют 2 мг глюкозооксидазы и 1 мг пероксидазы, прибавляют 1 мл 1%-ного раствора ортотолидина, перемешивают и доводят объем буферным раствором до 100 мл.

9. Калибровочные растворы глюкозы. Сначала готовят основной раствор с концентрацией 50 ммоль/л, для чего 180 мг глюкозы растворяют в 20 мл бензойной кислоты. Из этого раствора готовят рабочие калибровочные растворы, содержащие: 3 ммоль/л; 6 ммоль/л; 9 ммоль/л; 12 ммоль/л; 15 ммоль/л; 18 ммоль/л; 21 ммоль/л, для чего берут 0,6 мл; 1,2 мл; 1,8 мл; 2,4 мл; 3,6 мл; 4,2 мл основного раствора и доводят насыщенным раствором бензойной кислоты до 10 мл. Эти растворы содержат глюкозу в тех же концентрациях, в которых она бывает в крови.

Ход определения: В центрифужные пробирки вносят 1,1 мл хлорида натрия, 0,4 мл раствора сульфата цинка и 0,4 мл 0,3 Н раствора NaOH, перемешивают; при этом образуется очень тонкий гель гидрата окиси цинка, в него выпускают 0,1 мл крови или калибровочного раствора, снава перемешивают и через 10 мин. центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин.

К 1 мл надосадочной жидкости добавляют 3 мл рабочего реактива и осторожно перемешивают. Через 15 минут развивается окраска и фотометрируют в кюветах с длиной оптического пути 1 см с красным светофильтром (625 нм) против холостого опыта, который ставят одновременно с рабочими пробами, но вместо крови берут физиологический раствор хлорида натрия. При приготовлении калибровочного графика вместо проб крови берут 0,1 мл соответствующего калибровочного раствора.

Нормальные величины натощак: 3,5- 5,7 ммоль/л (60-100 мг в 100 мл).

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

Глюкоза (гексокиназный метод)

1 2511 99 10 021 R1 420 мл + R2 120 мл +

1 2511 99 10 026 R1 580 мл + R2 1100 мл +

В основном, концентрация глюкозы в сыворотке или плазме измеряется для диагностики и наблюдения за ходом лечения диабета. Другие применения – это определение неонатальной гипогликемии, исключение панкреатической очаговой клеточной карциномы, а также оценка углеводного метаболизма при различных болезнях.

Ферментативный ультрафиолетовый тест с использованием гексокиназы (ГК).

Глюкоза + АТФ Глюкоза-6-фосфат + АДФ

Глюкоза-6-фосфат + НАД +

Компоненты и их концентрации в реакционной смеси

R1: Трис буфер, ммоль/л pH 7,8 100
Глюкоза-6-фосфат-дегидрогеназа (Г6Ф-ДГ), кЕд/л ≥7,5
Стандарт : мг/дл (ммоль/л) 100 (5,55)

Стабильность и хранение

Реагенты стабильны до конца месяца, указанного в сроке годности, при хранении при 2–8°С в защищенном от света месте. Не допускать загрязнения. Не замораживать реагенты! Стандарт стабилен до конца указанного в сроке годности месяца при хранении при температуре 2–25°С.

1. В качестве консерванта реагенты содержат азид натрия (0.95 г/л). Не глотать! Избегать контакта реагентов с кожей и слизистыми.

2. Предпринимать меры предосторожности, обычные при работе с лабораторными реактивами.

В соответствии с местными правилами.

Стандарт готов к использованию.

Запуск реакции субстратом

Реагенты готовы к использованию.

Смешать 4 части реагента 1 с одной частью реагента 2 (например, 20 мл R1 + 5 мл R2) = монореагент

Монореагент хранить в темноте!

Необходимые материалы, не включенные в набор

• Общее лабораторное оборудование.

Для сыворотки/плазмы: отделить от форменных элементов не позднее, чем через 1 ч после забора крови.

Стабильность в плазме после добавления ингибиторов гликолиза (фториды, манноза)

Стабильность в сыворотке (отделенная от форменных элементов, свободный гемолиз):

Загрязненные образцы хранению не подлежат.

Адаптации к автоматизированным системам запрашивайте дополнительно

Длина волны, нм 340, Hg 334, Hg 365

Холостая проба Образец/ стандарт Образец/стандарт, мкл – 10 Дист. вода, мкл 10 – Реагент 1, мкл 1000 1000 Перемешать, инкубировать 1–5 мин при 20–25/37°С, измерить оптическую плотность А1, затем добавить: Реагент 2, мкл 250 250 Перемешать, инкубировать 5 мин при 37°С или 10 мин при 20–25°С. Измерить оптическую плотность A 2 не позднее, чем через 30 мин

ΔА = (А2 – А1)образца/стандарта

Холостая
проба
Образец/
стандарт
Образец/стандарт, мкл – 10 Дист. вода, мкл 10 – Монореагент, мкл 1000 1000 Перемешать, инкубировать 5 мин при 37°С или 10 мин при 20–25°С. Измерить оптическую плотность против холостой пробы не позднее, чем через 30 мин

Примечание:

Схема дозирования с запуском реакции образцом рекомендуется только для анализаторов с коррекцией холостой пробы по сыворотке (например, бихроматическим измерением). Образцы часто показывают относительно высокую оптическую плотность при этих длинах волн, что ведет к получению ложно завышенных результатов при запуске реакции образцом. Данный в таблице фактор нельзя использовать для бихроматических измерений.

Для того, чтобы вычислить концентрацию глюкозы, умножьте А на соответствующий фактор f из нижеследующей таблицы:

Запуск реакции субстратом

По калибратору или стандарту

Глюкоза [мг/дл] = 

Глюкоза [мг/дл]  0,05551 = Глюкоза [ммоль/л].

Для калибровки автоматизированных фотометрических систем рекомендуется калибратор TruCal U компании DiaSys. Для внутреннего контроля качества с каждой серией образцов проводите измерения контрольных сывороток TruLab N и P.

TruCal U 5 9100 60 10 060 13 мл

TruLab N 5 9000 60 10 060 15 мл

TruLab P 5 9050 60 10 060 15 мл

уровень 1 5 9170 99 10 061 15 мл

уровень 2 5 9180 99 10 061 15 мл

Тест разработан для определения концентраций глюкозы в диапазоне измерения от 2 до 900 мг/дл (0,1–50 ммоль/л) при 365 нм и, соответственно, от 2 до 500 мг/дл (0,1–28 ммоль/л) при 334/340 нм. Если значение превосходит верхнюю границу диапазона, образец должен быть разведен изотоническим раствором NaCl (0,9%) в соотношении 1 + 2 и полученный результат умножить на 3. Образцы мочи должны быть разведены 1 + 10 дистиллированной водой и результат умножен на 11.

а скорбиновая кислотата до 30 мг/дл, билирубин до 40 мг/дл, гемоглобин до 500 мг/дл и липемия до 2000 мг/дл триглицеридов не влияют на точность анализа, если реакция запускается субстратом.

Нижний предел определения 2 мг/дл (0,1 ммоль/л).

(t = 37°C, число измерений n = 20)

Образец Среднеарифметическое значение, мг/дл SD, мг/дл CV, %
Внутрисерийная
Образец 1 65,7 1,39 2,11
Образец 2 121 2,54 2,11
Образец 3 298 6,57 2,21
Межсерийная
Образец 1 91,0 0,86 0,94
Образец 2 117 1,07 0,91
Образец 3 290 2,28 0,79

Сравнение методов

Сравнение реагента Glucose Hexokinase FS DiaSys (y) и имеющихся в продаже реагентов (x) с использованием 76 образцов дало следующие результаты:

y = 1,00 x + 0,00 мг/дл; r = 0,998.

кровь из пуповины 63–158 3,5–8,8

Сыворотка/плазма 70–115 3,9–6,4

(Значения получены из расчета, что среднее количество мочи в сутки составляет 1350 мл/сут)

Каждая лаборатория должна проверить применим ли контрольный диапазон величин к местному населению, и определить, при необходимости, свой собственный диапазон нормальных величин.

1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p. 131-137.

2. Sacks DB. Carbohydrates. In: Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3 rd ed.

3. Philadelphia: W.B Saunders Company; 1999. p. 750-808. Guder WG, Zawta B et al. The Quality of Diagnostic Samples. 1st ed. Darmstadt: GIT Verlag; 2001; p. 30-1, 50-1.

4. Sacks DB, Bruns DE, Goldstein DE, Mac Laren NK, Mc Donald JM, Parrott M. Guidelines and recommendations for laboratory analysis in the diagnosis and management of diabetes mellitus. Clin Chem 2002; 48: 436-72.

DiaSys Diagnostic Systems GmbH

Alte Strasse 9, 65558 Holzheim, Germany.

источник

В норме у всех здоровых людей в обычных общих анализах мочи могут обнаружить лишь следы глюкозы. Стандартное ее содержание не превышает 0,7 ммоль/литр или 2,8 ммоль/сутки.

Если в результате исследования было обнаружено, что у вас повышена глюкоза в моче, то вначале следует просто пересдать анализ. Если вы повторно получите плохой результат, то следует начинать искать причины возникновения проблем.

Читайте также:  Судороги у собак недержание мочи

Нередко появление сахара сопровождает острый панкреатит. Но он может появиться и вследствие развития других болезней. Например, глюкозурию центрального генеза может вызвать менингит, геморрагический инсульт, энцефалит, черепно-мозговая травма. Лихорадка также является причиной увеличения концентрации сахара в моче. Отдельно выделяют и эндокринную глюкозурию. Она может развиться в результате скачков уровня адреналина, увеличении тироксина, соматотропина, глюкокортикоидных гормонов.

Ренальная глюкозурия развивается из-за проблем с мочевыделительной системой. Это может быть последствием патологии клубочков и канальцев почек. Указанные поражения часто развиваются на фоне инфекционных заболеваний – гломерулонефрита или интерстициального нефрита. Отравление морфином, хлороформом, стрихнином, фосфором является токсической причиной появления сахара в исследуемом материале.

Также заболевание сопровождает акромегалию. Это непропорциональный рост внутренних органов, мягких тканей и скелета, вызванный избыточным продуцированием соматотропного гормона. При этом в общем анализе нередко наблюдается эозинофилия и анемия, а в моче — гиперкальциурия.

При феохромоцитоме также появляется глюкоза в моче. Причины кроются в том, что нарушается работа почек из-за развития опухоли мозгового слоя надпочечников.

Синдром Иценко-Кушинга характеризуется повышением функции надпочечников, они начинают продуцировать глюкокориткоиды в избыточном количестве. Это сопровождается появлением глюкозурии.

Также среди причин называют инфаркт, ожоги, демпинг-синдром.

Чаще всего повышение глюкозы в моче наблюдается у больных диабетом, гипертиреозом, у людей с тяжелыми поражениями печени. При этом процесс почечной фильтрации нарушается. Глюкоза, проходя через мембраны клубочков в почках, должна полностью всасываться обратно в канальцах и возвращаться в кровоток.

Для своевременного выявления заболеваний необходимо сдавать общий анализ мочи ежегодно. Ведь часто начало большинства болезней проходит практически бессимптомно.

Также важно знать, что существует 2 формы этого заболевания. Глюкоза в моче повышена может быть в результате наследственного дефекта, при котором нарушен механизм ее транспортировки. В таком случае говорят о первичной почечной глюкозурии. Схожий механизм развития наблюдается и при синдроме Фанкони или глюкоаминовом диабете. При первом заболевании нарушается работа почек, в моче обнаруживают глюкозу, избыток бикарбоната, аминокислот, фосфатов. Оно характеризуется повышенным выделением мочи, болями в костях, слабостью. Глюкоаминовый диабет проявляется сбоями в работе почек, при которых аминокислоты и сахар выводятся с мочой.

Вторичная форма может проявиться во время беременности или в результате отравления.

Для окончательной установки диагноза мало просто выслушать жалобы и собрать анамнез, необходимо достоверно определить, есть ли глюкоза в моче. Причины ее повышения устанавливаются позже. Сложность заключается в том, что глюкозурия часто протекает бессимптомно. Правда, при выраженной потере сахара с мочой некоторые пациенты жалуются на утомляемость, слабость, головокружения, чувство голода, повышение потоотделения. Также больные иногда отмечают боли в мышцах, увеличение суточной мочи, водянистый стул и нарушение сердцебиения.

Так, в рамках исследования назначаются дополнительные анализы. Проверяется количество сахара в сыворотке крови, исследуются все порции этой биологической жидкости, в том числе и суточная. Для анализов разработаны специальные методы определения глюкозы в моче.

Наиболее распространенным способом является выяснение концентрации сахара с помощью специальных полосок с реагентами. Также наличие глюкозы диагностируют, проведя пробу Гайнеса, исследование по методу Бенедикта, Нидлера. Выяснить точную концентрацию можно с помощью поляриметрического исследования или проведя анализ по Альтгаузену.

Если вам надо сдать обычный общий анализ или целенаправленно проверить наличие сахара в моче, то не забывайте об установленных правилах сбора биологического материала. Так, вначале необходимо провести тщательный туалет наружных половых органов с помощью нейтрального мыла. Иначе в биологический материал могут попасть вещества, способствующие быстрому разложению глюкозы.

Мочу необходимо собирать в чистую посуду, желательно использовать специальные аптечные контейнеры или тщательно вымытые и стерилизованные баночки. Закрыв емкость крышкой, ее необходимо доставить в лабораторию, в которой и будут определять содержание глюкозы в моче.

Если вам сказали собрать суточную мочу, то делается это следующим образом. Первая утренняя порция сливается. Сбор начинается со второго в день мочеиспускания в полном объеме. Не забудьте, что в суточный объем необходимо собрать утреннюю мочу следующего дня. Обязательно подмывайтесь перед каждым походом в туалет. Но не надо нести всю бутыль в лабораторию для того, чтобы определить, если ли у вас глюкоза в моче, повышена она или нет. Замеряйте общий объем, перемешайте биологическую жидкость в емкости и отберите до 100 мл в чистую баночку. На специальном листе необходимо указать ваш рост, вес и общее количество собранной мочи. Кстати, на протяжении суток хранить емкость необходимо в холодильнике. Это нужно для того, чтобы не снижалась концентрация глюкозы в моче.

Для диагностики предназначены особые полоски «Глюкотест» длиной 5 см и шириной 0,5 см со специальной светло-желтой полосой. Именно этот участок пропитан ферментами и красителями, он и окрашивается в случае возникновения реакции.

Определение глюкозы в моче проводится следующим образом. Индикаторная полоска помещается в биологическую жидкость так, чтобы реактивы полностью намокли, и сразу извлекается из нее. После этого ее оставляют на 2 минуты. Как пройдет указанное время, окрас полосы сравнивают со специальной шкалой, определяя приблизительную концентрацию сахара. Если она превышает 20 г/л, то цвет полоски становится предельно возможным и далее не изменяется.

Хранить полоски необходимо при температуре до +18 градусов так, чтобы на них не попадали солнечные лучи. Дотрагиваться до индикаторного участка нежелательно.

Для его проведения создают специальный реактив. В него входят кристаллический сульфат меди, едкий натр и глицерин, которые растворяются в дистиллированной воде по отдельности, а затем смешиваются.

Проводят исследование следующим образом: 20 капель реактива прибавляют к 8 мл мочи в пробирке. В результате должен появиться голубоватый окрас. Верхнюю часть пробирки греют до начала кипения. Нижний ее отдел остается холодным для контроля. Если при этом в нагретой части пробирки голубой окрас сменяется на желтый, то, значит, глюкоза в моче повышена.

Существует и другой метод проверки наличия избыточного количества сахара в моче, основанный на тех же свойствах глюкозы восстанавливать закись меди или гидрат закиси меди из гидрата окиси меди в щелочной среде. Для этих целей готовят специальный реактив из цитрата натрия, безводного карбоната натрия, сульфата меди и воды. Из них делают растворы, которые потом смешивают.

Для проведения исследования необходимо до 10 капель мочи и 5 мл готового реактива. Их смешивают в пробирке, нагревают ее на протяжении пары минут и дожидаются остывания. Если в результате появляется осадок, а жидкость окрашивается в желтый, красный или зеленый цвет, то глюкоза в моче есть.

Этот метод считается одним из самых надежных среди качественных исследований.

Метод разработан на основе того, что глюкоза может восстанавливать нитрат висмута в металлический. Для проведения исследования готовят специальный реактив. В него входит нитрат висмута, который растирается в сегнетовой соли, 10% едкий натр. Хранится приготовленный реактив только в бутылках из темного стекла.

Проводится анализ следующим образом. Моча и реактив смешиваются в соотношении 2:1 и варятся на протяжении 3-х минут. Если присутствует глюкоза в моче, то цвет поменяется на коричневый или даже черный, а при стоянии будет виден темный осадок. Но иногда положительный результат может возникнуть не из-за наличия сахара, а в результате реакции на белок или ряд лекарственных препаратов.

С помощью указанного метода проводится не только определение глюкозы в моче, но и выяснение ее концентрации. Делается это в специальном приборе – поляриметре.

Для проведения исследования биологическую жидкость обесцвечивают и удаляют из нее белок. После этого ее заливают в аппарат, ждут несколько минут для затихания колебаний частиц и определяют концентрацию глюкозы. С помощью такого метода можно определить даже значимое повышение глюкозы в моче, ведь оно основано на свойствах этого вещества поворачивать поляризованный луч вправо. Угол вращения будет зависеть от концентрации раствора. Правда, на результаты могут повлиять β-оксимолярная кислота, стрептомицин, тетрациклиновые препараты.

Указанный способ позволяет достаточно точно определить, присутствует ли в глюкоза в моче. Для этого в биологическую жидкость добавляют 10% раствор едкого натра и кипятят ее в течение минуты. После этого ее цвет сравнивают со шкалой стандартов, приготовленной в пробирках. Этот способ используют как альтернативу полиметрическому исследованию, когда необходимо быстро выяснить уровень сахара, а необходимого оборудования нет.

Причиной появления глюкозы в моче у малышей может стать диабет. При этом у новорожденных снижена масса тела, а при появлении проблем замечается отставание в развитии. Но по одному анализу мочи диагноз не ставится, малыша тщательно обследуют, чтобы исключить другие возможные причины развития болезни.

Обнаруженная глюкоза в моче у ребенка вынуждает родителей более тщательно следить за питанием малыша. В его организм должно поступать достаточное количество углеводов, они необходимы для полноценного развития. Также важно следить, чтобы концентрация глюкозы в сыворотке крови находилась в пределах 3,5-5,5 ммоль/л. Для этого необходимо не только правильное питание, но и физические нагрузки.

Многие пациенты не знают, что значит глюкоза в моче. Они начинают паниковать и требовать назначения каких-то препаратов для нормализации состояния. Но наличие сахара в биологической жидкости является лишь сигналом проблем. Это значит, что необходимо проверить, нет ли у вас диабета, проблем с почками или надпочечниками. Также необходимо проконтролировать работу щитовидной железы. Не стоит забывать, что глюкозурия может развиться и из-за отравлений рядом веществ.

Если вы страдаете от глюкозурии и хотите узнать, как предотвратить развитие болезни у детей, то медицина тут бессильна. Никакой специфической профилактики не существует. Важно просто следить за питанием, давать необходимую физическую нагрузку, и тогда есть шанс, что организм будет работать нормально, несмотря на предрасположенность к развитию заболевания. Ведь чаще всего глюкоза в моче у ребенка появляется вследствие генных мутаций. А избежать этого нельзя. Как правило, ломается ген, отвечающий за белок, который необходим для всасывания в кровь сахара в почках. Даже если у родителей нет проблем, но у них есть малыш с глюкозурией, то при планировании следующих беременностей им в обязательном порядке необходимо посетить генетика для оценки возможных рисков.

источник

Глюкоза (гексокиназный метод)

1 2 021 R1 4´20 мл + R2 1´20 мл +

В основном, концентрация глюкозы в сыворотке или плазме измеряется для диагностики и наблюдения за ходом лечения диабета. Другие применения – это определение неонатальной гипогликемии, исключение панкреатической очаговой клеточной карциномы, а также оценка углеводного метаболизма при различных болезнях.

Ферментативный ультрафиолетовый тест с использованием гексокиназы (ГК).

Глюкоза + АТФ Глюкоза-6-фосфат + АДФ

Глюкоза-6-фосфат + НАД+

Компоненты и их концентрации в реакционной смеси

Глюкоза-6-фосфат-дегидрогеназа (Г6Ф-ДГ), кЕд/л

Реагенты стабильны до конца месяца, указанного в сроке годности, при хранении при 2–8°С в защищенном от света месте. Не допускать загрязнения. Не замораживать реагенты! Стандарт стабилен до конца указанного в сроке годности месяца при хранении при температуре 2–25°С.

1. В качестве консерванта реагенты содержат азид натрия (0.95 г/л). Не глотать! Избегать контакта реагентов с кожей и слизистыми.

2. Предпринимать меры предосторожности, обычные при работе с лабораторными реактивами.

В соответствии с местными правилами.

Стандарт готов к использованию.

Запуск реакции субстратом

Реагенты готовы к использованию.

Смешать 4 части реагента 1 с одной частью реагента 2 (например, 20 мл R1 + 5 мл R2) = монореагент

Монореагент хранить в темноте!

Необходимые материалы, не включенные в набор

Для сыворотки/плазмы: отделить от форменных элементов не позднее, чем через 1 ч после забора крови.

Стабильность в плазме после добавления ингибиторов гликолиза (фториды, манноза)

Стабильность в сыворотке (отделенная от форменных элементов, свободный гемолиз):

Загрязненные образцы хранению не подлежат.

Адаптации к автоматизированным системам запрашивайте дополнительно

Длина волны, нм 340, Hg 334, Hg 365

Запуск реакции субстратом

Перемешать, инкубировать 1–5 мин при 20–25/37°С, измерить оптическую плотность А1, затем добавить:

Перемешать, инкубировать 5 мин при 37°С или 10 мин при 20–25°С. Измерить оптическую плотность A 2 не позднее, чем через 30 мин

ΔА = (А2 – А1)образца/стандарта

Перемешать, инкубировать 5 мин при 37°С или 10 мин при 20–25°С. Измерить оптическую плотность против холостой пробы не позднее, чем через 30 мин

Читайте также:  Норма уровня эритроцитов в моче у женщин

Схема дозирования с запуском реакции образцом рекомендуется только для анализаторов с коррекцией холостой пробы по сыворотке (например, бихроматическим измерением). Образцы часто показывают относительно высокую оптическую плотность при этих длинах волн, что ведет к получению ложно завышенных результатов при запуске реакции образцом. Данный в таблице фактор нельзя использовать для бихроматических измерений.

Для того, чтобы вычислить концентрацию глюкозы, умножьте DА на соответствующий фактор f из нижеследующей таблицы:

Запуск реакции субстратом

По калибратору или стандарту

Глюкоза [мг/дл] = ´

Глюкоза [мг/дл] ´ 0,05551 = Глюкоза [ммоль/л].

Для калибровки автоматизированных фотометрических систем рекомендуется калибратор TruCal U компании DiaSys. Для внутреннего контроля качества с каждой серией образцов проводите измерения контрольных сывороток TruLab N и P.

Кат.№ Фасовка

Тест разработан для определения концентраций глюкозы в диапазоне измерения от 2 до 900 мг/дл (0,1–50 ммоль/л) при 365 нм и, соответственно, от 2 до 500 мг/дл (0,1–28 ммоль/л) при 334/340 нм. Если значение превосходит верхнюю границу диапазона, образец должен быть разведен изотоническим раствором NaCl (0,9%) в соотношении 1 + 2 и полученный результат умножить на 3. Образцы мочи должны быть разведены 1 + 10 дистиллированной водой и результат умножен на 11.

аскорбиновая кислотата до 30 мг/дл, билирубин до 40 мг/дл, гемоглобин до 500 мг/дл и липемия до 2000 мг/дл триглицеридов не влияют на точность анализа, если реакция запускается субстратом.

Нижний предел определения 2 мг/дл (0,1 ммоль/л).

(t = 37°C, число измерений n = 20)

Среднеарифметическое значение, мг/дл

Сравнение реагента Glucose Hexokinase FS DiaSys (y) и имеющихся в продаже реагентов (x) с использованием 76 образцов дало следующие результаты:

y = 1,00 x + 0,00 мг/дл; r = 0,998.

кровь из пуповины 63–158 3,5–8,8

Сыворотка/плазма 70–115 3,9–6,4

(Значения получены из расчета, что среднее количество мочи в сутки составляет 1350 мл/сут)

Каждая лаборатория должна проверить применим ли контрольный диапазон величин к местному населению, и определить, при необходимости, свой собственный диапазон нормальных величин.

1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p. 131-137.

2. Sacks DB. Carbohydrates. In: Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed.

3. Philadelphia: W. B Saunders Company; 1999. p. 750-808. Guder WG, Zawta B et al. The Quality of Diagnostic Samples. 1st ed. Darmstadt: GIT Verlag; 2001; p. 30-1, 50-1.

4. Sacks DB, Bruns DE, Goldstein DE, Mac Laren NK, Mc Donald JM, Parrott M. Guidelines and recommendations for laboratory analysis in the diagnosis and management of diabetes mellitus. Clin Chem 2002; 48: 436-72.

источник

Гексокиназный метод также состоит из двух последовательных реакций, но совершенно других:

Реакция регистрируется при 340 нм. по образованию НАДН. Этот метод является высокоспецифичным и не дает реакции с другими компонентами сыворотки крови. Гексокиназный метод считается референтным для определения глюкозы. Как правило, он линеен до 50 ммоль/л, что позволило его широко рекомендовать для клиник с эндокринологическими отделениями.

Из описанного разнообразия методов определения глюкозы сотрудники КДЛ могут решить для себя, какой способ определения и какой прибор выбрать. Методы «мокрой» биохимии обеспечат нужды лабораторий с большим потоком анализов. Останавливаясь на диагностических наборах «жидкой» биохимии для определения глюкозы в клинической практике широко используются как глюкозооксидазный, так и гексокиназный метод. Из отечественных производителей наборов на глюкозу, отличающимися качественными характеристиками, можно выделить такие фирмы как Vital Diagnostics (C-Петербург), Вектор-Бест (Новосибирск); из зарубежных фирм — НUMAN (Германия), Лахема (Чехия).

Основным показателем углеводного обмена является глюкоза. Измерение сахара в крови помогает в определении различных заболеваний, в частности таких как сахарный диабет и всевозможные болезни крови. Чтобы предотвратить многие недуги врачи рекомендуют держать уровень глюкозы в пределах нормы.

Есть несколько методов, которые могут быстро измерить уровень сахара в крови. Наиболее популярными считаются:

  • Ферментативный;
  • Гексокиназный метод.

Раньше использовались также редуктометрический и колорометрический, но из-за токсичности и низкой точности они больше не используются в современной медицине.

Ферментивный метод определения глюкозы в крови условно делится на:

Определение глюкозы в крови глюкозооксидазным методом используется еще с начала века.
Он популярен тем, что использует ферменты для получения результата. То есть, основывается на реакции окисления глюкозы в крови или моче. А также по результатам с использованием плазмы крови. Простота метода заключается также в том, что результат очень быстро можно получить при помощи биохимического фотометра, так и автоматическим анализатором.
Такой метод специалисты считают наиболее точным, а для анализа необходима кровь или сыворотка крови.
У него также есть некоторые недостатки: во время анализа, перекись водорода, которая образуется от синтеза, может значительно занижать результаты глюкозы.

Поэтому такой метод считают линейным, с ошибкой в 30ммоль/л.

Такой метод считают референтным по измерению уровня глюкозы в крови, но наиболее точным, так как не взаимодействует с компонентами сыворотки крови. Чаще всего этот метод используют в эндокринологических отделениях.
Сотрудники лаборатории могут предложить способы проведения такого анализа:

  • провести обследование при помощи автоматического биохимического анализатора;
  • автоматический фотометр, который используют в небольших лабораториях;
  • в экстренных ситуациях удобным будет карманный глюкометр (One Touch).

Достаточно быстро можно определить уровень глюкозы в крови каждого человека.

Проводить анализ крови можно в лаборатории или в домашних условиях. Почти все методы лабораторных анализов предполагают забор крови из вены или пальца. И хоть данный анализ не требует специальной подготовки. Есть факторы, которые могут повлиять на результаты:

Анна Поняева. Закончила нижегородскую медицинскую академию (2007-2014) и Ординатуру по клинико-лабораторной диагностике (2014-2016).Задать вопрос>>

  • Сильная физическая нагрузка накануне сдачи анализа.
  • Сильное эмоциональное потрясение.
  • Переедание или чрезмерное употребление алкогольных напитков.
  • Также стоит помнить о том, что не следует перед анализом крови 2-3 дня использовать лекарственные препараты.

Если кровь для анализа берут из вены, делать это нужно утром, натощак.

Если же для анализа используют кровь из пальца, ее забор можно совершать в любое время суток.
На качество лабораторного исследования могут влиять такие факторы:

  • время забора крови;
  • материал пробирок или качество системы для забора крови;
  • положение тела пациента;
  • квалификация медицинских сотрудников.

Хранение и транспортировка образца очень важна для правильного результата. Для этого используют специальные системы вакуумного хранения, которые надежно защищают образец от внешних факторов.

Такие контейнеры защищают от солнца и света, образцы крови в них могут храниться до 2 суток.

Фотометрические глюкометры, как анализатор глюкозы, может использовать для анализа только капиллярную кровь. Это значит, что анализ можно делать в домашних условиях, используя кровь из пальца или пятки.

Посмотрите видео на эту тему

Данные приборы показывают результат, который снован на изменении окраса крови, что является реакцией глюкозы и нанесенных на тест-полоску веществ.

Глюкометры данного вида самые удобные и качественные. Электрохимический глюкометр показывает уровень сахара по электрическому току, который появляется в результате взаимодействия крови с глюкозой.

Это наиболее точные устройства.

Данные устройства не предполагают контакта аппарата с кровью.

Спектрометрические глюкометры сканируют ладонь человека лазером и считывают особые биохимические процессы.

Другие измерители:

  1. лазерный глюкометр,
  2. сенсорный,
  3. глюкометр с управлением голосом,
  4. глюкометр Романовского, который просто подносится к коже человека.

Чтобы аппарат выдавал стабильный, точный результат следует:

  • Хранить аппарат в хороших условиях, без сильных перепадов температур и высокой влажности.
  • Полоски для теста должны сохраняться в защитном контейнере.

Перед проведением теста нужно:

  • Тщательно вымыть руки, а место прокола продезинфицировать спиртовой салфеткой.
  • После прокола кожу нужно обработать антисептиком.
  • Проводить забор крови для теста лучше в ванной комнате.
  • Игла должна быть простерилизована.
  • Глубину и место прокола должен определить лечащий врач.

Кровь на полоске должна аккуратно прислоняться к глюкометру, внимательно следовать инструкции в зависимости от типа аппарата.
Проводить забор крови нужно не более 4 раз в сутки.

Нормальными показателями для людей от 14 до 60 лет есть от 3 до 5 ммоль/л.

  • Для новорожденных до 1 месяца – от 2,8 — до 4 ммоль/л.
  • Детям до 14 лет – 3,5-5,5.
  • От 14 до 60 – 3-5,5.
  • От 60 до 90лет — 4,5 – 6,5 ммоль/л.
  • Старше 90 лет – до 6,7 ммоль/л.

Для женщин и мужчин показатель одинаковый.

У женщин он может повышаться только в гестационном периоде. У беременных норма 5- 6,5 ммоль/л.
Повышенные значения:

  • сахарный диабет;
  • дефицит железа;
  • повышение может быть из-за фетального гемоглобина.

Сниженные значения:

  • анемия;
  • кровотечения;
  • гипогликемия;
  • дальнейшее переливание крови.

При незначительных изменениях нормы глюкозы нужно как можно раньше наладить режим питания. Для больных гипергликемией нужно исключить использование углеводов.
Для тех, кто страдает диабетом, и хочет держать уровень глюкозы в норме, нужно использовать диету№9.

Если уровень глюкозы превышен из-за других возможных заболеваний, их нужно немедленно устранять.
В каждом отдельном случае нужно всегда консультироваться с врачом и следовать рекомендациям.

Если возникла необходимость в частом измерении уровня глюкозы, нужно очень тщательно подходить к тому, как правильно выбрать измеритель крови.

Практически все аппараты имеют сертификаты качества, а результаты точные как в лаборатории. Придерживаясь инструкций врача и фармацевта, можно следить за уровнем глюкозы в домашних условиях, без ежедневного посещения больницы. Держать уровень сахара в норме очень важно, ведь увеличение или снижение может влиять на работу всего организма и провоцировать различные заболевания. Кроме этого, людям которые болеют сахарным диабетом, нужно чаще посещать врача для обследования.

Глюкоза (гексокиназный метод)

1 2511 99 10 021 R1 420 мл + R2 120 мл +

1 2511 99 10 026 R1 580 мл + R2 1100 мл +

В основном, концентрация глюкозы в сыворотке или плазме измеряется для диагностики и наблюдения за ходом лечения диабета. Другие применения – это определение неонатальной гипогликемии, исключение панкреатической очаговой клеточной карциномы, а также оценка углеводного метаболизма при различных болезнях.

Ферментативный ультрафиолетовый тест с использованием гексокиназы (ГК).

Глюкоза + АТФ Глюкоза-6-фосфат + АДФ

Глюкоза-6-фосфат + НАД +

Компоненты и их концентрации в реакционной смеси

R1: Трис буфер, ммоль/л pH 7,8 100

Глюкоза-6-фосфат-дегидрогеназа (Г6Ф-ДГ), кЕд/л ≥7,5 Стандарт : мг/дл (ммоль/л)

Реагенты стабильны до конца месяца, указанного в сроке годности, при хранении при 2–8°С в защищенном от света месте. Не допускать загрязнения. Не замораживать реагенты! Стандарт стабилен до конца указанного в сроке годности месяца при хранении при температуре 2–25°С.

1. В качестве консерванта реагенты содержат азид натрия (0.95 г/л). Не глотать! Избегать контакта реагентов с кожей и слизистыми.

2. Предпринимать меры предосторожности, обычные при работе с лабораторными реактивами.

В соответствии с местными правилами.

Стандарт готов к использованию.

Запуск реакции субстратом

Реагенты готовы к использованию.

Смешать 4 части реагента 1 с одной частью реагента 2 (например, 20 мл R1 + 5 мл R2) = монореагент

Монореагент хранить в темноте!

Необходимые материалы, не включенные в набор

• Общее лабораторное оборудование.

Для сыворотки/плазмы: отделить от форменных элементов не позднее, чем через 1 ч после забора крови.

Стабильность в плазме после добавления ингибиторов гликолиза (фториды, манноза)

Стабильность в сыворотке (отделенная от форменных элементов, свободный гемолиз):

Загрязненные образцы хранению не подлежат.

Адаптации к автоматизированным системам запрашивайте дополнительно

Длина волны, нм 340, Hg 334, Hg 365

Холостая проба Образец/ стандарт Образец/стандарт, мкл – 10 Дист. вода, мкл 10 – Реагент 1, мкл 1000 1000 Перемешать, инкубировать 1–5 мин при 20–25/37°С, измерить оптическую плотность А1, затем добавить: Реагент 2, мкл 250 250 Перемешать, инкубировать 5 мин при 37°С или 10 мин при 20–25°С. Измерить оптическую плотность A 2 не позднее, чем через 30 мин

ΔА = (А2 – А1)образца/стандарта

Холостая
проба
Образец/
стандарт
Образец/стандарт, мкл – 10 Дист. вода, мкл 10 – Монореагент, мкл 1000 1000 Перемешать, инкубировать 5 мин при 37°С или 10 мин при 20–25°С. Измерить оптическую плотность против холостой пробы не позднее, чем через 30 мин

Схема дозирования с запуском реакции образцом рекомендуется только для анализаторов с коррекцией холостой пробы по сыворотке (например, бихроматическим измерением). Образцы часто показывают относительно высокую оптическую плотность при этих длинах волн, что ведет к получению ложно завышенных результатов при запуске реакции образцом. Данный в таблице фактор нельзя использовать для бихроматических измерений.

Читайте также:  Может ли быть кровь в моче при аппендиците

Для того, чтобы вычислить концентрацию глюкозы, умножьте А на соответствующий фактор f из нижеследующей таблицы:

Запуск реакции субстратом

По калибратору или стандарту

Глюкоза [мг/дл] = 

Глюкоза [мг/дл]  0,05551 = Глюкоза [ммоль/л].

Для калибровки автоматизированных фотометрических систем рекомендуется калибратор TruCal U компании DiaSys. Для внутреннего контроля качества с каждой серией образцов проводите измерения контрольных сывороток TruLab N и P.

Кат.№ Фасовка

TruCal U 5 9100 60 10 060 13 мл

TruLab N 5 9000 60 10 060 15 мл

TruLab P 5 9050 60 10 060 15 мл

уровень 1 5 9170 99 10 061 15 мл

уровень 2 5 9180 99 10 061 15 мл

Тест разработан для определения концентраций глюкозы в диапазоне измерения от 2 до 900 мг/дл (0,1–50 ммоль/л) при 365 нм и, соответственно, от 2 до 500 мг/дл (0,1–28 ммоль/л) при 334/340 нм. Если значение превосходит верхнюю границу диапазона, образец должен быть разведен изотоническим раствором NaCl (0,9%) в соотношении 1 + 2 и полученный результат умножить на 3. Образцы мочи должны быть разведены 1 + 10 дистиллированной водой и результат умножен на 11.

а скорбиновая кислотата до 30 мг/дл, билирубин до 40 мг/дл, гемоглобин до 500 мг/дл и липемия до 2000 мг/дл триглицеридов не влияют на точность анализа, если реакция запускается субстратом.

Нижний предел определения 2 мг/дл (0,1 ммоль/л).

(t = 37°C, число измерений n = 20)

Образец Среднеарифметическое значение, мг/дл SD, мг/дл CV, %
Внутрисерийная
Образец 1 65,7 1,39 2,11
Образец 2 121 2,54 2,11
Образец 3 298 6,57 2,21
Межсерийная
Образец 1 91,0 0,86 0,94
Образец 2 117 1,07 0,91
Образец 3 290 2,28 0,79

Сравнение реагента Glucose Hexokinase FS DiaSys (y) и имеющихся в продаже реагентов (x) с использованием 76 образцов дало следующие результаты:

y = 1,00 x + 0,00 мг/дл; r = 0,998.

кровь из пуповины 63–158 3,5–8,8

Сыворотка/плазма 70–115 3,9–6,4

(Значения получены из расчета, что среднее количество мочи в сутки составляет 1350 мл/сут)

Каждая лаборатория должна проверить применим ли контрольный диапазон величин к местному населению, и определить, при необходимости, свой собственный диапазон нормальных величин.

1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p. 131-137.

2. Sacks DB. Carbohydrates. In: Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3 rd ed.

3. Philadelphia: W.B Saunders Company; 1999. p. 750-808. Guder WG, Zawta B et al. The Quality of Diagnostic Samples. 1st ed. Darmstadt: GIT Verlag; 2001; p. 30-1, 50-1.

4. Sacks DB, Bruns DE, Goldstein DE, Mac Laren NK, Mc Donald JM, Parrott M. Guidelines and recommendations for laboratory analysis in the diagnosis and management of diabetes mellitus. Clin Chem 2002; 48: 436-72.

источник

Первые два метода крайне неудобны, токсичны и обладают низкой точностью, поэтому мы на них не будем останавливаться.

Сегодня наибольшее распространение получили методы, основанные на использовании фермента – глюкозооксидазы. В основе метода лежит следующая реакция:

Глюкозооксидаза катализирует перенос двух водородных атомов с первого углеродного атома глюкозы на кислород, растворенный в жидком реагенте. При этом в ходе реакции образуется в эквимолярных количествах перекись водорода. Т.е. концентрация образовавшейся перекиси водорода точно равна определяемой концентрации глюкозы. Следовательно, использование глюкозооксидазной реакции, трансформировало задачу определения концентрации глюкозы в задачу определения концентрации перекиси водорода, которая, как будет показано ниже, значительно проще первой. И здесь есть несколько способов, широко используемых сегодня в лабораторной практике (см. схему).

Среди вышеперечисленных способов регистрации наибольшее распространение получил фотометрический биохимический метод, в котором молекулы перекиси водорода под действием фермента пероксидазы расщепляются с образованием активной формы кислорода – супероксид анион-радикала – О2 — , который в свою очередь окисляет хромоген, что приводит к значительному изменению спектра поглощения хромогена.

На рис. 1 и 2 показаны спектры рабочего раствора до внесения в него стандартного раствора глюкозы и после. Максимум поглощения реакционной смеси – (реактив + глюкоза) находится в области 500 нм. Соответственно, изменение оптической плотности конечной реакции на длине волны 480-520 нм пропорционально концентрации глюкозы, содержащейся в пробе.

Рисунок 2. Спектр реакционной смеси (рабочий раствор + глюкоза).

Большая популярность данного метода определения глюкозы объясняется его высокой специфичностью и простотой выполнения. Метод можно реализовать как с применением обычного фотометра (лучше специализированного биохимического фотометра типа Микролаб 540), так и с помощью автоматических биохимических автоанализаторов.

Наряду с методом фотометрирования по конечной точке, несколько лет назад появились наборы, в которых реализован кинетический метод фотометрирования. Суть метода состоит в том, что при определенном соотношении активностей глюкозооксидазы и пероксидазы, скорость образования окрашенного соединения некоторое время после внесения пробы в рабочий раствор будет пропорциональна концентрации глюкозы в пробе. Преимущество такого метода состоит в том, что результат не зависит от наличия в пробе других соединений, поскольку поглощение последних стабильно во времени. Этот метод требует применения кинетического фотометра, например Stat Fax 1904+, Stat Fax 3300, полуавтоматических анализаторов, например Clima 15, или автоматических биохимических анализаторов. Измерение концентрации глюкозы из цельной крови удобно выполнять с помощью приборов, работа которых основана на амперометрическом принципе измерения, при помощи специальных ферментных датчиков. Перекись водорода является крайне нестабильным химическим соединением и она может служить источником заряженных частиц. Именно это и используется в ферментных датчиках мембранного типа или электрохимических элементах портативных глюкометров.

Проба цельной крови (обычно 20 мкл) разводится в системном буферном растворе (эритроциты разрушаются), после чего подается по магистрали в проточную ячейку. Глюкоза, подвергается окислению под воздействием фермента глюкозооксидазы, находящейся на мембране. Образовавшаяся перекись водорода диффундирует через мембрану и окисляется далее в каталитической реакции под действием платины. Диффузия перекиси водорода на поверхность платины формирует ток, пропорциональный числу молекул Н2О2. Полученный таким образом сигнал обрабатывается прибором в соответствующее значение напряжения. Это измеренное значение пропорционально концентрации глюкозы в пробы.

В качестве примера приборов, использующих вышеописанный метод можно назвать автоматические анализаторы глюкозы Biosen (Германия). Эти приборы удобны для использования не только в стационарах, но и в поликлиниках, где анализ на глюкозу делают преимущественно из капиллярной крови.

Важным этапом в развитии методов клинической лабораторной диагностики стало появление «сухой химии». Естественно, одним из первых приложений этой технологии стала задача определения глюкозы в крови пациента. Первые приборы значительно уступали по точности традицинным лабораторным методам исследований. Однако, со временем, ряду фирм удалось разработать такие диагностические полоски и отражательные фотометры, которые обеспечили весьма высокую точность анализа. Широко популярными во всем мире в настоящее являются глюкометры One Touch и тест-полоски к ним производства компании Life Scan (США), которые удачно сочетают в себе аналитическую точность количественного ферментативного метода со скоростью и простотой «сухой химии».

Глюкометры One Touch предназначены для быстрого и точного измерения уровня глюкозы в цельной крови. Тест-полоска One Touch содержит все необходимые химические компоненты для двухэтапного глюкозооксидазного метода, включая ферменты глюкозооксидазу и пероксидазу, которые сорбированы на уникальную пористую гидрофильную мембрану. Результатом реакции является образование окрашенного комплекса. Интенсивность развившейся окраски регистрируется отражательным минифотометром.

Мембрана тест-полоск One Touch напоминает губку с микроскопическими порами и выполняет тройственную функцию. Она действует: 1) как резервуар, собирая необходимое количество крови, 2) как фильтр, блокируя твердый клеточный материал (эритроциты, лейкоциты и др.), 3) как гладкая оптическая поверхность, на которой измеряется отраженный свет. Последняя функция, в частности, очень важна для работы прибора. Она делает возможным считывать нижнюю часть полоски, тогда как кровь остается на верхней части тест-полоски. Соответственно, нет необходимости стирать (промокать) кровь с поверхности тест-полоски.

В дополнении к этому, мембрана обладает гидрофильными свойствами, благодаря которым капля крови “притягивается” к поверхности тест-полоски при касании.

В состав приборов One Touch входит два специальных светодиода. Обработка развившейся окраски на тест-полоске идет следующим образом. Как только тест-полоска вставлена в прибор – происходит нулевое считывание. В этот момент на дисплее мы видим: “ЖДАТЬ”. Когда капля крови наносится на тест-полоску, плазма крови моментально сорбируется мембраной, тогда как эритроциты и излишки плазмы остаются на поверхности мембраны. После полного впитывания капли крови немедленно происходит окрашивание. Прибор регистрирует изменение величины отражения и автоматически запускает таймер. Через 45 секунд химическая реакция заканчивается, результат светоотражения обрабатывается. Окрашенный продукт реакции поглощает свет, испускаемый первым светодиодом. Форменные элементы крови и лишняя плазма также поглощают свет, излучаемый диодом. Чтобы скорректировать фоновое отражение, второе считывание производится вторым светодиодом на другой длине волны. Разность сигналов от первого и второго светодиода несет информацию о поглощении света хромогеном. Сигнал, полученный от хромогена для оценки концентрации глюкозы, соотносится со специальной калибровкой. Все приборы One Touch откалиброваны с использованием референтного метода на лабораторном анализаторе глюкозы. С помощью этой процедуры получается стандартная калибровочная кривая. Отметим, что достаточно сложно наладить производство тест-полосок, которые были бы абсолютно одинаковыми химически, в силу очень низкой концентрации реактивов. Для решения этой проблемы используется стандартная калибровочная кривая, состоящая из 16 –ти калибровочных линий. Контроль качества осуществляется сразу после производства тест-полосок, что позволяет определить, какая из калибровочных линий (от 1 до 16) может быть применена для данной тест-полоски. Это так называемый номер кода, который проставляется на упаковке тест-полосок. Эти 16 калибровочных линий также программируются в микропроцессоре прибора. Для получения оптимально точных результатов, номер кода, указанный на упаковке тест-полосок выставляется в приборе при помощи кнопки кода. Таким образом, неправильно установленный код на приборе может являться причиной ошибки измерения.

С момента появления на рынке приборов One Touch прошло большое количество клинических исследований в лабораториях России, Америки и Европы. Одно из таких исследований было проведено Эндокринологическим научным центром РАМН по заказу Российской Ассоциации Медицинской Лабораторной Диагностики. Специалисты Центра провели сравнительный анализ двух методов измерения уровня глюкозы в крови. Результаты, полученные на One Touch, сопоставлялась с данными, полученными на биохимическом анализаторе Spectrum II (Abbott Laboratories, США), реализующем гексокиназный метод определения глюкозы. Было исследовано 190 проб крови от 95 пациентов. Коэффициент корреляции результатов составил 0,98641. Коэффициент вариации в нормальном и патологическом диапазонах на глюкометре One Touch не превысил 2,5%.

В официальном отчете Эндокринологического научного центра РАМН сказано: «приборы One Touch обладают высокой точностью и правильностью, а также широким диапазоном измерений. Их можно использовать для диагностики неотложных состояний при диабете, в том числе бригадами “Скорой помощи”, поскольку эти приборы не только надежны, но и быстро дают результаты».

В заключении следует упомянуть и о недостатках глюкозооксидазного метода. Образующаяся перекись водорода и супероксид анион-радикал могут окислять не только хромоген, но и другие вещества, присутствующие в биологической жидкости: аскорбиновую кислоту, мочевую кислоту, билирубин. При этом, соответственно, доля перекиси, принимающая участие в окислении хромогена, снижается, что приводит к занижению результата по глюкозе. Этот метод линеен, как правило, до 20-30 ммоль/л глюкозы.

Регистрация осуществляется при длине волны 340 нм по светопоглощению НАДН. Этот метод является высокоспецифичным и не дает реакции с другими компонентами сыворотки крови. Гексокиназный метод считается референтным для определения глюкозы. Как правило, он линеен до 50 ммоль/л, что позволило его широко рекомендовать для клиник с эндокринологическими отделениями.

Из описанного разнообразия методов определения глюкозы сотрудники КДЛ могут решить для себя, какой способ определения и какой прибор выбрать:

  • Методы «мокрой» биохимии, реализованные на автоматических биохимических анализаторах, обеспечат нужды лабораторий с большим потоком анализов.
  • Анализаторы глюкозы типа Biosen требуют от оператора минимальных трудозатрат, так как они полностью автоматизированы и достаточно производительны (скорость от 50 до 200 проб в час).
  • Для лабораторий с небольшим числом исследований, а также экспресс-лабораторий удобен специализированный биохимический фотометр Микролаб 540.
  • Для бригад скрой помощи идеальное решение — глюкометры типа One Touch.

Т.о., задача КДЛ обеспечить не только быстрое, но и высокоточное определение глюкозы, на сегодняшний день вполне решаема.

источник

Похожие статьи: