Калибраторы для определения белка в моче

Белур 600 — это единственный в России универсальный анализатор общего белка в моче.

Белур 600 разработан на основе гемоглобинометра МиниГЕМ+ и имеет аналогичный ему интерфейс пользователя. Владельцы МиниГЕМ+ могут работать на анализаторе Белур 600 без какой-либо подготовки.

Гемоглобинометры МиниГЕМ – уникальная разработка мирового уровня (фото).

Белур 600 – экспортная продукция.

Определение общего белка в моче.

Определение белка в анализаторе Белур 600 производится фотометрическими методами на длине волны 600 нм: с пирогаллоловым красным, с сульфосалициловой кислотой, с Кумасси бриллиантовым синим (Бредфорд).

Пирогалоловый метод обладает высокой линейной зависимостью оптической плотности от концентрации общего белка, что позволяет проводить измерения с единственной калибровкой по фактору во всем диапазоне концентраций (0-10 г/л с минимальным дискретом 0,001 грамм/литр). Этим Белур 600 отличается от ближайших аналогов.

В анализаторе Белур 600 предусмотрена калибровка по фактору с повышенной в 4 раза точностью.

Для измерений сульфосалициловым методом требуется калибровка по нескольким значениям концентрации.

Для измерения пирогаллоловым методом необходимо 20 мкл биопробы.

Открытая система избавляет лабораторию от использования реагентов лишь одного производителя (далеко не всегда оптимальных по цене и качеству). В анализаторе применяются РЕАГЕНТЫ РАЗЛИЧНЫХ АВТОРИТЕТНЫХ ОТЕЧЕСТВЕННЫХ И ЗАРУБЕЖНЫХ ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ: «Вектор-Бест», «Диакон Диагностикс», «Bayer Diagnostics», «Beckman», «Biocon Diagnostic», «Biodirect», «Bio-Rad», «Kone», «Merck», «Randox», «Sigma», «Chronolab», «DiaSys», «Serono», «Sentinel CH», «Sigma». Разработанный в ЗАО «Вектор-Бест» набор «Белок-ПГК- Ново» сравним по правильности определения белка в моче с наборами реагентов фирм «Biocon», «Bio-Rad» и «Chronolab».

При выборе реагентов необходимо обращать внимание на значение оптической плотности холостой пробы, которое должно находиться в пределах 0.12 — 0.35 Б, а также на значение получающегося после калибровки фактора, которое не должно превышать 4 при разведении 1:50. Несоответствие этим требованиям может привести к неправильным результатам измерений.

Для измерения концентрации общего белка достаточно опустить в фотометрическую ячейку прибора кювету с приготовленным раствором биопробы и через мгновение на дисплее появится значение концентрации. Пересчет оптической плотности раствора в концентрацию гемоглобина производится автоматически. Прибор не нужно включать, «прогревать. При опускании кюветы в фотометрическую ячейку Белур 600 автоматически включается, производит измерение и индицирует измеренную концентрацию. После извлечения кюветы из фотометрической ячейки, анализатор переходит в режим «ожидания» до следующего измерения.

Повторные измерения возможны через каждые 2 секунды.

Автокалибровка.

Анализатор Белур 600 обладает функцией автоматической подстройки оптико-электронных параметров (автокалибровки).

Белур 600 сохраняет калибровку (фактор) неограниченно долго, в том числе при отключении питания. Это позволяет изменять калибровку только при смене партии используемых реагентов.

Экономичность.

Белур 600 потребляет энергию только во время измерения, что обеспечивает долговременное использование элементов питания — до 1 миллиона измерений от одного комплекта из 3 свежих элементов DURASEL в течение срока службы элементов (4-5 лет). Элементы питания размещены в корпусе анализатора Белур 600 (фото), однако при желании можно использовать сетевой адаптер, для которого имеется гнездо подключения на тыльной стороне прибора (фото).

Контроль работоспособности анализатора Белур 600 производится посредством оптических контрольных мер (фото). Свойства стеклянных мер отличаются многолетней стабильностью. Никакие традиционные средства — возобновляемые жидкие контрольные растворы с незначительным временем годности — не нужны.

Средство измерения.

Белур 600 является средством измерения. Для поверки анализатора используется набор стеклянных мер оптической плотности НОСМОП-7. Поверка производится метрологическими службами, которые обеспечены этим набором мер. Набор выпускается ЗАО НПП «ТЕХНОМЕДИКА».

Удобная конструкция.

Белур 600 имеет привлекательный внешний вид. Корпус выполнен из светлого химически стойкого пластика. Лицевая панель покрыта износоустойчивой ламинирующей пленкой, легко поддающейся стандартной санитарной обработке. В анализаторе Белур 600 используется высококонтрастный жидкокристаллический индикатор с крупными цифрами (фото). Для защиты от возможного загрязнения фотометрическая ячейка снабжена удобной задвижкой. Размеры Белур 600 составляют 178х128х43 мм, масса без батарей не превышает 300 граммов. Несмотря на малые размеры и вес прибор надежно фиксируется на рабочем столе резиновыми ножками. Для фотометрирования используются стандартные стеклянные фотометрические кюветы с длиной оптического пути 10 мм. Допускается использование одноразовых пластиковых кювет и стеклянных пробирок. В корпус анализатора Белур 600 встроен выдвигающийся пенал для хранения кюветы и контрольных мер (фото).

Минимум обслуживания.

Тщательное соблюдение указаний по эксплуатации анализатора Белур 600, своевременный уход за его оптическими поверхностями обеспечивают многолетнюю безотказную работу прибора без привлечения сервисных инженеров.

Обозначение прибора при его заказе и в документации других изделий:

Анализатор общего белка в моче фотометрический портативный АОБМФ-01-«НПП-ТМ»ТУ 9443-020- 11254896-2009, торговое наименование «Белур 600».

Смотрите также:

МиниГЕМ+. Гемоглобинометр с расширенными возможностями определения гемоглобина любыми методами на рабочей длине волны 540 нм.

МиниГЕМ 540. Измерение общего гемоглобина в крови гемиглобинцианидным методом АГФ-03/540-«Минигем» на рабочей длине волны 540 нм.

МиниГЕМ 523. Измерение общего гемоглобина в крови модифицированным методом Дервиза-Воробьёва АГФ-03/523-«Минигем» на рабочей длине волны 523 нм.

Микрола. Микрофотометр для лабораторных исследований.

Рабочая длина волны определяется спектральной полосой излучения светодиода: (600 ± 5) нм.
Прибор определяет концентрацию общего белка в моче с реагентами различных производителей, использующих фотометрирование на длине волны 600 нм с калибровкой по стандарту или калибратору или фактору, указанному в инструкции на набор.
Диапазон измерений:
- Нормированный диапазон измерений зональной оптической плотности составляет от 0 до 0,999 Б (бел — единица оптической плотности). Ненормированный диапазон составляет от 1 до 3 Б.
- Вывод на индикацию концентрации общего белка и оптической плотности раствора.
- Автоматическое вычисление фактора по стандартному раствору или калибратору с известной концентрацией белка (калибровка по стандартному образцу или калибратору).
Предел допускаемой погрешности при измерении оптической плотности стеклянных мер из набора НОСМОП-7 составляет ±0,04 Б — в диапазоне от 0 до 0,999 Б. В диапазоне от 1 до 3,0 Б погрешность не нормируется.
Прибор работает от источника питания ДГВИ.436615.004, преобразующего сетевое переменное напряжение (220±22 В) в постоянное напряжение (5±1) В, 0,3 А или от трех элементов питания 1,5 В типоразмера АА.
Ток потребления прибора при напряжении питания 6 В — не более 20 мА.
Порог срабатывания индикации разряда внутреннего источника питания -от 2 В до 3,6 В.
Примечание. Индикацией разряда внутреннего источника питания является показания приборов «ЦЦЦ».
Длительность измерения не более 2 секунд.
Объем пробы для фотометрирования — не менее 1 мл.
Длина оптического пути кюветы: 10,0 ±0,1 мм.
Габаритные размеры прибора, не более — 130x180x50 мм.
Масса прибора без комплекта запасных частей и принадлежностей (ЗИП) не более 0,5 кг, в полном комплекте поставки — не более 2 кг.
Средний срок службы прибора — не менее 4 лет. Время непрерывной эксплуатации прибора -7 ч. в сутки.
Гарантийный срок 4 года.

Базовый комплект поставки

Принадлежности

Кювета 10 мм оптическая стеклянная

Эксплуатационная документация

№	Наименование	Шифр конструкторской документации	Кол-во
1	Анализатор общего белка в моче фотометрический портативный АОБМФ-01-«НПП-ТМ»	ТУ 9443-020-11254896-2009	1
7	Руководство по эксплуатации с методикой поверки	ДГВИ.941416.011 РЭ	1

Заключения испытательных медицинских центров.

Институт Клинической Кардиологии им. А.Л. Мясникова
Российского Кардиологического Научно- Производственного Комплекса МЗ РФ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Результаты медицинских испытаний показали, что анализатор общего белка в моче фотометрический портативный АОБМФ-01-«НПП-ТМ», производства НПП» Техномедика» г. Москва , является удобным прибором для измерения белка в моче и может быть рекомендован для применения в клинико-диагностических лабораториях поликлиник, экспресс-лабораторий стационаров и ЛПУ РФ.

Состав и последовательность испытаний.
1. Определить возможности применения прибора для определения общего белка мочи.
Мы проводили испытания прибора, определяя общий белок мочи методом с пирогаллолом красным производства ЗАО » Вектор-Бест» » Белок-ПКГ-Ново».
Контролями служили контрольные образцы мочи производства » Био-Рад» и «Биосистемс» с содержанием белка в диапазоне от 0.04 г/л до 1. 44 г/ л, т.е. в диапазоне линейности определения белка данным реактивом.
Данные воспроизводимости и правильности в одной серии ( п= 10) представлены в таблице 1.

источник

Нормальные показатели: белок в норме в моче содержится в минимальных количествах, которые не обнаруживаются обычными качественными реакциями. Верхняя граница нормы белка в моче – 0,033 г/л. Если содержание белка выше этого значения, то качественные пробы на белок становятся положительными.

Клиническое значение определения:

Появление белка в моче называется протеинурия. Протеинурии могут быть ложными и почечными. Экстраренальные протеинурии могут быть при наличии примесей белкового происхождения из половых органов (вагинитах, уретритах и др.), количество белка при этом незначительно – до 0,01 г/л. Почечные протеинурии могут быть функциональными (при переохлаждении, физических нагрузках, лихорадке) и органическими — при гломерулонефрите, пиелонефрите, нефрите, нефрозах, почечной недостаточности. При почечных протеинуриях содержание белка может быть от 0,033 до 10 – 15 г/л, иногда выше.

Принцип метода: основан на том, что белок под действием неорганических кислот коагулирует (становится видимым). Степень помутнения зависит от количества белка.

Обнаружение белка в моче с 20% сульфосалициловой кислотой.

Реактивы: 20% р-р сульфосалициловой кислоты. Оборудование: темный фон.

1. Требования к моче: моча должна быть кислой (или слабокислой) рН, должна быть прозрачной, для этого мочу центрифугируют. Щелочную мочу подкисляют до слабокислой реакции среды, используя для контроля индикаторную бумагу.

2. В 2 пробирки одинакового диаметра наливают по 2 мл подготовленной мочи. 1 пробирка – контроль, 2 – опыт. В опытную пробирку добавляют 4 капли 20% сульфосалициловой кислоты.

3. Результат отмечают на темном фоне.

4. При наличии белка, моча в опытной пробирке мутнеет.

Качественное определение белка в моче тест – полосками.

Для выявления протеинурий используют различные монотест – полоски: Альбуфан, Альбустикс, Биофан Е и политесты: Трискан, Нонафан и др.

Обнаружение белка в моче по методу Робертса – Стольникова.

Принцип метода: основан на том, что белок под действием неорганических кислот коагулирует (становится видимым). Степень помутнения зависит от количества белка (т.е. кольцевая проба Геллера). При концентрации белка в моче 0,033 г/л к концу 3 минуты после наслаивания мочи появляется тонкое нитевидное белое кольцо.

Реактивы: 50% р-р азотной кислоты или реактив Робертса (98 частей насыщенного раствора поваренной соли и 2 части концентрированной соляной кислоты) или реактив Ларионовой (98 частей насыщенного р-ра поваренной соли и 2 части концентрированной азотной кислоты).

2. В пробирку наливают 2 мл 50% р-ра азотной кислоты или один из реактивов, затем осторожно по стенке пробирки с помощью пипетки наслаивают такой же объем подготовленной мочи

3. Пробу оставляют на 3 минуты

4. Через 3 минуты отчитывают результат. Результат отмечают на темном фоне в проходящем свете. Если кольцо широкое, компактное, то мочу разводят дистиллированной водой и вновь наслаивают на реактив.

5. Мочу разводят до тех пор, пока через 3 минуты не образуется тонкое нитевидное кольцо.

6. Расчет содержания белка в моче производят по формуле:

С = 0,033г/л х степень разведения.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Да какие ж вы математики, если запаролиться нормально не можете. 8376 — | 7302 — или читать все.

195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник

В нашей стране для определения концентрации белка в моче преимущественно применяют турбидиметрический метод с использованием сульфосалициловой кислоты (сульфосалициловый метод), который впервые был предложен Kingsbury F . B . и соавторами в 1926 г. В то же время, лаборатории развитых стран этот метод практически не используют, в результате лабораторный контроль качества анализа мочи на белок демонстрирует снижение коэффициента вариации. Так в 1993 году 60% клинико-диагностических лабораторий Франции выполняли определение концентрации белка мочи колориметрическим методом с использованием красителя пирогаллоловый красный (пирогаллоловый метод) и лишь 10% — сульфосалициловым методом. Диагностические наборы для определения белка в моче, основанные на пирогаллоловом методе, выпускают такие известные фирмы как Bayer D iagnostics, Beckman, Biodirect, Biocon Diagnostik , Bio — Rad Laboratories , Eurodiag, Kone, Merck, Randox, Serono, Sentinel CH , Sigma. К сожалению, в нашей стране в силу экономических причин и отчасти из-за отсутствия опыта колориметрические методы определения белка мочи пока используются крайне мало.

Возникает вопрос – насколько оправдан отказ лабораторий развитых стран от применения простого и, главное, – дешевого метода. Для выяснения этого вопроса мы провели сопоставление результатов определения концентрации белка в моче пациентов двумя методами: сульфосалициловым [1] и пирогаллоловым [2].

Порядок выполнения измерения концентрации белка каждым из методов был следующий.

Реагенты: 3% раствор сульфосалициловой кислоты, 0,9% раствор хлорида натрия,

калибратор (калибровочный раствор сывороточного альбумина, 50 г/л, в растворе хлористого натрия, 0,9% и азида натрия, 0,095%) из набора «Юни-Тест – Общий белок» производства ЗАО “Диакон ДС” по заказу ЗАО “А/О Юнимед”.

Оборудование: спектрофотометр СФ-2000 производства ОКБ “Спектр”.

Ход измерения: в кварцевую кювету с длиной оптического пути 1 см вносили 0,5 мл профильтрованной мочи и 1,5 мл 3% раствора сульфосалициловой кислоты, перемешивали. Через 10 мин измеряли оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 595 нм против холостой пробы (кювета с 0,5 мл мочи и 1,5 мл 0,9% раствора хлорида натрия). Расчет концентрации белка проводили по калибровочному графику. Для его построения готовили разведения стандартного раствора сывороточного альбумина человека в 0,9%-м растворе хлорида натрия с концентрациями: 0,025; 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9 г/л. Для каждого из приготовленных растворов выполняли измерение так же, как с для пробы мочи. Калибровочный график показан на рис.1.

Рис. 1. Калибровочная кривая для определения белка в моче сульфосалициловым методом.

Использован коммерческий набор производства компании Biocon Diagnostik (Германия) – Fluitest USP – Белок, сверхчувствительный метод на основе красного пирогаллол-молибдатного комплекса.

Реагенты: пирогаллоловый красный, 0,06 ммоль/л, молибдат натрия, 0,04 ммоль/л, сукцинатный буфер 50 ммоль/л, рН 2,5, детергенты 2%; калибратор (калибровочный раствор сывороточного альбумина, 50 г/л, в растворе хлористого натрия, 0,9% и азида натрия, 0,095%) из набора «Юни-Тест – Общий белок» производства ЗАО “Диакон ДС” по заказу ЗАО “А/О Юнимед”. [3].

Оборудование: биохимический фотометр StatFax 1904 Plus (“ Awareness Technology inc .”, США).

Калибровочную кривую для описываемого метода при соотношении проба/реагент – 1/12,5 получали с помощью специально приготовленных растворов сывороточного альбумина: 0,05; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0, г/л путем разведения калибратора (50 г/л) с помощью 0,9% раствора хлорида натрия, (Рис.2).

Рис, 2. Калибровочная кривая для метода пирогаллоловый красный, реагент Fluitest USP , Biocon Diagnostik (Германия) при соотношении проба/реагент – 1/12,5.

Из каждого раствора белка брали по 80 мкл и смешивали с 1,0 мл реагента; выполняли измерение как пробы мочи.

Рис. 3. Диаграмма сопоставимости результатов измерения содержания белка в образцах мочи сульфосалициловым и пирогаллоловым методами.

Калибровочную кривую для реагента производства А/О Юнимед и фирмы Biocon Diagnostik при соотношении проба/реагент – 1/30 получали с помощью специально приготовленных растворов сывороточного альбумина: 0,05; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0, 1,1; 1,2;1,3;1,4;1,5;1,6; 1,7; 1,75; 1,8; 1,85; 1,9; 2,0 г/л путем разведения калибратора (50 г/л) с помощью 0,9% раствора хлорида натрия (Рис.4).

Рис. 4. Калибровочные кривые для реагента производства А/О Юнимед (верхний график) и набора Fluitest USP фирмы Biocon Diagnostik (нижний график) при соотношении проба/реагент – 1/30.

Из каждого раствора белка брали по 50 мкл и смешивали с 1,5 мл реагента и выполняли измерение как пробы мочи.

В проведенном исследовании для достижения максимальной чувствительности пирогаллолового метода был использован его модифицированный высокочувствительный вариант. Для этого объем добавляемой мочи был увеличен. Ход измерения: во все пробирки вносили 1 мл основного реагента, затем в первую пробирку вносили 80 мкл дистиллированной воды (бланк), в остальные пробирки по 80 мкл отцентрифугированной мочи, инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут и измеряли оптическую плотность пробы против бланка при длине волны 600 нм и дифференциальном светофильтре 650 нм

Для сопоставления методов определения концентрации белка в моче были проведены измерения 60 проб мочи пациентов сульфосалициловым и пирогаллоловым методами.

Чувствительность методов измерения белка в моче оценивали путем исследования приготовленных водных растворов мочи, содержащих низкие концентрации сывороточного альбумина (от 0 до 0,05 г/л). Для пирогаллолового и сульфосалицилового методов нами также были исследованы величины неспецифического поглощения за счет окраски образца мочи. Для этого измерялась оптическая плотность проб мочи, в которые вместо сульфосалициловой кислоты или пирогаллолового реактива добавлялось эквивалентное количество физиологического раствора.

Для оценки влияния матрицы (мочи) на результаты сульфосалицилового метода были проведены следующие опыты.

1) В образцы мочи, не содержащие белка по данным пирогаллолового и сульфосалицилового методов ( n =43), был добавлен человеческий сывороточный альбумин в конечной концентрации 0,4 г/л. Затем с помощью вышеуказанных методов была определена концентрация белка в подготовленных образцах.

2) Образцы мочи ( n =16), имеющие белок по данным пирогаллолового метода, были разведены в два раза 0,9% раствором хлорида натрия. Полученные пробы были вновь исследованы сульфосалициловым методом, концентрация белка была пересчитана с учетом разведения.

Результаты исследования и их обсуждение

Исследование образцов мочи, содержащих определенные концентрации альбумина показало, что минимально определяемая концентрация альбумина (чувствительность метода) составила для сульфосалицилового метода 0,033 г/л, а для пирогаллолового метода – 0,012 г/л.

Результаты измерений в виде диаграммы сопоставимости результатов измерения содержания белка в образцах мочи сульфосалициловым (ось ординат) и пирогаллоловым (ось абсцисс) методами приведены на рис 3. Сплошная наклонная линия на графике соответствует равенству результатов измерений двумя методами. Если бы оба метода давали близкие значения, то точки на графике должны были бы группироваться возле сплошной линии. Данные, приведенные на рис. 3, позволяют также отметить, что сульфосалициловый метод стабильно показывал более низкие концентрации белка во всех пробах мочи по сравнению с пирогаллоловым методом.

Как показало проведенное исследование, между результатами, получаемыми с помощью сульфосалицилового и пирогаллолового методов, отсутствует убедительная статистическая связь. Кроме того, по сравнению с пирогаллоловым методом, сульфосалициловый метод в 95% образцов мочи показал более низкие значения концентрации белка. При этом в 86% случаев измерение сульфосалициловым методом дало заниженные результаты в два и более раз по сравнению с пирогаллоловым методом.

В тоже время сульфосалициловый метод в ряде случаев показал присутствие белка в пробе за счет темного цвета или повышенной мутности исследуемой мочи. Установлено, что при определении белка сульфосалициловым методом (соотношение проба/реактив = 1/3) при длине волны 595 нм, вклад образца мочи за счет его цвета или степени мутности в получаемый результат может составлять от 0 до 0,247 г/л (среднее значение – 0,031 г/л). Таким образом, следует признать, что при использовании сульфосалицилового метода применение контрольной пробы (образец мочи+физраствор) для каждого образца мочи обязательно. При определении белка пирогаллоловым методом цвет или степень мутности образца мочи не оказывали влияния на получаемый результат.

Опыт по оценке влияния матрицы (мочи) показал, что практически во всех приготовленных пробах мочи, содержащих 0,4 г/л альбумина, его концентрация, определенная сульфосалициловым методом, была ниже 0,4 г/л в среднем на 20% (пограничные значения концентрации белка 0,29-0,34 г/л). В тоже время при измерении концентрации белка в этих пробах пирогаллоловым методом, результаты для всех образцов были в пределах 0,40-0,46 г/л. Также при оценке влияния матрицы (мочи) на результаты измерения концентрации белка сульфосалициловым методом было установлено, что в 5 из 16 двукратно разведенных образцах мочи концентрация белка была на 15-33% выше, чем в соответствующих не разведенных образцах. Для окончательного выяснения влияния матрицы на результаты сульфосалицилового метода требуется проведение исследований на большом количестве образцов мочи.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о преимуществах пирогаллолового метода перед сульфосалициловым методом вследствие его более высокой чувствительности и неподверженности влиянию интерферирующих факторов, отсутствии необходимости в холостой пробе по моче, возможности использования одного стандарта для построения калибровочной кривой, малого количества мочи для анализа. Наличие таких характеристик позволяет рекомендовать пирогаллоловый метод для широкого применения в лабораторной практике.

Из полученных данных вытекает вывод – результаты измерения концентрации белка в моче сульфосалициловым методом несопоставимы с результатами, полученными пирогаллоловым методом. Этот факт и является ответом на вопрос – почему лаборатории развитых стран не используют сульфосалициловый метод. Применение этого метода в слаборазвитых странах, по-видимому, объясняется тем, что там ценовой фактор превалирует над точностью и диагностической значимостью получаемых результатов, а, учитывая представленные на рис. 3 результаты, можно сказать, и над здравым смыслом. Кому нужен такой анализ, когда при концентрации белка в моче 0,3 г/л результат измерения может быть от 0,05 до 0,25 г/л? Что же касается ценового фактора, то, как известно, скупой платит дважды. Ошибочные результаты анализа приводят к ошибочному диагнозу и неэффективному лечению больного. Основная опасность применения сульфосалицилового метода состоит в том, что мы получаем значительно заниженные значения и не редко пропускаем протеинурию. Следовательно, данный метод нельзя применять даже для скрининга.

Так что же мы измеряем сульфосалициловым методом? Метод относится к классу турбидиметрических, в основе которых лежит измерение изменения светопропускания ( D D ) реакционной смеси, обусловленное рассеянием света (образованием мутности). В случае определения белка в моче мутность образуется за счет следующего процесса: молекулы белков мочи в кислой среде денатурируют, переходя из компактной глобулярной формы в рыхлую «нитчатую» форму. При этом у белков резко возрастает способность образования конгломератов (реакция преципитации). Отдельные молекулы белка имеют размеры меньше длины волны видимого света и поэтому очень слабо рассеивают его. Эффективность рассеивания резко возрастает, когда размеры образующихся конгломератов молекул белка, приближаются к величине 0,6 мкм (длине волны зондирующего света). Чем больше концентрация белка в моче, тем большее количество таких конгломератов (центров рассеивания) образуется. Однако, связь между измеряемой на фотометре оптической плотностью D D и концентрацией белка в моче очень сложная. На начальном этапе реакции образуется определенное количество мелких белковых частиц, затем они начинают слипаться в более крупные частицы, при этом концентрация центров рассеивания падает, а эффективность (сечение) рассеивания каждого центра растет. В каждый конкретный момент времени мы имеем в реакционной смеси определенное количество центров рассеивания с различными размерами. При больших концентрациях белка в моче могут образовываться крупные белковые частицы, выпадающие в осадок, что приводит к уменьшению оптической плотности реакционной смеси.

Процесс денатурации белков и реакция преципитации зависят от состава среды, в которой они протекают (рН, концентрация различных солей). Для калибровки метода мы используем водный раствор альбумина человека с добавлением 0,9% хлористого натрия. Когда же мы выполняем измерение концентрации белка в моче, мы не знаем и не учитываем ни рН мочи, ни ее солевой состав. Так же мы не учитываем тот факт, что различные белки по-разному реагируют в растворе сульфосалициловой кислоты. Этим и объясняется большой разброс результатов измерений, представленных на рис. 3. Чем ближе состав мочи к составу калибратора, тем точнее результат измерения. Однако таких проб мочи встречается очень мало. В большинстве случаев состав мочи таков, что результаты измерений получаются заниженными и нередко весьма значительно.

Последнее подтверждается описанным выше экспериментом, в котором выполнили измерение концентрации белка сульфосалициловым методом в неразведенных и двукратно разведенных пробах мочи. Сравнение полученных данных показало, что разведение мочи (с учетом степени разведения) приводит к росту результатов измерений концентрации белка на 15-33%. Этот факт подтверждает существенное влияние состава мочи на результат определения концентрации белка (эффект матрицы).

Почему пирогаллоловый метод позволяет получать более точные результаты измерения концентрации белка в моче? Во-первых, за счет большей кратности разведения пробы мочи в реакционной смеси. Если в сульфосалициловом методе отношение проба мочи/реагент составляет 1/3, то в пирогаллоловом методе оно может быть в пределах от 1/12,5 до 1/60 в зависимости от варианта методики, что значительно уменьшает влияние состава мочи на результат измерения. Во-вторых, реакция протекает в сукцинатном буфере, то есть при стабильном рН. И, наконец, сам принцип метода, если можно так сказать, более прозрачный. Молибдат натрия и краситель пирогаллоловый красный образуют комплекс с молекулой белка. Это приводит к тому, что молекулы красителя, в свободном состоянии не поглощающие свет на длине волны 600 нм, в комплексе с белком свет поглощают. Таким образом, мы как бы метим каждую молекулу белка красителем и в результате получаем, что изменение оптической плотности реакционной смеси на длине волны 600 нм однозначно связано с концентрацией белка в моче.

В качестве заключения наиболее существенные различия между сульфосалициловым методом определения белка в моче и методом с использованием красителя пирогаллоловый красный представлены в таблице № 1.

Таб. № 1. Сравнительная характеристика двух методов определения белка в моче (сульфосалициловый и пирогаллоловый метод)

источник

Почечная (истинная) протеинурия бывает функциональной и органической. Среди функциональной почечной протеинурии наиболее часто наблюдаются следующие ее виды:

— физиологическая протеинурия новорожденных, которая исчезает на 4— 10-й день после рождения, а у недоношенных несколько позже;
— ортостатическая альбуминурия, которая характерна для детей в возрасте 7—18 лет и появляется только в вертикальном положении тела;
— транзиторная (инсультная) альбуминурия, причиной которой могут быть различные заболевания органов пищеварения, тяжелая анемия, ожоги, травмы или физиологические факторы: тяжелая физическая нагрузка, переохлаждение, сильные эмоции, обильная, богатая белком пища и др.

Органическая (почечная) протеинурия наблюдается вследствие прохождения белка из крови через поврежденные участки эндотелия почечных клубочков при заболеваниях почек (гломерулонефрит, нефроз, нефросклероз, амилоидоз, нефропатия беременных), расстройствах почечной гемодинамики (почечная венная гипертензия, гипоксия), трофических и токсических (в том числе лекарственных) воздействиях на стенки капилляров клубочков.

Большинство качественных и количественных методов определения белка в моче основаны на его коагуляции в объеме мочи или на границе сред (мочи и кислоты).

Среди качественных методов определения бедка в моче наибольшее распространение получили унифицированная проба с сульфосалициловой кислотой и кольцевая проба Геллера.

Унифицированная проба с сульфасалициловой кислотой проводится следующим образом. В 2 пробирки наливают по 3 мл профильтрованной мочи. В одну из них прибавляют 6—8 капель 20 % раствора сульфасалициловой кислоты. На темном фоне сравнивают обе пробирки. Помутнение мочи в пробирке с сульфасалициловой кислотой указывает на наличие белка. Перед исследованием необходимо определить реакцию мочи, и если она щелочная, то подкислить 2—3 каплями 10 % раствора уксусной кислоты.

Проба Геллера основана на том, что при наличии белка в моче на границе азотной кислоты и мочи происходит его коагуляция и появляется белое кольцо. В пробирку наливают 1—2 мл 30 % раствора азотной кислоты и осторожно по стенке пробирки наслаивают точно такое же количество профильтрованной мочи. Появление белого кольца на границе двух жидкостей указывает на наличие белка в моче. Следует помнить, что иногда белое кольцо образуется при наличии большого количества уратов, но в отличие от белкового кольца оно появляется несколько выше границы между двумя жидкостями и растворяется при нагревании [Плетнева Н.Г., 1987].

Из количественных методов наиболее часто применяются:

1) унифицированный метод Брандберга—Робертса—Стольникова, в основу которого положена кольцевая проба Геллера;
2) фотоэлектроколориметрический метод количественного определения белка в моче по помутнению, образующемуся при добавлении сульфасалициловой кислоты;
3) биуретовый метод.

Выявление белка в моче упрощенным ускоренным методом проводят колориметрическим методом с помощью индикаторной бумаги, которую выпускают фирмы «Lachema» (Словакия), «Albuphan», «Ames» (Англия), «Albustix», «Boehringer» (Германия), «Comburtest» и др. Метод заключается в погружении в мочу специальной бумажной полоски, пропитанной тетрабромфеноловым синим и цитратным буфером, которая меняет свой цвет от желтого до синего в зависимости от содержания белка в моче. Ориентировочно концентрацию белка в исследуемой моче определяют с помощью стандартной шкалы. Для получения правильных результатов необходимо соблюдать следующие условия. рН мочи должна быть в пределах 3,0—3,5; при слишком щелочной моче (рН 6,5) будет получен ложноположительный результат, а при слишком кислой моче (рН 3,0) — ложноотрицательный.

Бумага должна находиться в контакте с исследуемой мочой не дольше, чем указано в инструкции, в противном случае тест даст ложноположительную реакцию. Последнюю также наблюдают и при содержании в моче большого количества слизи. Чувствительность различных видов и серий бумаги может быть различной, поэтому к количественной оценке белка в моче этим методом следует относиться осторожно. Определение его количества в суточной моче при помощи индикаторной бумаги невозможно [Плетнева Н.Г., 1987]

Существует несколько способов определения количества белка, выделившегося с мочой за сутки. Наиболее простым является метод Брандберга —Робертса—Стольникова.

Методика. 5-10 мл тщательно перемешанной суточной мочи наливают в пробирку и осторожно по стенкам ее добавляют 30 % раствор азотной кислоты. При наличии белка в моче в количестве 0,033 % (т.е. 33 мг на 1 л мочи) через 2-3 мин появляется тонкое, но четко видимое белое кольцо. При меньшей его концентрации проба отрицательная. При большем содержании белка в моче его количество определяют путем многократных разведений мочи дистиллированной водой до тех пор, пока не перестанет образовываться кольцо. В последней пробирке, в которой еще видно кольцо, концентрация белка будет составлять 0,033 %. Умножив 0,033 на степень разведения мочи, определяют содержание белка в 1 л неразведенной мочи в граммах. Затем рассчитывают содержание белка в суточной моче по формуле:

где К — количество белка в суточной моче (г); х — количество белка в 1 л мочи (г); V — количество мочи, выделенное за сутки (мл).

В норме в течение суток с мочой выделяется от 27 до 150 мг (в среднем 40—80 мг) белка.

Указанная проба позволяет определить в моче только мелкодисперсные белки (альбумины). Более точные количественные методы (колориметрический метод Кьельдаля и др.) довольно сложны и требуют специальной аппаратуры.

При почечной протеинурии с мочой выделяются не только альбумины, но и другие виды белка. Нормальная протеинограмма (по Зейцу и соавт., 1953) имеет следующее процентное содержание: альбуминов — 20 %, α₁-глобулинов — 12 %, α₂-глобулинов — 17 %, γ-глобулинов — 43 % и β-глобулинов — 8 %. Отношение альбуминов к глобулинам изменяется при различных заболеваниях почек, т.е. нарушается количественное соотношение между белковыми фракциями.

Наиболее распространенными методами фракционирования уропротеинов являются следующие: высаливание нейтральными солями, электрофоретическое фракционирование, иммунологические методы (реакция радиальной иммунодиффузии по Манчини, иммуноэлектрофоретический анализ, преципитационный иммуноэлектрофорез), хроматография, гель-фильтрация, а также ультрацентрифугирование.

В связи с внедрением методов фракционирования уропротеинов, основанных на изучении электрофоретической подвижности, вариабильности молекулярной массы, размеров и формы молекул уропротеинов, появилась возможность выделять характерные для того или иного заболевания типы протеинурии, изучать клиренсы индивидуальных плазменных белков. К настоящему времени в моче идентифицировано свыше 40 плазменных белков, В том числе в нормальной моче 31 плазменный белок [Berggard, 1970].

В последние годы появилось понятие селективности протеинурии. В 1955 г. Hardwicke и Squire сформулировали понятие «селективная» и «неселективная» протеинурия, определив, что фильтрация плазменных белков в мочу подчиняется определенной закономерности: чем больше молекулярная масса белка, экскретируемого в мочу, тем меньше его клиренс и тем ниже концентрация его в окончательной моче. Протеинурия, соответствующая этой закономерности, является селективной в отличие от неселективной, для которой характерным является извращение выведенной закономерности.

Обнаружение в моче белков с относительно большой молекулярной массой свидетельствует об отсутствии избирательности почечного фильтра и выраженном его поражении. В этих случаях говорят о низкой селективности протеинурии. Поэтому в настоящее время широкое распространение получило определение белковых фракций мочи с использованием методов электрофореза в крахмальном и полиакриламидном геле. По результатам этих методов исследования можно судить о селективности протеинурии.

По данным В.С.Махлиной (1975), наиболее оправданным является определение селективности протеинурии путем сравнения клиренсов 6—7 индивидуальных белков плазмы крови (альбумина, транеферрина, α₂ — макроглобулина, IgA, IgG, IgM) с использованием точных и специфичных количественных иммунологических методов реакции радиальной иммунодиффузии по Манчини, иммуноэлектрофоретического анализа и преципитального иммуноэлектрофореза. Степень селективности протеинурии определяют по индексу селективности, представляющего собой отношение сравниваемого и эталонного белков (альбумина).

Изучение клиренсов индивидуальных плазменных белков позволяет получить достоверные сведения о состоянии фильтрационных базальных мембран клубочков почки. Связь между характером экскретируемых в мочу белков и изменениями базальных мембран клубочков настолько выражена и постоянна, что по уропротеинограмме можно косвенно судить о патофизиологических изменениях в клубочках почек. В норме средний размер пор гломерулярной базальной мембраны составляет 2,9—4 А° НМ, которые могут пропускать белки, имеющие молекулярную массу до 10 4 (миоглобулин, кислый α₁ — гликопротеин, легкие цепи иммуноглобулинов, Fc и Fab — фрагменты IgG, альбумин и трансферрин).

При гломерулонефрите, нефротическом синдроме размеры пор в базальных мембранах клубочков увеличиваются, в связи с чем базальная мембрана становится проницаемой для белковых молекул большого размера и массы (церулоплазмин, гаптоглобин, IgG, IgA и др.). При крайней степени повреждения клубочков почек в моче появляются гигантские молекулы белков плазмы крови (α₂-макроглобулин, IgM и β₂-липопротеин).

Определяя белковый спектр мочи, можно сделать заключение о преимущественном поражении тех или иных участков нефрона. Для гломерулонефрита с преимущественным поражением гломерулярных базальных мембран характерно наличие в моче крупно- и среднемолекулярных белков. Для пиелонефрита с преимущественным поражением базальных мембран канальцев характерны отсутствие крупномолекулярных и наличие повышенных количеств средне- и низкомолекулярных белков.

Концентрацию этого белка в плазме крови и моче определяют радиоиммунологическим методом с помощью стандартного набора «Phade-bas β₂-mikroiest» (фирма «Pharmaсia», Швеция). В сыворотке крови здоровых людей содержится в среднем 1,7 мг/л (колебания от 0,6 до 3 мг/л), в моче — в среднем 81 мкг/л (максимально 250 мкг/л) β₂-микроглобулина. Превышение его в моче свыше 1000 мкг/л — явление патологическое. Содержание β₂-микроглобулина в крови увеличивается при заболеваниях, сопровождающихся нарушением клубочковой фильтрации, в частности при остром и хроническом гломерулонефрите, поликистозе почек, нефросклерозе, диабетической нефропатии, острой почечной недостаточности.

Концентрация β₂-микроглобулина в моче повышается при заболеваниях, сопровождающихся нарушением реабсорбционной функции канальцев, что приводит к увеличению экскреции его с мочой в 10—50 раз, в частности, при пиелонефрите, ХПН, гнойной интоксикации и др. Характерно, что при цистите в отличие от пиелонефрита не наблюдается увеличения концентрации β₂-микроглобулина в моче, что может быть использовано для дифференциальной диагностики этих заболеваний. Однако при интерпретации результатов исследования надо учитывать, что любое повышение температуры всегда сопровождается увеличением экскреции β₂-микроглобулина с мочой.

Средние молекулы (СМ), иначе называемые белковыми токсинами, представляют собой вещества с молекулярной массой 500—5000 дальтон. Физическая структура их неизвестна. В состав СМ входят по меньшей мере 30 пептидов: окситоцин, вазопрессин, ангиотензин, глюкагон, адренокортикотропный гормон (АКТГ) и др. Избыточное накопление СМ наблюдается при снижении функции почек и содержании в крови большого количества деформированных белков и их метаболитов. Они обладают разнообразным биологическим действием и нейротоксичны, вызывают вторичную иммунодепрессию, вторичную анемию, угнетают биосинтез белка и эритропоэз, тормозят активность многих ферментов, нарушают течение фаз воспалительного процесса.

Уровень СМ в крови и моче определяют скрининговым тестом, а также путем спектрофотометрии в ультрафиолетовой зоне по длине волны 254 и 280 мм на спектрофотометре ДИ-8Б, а также динамической спектрофотометрии с компьютерной обработкой в диапазоне волн 220—335 нм на том же спектрометре фирмы Beckman. За норму принимают содержание СМ в крови, равное 0,24 ± 0,02 усл. ед., а в моче — 0,312 ± 0,09 усл. ед.
Будучи нормальными продуктами жизнедеятельности организма, они удаляются из него в норме ночками путем гломерулярной фильтрации на 0,5 %; 5 % их утилизируется другим путем. Все фракции СМ подвергаются канальцевой реабсорбции.

Кроме белков плазмы крови, в моче могут быть неплазменные (тканевые) протеины. По данным Buxbaum и Franklin (1970), неплазменные белки составляют приблизительно 2/3 всех биоколлоидов мочи и значительную часть уропротеинов при патологической протеинурии. Тканевые белки попадают в мочу непосредственно из почек или органов, анатомически связанных с мочевыми путями, или попадают из других органов и тканей в кровь, а из нее через базальные мембраны клубочков почки — в мочу. В последнем случае экскреция в мочу тканевых протеинов происходит аналогично выведению плазменных белков различной молекулярной массы. Состав неплазменных уропротеинов чрезвычайно разнообразен. Среди них гликопротеины, гормоны, антигены, ферменты (энзимы).

Тканевые протеины в моче выявляют с помощью обычных методов белковой химии (ультрацентрифугирование, гель-хроматография, различные варианты электрофореза), специфических реакций на ферменты и гормоны и иммунологических методов. Последние позволяют также определить концентрацию неплазменного уропротеина в моче и в ряде случаев определить тканевые структуры, ставшие источником его появления. Основным методом выявления в моче неплазменного белка является иммунодиффузионный анализ с антисывороткой, полученной иммунизацией экспериментальных животных мочой человека и истощенной (адсорбированной) в последующем белками плазмы крови.

При патологическом процессе наблюдаются глубокие нарушения жизнедеятельности клеток, сопровождающиеся выходом внутриклеточных ферментов в жидкостные среды организма. Энзимодиагностика базируется на определении ряда ферментов, выделившихся из клеток пораженных органов и не свойственных сыворотке крови.
Исследования нефрона человека и животных показали, что в отдельных его частях имеется высокая ферментативная дифференциация, тесно связанная с функциями, которые выполняет каждый отдел. В клубочках почки содержится относительно небольшое количество различных энзимов.

Клетки почечных канальцев, особенно проксимальных отделов, содержат максимальное количество энзимов. Высокая их активность наблюдается в петле Генле, прямых канальцах и собирательных трубочках. Изменения активности отдельных энзимов при различных заболеваниях почек зависят от характера, остроты и локализации процесса. Они наблюдаются до появления морфологических изменений в почках. Поскольку содержание различных ферментов четко локализовано в нефроне, определение того или иного фермента в моче может способствовать топической диагностике патологического процесса в почках (клубочки, канальцы, корковый или мозговой слой), дифференциальной диагностике почечных заболеваний и определению динамики (затухание и обострение) процесса в почечной паренхиме.

Дли дифференциальной диагностики заболеваний органов мочеполовой системы применяют определение активности в крови и моче следующих ферментов: лактатдегидрогеназы (ЛДГ), лейцинаминопептидазы (ЛАП), кислой фосфатазы (КФ), щелочной фосфатазы (ЩФ), β-глюкуронидазы, глютамино-щавелевоуксусной трансаминазы (ГЩТ), альдолазы, трансамидиназы и др. Активность ферментов в сыворотке крови и в моче определяют с помощью биохимических, спектрофотометрических, хроматографических, флуориметрических и хемилюминесцентных методов.

Энзимурия при заболеваниях почек более выражена и закономерна, чем энзимемия. Она особенно сильно выражена в острой стадии заболевания (острый пиелонефрит, травма, распад опухоли, инфаркт почки и т.д.). При этих заболеваниях обнаруживается высокая активность трансамидиназы, ЛДГ, ЩФ и КФ, гиалуронидазы, ЛАП, а также таких неспецифических энзимов, как ГЩТ, каталаза [Полянцева Л.Р., 1972].

Селективная локализация ферментов в нефроне при обнаружении ЛАП и ЩФ в моче позволяет с уверенностью говорить об острых и хронических заболеваниях почек (острая почечная недостаточность, некроз почечных канальцев, хронический гломерулонефрит) [Шеметов В.Д., 1968]. По данным А.А.Карелина и Л.Р.Полянцевой (1965), трансамидиназа содержится лишь в двух органах — почке и поджелудочной железе. Она является митохондриальным ферментом почек и в норме в крови и моче отсутствует. При различных заболеваниях почек трансамидиназа появляется в крови и в моче, а при поражении поджелудочной железы — только в крови.

Дифференциальным тестом в диагностике гломерулонефрита и пиелонефрита Krotkiewski (1963) считает активность ЩФ в моче, повышение которой более характерно для пиелонефрита и диабетического гломерулосклероза, чем для острого и хронического нефрита. Нарастающая в динамике амилаземия при одновременном снижении амилазурии может указывать на нефросклероз и сморщивание почки, ЛАП имеет наибольшее значение при патологических изменениях в клубочках и извитых канальцах почки, поскольку содержание ее в этих отделах нефрона более высокое [Шепотиновский В.П. и др., 1980]. Для диагностики волчаночного нефрита рекомендуется определение β-глюкуронидазы и КФ [Приваленко М.Н. и др., 1974].

При оценке роли энзимурии в диагностике заболеваний почек следует учитывать следующие положения. Энзимы, будучи по своей природе белками, при малой молекулярной массе могут проходить через неповрежденные клубочки, определяя так называемую физиологическую энзимурию. Среди этих энзимов постоянно определяются в моче α-амилаза (относительная молекулярная масса 45 ООО) и уропепсин (относительная молекулярная масса 38000).

Наряду с низкомолекулярными энзимами в моче здоровых лиц могут быть обнаружены в небольшой концентрации и другие энзимы: ЛДГ, аспартат- и аланинаминотрансферазы, ЩФ и КФ, мальтаза, альдолаза, липаза, различные протеазы и пептидазы, сульфатаза, каталаза, рибонуклеаза, пероксидаза [King, Воусе, 1963].

Высокомолекулярные энзимы с относительной молекулярной массой больше 70000-100000, по мнению Richterich (1958) и Hess (1962), могут проникать в мочу лишь при нарушении проницаемости клубочкового фильтра. Нормальное содержание ферментов в моче не позволяет исключить патологический процесс в почке при окклюзии мочеточника. При эпзимурии возможен выход энзимов не только из самих почек, но и из других паренхиматозных органов, клеток слизистых оболочек мочевых путей, предстательной железы, а также форменных элементов мочи при гематурии или лейкоцитурии.

Большинство энзимов неспецифично по отношению к почке, поэтому откуда происходят энзимы, обнаруженные в моче здоровых и больных, установить трудно. Однако степень энзимурии даже дли неспецифичных энзимов при поражении почек бывает выше нормы или той, которая наблюдается при заболеваниях других органов. Более ценную информацию может дать комплексное исследование в динамике ряда ферментов, особенно органоспецифичных, таких как трансаминаза.

В решении вопроса о почечном происхождении энзима в моче помогает исследование изоэнзимов с выявлением фракций, типичных для изучаемого органа. Изоэнзимы — это энзимы, изогенные по действию (катализируют одну и ту же реакцию), но гетерогенные по химической структуре и другим свойствам. Каждая ткань имеет характерный для нее изоэнзимный спектр. Ценными методами разделения изоэнзимов являются электрофорез в крахмальном и полиакриламидном геле, а также ионообменная хроматография.

При миеломной болезни и макроглобулинемии Вальденстрема в моче обнаруживают белок Бенс-Джонса. Метод обнаружения названного белка в моче основан на реакции термопреципитации. Применявшиеся ранее методы, с помощью которых оценивают растворение этого белка при температуре 100 °С и повторное осаждение при последующем охлаждении, ненадежны, так как не все белковые тела Бенс-Джонса обладают соответствующими свойствами.

Более достоверно выявление этого парапротеина путем осаждения его при температуре 40 -60 °С. Однако и в этих условиях осаждения может не произойти в слишком кислой (рН 6,5) моче, при низкой ОПМ и низкой концентрации белка Бенс-Джонса. Наиболее благоприятные условия для его осаждения обеспечивает методика, предложенная Patnem: 4 мл профильтрованной мочи смешивают с 1 мл 2 М ацетатного буфера рН 4,9 и согревают 15 мин на водяной бане при температуре 56 °С. При наличии белка Бенс-Джонса в течение первых 2 мин появляется выраженный осадок.

При концентрации белка Бенс-Джонса меньше 3 г/л проба может быть отрицательной, но на практике это встречается крайне редко, поскольку его концентрация в моче, как правило, более значительна. На пробы с кипячением нельзя вполне полагаться. С полной достоверностью он может быть обнаружен в моче иммуно-электрофоретическим методом с использованием специфических сывороток против тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов.

источник

В каталоге медицинского оборудования Юнимед вы можете подобрать и купить набор реагентов для определения белка в моче в Москве с доставкой. Более 6 позиций от 550 рублей — фотографии, подробное описание и характеристики.

Набор реагентов «Юни-Тест-БМ» предназначен для количественного определения белка в моче (диагностика протеинурии) и спинномозговой жидкости современным, высокочувствительным методом – пирогаллоловый красный. Это метод, точность измерений и правильность полученных результатов, которым соответствует Приказу МЗ РФ №45 от 07.02.2000 и ОСТ 91500.13.0001-2003.

Реагент – раствор красителя пирогаллолового красного и молибдата натрия в сукцинатном буфере; 1 флакон, 500 мл
Калибратор1 г/л – калибровочный раствор общего белка 1 г/л; 1 флакон, 5 мл
Калибратор0,2 г/л – калибровочный раствор общего белка 0,2 г/л; 1 флакон, 5 мл

Линейный диапазон определения общего белка до 4 г/л, что позволяет определять общий белок в моче в диапазоне от 0, 05 г/л до 4 г/л без дополнительных разведений
Для работы используется малый объем биологического материала — 20 мкл
Время инкубации проб сокращено до 10 мин при температуре 18-25 о С или 37 о С
Срок годности калибратора после вскрытия флакона — до 3 месяцев при 4-8 о С
Возможность использования на фотометрах любого типа
Все компоненты набора готовы к использованию

Мы рады сообщить Вам, что во втором выпуске журнала «Справочник Заведующего КДЛ», Вы можете ознакомиться со статьей А.Н. Шибанова «Определение референтного интервала концентрации белка в моче»

На прошедшей неделе генеральный директор А/О Юнимед посетил один из самых популярных курортов Кавказских Минеральных вод — г. Ессентуки. Подробнее о визите Александра Николаевича читайте в нашем репортаже.

Из этого репортажа Вы узнаете о том, почему специалисты компании Юнимед на два дня сменили место работы на клинико-диагностическую лабораторию крупнейшего стационара города Москвы, и что из этого получилось.

Ратуете за внедрение прогрессивных методик в практику лабораторной диагностики? — Нам с Вами по пути!

Общий клинический анализ мочи является одним из наиболее часто выполняемых видов лабораторных исследований в поликлинике.

28 и 29 мая 2009 года в Москве состоялась II научно-практическая конференция «Современные технологии и методы диагностики различных групп заболеваний, лабораторный анализ».

Клиническое значение протеинурии – это тема, которая уже не одно десятилетие вызывает активную дискуссию врачей разных стран. В данной статье, опубликованной в «Американском журнале семейных врачей», изложено мнение наших зарубежных коллег о проблеме диагностики протеинурии у взрослых.

В норме белок выделяется с мочой в относительно небольшом количестве, обычно не более 100–150 мг/сут. Общий белок мочи представлен тремя основными фракциями – альбуминами, мукопротеинами и глобулинами.

Альбуминурия (albuminuria; альбумин + греч. uron моча) — выделение с мочой альбумина.

Клинические испытания набора реагентов для определения белка в моче «Юни-Тест-БМ» проводились на 4-х клинических базах.

Указанные на сайте цены не включают доставку товара и установку приборов. Приведенные характеристики товаров, включая изображения, представлены исключительно для ознакомления и могут отличаться от реальных. Для получения более подробной информации, пожалуйста, обращайтесь к сотрудникам компании. Данный сайт не является средством массовой информации (СМИ). Вся представленная информация не является публичной офертой.

Юр. адрес: 129301, Москва, ул. Касаткина, 3а
Телефон: +7 (495) 734-91-31
Email: office@unimedao.ru

Все материалы на данном ресурсе разрешено использовать только при условии указания источника.

источник

Патологическая протеинурия является одним из наиболее важных и постоянных признаков заболеваний почек и мочевых путей. Определение концентрации белка в моче является обязательным и важным элементом исследования мочи. Выявление и количественная оценка протеинурии важна не только в диагностике многих первичных и вторичных заболеваний почек, оценка изменения выраженности протеинурии в динамике несет информацию о течении патологического процесса, об эффективности проводимого лечения. Обнаружение белка в моче даже в следовых количествах должно настораживать в отношении возможного заболевания почек или мочевых путей и требует повторного анализа. Особо следует отметить бессмысленность исследования мочи и, в частности, определения белка мочи без соблюдения всех правил ее сбора.

Все методы определения белка в моче можно разделить на:

Качественные,
Полуколичественные,
Количественные.

Все качественные пробы на белок в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. При наличии белка в исследуемом образце мочи появляется либо помутнение, либо выпадение хлопьевидного осадка.

Условия определения белка в моче на основе реакции коагуляции:

Моча должна иметь кислую реакцию. Мочу щелочной реакции подкисляют несколькими (2 — 3) каплями уксусной кислоты (5 – 10%).
Моча должна быть прозрачной. Помутнение устраняется через бумажный фильтр. Если помутнение не исчезает, добавляют тальк или жженую магнезию (около 1 чайной ложки на 100 мл мочи), взбалтывают и фильтруют.
Качественную пробу следует проводить в двух пробирках, одна из них – контрольная.
Искать помутнение следует на черном фоне в проходящем свете.

К качественным методам определения белка в моче относятся:

Как показывают многочисленные исследования, ни один из большого числа известных методов качественного определения белка в моче не позволяет получать надежные и воспроизводимые результаты. Несмотря на это, в большинстве КДЛ в России эти методы широко используются в качестве скрининга – в моче с положительной качественной реакцией в дальнейшем проводят количественное определение белка. Из качественных реакций чаще используют пробу Геллера и пробу с сульфосалициловой кислотой, однако пробу с сульфосалициловой кислотой большей частью считают наиболее подходящей для выявления патологической протеинурии. Проба с кипячением в настоящее время практически не используется в связи с ее трудоемкостью и длительностью.

В основе метода Брандберга-Робертса-Стольникова лежит кольцевая проба Геллера, поэтому при данном методе наблюдаются те же ошибки, что и при пробе Геллера.

В настоящее время для определения белка в моче все чаще используются диагностические полоски. Для полуколичественного определения белка в моче на полоске в качестве индикатора чаще всего используется краситель бромфеноловый синий в цитратном буфере. О содержании белка в моче судят по интенсивности сине-зеленой окраски, развивающейся после контакта реакционной зоны с мочой. Результат оценивается визуально или с помощью анализаторов мочи. Несмотря на большую популярность и очевидные преимущества методов сухой химии (простота, скорость выполнения анализа) данные методы анализа мочи в целом и определения белка в частности не лишены серьезных недостатков. Одним из них, приводящих к искажению диагностической информации, является большая чувствительность индикатора бромфенолового синего к альбумину по сравнению с другими белками. В связи с этим, тест-полоски в основном приспособлены к обнаружению селективной гломерулярной протеинурии, когда практически весь белок мочи представлен альбумином. При прогрессировании изменений и переходе селективной гломерулярной протеинурии в неселективную (появление в моче глобулинов) результаты определения белка оказываются заниженными по сравнению с истинными значениями. Данный факт не дает возможности использовать данный метод определения белка в моче для оценки состояния почек (гломерулярного фильтра) в динамике. При тубулярной протеинурии результаты определения белка также оказываются заниженными. Определение белка с помощью диагностических полосок не является надежным индикатором низких уровней протеинурии (большинство выпускаемых в настоящее время диагностических полосок не обладают способностью улавливать белок в моче в концентрации ниже, чем 0,15 г/л). Отрицательные результаты определения белка на полосках не исключают присутствия в моче глобулинов, гемоглобина, уромукоида, белка Бенс-Джонса и других парапротеинов.

Хлопья слизи с высоким содержанием гликопротеидов (например, при воспалительных процессах в мочевых путях, пиурии, бактериурии) могут оседать на индикаторной зоне полоски и приводить к ложноположительным результатам. Ложноположительные результаты могут также быть связаны с высокой концентрацией мочевины. Плохое освещение и нарушение цветоощущения может быть причиной неточного результата.

В связи с этим, использование диагностических полосок следует ограничить скринирующими процедурами, а результаты, полученные с их помощью, следует рассматривать лишь как ориентировочные.

Корректное количественное определение белка в моче в ряде случаев оказывается непростой задачей. Трудности ее решения определяются следующим рядом факторов:

низким содержанием белка в моче здорового человека, часто находящимся на пороге чувствительности большинства известных методов;
присутствием в моче множества соединений, способных вмешиваться в ход химических реакций;
значительными колебаниями содержания и состава белков мочи при различных заболеваниях, затрудняющими выбор адекватного калибровочного материала.

В клинических лабораториях преимущественно применяются так называемые «рутинные» методы определения белка в моче, однако они далеко не всегда позволяют получать удовлетворительные результаты.

С точки зрения специалиста-аналитика, работающего в лаборатории, метод, предназначенный для количественного определения белка в моче, должен отвечать следующим требованиям:

обладать линейной зависимостью между поглощением образовавшегося в ходе химической реакции комплекса и содержанием белка в пробе в широком диапазоне концентраций, что позволит избежать дополнительных операций при подготовке пробы к исследованию;
должен быть прост, не требовать высокой квалификации исполнителя, выполняться при малом количестве операций;
обладать высокой чувствительностью, аналитической надежностью при использовании небольших объемов исследуемого материала;
быть устойчивым к воздействию различных факторов (колебаниям состава образца, присутствию лекарственных препаратов и др.);
обладать приемлемой стоимостью;
быть легко адаптируемым к автоанализаторам;
результат определения не должен зависеть от белкового состава исследуемого образца мочи.

Ни один из известных к настоящему времени методов количественного определения белка в моче не может в полной мере претендовать на роль «золотого стандарта».

Количественные методы определения белка в моче можно разделить на турбидиметрические и колориметрические.

К турбидиметрическим методам относятся:

определение белка с сульфосалициловой кислотой (ССК),
определение белка с трихлоруксусной кислотой (ТХУ),
определение белка с бензетоний хлоридом.

Турбидиметрические методы основаны на снижении растворимости белков мочи вследствие образования суспензии взвешенных частиц под воздействием преципитирующих агентов. О содержании белка в исследуемой пробе судят либо по интенсивности светорассеяния, определяемого числом светорассеивающих частиц (нефелометрический метод анализа), либо по ослаблению светового потока образовавшейся суспензией (турбидиметрический метод анализа).

Величина светорассеяния в преципитационных методах обнаружения белка в моче зависит от множества факторов: скорости смешивания реактивов, температуры реакционной смеси, значения pH среды, присутствия посторонних соединений, способов фотометрии. Тщательное соблюдение условий реакции способствует образованию стабильной суспензии с постоянным размером взвешенных частиц и получению относительно воспроизводимых результатов.

Некоторые лекарственные препараты влияют на результаты турбидиметрических методов определения белка в моче, приводя к так называемым «ложноположительным», либо «ложноотрицательным» результатам. К ним относятся некоторые антибиотики (бензилпенициллин, клоксациллин и др.), рентгеноконтрастирующие йодсодержащие вещества, сульфаниламидные препараты.

Турбидиметрические методы плохо поддаются стандартизации, часто приводят к получению ошибочных результатов, но, несмотря на это, в настоящее время они широко используются в лабораториях из-за невысокой стоимости и доступности реактивов. Наиболее широко в России используется метод определения белка с сульфосалициловой кислотой.

Наиболее чувствительными и точными являются колориметрические методы определения общего белка мочи, основанные на специфических цветных реакциях белков.

биуретовая реакция,
метод Лоури,
методы, основанные на способности различных красителей образовывать комплексы с белками:
- Понсо S (Ponceau S),
- Кумасси бриллиантовый синий (Coomassie Brilliant Blue)
- пирогаллоловый красный (Pyrogallol Red).

С точки зрения исполнителя, в повседневной работе лаборатории при большом потоке исследований биуретовый метод является неудобным из-за большого числа операций. В то же время, метод характеризуется высокой аналитической надежностью, позволяет определять белок в широком диапазоне концентраций и выявлять альбумин, глобулины и парапротеины со сравнимой чувствительностью, вследствие чего биуретовый метод рассматривают в качестве референтного и рекомендуют для сравнения других аналитических методов обнаружения белка в моче. Биуретовый метод определения белка в моче предпочтительно выполнять в лабораториях, обслуживающих нефрологические отделения, и использовать в тех случаях, когда результаты определения с помощью других методов представляются сомнительными, а также для определения величины суточной потери белка у нефрологических больных.

Метод Лоури, обладающий более высокой чувствительностью по сравнению с биуретовым методом, сочетает биуретовую реакцию и реакцию Фолина на аминокислоты тирозин и триптофан в составе белковой молекулы. Несмотря на высокую чувствительность, данный метод не всегда обеспечивает получение надежных результатов при определении содержания белка в моче. Причиной тому служит неспецифическое взаимодействие реактива Фолина с небелковыми компонентами мочи (чаще всего аминокислотами, мочевой кислотой, углеводами). Отделение этих и других компонентов мочи путем диализа или осаждения белков позволяет с успехом использовать данный метод для количественного определения белка в моче. Некоторые лекарственные препараты – салицилаты, хлорпромазин, тетрациклины способны оказывать влияние на данный метод и извращать результаты исследования.

Достаточная чувствительность, хорошая воспроизводимость и простота определения белка по связыванию красителей делают эти методы перспективными, однако высокая стоимость реактивов препятствует более широкому их использованию в лабораториях. В настоящее время в России все большее распространение получает метод с пирогаллоловым красным.

Проводя исследование уровня протеинурии, нужно иметь ввиду, что различные методы определения протеинурии имеют разную чувствительность и специфичность к многочисленным белкам мочи.

Исходя из эмпирических данных, рекомендуется определять белок двумя разными методами и рассчитывать истинное значение по одной из приведенных формул:

протеинурия = 0,4799 B + 0,5230 L;
протеинурия = 1,5484 B – 0,4825 S;
протеинурия = 0,2167 S + 0,7579 L;
протеинурия = 1,0748 P – 0,0986 B;
протеинурия = 1,0104 P – 0,0289 S;
протеинурия = 0,8959 P + 0,0845 L;

где:
B – результат измерения с Кумасси G-250;
L — результат измерения с реактивом Лоури;
P — результат измерения с молибдатом пирогаллола;
S — результат измерения с сульфосалициловой кислотой.

Учитывая выраженные колебания уровня протеинурии в различное время суток, а также зависимость концентрации белка в моче от диуреза, различное его содержание в отдельных порциях мочи, в настоящее время при патологии почек принято оценивать выраженность протеинурии по суточной потере белка с мочой, то есть определять так называемую суточную протеинурию. Она выражается в г/сут.

При невозможности сбора суточной мочи рекомендуется определять в разовой порции мочи концентрации белка и креатинина. Поскольку скорость выделения креатинина в течение дня достаточно постоянна и не зависит от изменения скорости мочеотделения, отношение концентрации белка к концентрации креатинина постоянно. Данное отношение хорошо коррелирует с суточной экскрецией белка и, следовательно, может использоваться для оценки выраженности протеинурии. В норме отношение белок/креатинин должно быть менее 0,2. Белок и креатинин измеряют в г/л. Важным достоинством метода оценки выраженности протеинурии по соотношению белок-креатинин является полное исключение ошибок, связанных с невозможностью или неполным сбором суточной мочи.

О. В. Новоселова, М. Б. Пятигорская, Ю. Е. Михайлов, «Клинические аспекты выявления и оценки протеинурии», Справочник заведующего КДЛ, № 1, январь 2007 г.
А. В. Козлов, «Протеинурия: методы ее выявления», лекция, Санкт-Петербург, СПбМАПО, 2000 г.
В. Л. Эмануэль, «Лабораторная диагностика заболеваний почек. Мочевой синдром», — Справочник заведующего КДЛ, № 12, декабрь 2006 г.
В.И. Пупкова, Л.М. Прасолова — Определение белка в моче и спинномозговой жидкости. Кольцово, 2007 г.
Справочник по клиническим лабораторным методам исследования. Под ред. Е. А. Кост. Москва, «Медицина», 1975 г.

Для количественного определения белка пригоден любой образец мочи. Большинство исследователей для выяснения величины суточной потери белка предпочитают определять содержание белка в моче, собранной за сутки.

Раздел: Анализ мочи

Все качественные пробы на белок в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. При наличии белка в исследуемом образце мочи появляется либо помутнение, либо выпадение хлопьевидного осадка.

Раздел: Анализ мочи

Проба с 20% сульфосалициловой кислотой относится к качественным реакциям определения белка в моче. Так как она основана на реакции коагуляции, то исследуемая моча должна соответствовать определенным требованиям: быть прозрачной и иметь кислую реакцию.

Раздел: Анализ мочи

Кольцевая проба Геллера относится к качественным реакциям определения белка в моче. Так как она основана на реакции коагуляции, то исследуемая моча должна соответствовать определенным требованиям: быть прозрачной и иметь кислую реакцию.

Раздел: Анализ мочи

источник