Исследование мочи на лептоспироз у лошадей

В данном разделе размещаются актуальные версии нормативно-правовых актов (законы, приказы, указы, решения Верховного суда РФ и др.), представляющие интерес для специалистов в области ветеринарии и фитосанитарии.

Дополнительную информацию Вы можете получить, задав вопрос в разделе «Электронная приемная».

1. Раздел I. Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Лептоспироз
   1. Часть 1. Область применения
   2. Часть 2. Нормативные ссылки
   3. Часть 3. Общие сведения о лептоспирозе
   4. Часть 4. Профилактика и борьба с лептоспирозом сельскохозяйственных и домашних животных
   5. Часть 5. Профилактика заболеваний людей на территории эпизоотического очага

3.1. Профилактика инфекционных болезней

Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных

Санитарные правила
СП 3.1.091-96

Ветеринарные правила ВП 13.3.1310-96

1. Научно — исследовательским институтом эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН (Ананьина Ю.В., Евдокимова О.А., Петров Е.М., Самсонова А.П.);
2. Всероссийским государственным научно — исследовательским институтом контроля, стандартизации и сертификации ветпрепаратов (Малахов Ю.А., Соболева Г.Л., Панин А.Н.);
3. Центральным научно — исследовательским институтом эпидемиологии Госкомсанэпиднадзора РФ (Шумилов П.К.);
4. Московской государственной академией прикладной биотехнологии (Логинов И.А.);
5. Научно — исследовательским институтом ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (Усольцев В.М.);
6. Всесоюзным НИ технологическим институтом биологической промышленности (Белоусов В.И.).

2. Утверждены и введены в действие Первым заместителем Председателя Госкомсанэпиднадзора России от 31 мая 1996 г. N 11 и начальником Департамента ветеринарии Минсельхозпрода России от 18 июня 1996 г. N 23.

3. Взамен методических рекомендаций «Эпидемиология, диагностика, клиника и профилактика лептоспироза» Минздрава РСФСР от 07.12.87 г. в части «Профилактика».

«Санитарные правила, нормы и гигиенические нормативы (далее — санитарные правила) — нормативные акты, устанавливающие критерии безопасности и (или) безвредности для человека, факторов среды его обитания и требования к обеспечению благоприятных условий его жизнедеятельности.

Санитарные правила обязательны для соблюдения всеми государственными органами и общественными объединениями, предприятиями и иными хозяйствующими субъектами, организациями и учреждениями, независимо от их подчиненности и форм собственности, должностными лицами и гражданами» (статья 3).

«Санитарным правонарушением признается посягающее на права граждан и интересы общества противоправное, виновное (умышленное или неосторожное) деяние (действие или бездействие), связанное с несоблюдением санитарного законодательства РСФСР, в том числе действующих санитарных правил.

Должностные лица и граждане РСФСР, допустившие санитарное правонарушение, могут быть привлечены к дисциплинарной, административной и уголовной ответственности» (статья 27).

«Основными задачами ветеринарии в Российской Федерации являются: . контроль за соблюдением органами исполнительной власти и должностными лицами, предприятиями, учреждениями, организациями, . иностранными юридическими лицами, гражданами Российской Федерации, иностранными гражданами и лицами без гражданства — владельцами животных и продуктов животноводства (далее — предприятия, учреждения, организации и граждане) ветеринарного законодательства Российской Федерации» (статья 1).

«Ветеринарное законодательство Российской Федерации регулирует отношения в области ветеринарии в целях защиты животных от болезней, выпуска безопасных в ветеринарном отношении продуктов животноводства и защиты населения от болезней, общих для человека и животных» (статья 2).

«Должностные лица и граждане, виновные в нарушении ветеринарного законодательства Российской Федерации, несут дисциплинарную, административную, уголовную и иную ответственность в соответствии с настоящим Законом и другими актами законодательства Российской федерации» (статья 23).

1.1. Настоящие Правила обязательны для выполнения на всей территории Российской Федерации государственными органами, предприятиями и иными хозяйственными субъектами, учреждениями, организациями, общественными объединениями, независимо от их подчинения и форм собственности, должностными лицами и гражданами.

2.1. Закон РСФСР «О санитарно — эпидемиологическом благополучии населения».

2.2. Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан.

2.3. Закон Российской Федерации «О ветеринарии».

2.4. Государственная система санитарно — эпидемиологического нормирования Российской Федерации.

2.5. Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно — санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов.

2.6. Инструкция «Проведение ветеринарной дезинфекции объектов животноводства».

2.7. Инструкция по дезинфекции сырья животного происхождения и предприятий по его заготовке, хранению и обработке.

2.8. Методические рекомендации «Эпидемиология, диагностика, клиника и профилактика лептоспироза». Минздрав РСФСР, 1987.

2.9. Методические указания по эпидемиологии и профилактике лептоспироза Минздрав, СССР, 1979.

2.10. Методические указания по борьбе с серой крысой в природных очагах иктерогеморрагического лептоспироза. Минздрав, 1984.

2.11. Инструкция о мероприятиях по профилактике и оздоровлению животных от лептоспироза. 1992.

2.12. Методические указания по лабораторной диагностике лептоспироза животных. 1976.

2.13. Государственный стандарт Союза СССР «Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики лептоспироза». ГОСТ 25386-91.

2.14. Наставление по применению поливалентной вакцины ВГНКИ против лептоспироза животных. 1992.

2.15. Наставление по применению вакцины против лептоспироза животных(концентрированной). 1994.

2.16. Наставление по применению вакцины ассоциированной против лептоспироза и парвовирусной инфекции свиней. 1989.

2.17. Наставление по применению вакцины ассоциированной против лептоспироза и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота. 1986.

2.18. Наставление по применению вакцины ассоциированной против лептоспироза и кампилобактериоза крупного рогатого скота. 1991.

2.19. Наставление по применению вакцины против лептоспироза собак. 1994.

2.20. Наставление по применению вакцины лептоспирозной инактивированной жидкой. 1981.

2.21. Наставление по применению вакцины против чумы плотоядных, инфекционного гепатита, аденовироза, парвовирусного энтерита и лептоспироза собак (гексаканивак). 1991.

Лептоспироз — зоонозная природноочаговая инфекционная болезнь диких, домашних животных и человека, широко распространенная в различных ландшафтно — географических зонах мира.

Источники возбудителей лептоспирозной инфекции подразделяются на две группы. К первой относятся грызуны и насекомоядные, являющиеся основными хозяевами (резервуаром) возбудителей в природе; ко второй — домашние животные (свиньи, крупный рогатый скот, овцы, козы, лошади, собаки), а также пушные звери клеточного содержания (лисицы, песцы, нутрии), формирующие антропургические (сельскохозяйственные) очаги.

Возбудители лептоспироза — микроорганизмы рода Leptospira.

Патогенные лептоспиры представлены 202 сероварами, которые по степени антигенного родства объединены в 23 серологические группы.

На территории Российской Федерации возбудителями лептоспироза сельскохозяйственных животных и собак являются лептоспиры серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa, Sejroe, Hebdomadis, Icterohaemorrhagiae, Canicola; в природных очагах установлена циркуляция лептоспир серогрупп Grippotyphosa, Pomona, Sejroe, Javanica, Icterohaemorrhagiae, Bataviae, Australis, Autumnalis. В этиологической структуре лептоспирозных заболеваний человека преобладают лептоспиры серогрупп Grippotyphosa, Pomona, Icterohaemorrhagiae, Canicola, Sejroe.

Основной путь передачи инфекции — водный, меньшее значение имеют контактный и пищевой (кормовой).

В организм человека и животных лептоспиры проникают через незначительные повреждения кожи и неповрежденные слизистые оболочки полости рта, носа, глаз, желудочно — кишечного и мочеполового трактов.

4.1. Основанием для подозрения на неблагополучие хозяйства по лептоспирозу служат клинические признаки болезни и патологоанатомические изменения, характерные для этой инфекции, обнаружение специфических антител в крови животных. Диагноз лептоспироза во всех случаях должен быть подтвержден лабораторными исследованиями.

4.2. В целях своевременного выявления лептоспироза проводят исследование сыворотки крови животных в реакции микроагглютинации (РМА):

— на племпредприятиях, станциях (пунктах) искусственного осеменения и в племенных хозяйствах (фермах) всех производителей два раза в год; — свиней, крупный и мелкий рогатый скот, лошадей — перед вводом (ввозом) и выводом для племенных и пользовательных целей (за исключением животных на откорм) поголовно; — во всех случаях при подозрении на лептоспироз.

4.3. По результатам лабораторных исследований хозяйство (ферму, отделение, предприятие, гурт и т.д.) считают неблагополучным по лептоспирозу в одном из следующих случаев:

— культура лептоспир выделена из патологического материала; — лептоспиры обнаружены при микроскопическом исследовании патологического материала; — антитела обнаружены в сыворотке крови более, чем у 20% обследованных животных в титре 1:50 у невакцинированных, 1:100 и более — у вакцинированных. При выявлении меньшего числа положительных реакций проводят микроскопию мочи. При отрицательном результате микроскопии мочи повторное исследование сыворотки крови и мочи ранее исследованных животных проводят через 15-30 дней.

Обнаружение лептоспир или антител при повторном исследовании у животных, не имевших их при предыдущем исследовании, или нарастание титра антител в четыре и более раз свидетельствует о неблагополучии хозяйства.

4.4. Лептоспироз считают причиной аборта (мертворождения) при обнаружении:

— лептоспир в органах (тканях, жидкостях) плода или околоплодных водах; — антител к лептоспирам в сыворотке крови плода в РМА в разведении 1:5 (с антигеном 1:10) и более.

4.5. Лептоспироз считают причиной гибели животных при наличии клинических признаков и патологоанатомических изменений, характерных для этой инфекции, подтвержденных обнаружением лептоспир в крови или паренхиматозных органах (кроме почек).

4.6. В целях недопущения заболевания животных лептоспирозом собственники и владельцы скота, ветеринарные специалисты обязаны выполнять следующее:

— осуществлять контроль за клиническим состоянием животных, учитывать количество абортов и при подозрении на лептоспироз отбирать патматериал для лабораторных исследований; — комплектование племенных хозяйств (ферм), предприятий, станций искусственного осеменения из благополучных по лептоспирозу хозяйств; — исследовать всех поступающих в хозяйство животных в период 30-дневного карантина на лептоспироз в РМА в разведении сыворотки 1:25. Свиней, вводимых в хозяйство для племенных целей, обследуют, кроме того, на лептоспироносительство путем микроскопии мочи независимо от результатов серологических исследований. При выявлении животных, сыворотка крови которых содержит специфические антитела или выделяющих лептоспир с мочой, проводят мероприятия, предусмотренные для неблагополучных по лептоспирозу хозяйств; — разрешается комплектовать откормочные хозяйства (отделения, фермы) клинически здоровыми животными без обследования на лептоспироз, но с обязательной вакцинацией их против лептоспироза в период карантинирования; — не допускать контакта животных со скотом неблагополучных по лептоспирозу хозяйств (ферм), населенных пунктов, на пастбище, в местах водопоя и т.д.; не выпасать невакцинированных животных на территории природных очагов лептоспироза; — не устраивать летних лагерей для животных на берегах открытых водоемов; — систематически уничтожать грызунов в животноводческих помещениях, на территории ферм, в местах хранения кормов и т.п.

4.7. Животных, поступающих по импорту, содержат в карантинном помещении и исследуют их сыворотку крови в РМА с лептоспирами серологических групп, регистрируемыми в стране — экспортере.

При получении положительной РМА с сывороткой крови отдельных животных проводят микроскопию мочи и повторное исследование сыворотки крови через 7-10 дней у животных всей группы для решения вопроса о благополучии по лептоспирозу.

4.8. При установлении диагноза лептоспироз администрация района (города) по представлению главного ветеринарного врача района (города) выносит решение об объявлении хозяйства (его отдельной части), населенного пункта неблагополучным по лептоспирозу, вводит ограничения и утверждает план по оздоровлению хозяйства.

Одновременно главный ветеринарный врач района (города) сообщает об этом вышестоящему ветеринарному органу и территориальному центру госсанэпиднадзора.

В плане оздоровительных мероприятий предусматривают необходимые диагностические исследования животных, ограничительные, ветеринарные, санитарные, организационно — хозяйственные мероприятия с указанием сроков проведения и ответственных лиц.

4.9. По условиям ограничений запрещается:

— выводить (ввозить) животных для целей воспроизводства, продавать животных населению; — перегруппировывать животных без ведома ветеринарного специалиста, обслуживающего хозяйство; — допускать животных к воде открытых водоемов и использовать ее для поения и купания животных; — выпасать невакцинированных животных на пастбищах, где выпасались больные лептоспирозом животные, или на территории природного очага лептоспироза; — скармливать невакцинированным животным корма, в которых обнаружены инфицированные лептоспирами грызуны.

4.10. Молоко, полученное от больных лептоспирозом животных, нагревают до кипения и используют в корм. Молоко клинически здоровых коров, сыворотка крови которых дает положительную РМА без нарастания титра, используют без ограничений.

4.11. В неблагополучном по лептоспирозу хозяйстве (ферме, отделении, стаде, свинарнике, и т.д.) проводят клинический осмотр и измерение температуры тела у подозрительных по заболеванию животных.

Больных и подозрительных по заболеванию животных изолируют, лечат гипериммунной сывороткой и антибиотиками в дозах, указанных в наставлениях по их применению.

Убой таких животных проводят на санитарной бойне, а при ее отсутствии — в убойном цехе мясокомбината в конце смены, после удаления продуктов убоя здоровых животных, с соблюдением мер личной профилактики. Помещение и оборудование после убоя таких животных дезинфицируют. Продукты убоя используют в соответствии с «Правилами ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно — санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов».

4.12. Клинически здоровых животных всех видов и возрастных групп, восприимчивых к лептоспирозу, вакцинируют. Животных, подвергнутых лечению, вакцинируют через 5-7 дней после выздоровления.

4.13. Всех животных откормочных хозяйств, неблагополучных по лептоспирозу, и малоценных животных в племенных и пользовательных хозяйствах откармливают и сдают на убой.

Маточное поголовье, производителей и ремонтный молодняк, которых необходимо сохранить для воспроизводства, после вакцинации обрабатывают лептоспироцидными препаратами и переводят в продезинфицированное помещение.

Эффективность обработки проверяют через 10-15 дней путем микроскопии мочи.

4.14. Молодняк, полученный после проведения мероприятий, выращивают отдельно, вакцинируют в сроки, предусмотренные наставлением по применению вакцины против лептоспироза и, после снятия ограничений, реализуют на общих основаниях.

4.15. Вывод животных для откорма разрешается в пределах области (края, республики) через месяц после последнего случая выздоровления больного животного, проведения вакцинации и заключительных ветеринарно — санитарных мероприятий.

4.16. У производителей (быки, хряки, жеребцы, бараны), инфицированных лептоспирами (положительная РМА, лептоспиры в моче), прекращают получать сперму и, исходя из хозяйственной целесообразности, направляют их на убой или обрабатывают стрептомицином и проводят дезинфекцию помещения. Все поголовье вакцинируют против лептоспироза. Через 10-15 дней эффективность лечения контролируют путем микроскопии мочи. При обнаружении лептоспир в моче повторяют курс лечения и проверку его эффективности. От быков, признанных здоровыми, продолжают брать сперму. Сперму, полученную от быков — лептоспироносителей, уничтожают.

4.17. Повторное исследование сыворотки крови в РМА и микроскопию мочи всех производителей на ранее неблагополучном по лептоспирозу предприятии (станции) проводят через 3 месяца и при получении отрицательных результатов далее каждые 6 месяцев.

Производителей на предприятиях (станциях, пунктах) искусственного осеменения, расположенных в неблагополучной или угрожаемой по лептоспирозу зоне, вакцинируют против лептоспироза.

4.18. В питомниках служебного собаководства изолируют клинически больных и подозрительных по заболеванию собак, лечат их гипериммунной сывороткой и стрептомицином.

Клинически здоровых собак всех возрастных групп вакцинируют против лептоспироза.

Продажа собак из неблагополучного по лептоспирозу питомника запрещается.

Владельцы собак обязаны обеспечить проведение вакцинации против лептоспироза.

4.19. Ограничения в неблагополучных по лептоспирозу хозяйствах снимают в следующем порядке:

— в откормочных хозяйствах — после сдачи поголовья на убой и проведения заключительных ветеринарно — санитарных мероприятий; — в племенных и пользовательных хозяйствах — после установления их благополучия по лептоспирозу лабораторными методами исследований. Для этой цели через 1-2 месяца после проведения мероприятий исследуют в РМА не менее 50 проб сыворотки крови молодняка, предназначенного для продажи (не должно быть положительных реакций), и не менее 100 проб мочи от каждой 1000 взрослых животных или группы ремонта, среди которых не должно быть лептоспироносителей; РМА у взрослых животных может оставаться положительной; — повторное исследование на лептоспироз в ранее неблагополучных хозяйствах проводят через 6 месяцев после снятия ограничений; — хозяйство считают оздоровленным при получении отрицательных результатов исследований у всех обследованных животных.

4.20. Порядок ветеринарной обработки племенных и пользовательных животных, выводимых из хозяйств.

4.21. Вывод животных для племенных или пользовательных целей разрешается только из благополучных по лептоспирозу хозяйств (ферм, отделений).

4.22. Предназначенных к продаже животных содержат в карантине и исследуют сыворотку крови в РМА на лептоспироз, у свиней, кроме того, мочу на наличие лептоспир.

4.23. Вывод животных разрешается без ограничений при отрицательных результатах исследований по всей группе.

При выявлении у отдельных животных антител в крови или лептоспир в моче всю группу оставляют в хозяйстве и проводят дополнительные исследования для решения вопроса о его благополучии по лептоспирозу.

4.24. Вывод животных из хозяйств, в которых есть единичные (до 10%) животные с положительной РМА при отсутствии лептоспир в моче, разрешается внутри области (края, республики) по согласованию с ветотделом в хозяйства с аналогичной ситуацией по лептоспирозу после вакцинации и трехкратной обработки стрептомицином.

4.25. Специфическая иммунопрофилактика и антибиотикотерапия.

4.26. Вакцинируют против лептоспироза всех восприимчивых животных в следующих случаях:

— в неблагополучных по лептоспирозу хозяйствах; — в откормочных хозяйствах, где поголовье комплектуют без обследования на лептоспироз; — при выпасании животных в зоне природного очага лептоспироза; — при выявлении в хозяйстве животных, сыворотка крови которых реагирует в РМА; — в районах с отгонным животноводством.

В хозяйствах, неблагополучных по лептоспирозу и парвовирусной инфекции свиней, применяют ассоциированную вакцину, содержащую инактивированные антигены лептоспир серогрупп Pomona, Tarassovi и парвовирус.

Крупный рогатый скот по эпизоотическим показаниям вакцинируют ассоциированными вакцинами против лептоспироза и эмфизематозного карбункула, против лептоспироза и кампилобактериоза.

Собак вакцинируют вакциной против лептоспироза собак или ассоциированной вакциной против чумы плотоядных, инфекционного гепатита, аденовироза, парвовирусного энтерита и лептоспироза собак (Гексаканивак).

5.1. Организационно — методическое руководство работой по профилактике лептоспироза среди людей осуществляют отделы особоопасных инфекций республиканских, краевых и областных центров Госсанэпиднадзора.

5.2. О каждом больном и подозрительном по заболеванию лептоспирозом медицинским работником направляется в санитарно — эпидемиологическую станцию экстренное извещение (учетная форма N 058).

Заболевания лептоспирозом учитываются в журнале регистрации инфекционных заболеваний (учетная форма N 060).

Следует обязательно определять, к какой серогруппе относится возбудитель выявленного лептоспирозного заболевания.

5.3. При выявлении групповых заболеваний с числом заболевших 10 и более областные, краевые, республиканские центры госсанэпиднадзора немедленно информируют Комитет Госсанэпиднадзора РФ. Подробное донесение представляется в Комитет Госсанэпиднадзора РФ не позднее 1 месяца по окончании вспышки.

5.4. Все больные с клиническим диагнозом или подозреваемые в заражении лептоспирозом в обязательном порядке должны быть обследованы лабораторными методами в соответствии с «Методическими рекомендациями по лабораторной диагностике лептоспироза» (МЗ РСФСР 07.12.87).

5.5. В случае появления больных лептоспирозом людей, а также больных животных и лептоспироносителей, врач — эпидемиолог совместно с ветеринарными специалистами проводит эпидемиологическое обследование.

5.6. Если предполагается, что источником заражения людей послужили сельскохозяйственные, промысловые и другие животные, Центр госсанэпиднадзора сообщает об этом ветеринарной службе, которая выясняет эпизоотическую ситуацию и по предложению главного санитарного врача города (района) проводит лабораторное обследование животных независимо от того, регистрировались ли ранее среди них какие-либо заболевания.

Если источником заражения людей явились сельскохозяйственные животные или собаки индивидуальных владельцев, по предложению Главного государственного врача лабораторно обследуются подозреваемые животные.

В случае, если предполагается, что инфицирование произошло от грызунов, то организуется их отлов и лабораторные обследования в подозреваемых хозяйствах, угодьях, населенных пунктах и выясняются возможные связи антропургического очага с природным.

На основании данных эпидемиологического обследования заполняется «Карта эпизоотолого — эпидемиологического обследования очага зоонозного заболевания» (ф. N 391/У).

5.7. При заболевании лептоспирозом связь заболевания с профессиональной деятельностью больного устанавливает врач — эпидемиолог территориального центра госсанэпиднадзора, проводящий эпидобследование в очаге заражения.

Основным документом, подтверждающим профессиональный характер заражения лептоспирозом, служит карта эпидемиологического обследования (ф. N 391/У с заполненным вкладным листом).

Мероприятия по профилактике и борьбе с лептоспирозом проводятся дифференцированно в очагах разных типов.

5.8. В очагах лептоспироза проводятся мероприятия в соответствии с инструктивно — методическими документами Госкомсанэпиднадзора РФ и Минсельхозпрода РФ.

5.9. При возникновении групповых заболеваний людей, в случае, если подозревается загрязнение водоема сельскохозяйственными животными, немедленно запрещается купание и использование воды для питья и хозяйственных нужд из этого водоема. Использование воды в последующем разрешается спустя 4 недели с момента устранения причин заражения водоемов. Подозрительная на заражение лептоспирами вода употребляется только после обеззараживания.

5.10. В очагах лептоспироза руководители хозяйств обязаны:

— обеспечить всех работников животноводства спецодеждой и спецобувью, включая резиновые сапоги, халаты, прорезиненный фартук, нарукавники, перчатки, косынку; — обеспечить инструктаж обслуживающего персонала о мерах личной гигиены и промсанитарии при лептоспирозе; — иметь в каждом животноводческом помещении (скотном дворе, свинарнике и т.д.) умывальник, мыло, полотенце, аптечку первой помощи, емкости с дезраствором, а также помещение, оборудованное для хранения спецодежды и обуви; — иметь в хозяйстве санитарный журнал для записи указаний и предложений специалистов ветеринарно — санитарного надзора и органов здравоохранения, обеспечить выполнение сделанных указаний и предложений; — при выявлении заболевания лептоспирозом среди животных немедленно принять меры по предупреждению заражения людей, оказанию помощи по выявлению источников возбудителя инфекции.

5.11. Запрещается прием пищи, воды, курение во время работы. Для приема пищи отводится специальное помещение, где должны быть умывальник, 2%-ный раствор хлорамина и закрытые бачки с питьевой водой.

5.12. Обезвреживание сточных вод, текущую и заключительную дезинфекцию помещений, загонов, выгульных площадок, оборудования, инвентаря и других объектов проводят с использованием любых веществ, предназначенных для дезинфекции животноводческих помещений и объектов внешней среды, инфицированных патогенными неспоровыми микробами.

5.13. Если не установлено возможное место заражения заболевшего лептоспирозом, то при наличии грызунов по месту его жительства проводится дератизация и дезинфекция, как при кишечных инфекциях. Если известно, что заражение произошло вне дома, эти мероприятия проводятся не в домашнем очаге, а по месту заражения в зависимости от выявленного источника.

5.14. Для предупреждения распространения иктерогеморрагического лептоспироза, в наиболее заселенных крысами объектах проводятся дератизационные мероприятия. Они проводятся в жилых застройках, на животноводческих фермах, продовольственных складах, зверофермах, предприятиях по переработке животноводческого сырья и продуктов, в шахтах и канализационных сооружениях, а также в открытых стациях городов (свалки, пустыри, парковая зона) и сельской местности, местах массового отдыха, охоты и рыбной ловли (см. «Методические указания по борьбе с серой крысой в природных очагах иктерогеморрагического лептоспироза.» МЗ СССР. 1984).

5.15. Санитарные органы осуществляют контроль за проведением профилактических мероприятий по ограничению численности серой крысы: очисткой территории населенных пунктов от мусора, соблюдением санитарно — технических нормативов, относящихся к грызунонепроницаемости каптажей, колодцев и других водосборных сооружений, тары для хранения фуража и продуктов и т.д.

5.16. Все больные с явным заболеванием или подозрительные по заболеванию лептоспирозом в обязательном порядке подлежат немедленной госпитализации. Разобщение общавшихся с заболевшими не проводится. Карантин не устанавливается.

5.17. Лица, переболевшие лептоспирозом, подлежат диспансерному наблюдению в течение шести месяцев с обязательным клиническим обследованием окулистом, невропатологом и терапевтом (детей — педиатром) в первый месяц после перенесенного заболевания. В последующие месяцы диспансерные наблюдения осуществляются ежемесячно участковыми врачами с привлечением специалистов по профилю клинических проявлений.

Снятие с учета по истечении срока диспансерного наблюдения проводится при полном клиническом выздоровлении (нормализации лабораторных и клинических показателей). В противном случае сроки наблюдения удлиняются до полного выздоровления.

5.18. Профилактическая вакцинация против лептоспироза проводится населению по эпидемическим показаниям, определяемым местными органами здравоохранения в зависимости от эпидемической и эпизоотической ситуации.

5.19. В очагах лептоспироза иммунизируются лица повышенного риска инфицирования. Контингенты риска и время иммунизации определяются территориальными ЦГСН.

5.20. Плановой иммунизации подлежат сотрудники лабораторий, работающие с патогенными лептоспирами (в любое время года), а также лица, направляемые на строительные и сельскохозяйственные работы в места активно действующих природных и антропургических очагов лептоспироза (не позднее, чем за месяц до начала работы в них).

5.21. В целях экстренной антибиотикопрофилактики лептоспироза лицам, подвергшимся риску заражения, назначается доксициклин (вибрамицин) по следующей схеме: 1 капсула (0,1 г) один раз в день в течение 5 дней. Решение о проведении экстренной химиопрофилактики принимается территориальными ЦГСН.

5.22. В очагах лептоспироза медицинские и ветеринарные работники, руководители хозяйств проводят санитарно — просветительную работу среди населения о мерах профилактики данной инфекции.

источник

Диагноз на лептоспироз ставят путем проведения микроскопических, бактериологических, серологических и гистологических исследований с учетом эпизоотологических, эпидемиологических, клинических и патологоанатомических данных.

Материалом для прижизненной диагностики является кровь и моча, для посмертной — трупы мелких животных, от крупных животных ветспециалист отбирает в ветлабораторию следующий патматериал: сердце, кусочки паренхиматозных органов , почку, транссудат грудной и брюшной полостей, перикардиальную жидкость, мочевой пузырь с содержимым. Абортированный плод доставляют в лабораторию целиком или берут желудок с содержимым и паренхиматозные органы. В летнее время патологический материал должен быть взят и исследован в течение 6 часов, зимой при условии хранения его в охлажденном состоянии — в течение 10-12 часов. При обнаружении больных или подозрительных по заболеванию животных берут не менее 50 проб крови от животных каждого скотного двора, свинарника, гурта; спустя 7-10 дней у тех же животных ветспециалист берет кровь повторно. В хозяйстве рекомендуется провести микроскопию мочи не менее чем от 100 животных.

Бактериологическая диагностика состоит в обнаружении в исследуемом материале или в органах лабораторных животных, зараженных этим материалом, лептоспир путем микроскопии, а также в выделении и идентификации чистых культур.

Серологическая диагностика основана на обнаружении специфических антител в крови животных реакцией микроагглютинации (РМА) или реакцией макроагглютинации.

Диагноз на лептоспироз считается установленным и хозяйство признается неблагополучным по лептоспирозу, если при лабораторном исследовании материала обнаруживаются лептоспиры: при микроскопии; при выделении культур; выявлении возбудителя в гистологических срезах почек или печени; установлении нарастания титра антител при повторном исследовании в 5 раз и более или при обнаружении антител у ранее не реагировавших животных, если специфические антитела обнаружены в сыворотке крови при однократном исследовании по РМА в титре 1:100 и выше более чем у 25% обследованных животных или по РА 1-4креста более чем у 20% животных.

Дифференциальный диагноз. При установлении причины падежа животного специалистам необходимо учитывать, что животные –лептоспироносители, а также животные, имеющие в крови антитела к лептоспирозу, могут погибать от других инфекционных и незаразных болезней. При заболевании крупного и мелкого рогатого скота необходимо исключить гемоспоридиозные заболевания, злокачественную катаральную горячку, бруцеллез, кампилобактериоз (вибриоз), трихомоноз, листериоз, сальмонеллез, вирусные пневмоэнтериты, кормовые отравления. У свиней необходима исключить бруцеллез, сальмонеллез, чуму, рожу, дизентерию, микотоксикозы. У лошадей — инфекционную анемию, инфекционный энцефаломиелит. У собак и пушных зверей — чуму, инфекционный гепатит, сальмонеллез и вирусный энтерит.

Лечение. Заболевших лептоспирозом животных изолируют и подвергают лечению. Лечение может быть специфическим и симптоматическим. Из специфических средств хороший лечебный эффект оказывает поливалентная гипериммунная противолептоспирозная сыворотка, особенно если ее применить в самом начале болезни. Сыворотку вводят подкожно в разовых дозах: крупному рогатому скоту 50-120 мл; телятам 20-40 мл; свиньям, овцам, лисицам 5-30 мл. При тяжелом течении болезни введение сыворотки через 1-2 дня повторяют. Внутривенно сыворотка вводится в половинных дозах. Эффективно также применение антибиотиков: стрептомицин (по 10-12 тыс. ЕД на 1кг массы животного 2 раза в день 4-5дней подряд), дитетрациклин (свиньям по 30 тыс.ЕД на 1кг массы животного 2-3 раза с интервалом 2-3дня). Для симптоматического лечения используют глюкозу. При лептоспирозе в организме животных наблюдается гипогликемия. Использование глюкозы компенсирует недостачу сахара, пополняет энергетические ресурсы организма, 40% раствор глюкозы вводят внутривенно : крупному рогатому скоту и лошадям 500 мл; молодняку 50-200 мл; лисицам, песцам и собакам 5-10мл. Для устранения атонии желудочно-кишечного тракта используют слабительные (внутрь — глауберовую соль 25-500г). Для дезинфекции мочевых путей внутрь применяют уротропин с водой: крупным животным 5-10г, телятам 1-2г. Для поддержания сердечной деятельности подкожно инъекция кофеина: крупным животным 2-3г; мелкому рогатому скоту и свиньям 0,5-2г. При поражении ротовой полости ее промывают растворами марганцовокислого калия (1:1000). Некротические очаги кожи смазывают ихтиоловой мазью, борным вазелином и т.д. Больным животным создают наилучшие условия кормления и содержания. В рацион вводят рыбий жир, рыбную муку, микроэлементы, витамины. Телят и поросят облучают кварцевой лампой.

Больных животных необходимо предохранять от действия солнечных лучей, необходимо их чаще поить.

Иммунитет и иммунизация. Чрезвычайно широкое распространение лептоспир в природе дают частые возможности контакта всех видов животных с этими микроорганизмами. В то же время при вспышках лептоспироза в сельскохозяйственных предприятиях большинство животных не заболевает. Чаще болеют молодые животные, а это говорит о том, что естественная иммунизация животных против лептоспироза (иммунизирующая субинфекция) является бесспорным фактором.

В создании невосприимчивости к лептоспирозу в организме животного большую роль играют гуморальные и клеточные факторы. При попадании лептоспир в организм их обнаруживают в макрофагах различных органов, купферовских клетках печени; доказано, что фагоцитарная активность клеток крови (нейтрофилов) через несколько дней после заражения увеличивается в 4-6раз. То есть можно сказать, что в начальном периоде после заражения защитные функции выполняют клеточные факторы иммунитета, которые приобретают специфичность под влиянием появляющихся несколько позднее антител, агглютининов, лизинов, комплемент связывающих антител, преципитинов. Преципитины делают фагоцитоз не только завершенным, но и разрушают паразитов (лизис). Конечно, эффективность механизмов иммунитета зависит от состояния нервной системы организма, и в первую очередь от ее чувствительности, способной своевременно пускать в ход защитные механизмы.

Изучая иммуногенез, ученые заметили, что переболевшие лептоспирозом животные приобретают иммунитет к повторному заражению гомологичным серотипом, а кровь реконвалисцентов обладает лечебными и профилактическими свойствами. Эти факторы были учтены учеными при изыскании вакцин и сыворотки против лептоспироза.

Первая вакцина против лептоспироза в СССР была предложена С.Я. Любашенко в 1940г., а начиная с 1946 по 1958г., лептоспирозную вакцину готовили из трех серотипов (гриппотифоза, помона, иктерогеморрагия). В дальнейшем в соавторстве с А.Г. Малявиным для приготовления вакцины стали использовать еще два серотипа (каникола и тарасови).

Сейчас для активной иммунизации животных используют поливалентную депонированную вакцину ВГНКИ, выпускаемую в двух вариантах (различное сочетание серогрупп лептоспир).

Противолептоспирозные вакцины применяют как для профилактики, так и при проведении вынужденной вакцинации животным в возрасте от 1месяца и старше в неблагополучных, откормочных и угрожаемых по лептоспирозу хозяйствах, при выпасе животных в зоне природного очага болезни, при выявлении в хозяйстве животных, сыворотка крови которых реагирует на лептоспироз по РМА или РА, и в районах с отгонным животноводством. Специалисты при проведении вакцинации должны учитывать то, что крупный рогатый скот, буйволов, коз, свиней и лошадей нельзя вакцинировать в последнею неделю беременности и в первую неделю после родов, а собак, лисиц и песцов — во вторую половину беременности. Иммунитет у привитых животных наступает через 14 дней и продолжается до года. Сыворотку крови от вакцинированных животных не исследуют на лептоспироз в течение 2-3 месяцев после вакцинации.

Для пассивной иммунизации применяют поливалентную сыворотку против лептоспироза сельскохозяйственных и промысловых животных. Владельцам животных необходимо помнить, что сыворотка, как и вакцина, не освобождает организм животных от лептоспироносительства; и не может профилактировать наступление абортов у зараженных животных.

Меры борьбы. Борьба с лептоспирозом проводится согласно ветеринарных правил ВП 13.3. 1310-96 утвержденных Начальником Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации — Главным государственным ветеринарным инспектором Российской Федерации В. М. Авиловым 18июня 1996г. и Санитарных правил СП 3.1. 091-96, утвержденных первым заместителем председателя Госкомсанэпиднадзора России — заместителя Главного государственного санитарного врача Российской Федерации. С.В. Семеновым 31 мая 1996г.

При установлении диагноза лептоспироз Постановлением Губернатора области выносится решение об объявлении хозяйства (отдельной его части), населенного пункта неблагополучным по лептоспирозу, вводятся ограничения и утверждается план оздоровления хозяйства.

В плане оздоровительных мероприятий предусматриваются необходимые диагностические исследования животных, ограничительные, ветеринарные, санитарные, организационно-хозяйственные мероприятия с указанием сроков проведения и ответственных лиц.

По условиям ограничений запрещается:

• выводить (ввозить) животных для целей воспроизводства, продавать животных населению;
• перегруппировывать животных без ведома ветеринарного специалиста, обслуживающего хозяйство;
• допускать животных к воде открытых водоемов и использовать ее для поения и купания животных;
• выпасать невакцинированных животных на пастбищах, где выпасались больные лептоспирозом животные, или на территории природного очага лептоспироза;
• скармливать невакцинированным животным корма, в которых обнаружены инфицированные лептоспирами грызуны.

Молоко, полученное от больных лептоспирозом животных, нагревают до кипения и используют в корм. Молоко клинически здоровых коров, сыворотка крови которых дает положительную РМА без нарастания титра, используют без ограничений.

В неблагополучном по лептоспирозу хозяйстве (ферме, отделении, стаде, свинарнике, и т.д.) проводят клинический осмотр и измерение температуры тела у подозрительных по заболеванию животных.

Больных и подозрительных по заболеванию животных изолируют, лечат гипериммунной сывороткой и антибиотиками в дозах, указанных в наставлениях по их применению.

Убой таких животных проводят на санитарной бойне, а при ее отсутствии-в убойном цехе мясокомбината в конце смены, после удаления продуктов убоя здоровых животных, с соблюдением мер личной профилактики. Помещение и оборудование после убоя таких животных дезинфицируют. Продукты убоя используют в соответствии с «Правилами ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов».

Клинически здоровых животных всех видов и возрастных групп, восприимчивых к лептоспирозу, вакцинируют. Животных, подвергнутых лечению, вакцинируют через 5-7дней после выздоровления.

Всех животных откормочных хозяйств, неблагополучных по лептоспирозу, и малоценных животных в племенных и пользовательных хозяйствах откармливают и сдают на убой.

Маточное поголовье, производителей и ремонтный молодняк, которые необходимо сохранить для воспроизводства, после вакцинации обрабатывают лептоспироцидными препаратами и переводят в продезинфицированное помещение.

Эффективность обработки проверяют через 10-15дней путем микроскопии мочи.

Молодняк, полученный после проведения мероприятий, выращивают отдельно, вакцинируют в сроки, предусмотренные наставлением по применению вакцины против лептоспироза и, после снятия ограничений, реализуют на общих основаниях.

Вывод животных для откорма разрешается в пределах области (края, республики) через месяц после последнего случая выздоровления животного, проведения вакцинации и заключительных ветеринарно-санитарных мероприятий.

У производителей (быки, хряки, жеребцы, бараны) инфицированных лептоспирами ( положительная реакция РМА, лептоспиры в моче), прекращают получать сперму и, исходя из хозяйственной целесообразности, направляют их на убой или обрабатывают стрептомицином и проводят дезинфекцию помещения. Все поголовье вакцинируют против лептоспироза. Через 10-15 дней эффективность лечения контролируют путем микроскопии мочи. При обнаружении лептоспир в моче повторяют курс лечения и проверку его эффективности. От быков, признанных здоровыми, продолжают брать сперму. Сперму, полученную от быков — лептоспироносителей, уничтожают.

Повторное исследование сыворотки крови в РМА и микроскопию мочи всех производителей на ранее неблагополучном по лептоспирозу предприятии (станции) проводят через 3 месяца и при получении отрицательных результатов далее каждые 6месяцев.

Производителей на предприятиях (станциях, пунктах) искусственного осеменения, расположенных в неблагополучной или угрожаемой по лептоспирозу зоне, вакцинируют против лептоспироза.

Ограничения в неблагополучных по лептоспирозу хозяйствах снимают в следующем порядке:

• в откормочных хозяйствах-после сдачи поголовья на убой и проведения заключительных ветеринарно-санитарных мероприятий;
• в племенных и пользовательных хозяйствах — после установления их благополучия по лептоспирозу лабораторными методами исследований. Для этой цели через 1-2 месяца после проведения мероприятий исследуют в РМА не менее 50 проб сыворотки крови молодняка, предназначенного для продажи (не должно быть положительных реакций), и не менее 100 проб мочи от каждой 1000 взрослых животных или группы ремонта, среди которых не должно быть лептоспироносителей; РМА у взрослых животных может оставаться положительной;
• повторные исследования на лептоспироз в ранее неблагополучных хозяйствах проводят через 6 месяцев после снятия ограничений;
• хозяйство считается оздоровленным при получении отрицательных результатов исследований у всех обследованных животных.

В целях недопущения заболевания животных лептоспирозом собственники и владельцы скота, ветеринарные специалисты обязаны выполнять следующее:

• осуществлять контроль за клиническим состоянием животных, учитывать количество абортов и при подозрении на лептоспироз отбирать патматериал для лабораторных исследований;
• комплектование племенных хозяйств (ферм), предприятий, станций искусственного осеменения из благополучных по лептоспирозу хозяйств;
• исследовать всех поступающих в хозяйство животных в период 30-дневного карантина на лептоспироз в РМА в разведении 1:25;
• разрешается комплектовать откормочные хозяйства (отделения, фермы) клинически здоровыми животными без обследования на лептоспироз, но с обязательной вакцинацией их против лептоспироза в период карантинирования;
• не допускать контакта животных со скотом неблаголучных по лептоспирозу хозяйств (ферм), населенных пунктов на пастбищах, в местах водопоя и т.д.;
• не выпасать невакцинированных животных на территории природных очагов лептоспироза;
• не устраивать летних лагерей для животных на берегах открытых водоемов;
• систематически уничтожать грызунов в животноводческих помещениях, на территории ферм, местах хранения кормов и т.п.

источник

Лептопсироз у лошадей достаточно часто встречается, его причиной является L. Rotopa. Благодаря дополнительным научным исследования обнаружена связь данного заболевания между больными лошадьми и свиньями. Лептопсироз не является контагиозной проблемой и этим отличается от заразной инфлюэнцыи.

Лептоспироз у лошадей длится 3-4 недели, зато выздоровление тянется долго. Также возможно проявление осложнений на глаза, нервную систему, сердце. Лептоспироз лошадей или болезнь Вейля-Васильева, всем давно известна под названием желтуха. Вот только до сих пор неизведанным остается истинный возбудитель также как и его связь с животными.

Тяжелая форма болезни сопровождается острым и быстрым поднятием температуры тела, иногда до 42°C, опухлостью век, резким проявлением желтухи, конъюнктивитом, одно- и даже двусторонним иридоциклитом, коликами у лошади, отеками ног.

В болеющих животных проявляются симптомы желтушности

Очень часто лептоспироз у лошадей расширяется на оболочки мозга и почки, благодаря чему диагностику сделать намного проще. Также с самого начала болезни видоизменяется формула крови: количество кровяных телец резко снижается в два раза, проявляется анемия, а белых, наоборот возрастает – свидетельствует о началах лейкоцитоза. Их количество может достигнуть до 30000 в мм3. Скорость опускания эритроцитов приблизительно составляет 50 мм/час.

Диагноз определяется в результате клинических, патологоанатомических и эпизоотологических параметров, а также подтверждается лабораторными анализами.

В случае клинического диагноза болезнь может вначале иметь скрытый характер, и такое состояние может продолжаться до 20 дней. Заболевание будет проходить остро и бессимптомно, иногда с хроническим выявлением. У жвачных животных при остром протекании болезни где-то на 6 день поднимется температура тела до41°C. Животное будет вести себя подавлено и не будет кушать, пропадает жвачка. С первых дней развивается понос, который вскоре меняется на запор. Во время поднятия температуры у многих животных может проявляться желтуха всевозможных слизистых, а моча имеет бурый цвет. Несколькими днями позже начинается некроз головы лошади, особенно он, проявляется возле носа или на губах, внешних органах половой системы, а также на слизистых оболочках рта. Коровы могут абортировать.

1. В процессе острого протекания болезнь будет развиваться на протяжении 5 – 10 дней, статистика летальных исходов колеблется в пределах 50 – 70%.
2. Подострое протекание болезни имеет такие особенности как острое, но при этом симптомы будут менее выражены и медленнее распространятся. Болезнь развивается на протяжении от 10 до 20 дней, а летальность при таком развитии – 20 – 45%.
3. Хроническая форма заболевания отмечается лихорадкой, которая повторяется с периодичностью в месяц – полтора, и большим исхуданием. В болеющих животных проявляются симптомы гемоглобинурии, желтушности и атония ЖКТ. Беременные – абортируют. Главным образом больные животные помирают от истощения. Больные лошади ведут себя также, только при остром развитии болезни болезнь длится 5 – 18 дней, а летальность становит 40-60%.

Для лечения лептопсироза у лошадей применяют такие препараты как гипериммунную сыворотку и стрептомицин. Все дело в том, что сыворотка содержит в себе уникальные антитела к лептоспирам шести серогрупп. С помощью такой сыворотки при остром протекании лептоспироза животное выздоравливает, но даже после этого является носителем лептоспир. Использование сыворотки не оказывает профилактическое действие на аборты. Её могут использовать в качеств диагностического средства, ведь если после применения сыворотки не наблюдается улучшение больного животного, то это свидетельствует об отсутствии лептоспирозной болезни.

Сыворотка против лептоспироза подходит всем сельскохозяйственным животным

Поливалентная сыворотка, препарат против лептоспироза подходит всем сельскохозяйственным животным. Она вводится подкожно, количество вводимого лекарства зависит от возраста и вида животного. Принято додерживаться следующей градации для крупного рогатого скота:

• 1-3 месяца – 10 мл;
• 3-6 месяца – 15 мл;
• 6-12 месяца – 20 мл;
• более 1 года – 40-60 мл.

Лечебная дозировка препарата от лептопсироза рассчитывается с умножением вдвое. Иммунитет в организме достигается спустя 3 часа и действует на протяжении 20 дней. На второй день после введения сыворотку животному вводят еще раз.

На хозяйства, где обнаруживается липтоспироз вводятся определенные ограниченеия

Стрептомицин применяют для больных с клиническим лептоспирозом, а также для лечения носителей. Принимать его нужно каждые 12 часов на протяжении минимум 4 дней в количестве 12 тыс. ЕД на 1 килограмм массы. Помимо этого стрептомицин вводят только животным носителям вируса не позже чем через 10 дней после принятия второй вакцины.

Для того чтобы вовремя выявить лептоспироз у лошади проводят серологическую проверку животных по РМА либо РА в таких случаях:

• в хозяйствах, где водятся чистопородные животные, проверку проводят всех производителей и как минимум 10% по РМА или 15%по РА большой рогатой худобы, свиноматок, нетелей;
• на племенных предприятиях, где проводят искусственное осеменение всех производителей в количестве 2 раза в год;
• перед выводом либо вводом животных для племенных намерений. В общинах до 25 голов исследованиям поддаются все животные, если группы содержат до 100 голов – исследуются не менее 25 животных, в огромных группах – не менее как 25% по РМА либо 35%по РА;
• в любых случаях при опасении на лептоспироз. В таком случае проходят исследование все животные.
  Вакцину вводят всем животным в таких случаях:
• если в хозяйстве уже были случаи болезни на лептоспироз;
• в хозяйствах, где животных выращивают на откорм и при этом количество поголовья комплектуют без какого-либо обследования на лептоспироз;
• если выявляются животные, у которых сыворотка крови реагирует на лептоспироз по РМА или РА.

На фермы, где ранее был диагностирован лептоспироз, вводят определённые ограничения и заявляют об их неблагополучии. Молоко нездоровых животных кипятят и дают на скорм. Молоко от здоровых животных применяют в любых целях, без каких либо ограничений.
Животных, которых считают подозрительными, отправляют на клинический осмотр, и измеряют температуру тела. Больных и подозреваемых в болезни животных отделяют от общего количества и лечат, а здоровых обязательно вакцинируют.

В хозяйствах, сформированных для откармливания, больных животных сначала лечат, после чего прививают и переселяют к общему количеству, выкармливают и сдают на убой.

Молодое потомство, что родились в хозяйстве до противолептоспирозных процедур либо в течение 30 дней после них относят к числу подозреваемых в инфицировании, поэтому их прививают и для племенных намерений их не используют.

С помощью сыворотки животное выздоравливает, но является носителем лептоспор

Вывод животных с целью откорма (на территории области) может разрешаться, в случае выздоровления последнего больного животного. А вывод для племенных нужд – только после снятий ограничений. Следует заметить, что такой процесс проводят только если спустя два месяца после проведения данных мероприятии путем лабораторных анализов будет обретен отрицательный результат в каждых ста пробах изъятых от тысячи животных.

При этом повторное проведение исследований животных из неблагополучных ферм проводят спустя полгода со дня снятия ограничений.
Дезинфекцию принято проводить после каждого больного животного и на протяжении всего времени до снятия ограничения через каждые 10 дней. Причем перед самим снятием проводят очистку механическую и генеральную дезинфекцию. Люди, что обслуживали больных животных по лептоспирозу, должны быть в обязательном порядке иметь прививку от данной болезни.

Люди попросту могут заразиться данной «чумой» через зараженную воду, например, во время купания, где присутствует непроточная вода и имеется лептоспироз, или же при использовании такой воды для умывания, пития, стирки. Также довольно таки часто население села заболевает после время обработки полей (сенокос или непосредственный контакт с почвой).

Встречаются также такие болезни и среди других слоев населения: шахтеров, охотников, ветврачей, дератизаторов, рабочих забойных пунктов и прочее.

Пути распространения липтоспироза

Все дело в том, что лептоспиры могут проникнуть в человеческий организм по- разному:

• через малейшие поверхностные кожные повреждения;
• слизистую оболочку ЖКТ;
• через органы половой либо дыхательной систем.

Заболевания регистрируют больше всего в летние месяца. Клинический лептоспироз проявляется у человека всегда очень внезапно: начинается лихорадка до 40°C, гиперемией лица, ригидностью затылочных мышц, ознобом. Спустя несколько дней на теле появляется сыпь, человек жалуется на очень сильные боли в бёдренных и икроножных мышцах. Дополнительно распространяется общая усталость, желтизна, головная боль, тошнота и рвота.

источник

Цель занятия. Ознакомить студентов с методами лабораторной диагностики лептоспироза, кампилобактериоза и дизентерии свиней, биологическими свойствами возбудителей, биопрепара­тами.

Оборудование и материалы. Пробирки с культурой лептоспир, предметные и покровные стекла, стерильные пастеровские пи­петки, мерные пипетки на 1. 2мл, резиновые груши, спирт, микроскопы с темнопольными конденсорами, осветители ОИ-19, пробирки со стерильной дистиллированной водой и физиологи­ческим раствором, пластины из плексигласа с лунками или чис­тые пробирки в штативах, лептоспирозные агглютинирующие сыворотки, антигены для диагностики лептоспироза в РМА, для демонстрации — пробирки с культурой лептоспир (L.bijlexa), таблицы, мазки для люминесцентной микроскопии, МЛ-2, нефлуоресцирующее масло, культуры кампилобактерий в полужид­кой среде, среде Китта—Тароцци и на плотной среде, неокра­шенные мазки с кампилобактериями, таблицы, биопрепараты.

Лептоспироз. Инфекционное природно-очаговое заболевание животных — свиней, крупного рогатого скота, лошадей, овец, коз, оленей, собак, верблюдов, пушных зверей, грызунов, сумчатых и др. Болеет и человек. Птицы к лептоспирозу невосприим­чивы.

У животных болезнь протекает, как правило, бессимптомно, типичные клинические проявления: кратковременная лихорадка, желтуха, геморрагия, гемоглобинурия, аборты.

Возбудитель лептоспироза отнесен к роду Leptospira, который включает в себя два вида: L. interrogans— патогенные лептоспиры и L. biflexa — лептоспиры, обитающие во влажной почве и пре­сных поверхностных водах. Вид патогенных лептоспир представ­лен 183 сероварами, которые по степени антигенного родства объединены в 25 серологических групп. Основными возбудителя­ми лептоспироза у сельскохозяйственных животных считают лептоспиры серогрупп Canicola, Grippotyphosa, Hebdomadis, Pomona, Tarassowi, Icterohaemorrhagiae.

Лабораторная диагностика лептоспироза основана на резуль­татах бактериологического и серологических исследований.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой и люминесцентной микроскопии, выделение чи­стой культуры посевом на питательные среды и методом биопробы и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим серологическим и патогенным свойствам. Материал для исследования. Кровь берут в период лихорадки на 1. 7-е сутки болезни; мочу собирают при естественном мо­чеиспускании в стерильные пробирки. У коров и свиноматок допустимо брать мочу катетером. Абортированный плод дос­тавляют в лабораторию целиком или берут от него желудок с содержимым, сердце, мочевой пузырь, паренхиматозные орга­ны. От трупов крупных животных направляют на исследование сердце, кусочки паренхиматозных органов, почку целиком, транссудат из грудной и брюшной полостей, перикардиальную жидкость, мочевой пузырь с содержимым, спинномозговую жидкость. Трупы мелких животных доставляют в лабораторию целиком.

Пробы материала должны быть исследованы в летнее время в течение 6ч с момента взятия и 10. 12ч при хранении материала в охлажденном состоянии; мочу исследуют при температуре 30. 40°С в течение 3 ч, при 25. 30 °С — 4. 5 ч, при 20. 25 °С-6. 8 ч, при 16. 20°С — в течение 10. 12 ч с момента взятия.

Для бактериологического исследования материал предвари­тельно следует подготовить: мочу центрифугируют (при 10 000. 15 000 мин -1 30 мин), исследуют осадок; из проб органов готовят суспензию в стерильном физиологическом растворе, ис­следуют в нативном состоянии или после центрифугирования.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Лептоспиры разных сероваров не различаются по морфологическим и культу-ральным признакам. Длина лептоспир колеблется от 3 до 30 мкм и более, в среднем 7. 15 мкм, ширина 0,06. 0,15 мкм. Лептоспи­ры — грамотрицательные бактерии. Поскольку они плохо вос­принимают окраску, их обычно исследуют в неокрашенном со­стоянии. Готовят препарат «раздавленная капля» и изучают мето­дом темнопольной микроскопии при увеличении 40 x 7. 10 или 20 х 1,5 х 10, а для более детального изучения — при увеличении 40×10. 15 или 40 x 1,5 x 10. В каждой капле просматривают не менее 50 полей зрения. Лептоспиры представляют собой спира­левидные тонкие серебристые нити, концы которых — один или оба — загнуты в виде крючков (рис. 109).

Лептоспиры подвижны. Формы движения: вращательное, прямолинейное, поступательное с одновременным вращением вокруг собственной оси и круговое.

Для люминесцентной микроскопии готовят мазки из того же материала и обрабатывают их флуоресцирующим глобулином для диагностики лептоспироза.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Лептоспиры — факультативные анаэробы, температурный оптимум 28. 30°С. Для получения культуры лептоспир исследуемый
материал высевают пастеровской пипеткой по три — пять капель в 5. 7 пробирок со специальной питательной жидкой или полужидкой средой. Посевы культивируют при 28. 30 °С в течение трех месяцев. Обыч­но рост лептоспир появляется в течение 7. 20 сут, иногда их обнаруживают на 3. 5-е сутки или через 1. 2мес и очень редко — через 2,5. З мес культивирова­ния.

Для выявления роста лептоспир через 3, 5, 7, 10 сут и далее каждые 5 сут культивирования из всех пробирок готовят препа­рат «раздавленная капля» для исследования методом темнопольной микроскопии.

Макроскопически рост лептоспир выражен слабо. При доста­точном накоплении лептоспир после встряхивания пробирки с культурой в среде в проходящем свете заметны муаровые волны, а в спокойном состоянии отмечают легкую опалесценцию. Нали­чие пленки, осадка, помутнения среды свидетельствуют о при­сутствии посторонней микрофлоры, а полная прозрачность сре­ды — об отсутствии роста лептоспир.

Для культивирования лептоспир используют следующие пита­тельные среды.

Среда Ферворта—Вольфа (в модификации С. И. Тарасова): к 900 мл дистиллированной воды добавляют 0,5 г хлорида натрия, 1 г пептона (Дифко), 100 мл маточного раствора фосфатного буфера рН 7,2. 7,4. Смесь автоклавируют в колбе при 120 ºС 30 мин. На следующий день дважды фильтруют через бумажный фильтр, разливают в пробирки по 5 мл и вновь автоклавируют при 120 °С 30 мин. В пробирки добавляют по 0,5 мл кроличьей сыворотки и прогревают среду на водяной бане при 56. 58 ºС 30 мин.

Среда Любашенко: нехлорированную водопроводную (или ко­лодезную, речную) воду, профильтрованную через бумажный фильтр, стерилизуют в автоклаве при 1 атм 30 мин, охлаждают, устанавливают рН 7,3. 7,4, добавляют 5 % кроличьей или барань­ей сыворотки, прогретой при 56 ºС в течение 1 ч. Затем среду пропускают через фильтрующие пластины СФ в фильтре Зейтца и асептически разливают в пробирки. Для контроля стерильнос­ти среды пробирки помещают в термостат при 37 °С на 48 ч.

Можно применять и другие питательные cpeды. На плотных средах (Кокса, ВГНКИ и др.) лептоспиры образуют мелкие коло­нии в виде прозрачных дисков диаметром до 1. 2см с хорошо очерченными или размытыми краями или в виде матовых точек диаметром 1. 2 мм.

Для серологической идентификации выделенную чистую культуру исследуют в РМА с групповыми агглютинирующими лептоспирозными сыворотками, предварительно разведенными стерильным физиологическим раствором в соотношении 1 : 50, 1 : 500, 1 : 1000, 1 : 2000, 1 : 4000, 1 : 8000, 1 : 16 000 и 1 : 32 000. Ре­акцию ставят в агглютинационных пластинах (или в пробирках), смешивая 0,1мл сыворотки каждого разведения с 0,1мл выде­ленной (типируемой) 5-, 7-, 10-суточной культуры лептоспир с накоплением 70. 100 подвижных микробных клеток. Разведения сыворотки последовательно удваиваются. Пластины (пробирки) выдерживают в термостате при 37 °С 1 ч, затем учитывают ре­зультаты — из каждой лунки (начиная с наибольшего разведе­ния) готовят препараты «раздавленная капля», которые исследу­ют методом темнопольной микроскопии. Реакцию оценивают в крестах: (++++) — 100%-я агглютинация: склеивание лептоспир с образованием скоплений в виде «паучков» (рис. 110), содержа­щих от нескольких клеток до нескольких десятков и даже сотен; свободные концы клеток сохраняют подвижность; (+++) — аг­глютинировано 75% лептоспир; (++) —50%; (+) — агглютини­ровано 25%; (-) —агглютинация отсутствует. РМА считают по­ложительной, если она выражена на четыре, три и два креста. Исследуемую культуру относят к той серологической группе лептоспир, с сывороткой которой она дает реакцию на два. четыре креста до 50. 100 % ее титра, указанного на этикетке.

Рис. 110. Реакция микроагглютинации: «паучки» из склеившихся лептоспир

Биопроба. Метод используют для выделения культуры возбу-дителя из исследуемого материала, так как посевом на питательные среды изолировать лептоспиры удается не всегда, а также для установления патогенных свойств чистых культур. Биопробу ставят на золотистых хомячках 20. 30-дневного возраста, кроль­чатах-сосунках в возрасте 10. 20 дней и 3. 5-недельных морских свинках. Исследуемый материал (кровь, моча, суспензия из паренхиматозных органов или аборти­рованного плода и др.) вводят подкожно или внутрибрюшинно хомякам от 0,3. 0,5 до 1 мл, крольчатам — 2. 3 мл. На каждую пробу материала берут по 2 животных, одного из которых убива­ют на 4. 5-й день в период подъема температуры, другого, если животное не погибает,— на 14. 16-й день после заражения. Кровь последнего исследуют в реакции микроагглютинации (РМА), начиная с разведения 1: 10, с лептоспирами 13 серологи­ческих групп.

Высевы из органов убитых и павших животных (сердца, пече­ни и почек) делают в 2. 3 пробирки из каждого органа. Транссу­дат из грудной и брюшной полостей, перикардиальную жид­кость, содержимое мочевого пузыря исследуют методом темнопольной микроскопии.

Вирулентность выделенной культуры определяют на золотис­тых хомячках или крольчатах, которых заражают внутрибрюшин­но 5. 7-дневной культурой, содержащей 70. 100 лептоспир в поле зрения микроскопа. Высоковирулентные культуры лептоспир вы­зывают гибель золотистых хомячков в дозе менее 0,1 мл, средней вирулентности — 0,2. 0,4 мл, слабовирулентные — 0,5. 1 мл.

Серологическая диагностика включает в себя постановку реакции микроагглютинации (в качестве антагена используют живые культуры лептоспир определенных серологи­ческих групп) и реакции макроагглютинации (применяют кон­центрированную взвесь лептоспир).

В реакции микроагглютинации сыворотки крови исследуют в разведениях 1:50, 1:250, 1:1250.

Учет реакции: каплю из каждой лунки исследуют методом темнопольной микроскопии при увеличении 20×10 или 20x7x1,5. Агглютинация проявляется в образовании «паучков», содержащих от 3. 5 до нескольких десятков лептоспир.

Специфические антитела в сыворотке крови животных в титре 1:50. 1:100 и выше свидетельствуют об инфицированности дан­ной особи лептоспирами и возможном лептоспироносительстве.

По результатам серологических исследований диагноз на лептоспироз считают установленным, а хозяйство неблагополучным по лептоспирозу, если специфические антитела обнаружены в сыворотке крови при однократном исследовании в РМА в титре 1:100 и выше более чем у 25 % обследованных животных, а также при нарастании титра антител в 5 раз и более при повторном ис­следовании через 7. 10 дней сыворотки крови в РМА или при обнаружении антител у ранее нереагировавших животных.

Сыворотки животных, дающие положительную реакцию мик­роагглютинации в равных титрах с лептоспирами нескольких се­рологических групп или дающие наиболее высокий титр с лептоспирами, ранее неизвестными в качестве возбудителя лепто­спироза сельскохозяйственных животных, исследуют в реакции иммуноадсорбции.

Для постановки реакции иммуноадсорбции все штаммы леп­тоспир, с которыми данная сыворотка дала положительную реак­цию микроагглютинации, выращивают в 0,5. 1-литровых флако­нах в течение 5. 7 сут. Затем культуры лептоспир осаждают цент­рифугированием при

10 000 мин -1 30 мин. Надосадочную жид­кость сливают, а осадок суспендируют в 0,9 мл питательной среды или физиологического раствора. 0,1 мл исследуемой сыво­ротки смешивают с 0,9 мл концентрированного антигена и вы­держивают в течение 48 ч при 1. 5 ºС. Отделяют сыворотку цент­рифугированием при 10 000 мин -1 30 мин. Адсорбированную сы­воротку проверяют в реакции микроагглютинации на наличие остаточных антител к штамму-адсорбенту, а затем исследуют с лептоспирами всех групп, с которыми сыворотка дала положи­тельную реакцию до адсорбции. В результате адсорбции лепто­спиры, являющиеся возбудителем, удаляют из сыворотки антите­ла к лептоспирам всех других серологических групп; гетерологичные типы лептоспир не адсорбируют антитела к штамму-возбу­дителю.

Реакцию макроагглютинации ставят на стекле, на которое на­носят каплю исследуемой сыворотки крови, разведенной в соот­ношении 1 : 100, и равное количество антигена, компоненты пе­ремешивают, результат учитывают в проходящем свете. Положи­тельным результатом считают агглютинацию интенсивностью на два креста и выше, сомнительным — на один крест.

Антитела в крови можно обнаружить также методом иммуноферментного анализа.

Биопрепараты. Депонированная поливалентная вакцина против лептоспироза животных ВГНКИ содержит шесть штам­мов лептоспир с наиболее выраженными антигенными и иммуногенными свойствами, относящихся к серогруппам Pomona, Tarassovi, Icterohaemorrhagiae, Canikola, Grippotyphosa, Hebdomadis. Выращенные культуры лептоспир сливают в общую емкость, инактивируют, концентрируют, добавляют адъювант. Вакцину проверяют на стерильность, безвредность и актив­ность (на кроликах).

Поливалентную вакцину против лептоспироза сельскохозяй­ственных и промысловых животных готовят из 7. 10-дневной культуры лептоспир, консервированных 5%-м раствором карбо­ловой кислоты до конечного содержания фенола в вакцине 0,5 %. Вакцину контролируют на стерильность, безвредность и активность (на кроликах).

Поливалентную сыворотку против лептоспироза сельскохо­зяйственных и промысловых животных получают методом ги­периммунизации волов-продуцентов. Антигены для гипериммунизации готовят из производственных штаммов шести серогрупп. Сыворотку консервируют 5%-м раствором фенола, прове­ряют на стерильность, безвредность (на белых мышах и морских свинках) и активность (в реакции микроагглютинации в разведе­ниях от 1:1000 до 1 : 100 000).

Антигены для диагностики лептоспироза реакцией макроаг­глютинации готовят из эталонных штаммов лептоспир. Выра­щенные культуры инактивируют формалином, концентрируют, расфасовывают по ампулам и подвергают сублимационному вы­сушиванию. Антигены контролируют на растворимость в физио­логическом растворе, на концентрацию. Активность антигена проверяют в РА на стекле с гомологичной лептоспирозной аг­глютинирующей сывороткой.

Групповые агглютинирующие лептоспирозные сыворотки предназначены для определения серогрупповой принадлежности лептоспир, выделенных из патологического материала, а также лептоспир, используемых в качестве антигенов в реакции микро­агглютинации при серологической диагностике лептоспироза.

Кампилобактериоз (вибриоз). Хроническое заболевание круп­ного рогатого скота, овец, свиней, которое проявляется аборта­ми, задержанием последа, временным бесплодием, вагинитами, метритами, рождением нежизнеспособного потомства. У кур возбудитель вызывает падеж цыплят, снижение яйценоскости несушек и прироста массы у бройлеров, у людей — гастроэнтери­ты, бактериемию, кожные поражения.

Возбудитель кампилобактериоза — бактерии семейства Spirillaceae, род Campylobacter. Основные виды: С. fetus (подвиды С. fetus venerealis и С. fetus fetus), С. jejuni, С. sputorum (подвиды С. sputorum sputorum, С. sputorum bubulus, С. sputorum faecalis) и не­патогенный С. coli (табл. 33). С. fetus sb. fetus вызывает аборты у овец, крупного рогатого скота. С.fetus sb. veneralis — патогенен для крупного рогатого скота. С. jejuni вызывает аборты у овец, энтериты у телят, ягнят и других животных. С. mucosalis патоге­нен для свиней, его выделяют от животных с признаками некро­тического энтерита, локального илеита.

Лабораторная диагностика кампилобактериоза основана на ре­зультатах бактериологического и серологического исследований.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии, выделение чистой культуры посе­вом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным, серологичес­ким свойствам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют абор­тированный плод (целиком с плодными оболочками или от круп­ных плодов голову, желудок, легкие, печень); плаценту; слизь из шейки матки, взятую стерильно в первые 3. 4 дня после аборта или в период охоты; от быков-производителей — препуциальную слизь и секрет придаточных половых желез; от убитых с диагнос­тической целью животных — матку, влагалище, лимфоузлы тазо­вой области.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Представите­ли рода Campylobacter — грамотрицательные, полиморфные, тон­кие палочки, изогнутые в виде «крыла чайки», запятой, спирали с одним или несколькими завитками или S-образные. Средние размеры (0,5. 8) х (0,2. 0,8) мкм. Подвижны за счет одного по­лярного жгутика на одном или обоих концах клетки, движение винтообразное; спор и капсул не образуют (рис. 111).

В мазках из патологического материала кампилобактерии об­наруживают в виде «крыла чайки», запятой или S-образной фор­мы; от животных, подвергавшихся лечению, — в виде длинных спирилл, малоизвитых нитей и мелких кокковидных форм.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Возбуди­тель — микроаэрофил, температурный оптимум 37. 38 °С. Для получения культуры кампилобактерии используют полужидкие и плотные питательные среды: плотный 2. 3%-й МППА и полу­жидкий 0,2%-й мясо-печеночный пептонный агар (ПЖА), среду Китта—Тароцци без масла, агар Мартена, сафранино-железо-новобиоциновую (СЖН) среду. Для обогащения в питательные сре­ды добавляют 5. 10 % дефибринированной крови крупного рога­того скота, овец, кроликов или сыворотку крови лошади. Куль­тивируют в течение 6. 10 сут в микроаэрофильных условиях при замене 10. 15% воздуха оксидом углерода (IV). Контаминиро­ванный материал высевают на среду СЖН: полужидкий агар — 985 мл, 2%-й раствор сульфата железа — 5 мл, 0,5%-й водный ра­створ сафранина Т — 5 мл и 0,2%-й водный раствор новобиоци-на — 5 мл. Среду фильтруют через бумажный фильтр, разливают в пробирки и автоклавируют при 115°С 25 мин. Готовая к ис­пользованию среда должна быть розового цвета, рН 6,8. При культивировании на данной среде кампилобактерии ее цвет не изменяется, другой микрофлоры — приобретает ярко-желтую окраску.

Каждую пробу высевают на несколько чашек Петри, растирая шпателем по поверхности среды. Выросшие колонии пересевают на полужидкий кровяной, сывороточный агар или среду Китта— Тароцци для получения чистой культуры.

При первичном выделении на плотной среде кампилобакте­рии образуют через 3. 4 сут колонии: гладкие, бесцветные, диа­метром 1 мм или шероховатые, непрозрачные, белые или кремовые до 2 мм в диаметре, могут быть плоские, серые или свет­ло-коричневые с неровными краями, редко растут в виде тон­кого налета. На кровяном агаре гемолиза не дают. При росте на сывороточном бульоне дают слабое помутнение, иногда с обра­зованием незначительного рыхлого осадка, на полужидком ага­ре растут в виде серовато-голубого диска около поверхности среды.

У выделенных культур кампилобактерии изучают фермента­тивную активность, ростовые потребности и на основании полу­ченных данных идентифицируют их на уровне вида, подвида, биовара (см. табл. 33).

Для серологической идентификации кампилобактерии выпус­кают агглютинирующие и люминесцирующие сыворотки против С. fetus subsp. fetus (так называемый Первый тип), С. fetus subsp. venerealis (Второй тип), С. sputorum subsp. bubulus (Третий тип).

Для ориентировочной идентификации выделенных культур ставят РА на стекле, используя указанные сыворотки, разведен­ные 1:50.

Для окончательной серологической идентификации кампило­бактерии ставят пробирочную РА: готовят последовательные раз­ведения каждой из трех моноспецифических сывороток в 3%-м растворе хлорида натрия, содержащем 0,3 % формалина, — 1 : 25, 1 : 50, 1 : 100, 1 : 200. Затем в каждую пробирку с указанными раз­ведениями моноспецифических сывороток добавляют по 0,5 мл исследуемой суспензии вибрионов (концентрация 1 • 10 9 ).

После внесения компонентов пробирки тщательно встряхива­ют и помещают в термостат при 37 ºС до следующего дня. Затем их выдерживают З. 4ч при комнатной температуре и учитывают результаты реакции.

При положительной реакции с моноспецифической сыворот­кой одного типа и отрицательной— с моноспецифическими сы­воротками остальных двух типов исследуемый штамм относят к тому типу, с которым получен положительный результат.

При получении положительной реакции с двумя моноспеци­фическими сыворотками (что может быть при выделении ати­пичных или диссоциированных штаммов) опыт повторяют с обеими моноспецифическими сыворотками, агглютинировавшими исследуемую суспензию вибрионов, применяя более высокие разведения, чтобы определить титр каждой сыворотки. Типовую принадлежность исследуемого штамма устанавливают по той мо­носпецифической сыворотке, которая агглютинирует микробную суспензию в более высоком титре.

Для идентификации возбудителей кампилобактериоза в реак­ции иммунофлуоресценции используют как чистые, так и сме­шанные культуры, выращенные на общепринятых питательных средах.

Биопроба. Нативным материалом или выделенной культурой заражают беременных морских свинок внутрибрюшинно или во влагалище с последующим исследованием абортированных плодов. Если в течение 10. 12 сут аборта не наступает, морских сви­нок убивают и исследуют содержимое полости матки и плоды. При необходимости биопробу ставят на беременных телках и ов­цах, заражая их подкожно или перорально. Животные абортиру­ют, при отсутствии аборта их убивают с диагностической целью.

Серологическая диагностика кампилобакте­риоза у коров основана на результатах реакции агглютинации с вагинальной слизью (РАВС), а у овец — РА с сывороткой крови.

Слизь берут марлевым тампоном, который помещают в про­бирку с 5 мл формалинизированного 3%-го раствора хлорида на­трия. Выдерживают при температуре 1. 4°С 12. 14ч. Тампон от­жимают, жидкость центрифугируют при 2500. 3000 мин -1 30 мин.

После центрифугирования реакцию ставят с экстрактом ваги­нальной слизи в четырех разведениях (табл. 34). Для приготовле­ния кампилобактериозного антигена исходную концентрирован­ную суспензию бактерий разводят физиологическим раствором, содержащим 0,3 % формалина, в соотношении 1 : 10.

Наряду с исследуемыми пробами материала ставят контроли антигена: 1) контроль антигена (проверка самоагглютинации): в пробирку наливают 0,5 мл антигена в рабочем разведении и до­бавляют 0,5 мл 3%-го формалинизированного раствора хлорида натрия; 2) контроль активности антигена: в каждую пробирку с разведенной агглютинирующей кампилобактериозной сывороткой Первого типа добавляют по 0,5 мл антигена; 3) контроль спе­цифичности антигена: в две пробирки, содержащие по 0,5 мл нормальной сыворотки в разведениях 1 : 100 и 1 : 200, добавляют по 0,5 мл антигена. Все пробирки встряхивают и далее поступают с ними так же, как с опытными.

Вначале учитывают результаты контроля антигена. Отрица­тельная реакция в первом и третьем контролях при положитель­ной во втором свидетельствует о правильности постановки реак­ции.

Учет результатов: 1) положительная — реакция хорошо выра­жена (на три-четыре креста) во всех пробирках или только в 1-й и 2-й; 2) сомнительная — агглютинация на один-два креста в 1-й и во 2-й пробирках; 3) отрицательная — отсутствие агглютинации во всех пробирках.

У больных овец для исследования берут сыворотку крови, раз­водят ее в 100, 200 и 400 раз. Результат считают положительным, если исследуемая сыворотка дает положительную реакцию агглютинации в разведении 1 : 200 и выше на четыре или три креста, со­мнительным — на четыре или три креста в разведении 1 :100 либо на два или один крест в разведении 1:200, отрицательным — если агглютинация отсутствует или ее оценивают не выше чем на два или один крест в разведении 1 : 100. Сыворотку овец, вакциниро­ванных против кампилобактериоза, серологически не исследуют.

Кроме реакции агглютинации сыворотку животных можно ис­следовать в РСК, реакции иммунофлуоресценции или реакции иммунной сорбции антител, меченных ферментами. Разработа­ны экспериментальные партии диагностикумов для выявления антител в РНГА, пригодные для диагностики кампилобактериозов животных и человека.

Биопрепараты. Эмульсинвакцина инактивированная против кампилобактериоза овец.

Кампилобактериозные агглютинирующие сыворотки готовят методом гипериммунизации кроликов суспензией живых микро­бов кампилобактерии. Полученные сыворотки после адсорбции групповых антител проверяют на активность, специфичность и стерильность.

Кампилобактериозный антиген представляет собой инактивированную 0,3%-м раствором формалина суспензию кампилобак­терии Первого типа (концентрация микробных клеток 10 10 /мл). Предназначен для диагностики кампилобактериоза у крупного рогатого скота.

Дизентерия свиней. Инфекционная болезнь. Характеризуется геморрагическим поносом и некротическим поражением толсто­го отдела-кишечника. Восприимчивы свиньи всех возрастов, но чаще болеет молодняк в возрасте 1. 6мес.

Возбудитель дизентерии свиней — спирохета Serpulina hyodysenteriae, род Serpulina.

Лабораторная диагностика дизентерии свиней основана на ре­зультатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии (основной метод), а также выделе­ние чистой культуры посевом на питательные среды и идентифи­кацию возбудителя по культурально-морфологическим и фер­ментативным свойствам.

Материал для исследования. Для прижизненной диагностики в лабораторию направляют фекалии, для посмертной — слизистую оболочку большой ободочной кишки, которую соскабливают после удаления из кишечника содержимого и промывания водой. От трупов материал берут не позднее чем через 2 ч после гибели животного, материал должен быть исследован в течение 2. 4 ч, а при хранении на холоде — 6. 8 ч.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Поскольку культивирование возбудителя весьма трудоемко, микроскопичес­кое исследование — это основной метод диагностики, доступный практическим лабораториям. Поступивший материал исследуют методом темнопольной, фазово-контрастной или обычной све­товой микроскопии.

При темнопольной микроскопии препарат «раздавленная капля» исследуют в водной иммерсии с объективом х 40 и окуля­рами х 7 или х 10. Возбудитель в этом случае виден как спирале­видная клетка с 3. 12 правильными витками размером (7. 9) х (0,3. 0,4) мкм, движущаяся змеевидно-поступательно. При температуре 22 °С наблюдают изгибание и скользящее дви­жение клетки, а при 37. 42 ºС клетка движется поступательно. У большинства больных дизентерией свиней в препарате «раздав­ленная капля» в одном поле зрения обнаруживают 5. 10 спиро­хет и более. В окрашенных по Граму препаратах видны грамотрицательные извитые клетки со строением, типичным для спи­рохет. Клетки возбудителя хорошо окрашиваются по Романовс­кому—Гимзе, фуксином Пфейффера. Сходные по морфологии с Serpulina hyodysenteriae вибрионы, обитающие в кишечнике, от­личаются тем, что их клетка в 2. 4 раза толще, с тупыми конца­ми, движение вращательное вокруг длинной оси.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Возбуди­тель—строгий анаэроб, температурный оптимум 36. 38 ºС, при 25 и 30 °С не растет, рН 7,0. 7,2. Для первичной изоляции ис­пользуют селективные среды, например следующие.

Кровяной агар со спектомицином: к перевару Хоттингера до­бавляют 0,001 % резазурина (индикатор ОКВП), 0,5 % хлорида на­трия, 0,25 % глюкозы, 1 % пептона, 2 % агара, кипятят, пропуска­ют через среду азот или оксид углерода (IV) в течение 10. 15 мин, устанавливают рН 7,0. 7,2, вносят 0,05 % гидрохлорида цистеина. Среду автоклавируют при 110º С 30 мин, охлаждают до 40. 45°С, пропуская при этом через среду стерильный обескислороженный газ, после чего вносят 10% дефибринированной крови барана (или крупного рогатого скота) и 400 мкг/мл спектомицина. Среду разливают в атмосфере оксида углерода (IV).

Культивируют также в жидкой или полужидкой среде, содер­жащей сердечно-мозговую вытяжку и 10 % эмбриональной теля­чьей или кроличьей сыворотки. На кровяном агаре через 48. 96ч инкубирования при 38 °С вырастают плоские просвечивающие колонии диаметром 0,5. 3 мм с зоной бета-гемолиза. В полужид­ком сывороточном агаре возбудитель растет в виде беловатого диффузного облачка ближе к поверхности среды.

После изучения морфологии и культуральных свойств у выде­ленных бактерий исследуют ферментативную активность. Пато­генные для свиней культуры гидролизуют эскулин, не ферменти­руют фруктозу, утилизируют пируват, при сбраживании глюкозы образуют водород, углекислоту, ацетат, бутират; нитрат не вос­станавливают; растут на средах, содержащих 6,5 % хлорида на­трия, но не растут на средах с 1 % глицина.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Из чистой культуры лептоспир приготовить препараты «раз­давленная капля» и изучить их методом темнопольной микро­скопии.

2. Поставить РМА с культурой лептоспир и двумя сыворотка­ми различных антигенных групп в пробирках или на пластинах, учесть результат реакции, начиная с наибольшего разведения сыворотки. Из пробирки (лунки) каждого разведения сыворотки приготовить препарат «раздавленная капля» и изучить методом темнопольной микроскопии.

3. Окрасить мазки с кампилобактериями по Граму, промикроскопировать, зарисовать.

4. Изучить характер роста кампилобактерии на питательных средах и сделать заключение о морфологических и тинкториаль-ных свойствах возбудителя.

1. В чем заключаются особенности микроскопирования лептоспир?

2. Каковы морфологические и культуральные свойства лептоспир?

3. Каковы правила взятия патологического материала для исследования на лептоспироз?

4. Какие методы применяют для серологической диагностики лептоспироза?

5. Как ставят биопробу при лептоспирозе?

6. Каковы морфологические и тинкториальные свойства возбудителя кампилобактериоза?

7. В чем состоит серологическая диагностика кампилобактериоза?

8. Каковы морфологические особенности возбудителя дизентерии свиней?

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Как то на паре, один преподаватель сказал, когда лекция заканчивалась — это был конец пары: «Что-то тут концом пахнет». 8319 — | 7945 — или читать все.

195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник