Меню Рубрики

Камера для подсчета клеток мочи

Слайд-планшеты используют для микроскопического исследования осадка мочи методом Нечипоренко, перитонеальной и синовиальной жидкости, эксудатов, транссудатов и других биологических жидкостей.

Пластиковый слайд-планшет содержит 10 камер для микроскопического исследования нативных или суправитально окрашенных препаратов, приготовленных из биологических жидкостей.

Каждая камера слайд-планшета покрыта тонкой, идеально прозрачной пластиковой пластинкой, играющей роль покровного стекла. Расстояние между поверхностью слайд-планшета и покровным стеклом позволяет клеточным элементам располагаться однослойно.

Длина слайд-планшета 8 см, ширина – 3 см, толщина – 1,7 мм, что примерно соответствует размерам предметных стекол для микроскопии. Например: в 9-ти окружностях камеры слайд-планшета подсчитано 8 эритроцитов, следовательно в 1 мкл жидкости содержится 80 эритроцитов.

Подсчет общего количества клеточных элементов в биологических жидкостях с использованием одной или двух серий окружностей можно производить на малом увеличении микроскопа (окуляр х10, объектив х8 или х10). Дифференциацию клеточных элементов (подсчет лейкоцитарной формулы и количества эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров и других клеточных элементов) ориентировочно можно произвести, используя объектив х20 и окуляры х10. Более точная дифференциация клеток проводится на большом увеличении микроскопа (объектив х40 и окуляры х10).

В каждой камере слайд-планшета слева расположены две серии окружностей, по 9 в каждой. Они видны в проходящем свете и на малом увеличении микроскопа. На большом увеличении микроскопа (окуляр х10 и объектив х40) одна окружность занимает все поле зрения.

Каждая окружность имеет диаметр 0,376 мм, объем одной окружности — 0,011 мкл. Объем каждой серии окружностей составляет 0,011х 9 = 0,099 мкл или ≈ 0,1 мкл. Следовательно, если количество клеточных элементов, подсчитанных в 9 окружностях камеры умножить на 10, то получается содержание клеточных элементов в 1 мкл исследуемой жидкости.

В одной упаковке 100 штук слайд-планшет.

Комфортность и удобство при работе;

При работе со слайд-планшетами не используются предметные и покровные стекла;

Исследование осадка мочи в слайд-планшете позволяет одновременно определить количество клеточных элементов в 1 мл мочи (число Нечипоренко) и получить представление о количестве форменных элементов в поле зрения или в препарате;

Быстрое и достаточно точное определение увеличенного количества клеток в ликворе (плеоцитоз);

Подсчет и дифференциальная диагностика клеток в ликворе и в осадке мочи требуют для каждого анализа пришлифовывать покровное стекло к камере, что вызывает затруднение в работе и отнимает время. Подсчет и дифференциальная диагностика клеток в камере слайд-планшета производится под фиксированным покровным стеклом.

Доставленная в лабораторию моча, собранная после туалета наружных половых органов (желательно средняя порция), аккуратно, без пены размешивается и переносится в 10 мл центрифужную пробирку. Если мочи мало, менее 10 мл, вся доставленная моча выливается в центрифужную пробирку.

Отцентрифугировать со скоростью 1500-2000 об/мин в течение 15 мин.

Надосадочную мочу с помощью пипетки отсосать и оставить в пробирке 1 мл мочи с осадком.

Содержимое пробирки тщательно без пены размешать той же пипеткой.

Каплей мочи с осадком заполнить камеру слайд-планшета. Остатки мочи удалить кусочком фильтровальной бумаги или ватным тампоном.

Слайд-планшет поместить на предметный столик микроскопа и при увеличении х200 или х400 произвести последовательно подсчет количества эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров.

Рассчитать количество форменных элементов в 1 мл мочи по формуле:
N=(x*10*1000)/v,

где:
N — количество форменных элементов в 1 мл мочи;
X — количество форменных элементов в одной серии (9 окружностей) в 0,1мкл;
V — количество мочи в мл, взятой для центрифугирования;
10 — коэффициент пересчета количества форменных элементов в 1 мкл мочи;
1000 — количество мочи в мкл, взятое для исследования.

Если для центрифугирования всегда берется 10 мл мочи, то можно пользоваться следующим вариантом формулы:

Нормальное количество форменных элементов мочи по Нечипоренко:
Лейкоциты — 2000 в 1 мл мочи;
Эритроциты — 1000 в 1 мл мочи;
Цилиндры — 20 в 1 мл мочи.

10-20 капель хорошо перемешанной спинномозговой жидкости поместить в центрифужную или видалевскую пробирку, внести, соответственно, 1-2 капли реактива Самсона и аккуратно, без пены перемешать.

Через 10-15 минут вновь перемешать содержимое пробирки и каплей перемешанного окрашенного ликвора заполнить камеру слайд-планшета.

Лишний ликвор удалить с поверхности слайд-планшета фильтровальной бумагой или ватным тампоном.

Подсчитать общее количество ликворных клеток (в зависимости от выраженности плеоцитоза*).

При слабом плеоцитозе, при условии, что клетки в камере распределены равномерно и попали в ячейки, можно подсчитать их количество в 18 ячейках камеры слайд-планшета. Полученное в 0,2 мкл ликвора количество клеток (в 18 ячейках) пересчитать на их содержание в 1 мкл ликвора по формуле:

где:
Х — количество клеток в 1 мкл ликвора;
А — количество клеток в 18 ячейках камеры слайд-планшета (в 0,2 мкл ликвора);
10 — цифра для получения количества клеток в 2 мкл;
2 — цифра для пересчета количества клеток на 1 мкл ликвора.

Если клеток очень много (умеренный или выраженный плеоцитоз), можно считать клетки в 9 ячейках камеры слайд-планшета и расчет производить по формуле: Х = В х 10, где:
Х — количество клеток в 1 мкл ликвора;
B — количество клеток в 9 ячейках камеры слайд-планшета (в 0,1 мкл ликвора);
10 — цифра для получения количества клеток в 1 мкл ликвора.

Если клетки покрывают все ячейки камеры (резко выраженный или массивный плеоцитоз), можно считать клетки в одной ячейке и расчет производить по формуле: Х = С х 9 х 10, где:
Х — количество клеток в 1 мкл ликвора;
C — количество клеток в одной ячейке камеры слайд-планшета;
9 — цифра для пересчета количества клеток в 9 ячейках камеры слайд-планшета;
10 — цифра для получения количества клеток в 1 мкл ликвора.

В нормальном ликворе взрослого человека практически отсутствуют клеточные элементы: в вентрикулярном ликворе 0-1 клетка/мкл, в субокципитальном — 2-3 клетки/мкл и люмбальном ликворе — 3-5 клеток/мкл. Содержание клеток в нормальном ликворе уменьшается в направлении от люмбального к субокципитальному, а в вентрикулярном — почти равно нулю.

Если клетки в камере слайд-планшета распределились неравномерно, нужно сосчитать клетки во второй серии окружностей и произвести перерасчет на 1 мкл ликвора.

В камере слайд-планшета при патологии обычно содержится достаточное количество клеток, позволяющее сосчитать лейкоформулу ликвора. Дифференциацию клеточных элементов необходимо производить при увеличении х 400. Результат выражается в процентах или в абсолютном количестве подсчитанных клеток. Например: общее количество клеток 39, из них: 15 нейтрофилов, 10 лимфоцитов, 5 моноцитов, 4 макрофага, 2 эозинофила и 3 плазматических клетки.

Если в камере слайд-планшета клеток мало (единичные) и решается вопрос о нормальном или патологическом количестве клеточных элементов в ликворе, необходимо провести подсчет в камере Фукса-Розенталя.

Поиск патологических клеточных элементов, тканевых клочков, комплексов клеток злокачественных новообразований, клеток арахноэндотелия, кристаллов всегда производится на малом увеличении микроскопа.

источник

Количественные методы определения клеток в единице объема до сих пор широко используются в работе лабораторий разных направлений. Проведено исследование для оценки воспроизводимости результатов подсчета с помощью камеры Горяева и пластиковых слайд планшетов для микроскопического исследования осадка мочи.

Количественные методы определения клеток в единице объема до сих пор широко используются в работе лабораторий разных направлений. Проведено исследование для оценки воспроизводимости результатов подсчета с помощью камеры Горяева и пластиковых слайд планшетов для микроскопического исследования осадка мочи.

Используя при подсчете клеточных элементов формулы из методического пособия производителя, были достигнуты хорошие результаты. Проведенные параллельные измерения показали, что работа с данными формулами позволяет точно определять количество клеточных элементов.

Количественные методы определения клеток в единице объема образцов биологических жидкостей и сегодня широко используются в работе лабораторий разных направлений — общеклинических, микробиологических и др.

В рамках клинико-лабораторных исследований выполняют подсчет

  • числа сперматозоидов в 1 мл эякулята,
  • числа лейкоцитов в ликворе
  • концентрацию спор возбудителя сибирской язвы В. anthracis в вакцинной культуре [3, 4].

Успеете скачать всё, что нужно, по демодоступу за 3 дня?

В начале прошлого века для подсчета клеток крови применялся аппарат Тома — Цейсса, на смену ему пришла камера Предтеченского и, наконец, с середины прошлого века для подсчета клеток стали использовать сетку камеры Горяева, состоящую из 225 больших квадратов, 25 из которых разграфлены на 16 маленьких [2]. До настоящего времени она является основным инструментом подсчета клеток при проведении анализа мочи по методу Нечипоренко [1].

Принцип формирования сеток во всех камерах один и тот же.

Камеры разделены на некоторое число квадратов, различным образом сгруппированных. Зная объем квадрата, можно произвести расчет и определить количество клеток в единице объема образца.

Контрольных материалов для оценки результатов исследования мочи по методу Нечипоренко не существует. Камеры не подвергаются калибровке, ни одна система внешней оценки качества не имеет в своем арсенале контрольных образцов, в работе с которыми нужно применять камеру Горяева.

Таким образом, оценить правильность полученных результатов — дело непростое.

Перед началом использования в работе пластиковых слайд-планшетов (Aptaca, Италия) для микроскопического исследования осадка мочи и других биологических жидкостей мы решили провести исследование, целью которого было оценить точность и воспроизводимость результатов подсчета.

В качестве материала для исследования были взяты образцы крови 16 больных.

Подсчет проводился тремя врачами клинической лабораторной диагностики, которые определяли количество лейкоцитов при помощи слайд-планшета и для сравнения — с использованием камеры Горяева.

В качестве контрольных использовались данные, полученные на автоматическом гематологическом анализаторе Сисмекс KX-21N.

Для проверочного исследования мы выбрали подсчет форменных элементов крови, а не мочи, в связи с тем что контроль их количества можно осуществить автоматизированным способом.

  • Камера Горяева предназначена для подсчета форменных элементов крови и клеточных элементов спинномозговой жидкости. Площадь камеры — 9 мм², глубина — 0,1 мм, объем — 0,9 мм³.
  • Слайд-планшет содержит ячейки, которые снабжены сеткой для подсчета (3×3 мм) и покрыты тонкой прозрачной пластиковой пластинкой. Каждая сетка поделена на 5 квадратов (1×1 мм), которые, в свою очередь, разделены на 9 маленьких квадратов (0,333×0,333 мм).

Подсчет велся согласно инструкции, опубликованной на сайте компании-производителя.

Среднее значение количества лейкоцитов:

  • полученное при исследовании на автоматическом анализаторе, составило 5950 ± 2407×109/л (M ± SD),
  • при подсчете с помощью камеры Горяева (среднее значение результатов анализа, выполненного тремя врачами) — 4916 ± 1794,4×109/л,
  • при использовании слайд-планшета (среднее значение, полученное тремя врачами) — 9477 ± 3624×109/л.

Результаты подсчета количества лейкоцитов с использованием камеры Горяева и с использованием слайд-планшета достоверно отличались от данных, полученных на автоматическом анализаторе Sysmex KX-21 N.

Результаты подсчета с помощью камеры Горяева и на автоматическом анализаторе, полученные двумя врачами из трех, достоверно не отличались, но существенно отличались от значений, полученных при работе со слайд-планшетом.

Особенно важно, что при использовании слайд-планшета были выше не только собственно средние значения числа лейкоцитов, но и дисперсия полученных результатов, оказавшаяся достоверно большей, чем дисперсия результатов, полученных с применением автоматического анализатора.

В литературе найти описание нашей проблемы или ее решение нам не удалось. Обратившись к производителю за разъяснениями, мы получили великолепную инструкцию, в которой имелись ответы на все наши вопросы.

Оказалось, что необходимо выбирать способ подсчета элементов в зависимости от клеточности образца.

  1. При высокой клеточности необходимо подсчитать количество элементов в 5 разных малых квадратах, строго следя за тем, чтобы подсчет не проводился в одних и тех же квадратах.
  2. При низкой клеточности необходимо подсчитать количество элементов в 10 разных малых квадратах, строго следя за тем, чтобы подсчет не проводился в одних и тех же квадратах.

Дальнейшие подсчеты ведутся согласно формулам, приведенным ниже.

Tμ = n / (k x N x 10) или Tml = (n x 1000) / (k x N x 10),

  • n — количество клеток, подсчитанных в малых квадратах;
  • N — количество малых квадратов, в которых велся подсчет;
  • k — 0,01111 — объем малого квадрата;
  • 10 — количество миллилитров мочи, подвергнутых центрифугированию;
  • Tμ — количество клеток в микролитре;
  • Tml — количество клеток в миллилитре.

Также методическое пособие содержит формулы для работы с образцами, которые не подвергаются центрифугированию:

Tμ = n / (k x N) или Tml = (n x 1000) /(k x N) .

Используя данный подход к подсчету клеточных элементов, мы смогли добиться хороших результатов. Проведенные параллельные измерения показали, что работа с данными формулами позволяет точно определять количество клеточных элементов.

Применяя данные рекомендации, мы смогли использовать слайд-планшет для микроскопического анализа мочи, количественного определения по методу Нечипоренко, а также для подсчета клеток в любом биологическом материале.

На наш взгляд, эта тема представляет практический интерес, т. к. камеры для подсчета клеток широко применяются и по сей день. Своей скромной публикацией мы открываем площадку для обсуждения.

Список использованной литературы

1. Нечипоренко А. З. Определение количества лейкоцитов и эритроцитов в 1 мл мочи // Лабораторное дело. 1969. № 2. С. 121. 2. Предтеченский В. Е. Руководство к клинической микроскопии. М.: Типо-литографияТ-ваИ. Н. Кушнерев и Ко, 1901. 256 с. 3. Методические указания. МУ 3.3.1.1112–02. Основные требования к вакцинным штаммам сибиреязвенного микроба для иммунизации людей. (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 26.02.2002). 4. СП 3.3.2.561-96. 3.3.2. Медицинские иммунобиологические препараты. Государственные испытания и регистрация новых медицинских иммунобиологических препаратов. Санитарные правила (утв. постановлением Госкомсанэпиднадзора РФ от 31.10.1996 № 33).

источник

Кулешова С.В. заведующая КДЛ, врач высшей категории
Москалева С.П.врач высшей категории
Зорина Л.В. врач высшей категории
Григорьева Е.В. врач высшей категории
Минушкина Л.О. д.м.н., профессор кафедры терапии, кардиологии и функциональной диагностики Учебно-научного медицинского центра УДП РФ

При переходе на новые методики сотрудникам лаборатории следует внимательно изучать инструкции и тестировать новинки перед составлением стандартных операционных процедур. В статье рассматриваются проблемы, с которыми может столкнуться любая лаборатория при модернизации. Успешный опыт внедрение пластиковых слайд-планшетов для исследования мочи и сложности, возникшие в процессе внедрения предложены для обсуждения.
Summary the introduction of new techniques requires careful study guide and test innovations prior to the preparation of standard operating procedures. The article discusses the problems that can face any laboratory at modernization. The successful introduction of the plastic slide plates urine and difficulties encountered in the implementation process proposed for discussion.
«С микроскопическим исследованием мочи каждый врач должен быть знаком самым обстоятельным образом, так как в некоторых случаях только путём такого исследования и возможна точная и решительная диагностика данного страдания.» В.Е. Предтеченский

Читайте также:  Почему моча бывает темного цвета

Пациент К. 34 лет обратился к терапевту для получения санаторно-курортной карты. На приеме активно жалоб не предъявляет. При осмотре общее состояние удовлетворительное. Температура тела 36.6°С. Сознание ясное. Кожные покровы обычной окраски. Видимые слизистые розовые. Лимфоузлы не увеличены. Отеков нет. Системы органов дыхания, система органов пищеварения без патологии. Тоны сердца звучные, ритм правильный. ЧСС 68 в мин. Артериальное давление 120/80 мм. рт. ст. Симптом поколачивания — отрицательный. Мочеиспускание безболезненное. Даны направления на анализы в необходимом объеме. По результатам выполненных анализов патология не выявлена. Пациенту выдается медицинская справка формы №072/у. После санаторно-курортного лечения в выписном эпикризе пациенту были даны рекомендации обратиться к нефрологу в связи с изменениями в анализе мочи по методу Нечипоренко. В анализе отмечалось увеличение количества эритроцитов до 2400 клеток в мл. и лейкоцитов до 4800 клеток в мл.
Пациент К. был вызван для обследования, в ходе которого проводилось исследование мочи, крови, консультация уролога, нефролога и терапевта. Результаты анализов были в пределах референтных значений. Консультации специалистов патологии не выявили. Было решено связаться с лечащим врачом пациента К. для уточнения результатов анализов. В ходе детального и подробного опроса выяснилось, что объяснить отклонения в результате анализа мочи выполненного по методу Нечипоренко специалистам санатория тоже не удалось. Клинически данных за почечную патологию у пациента К. в течение всего срока пребывания в санатории не было. Однако, после расспросов о методах и способах исследования выяснилось, что подсчет форменных элементов в моче велся врачами не с использованием камеры Горяева, а в пластиковом планшете. Данный случай привлек наше внимание, и мы стали интересоваться случаями несоответствий клинической картины у пациентов с данными анализа мочи по методу Нечипоренко. Анализируя в течение полугода результаты пациентов, полученные в нашей лаборатории с данными этих же пациентов, полученными в других лечебных учреждениях, мы выяснили, что в ряде случаев имеются завышенные результаты анализа при использовании слайд-планшетов при отсутствии клинических проявлений болезни, функциональных изменений и при нормальных значениях анализов в нашей лаборатории.

История приборов для подсчёта клеточных элементов насчитывает уже более 150 лет. Сетки в счетных камерах, предложенных различными авторами неодинаковы как по рисунку, так и по площади.

В начале прошлого века для подсчёта клеток крови применялся аппарат Тома-Цейсса (рис.1), который в дальнейшем был заменён на камеру Предтеченского (рис.2) и , наконец в середине прошлого века прибор обрёл современный вид – сетку камеры Горяева, состоящую из 225 больших квадратов, 25 из которых разграфлены на 16 маленьких. Она и используется сегодня как основной инструмент подсчёта клеток в 1 мл.мочи по методу Нечипоренко

Рисунок 2. Сетка Предтеченского

Принцип сеток в камерах один и тот же. Они разделены на то или иное число квадратов, различным образом сгруппированных. Зная объём квадрата можно произвести расчёт и определить количество клеток в единице объёма.

Перед вводом в работу пластиковых слайд — планшетов мы решили провести исследование, целью которого было оценить воспроизводимость результатов подсчёта с помощью камеры Горяева и нового пластикового слайд-планшета.

Материал и методы исследования

В качестве материала для исследования были взяты образцы крови 16 больных. Проводился подсчёт количества лейкоцитов. В качестве контрольного измерения использовались данные автоматического гематологического анализатора Сисмекс KX-21N. Подсчёт также велся 3 независимыми врачами, которые определяли количество лейкоцитов с помощью камеры Горяева и слайд-планшета.
Камера Горяева предназначена для подсчёта форменных элементов крови и клеточных элементов спинномозговой жидкости. ТУ9443-007-29508133-2007 ,РУ МЗ № ФСР 2008/02731 от 11.06.2008 г. Технические данные камеры : площадь — 9 мм2, глубина — 0,1 мм, объём — 0,9 мм3.
Камера (слайд-планшет) для микроскопического исследования осадка мочи и других биологических жидкостей, Aptaca. Каждая ячейка снабжена сеткой для подсчёта (3х3 мм) и покрыта тонкой прозрачной пластиковой пластинкой, играющей роль покровного стекла. Каждая сетка поделена на 5 квадратов (1х1 мм), которые в свою очередь разделены на 9 маленьких квадратов (0,333х0,333 мм). Изготовлена камера из полиметилметакрилата (ПММА). Регистрационное удостоверение № ФСЗ 2011/09223 от 19 марта 2012 г. Подсчёт вёлся согласно инструкции, опубликованной на сайте производителя [5].

Для исследования мы брали образцы венозной крови, определяя количество лейкоцитов с помощью автоматического гематологического анализатора Сисмекс KX-21N ( Sysmex KX-21N ) Производитель: Roche Diagnostics (Швейцария).

Результаты исследования

Проанализировано 16 проб. Подсчет вёлся независимо 3 врачами с высшей категорией. Средние значения количества лейкоцитов по данным анализатора составили 5950±2407*109/л(M±SD), при подсчёте с помощью камеры Горяева (средние данные у 3 независимых врачей) 4916±1794,4*109/л , с помощью слайд планшета (средние данные у 3 независимых врачей) — 9477±3624*109/л. Данные подсчёта и с использованием камеры Горяева и с использованием слайд — планшета достоверно отличались от данных автоматического анализатора Sysmex KX-21 N. Для двух врачей из трёх результаты подсчёта с помощью камеры Горяева и автоматического анализатора достоверно не отличались, но существенно отличались от значений, полученных при работе со слайд-планшетом

Рисунок3. Дисперсия результатов подсчёта форменных элементов крови с помощью камеры Горяева и слайд-планшета.

Обращает на себя внимание, что при подсчёте с помощью слайд -планшета были выше не только собственно средние значения количества форменных элементов крови, но и дисперсия полученных результатов, оказавшаяся достоверно большей, чем дисперсия результатов автоматического анализатора. Наименьшая дисперсия значений количества форменных элементов наблюдалась при использовании камеры Горяева (Рис 3).

Обсуждение результатов

Проведенное нами исследование показало существенные расхождения в подсчёте количества форменных элементов крови с помощью различного лабораторного оборудования. Ранее мы, проводя подсчёт в камере клеточных элементов для анализа мочи по Нечипоренко с помощью слайд-планшета, получали результаты, которые не укладывались в референсные значения. В литературе найти описание нашей проблемы или ее решение нам не удалось.
Следует также отметить, что имелись существенные разночтения, между официальной инструкцией на русском языке, и инструкцией, полученной нами непосредственно от производителя.
Мы в работе ориентировались на инструкцию, предоставленную производителем оборудования. Для собственного исследования мы выбрали подсчёт форменных элементов крови, а не мочи, в связи с тем, что имели автоматизированный способ контроля их количества.
Следует отметить, что подсчёт клеточных элементов в камере Горяева оказался более точным. У двух врачей из трёх результаты измерений достоверно не отличались от данных автоматического анализатора. Полученные данные при использовании слайд-планшета у всех трёх врачей существенно отличались, как от данных анализатора, так и от данных, традиционного подсчёта с помощью камеры Горяева. Работа с камерой Горяева позволяет получить меньший разброс результатов, чем работа со слайд — планшетом.
Таким образом, при переходе к иному методу подсчёта (например, при замене камеры Горяева на слайд-планшет для выполнения анализа по методу Нечипоренко) использование существующих референтных значений вряд ли допустимо.
При работе с другим материалом, заменяя камеру Горяева на слайд -планшет, необходимо предварительно проверить возможность использования существующих норм. Результаты, полученные при работе со слайд-планшетами часто оказываются выше, чем при использовании других методов.
На бланке с результатом следует указывать прибор, использованный в работе – камера Горяева или пластиковый слайд-планшет. Это важно для корректного сравнения результатов.
Также необходимо учесть, что инструкция, прилагаемая к слайд-планшетам не приводит полный объём информации для безопасного использования. В случае подсчёта клеток по методу Нечипоренко нельзя пользоваться предложенной формулой в инструкции без применения коэффициента концентрации. Данные по коэффициенту приводятся в полной версии инструкции производителя, либо высчитываются самостоятельно.

На наш взгляд эта тема представляет практический интерес, т.к .камеры для подсчёта клеток широко применяются и по сей день. Своей скромной публикацией мы открываем площадку для обсуждения. Просим откликнуться, и присоединиться к обсуждению специалистов разных направлений, в работе которых есть опыт внедрения слайд-планшетов.

Использованная литература:
1. «Руководство к клинической микроскопии.» В.Е.Предтеченский. Москва 1901 г. Типо-литография Т-ва И.Н.Кушнерев и Ко. 256 с 101ил

источник

Количественные методы определения клеток в единице объема до сих пор широко используются в работе лабораторий разных направлений. Проведено исследование для оценки воспроизводимости результатов подсчета с помощью камеры Горяева и пластиковых слайд планшетов для микроскопического исследования осадка мочи.

Количественные методы определения клеток в единице объема до сих пор широко используются в работе лабораторий разных направлений. Проведено исследование для оценки воспроизводимости результатов подсчета с помощью камеры Горяева и пластиковых слайд планшетов для микроскопического исследования осадка мочи.

Используя при подсчете клеточных элементов формулы из методического пособия производителя, были достигнуты хорошие результаты. Проведенные параллельные измерения показали, что работа с данными формулами позволяет точно определять количество клеточных элементов.

Количественные методы определения клеток в единице объема образцов биологических жидкостей и сегодня широко используются в работе лабораторий разных направлений — общеклинических, микробиологических и др.

В рамках клинико-лабораторных исследований выполняют подсчет

  • числа сперматозоидов в 1 мл эякулята,
  • числа лейкоцитов в ликворе
  • концентрацию спор возбудителя сибирской язвы В. anthracis в вакцинной культуре [3, 4].

Успеете скачать всё, что нужно, по демодоступу за 3 дня?

В начале прошлого века для подсчета клеток крови применялся аппарат Тома — Цейсса, на смену ему пришла камера Предтеченского и, наконец, с середины прошлого века для подсчета клеток стали использовать сетку камеры Горяева, состоящую из 225 больших квадратов, 25 из которых разграфлены на 16 маленьких [2]. До настоящего времени она является основным инструментом подсчета клеток при проведении анализа мочи по методу Нечипоренко [1].

Принцип формирования сеток во всех камерах один и тот же.

Камеры разделены на некоторое число квадратов, различным образом сгруппированных. Зная объем квадрата, можно произвести расчет и определить количество клеток в единице объема образца.

Контрольных материалов для оценки результатов исследования мочи по методу Нечипоренко не существует. Камеры не подвергаются калибровке, ни одна система внешней оценки качества не имеет в своем арсенале контрольных образцов, в работе с которыми нужно применять камеру Горяева.

Таким образом, оценить правильность полученных результатов — дело непростое.

Перед началом использования в работе пластиковых слайд-планшетов (Aptaca, Италия) для микроскопического исследования осадка мочи и других биологических жидкостей мы решили провести исследование, целью которого было оценить точность и воспроизводимость результатов подсчета.

В качестве материала для исследования были взяты образцы крови 16 больных.

Подсчет проводился тремя врачами клинической лабораторной диагностики, которые определяли количество лейкоцитов при помощи слайд-планшета и для сравнения — с использованием камеры Горяева.

В качестве контрольных использовались данные, полученные на автоматическом гематологическом анализаторе Сисмекс KX-21N.

Для проверочного исследования мы выбрали подсчет форменных элементов крови, а не мочи, в связи с тем что контроль их количества можно осуществить автоматизированным способом.

  • Камера Горяева предназначена для подсчета форменных элементов крови и клеточных элементов спинномозговой жидкости. Площадь камеры — 9 мм², глубина — 0,1 мм, объем — 0,9 мм³.
  • Слайд-планшет содержит ячейки, которые снабжены сеткой для подсчета (3×3 мм) и покрыты тонкой прозрачной пластиковой пластинкой. Каждая сетка поделена на 5 квадратов (1×1 мм), которые, в свою очередь, разделены на 9 маленьких квадратов (0,333×0,333 мм).

Подсчет велся согласно инструкции, опубликованной на сайте компании-производителя.

Среднее значение количества лейкоцитов:

  • полученное при исследовании на автоматическом анализаторе, составило 5950 ± 2407×109/л (M ± SD),
  • при подсчете с помощью камеры Горяева (среднее значение результатов анализа, выполненного тремя врачами) — 4916 ± 1794,4×109/л,
  • при использовании слайд-планшета (среднее значение, полученное тремя врачами) — 9477 ± 3624×109/л.

Результаты подсчета количества лейкоцитов с использованием камеры Горяева и с использованием слайд-планшета достоверно отличались от данных, полученных на автоматическом анализаторе Sysmex KX-21 N.

Результаты подсчета с помощью камеры Горяева и на автоматическом анализаторе, полученные двумя врачами из трех, достоверно не отличались, но существенно отличались от значений, полученных при работе со слайд-планшетом.

Особенно важно, что при использовании слайд-планшета были выше не только собственно средние значения числа лейкоцитов, но и дисперсия полученных результатов, оказавшаяся достоверно большей, чем дисперсия результатов, полученных с применением автоматического анализатора.

В литературе найти описание нашей проблемы или ее решение нам не удалось. Обратившись к производителю за разъяснениями, мы получили великолепную инструкцию, в которой имелись ответы на все наши вопросы.

Оказалось, что необходимо выбирать способ подсчета элементов в зависимости от клеточности образца.

  1. При высокой клеточности необходимо подсчитать количество элементов в 5 разных малых квадратах, строго следя за тем, чтобы подсчет не проводился в одних и тех же квадратах.
  2. При низкой клеточности необходимо подсчитать количество элементов в 10 разных малых квадратах, строго следя за тем, чтобы подсчет не проводился в одних и тех же квадратах.

Дальнейшие подсчеты ведутся согласно формулам, приведенным ниже.

Tμ = n / (k x N x 10) или Tml = (n x 1000) / (k x N x 10),

  • n — количество клеток, подсчитанных в малых квадратах;
  • N — количество малых квадратов, в которых велся подсчет;
  • k — 0,01111 — объем малого квадрата;
  • 10 — количество миллилитров мочи, подвергнутых центрифугированию;
  • Tμ — количество клеток в микролитре;
  • Tml — количество клеток в миллилитре.

Также методическое пособие содержит формулы для работы с образцами, которые не подвергаются центрифугированию:

Tμ = n / (k x N) или Tml = (n x 1000) /(k x N) .

Используя данный подход к подсчету клеточных элементов, мы смогли добиться хороших результатов. Проведенные параллельные измерения показали, что работа с данными формулами позволяет точно определять количество клеточных элементов.

Применяя данные рекомендации, мы смогли использовать слайд-планшет для микроскопического анализа мочи, количественного определения по методу Нечипоренко, а также для подсчета клеток в любом биологическом материале.

На наш взгляд, эта тема представляет практический интерес, т. к. камеры для подсчета клеток широко применяются и по сей день. Своей скромной публикацией мы открываем площадку для обсуждения.

Читайте также:  Утром мутная моча причины у женщин

Список использованной литературы

1. Нечипоренко А. З. Определение количества лейкоцитов и эритроцитов в 1 мл мочи // Лабораторное дело. 1969. № 2. С. 121. 2. Предтеченский В. Е. Руководство к клинической микроскопии. М.: Типо-литографияТ-ваИ. Н. Кушнерев и Ко, 1901. 256 с. 3. Методические указания. МУ 3.3.1.1112–02. Основные требования к вакцинным штаммам сибиреязвенного микроба для иммунизации людей. (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 26.02.2002). 4. СП 3.3.2.561-96. 3.3.2. Медицинские иммунобиологические препараты. Государственные испытания и регистрация новых медицинских иммунобиологических препаратов. Санитарные правила (утв. постановлением Госкомсанэпиднадзора РФ от 31.10.1996 № 33).

источник

КАМЕРЫ СЧЁТНЫЕ — приборы для подсчета форменных элементов крови, мочи и цереброспинальной жидкости, а также микроорганизмов. Предложена К. с. франц. физиологом Малассе (L. Ch. Malassez) в 1874 г.

К. с. представляют собой толстое предметное стекло с углублением, на дне к-рого выгравирована счетная сетка; над углублением накладывают шлифованное покровное стекло. Постоянная высота К. с. обеспечивается плотным притиранием покровного и предметного стекол до образования радужных ньютоновых колец (полосы интерференции).

Структурными элементами всех типов сеток являются большие и малые квадраты. Сетки различных типов — Тома, Бюркера, Предтеченского, Тюрка, Нейбауэра, Горяева, Фукса — Розенталя и др.— отличаются различным группированием больших и малых квадратов.

Известные величины — высота камеры, площадь сетки и ее делений и разведение взятой для исследования крови — позволяют высчитать количество форменных элементов в определенном объеме (1 мкл) крови (или другой среды).

Различают открытые и закрытые К. с. В закрытой камере покровное стекло притирают после ее заполнения, и при этом в нее могут попасть пузырьки воздуха. Такие К. с. (Тома — Цейсса с сеткой Тома, Дунгера с особой сеткой) неудобны в работе и не используются.

Открытые камеры (рис. 1) заполняются после притирания покровного стекла. Они имеют две сетки на одном предметном стекле. Пластинки с выгравированными сетками отграничены желобками одна от другой, а также от остальной части предметного стекла. Наличие желобков дает возможность регулировать заполнение камер. Некоторые камеры снабжены металлическими зажимами, фиксирующими покровное стекло.

Открытые К. с. впервые описал С. П. Алферов в 1883 г., затем в 1905 г. Бюркер (К. Burker). Известны открытые счетные камеры Ключарева, Гауссера и Леви, Гельбера, Глауберманна. В СССР широко применяются счетные камеры Горяева и Фукса — Розенталя. Камера Горяева с сеткой Горяева (рис. 2) имеет объем 0,9 мкл, площадь сетки 9 мм 2 . Сетка состоит из 225 больших квадратов; из них 100 — пустые, 25 — разделены каждый на 16 малых квадратов, 100 — разделены полосами.

Счетная камера Фукса — Розенталя с сеткой Фукса — Розенталя (рис. 3) имеет объем 3,2 мкл, площадь сетки 16 мм 2 , она состоит из 256 больших квадратов (квадраты, разделенные полосами, не считают).

Перед работой предметное стекло К. с. и шлифованное покровное стекло моют под струей водопроводной воды и насухо вытирают. Затем плотно притирают покровное стекло к камере (до появления радужных ньютоновых колец, ибо только при этом условии объем К. с. постоянен).

Содержимое пробирки перед заполнением камеры несколько раз перемешивают, затем оплавленным концом стеклянной палочки отбирают из пробирки, наклоняя ее, каплю крови и наносят на предметное стекло у самого края покровного стекла. Если одной капли крови недостаточно для полного заполнения К. с., добавляют еще каплю. Если кровь взята в смеситель, то первые капли из капилляра смесителя выпускают, а К. с. заполняют каплей из ампулы смесителя. Остатки жидкости с предметного стекла удаляют марлевым тампоном. Подсчет начинают через 3 мин. после заполнения камеры (за это время происходит оседание форменных элементов крови) под микроскопом при малом увеличении (объектив X 8, окуляр X 10 или X 15) и затемненном поле зрения (с прикрытой диафрагмой или при несколько опущенном конденсоре). Счету подлежат клетки, лежащие внутри квадрата (рис. 4). Клетки, пересеченные сторонами квадратов, считают следующим образом: если более половины клетки находится внутри квадрата, то ее считают, если вне — ее не считают. Клетки, пересекаемые линиями точно посередине, считают на двух смежных, правой и верхней, линиях квадратов и не считают на двух других. При использовании соответствующих разводящих р-ров эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, эозинофилы, базофилы и ретикулоциты могут быть подсчитаны в камере Горяева.

Эритроциты считают в 80 малых квадратах, т. е. в 5 больших квадратах, расположенных по диагонали. Расчет проводится по формуле:

где а — количество эритроцитов, подсчитанное в 80 малых квадратах, 80 — количество сосчитанных малых квадратов, 200 — степень разведения крови, 4000 — множитель для получения содержания эритроцитов в 1 мкл крови (объем малого квадрата 1/4000 мкл). Практически количество эритроцитов, подсчитанное в 5 больших квадратах, умножают на 10 000.

Лейкоциты подсчитывают в 1600 малых квадратах (в 100 больших квадратах). Расчет проводится по формуле:

где а — количество лейкоцитов, подсчитанное в 1600 малых квадратах, 1600 — количество сосчитанных малых квадратов, 20 — степень разведения крови, 4000 — множитель для получения содержания лейкоцитов в 1 мкл крови. Практически количество лейкоцитов, подсчитанное в 1600 малых квадратах, умножают на 50.

Тромбоциты подсчитывают в 400 малых квадратах (25 больших квадратах по диагонали сетки). Реактивами для разведения могут быть изотонический р-р хлорида натрия, различные р-ры, консервирующие тромбоциты и гемолизирующие эритроциты.

Считают тромбоциты под обычным микроскопом и с помощью фазово-контрастного устройства (см. Фазово-контрастная микроскопия) для более четкого выявления их. После разведения пробирку с кровью оставляют на 25—30 мин. для гемолиза эритроцитов. Затем содержимое пробирки повторно перемешивают и заполняют К. с., к-рую помещают на 5 мин. во влажную камеру (напр., чашки Петри с влажной ватой) для оседания тромбоцитов. Расчет проводят по формуле:

где а — количество тромбоцитов,, подсчитанное в 400 малых квадратах, 200 — степень разведения крови, 400 — число сосчитанных малых квадратов, 4000 — множитель для получения содержания тромбоцитов в 1 мкл крови. Практически количество тромбоцитов, подсчитанное в 400 малых квадратах, умножают на 2000.

Количество базофилов и эозинофилов подсчитывают в камере Горяева в 1600 малых квадратах, как и лейкоциты. Практически подсчитанное количество базофилов и эозинофилов умножают на 50.

Ретикулоциты подсчитывают в камере Горяева в 80 малых квадратах, как эритроциты. Практически подсчитанное количество ретикулоцитов умножают на 10 000.

Определение общего количества клеток в цереброспинальной жидкости (см.) лучше производить в камере Фукса — Розенталя (из-за небольшого числа лейкоцитов в цереброспинальной жидкости). Подсчитывают по всей сетке (256 больших квадратов) под малым увеличением микроскопа (окуляр X 15, объектив х 8).

При очень большом количестве клеток допускается подсчет половины сетки (с последующим умножением результата на 2). Расчет проводят по формуле:

где а — количество клеток, подсчитанное в 256 квадратах, 11/10— степень разведения, 3,2— объем камеры в мкл. Практически при подсчете в камере Фукса — Розенталя число лейкоцитов делят на 3.

В камере Горяева клетки цереброспинальной жидкости считают не менее 3 раз (также всю площадь), каждый раз заполняя камеру заново, затем берут среднее арифметическое. Расчет проводят по формуле:

где а — среднее арифметическое количество клеток, подсчитанное по всей сетке, 11/10 — степень разведения, 0,9 — объем камеры в мкл. Практически число подсчитанных лейкоцитов умножают на 1,2.

Количественное определение форменных элементов в моче проводит в камерах Фукса — Розенталя, Горяева: подсчет эритроцитов и лейкоцитов при среднем увеличении микроскопа, подсчет цилиндров — при малом. Степень разведения мочи зависит от метода исследования (см. Моча).

Подсчет в К. с. не вполне точен. Ошибка метода составляет от 10 до 20% в зависимости от количества подсчитываемых элементов.

Следует предохранять камеры от загрязнения и попадания пыли на сетку. После работы камеру и покровное стекло моют под струей водопроводной воды и осторожно, но тщательно вытирают чистой салфеткой (можно марлевой). Затем завертывают в бумагу и убирают в коробку.

Библиография: Справочник по клиническим лабораторным методам исследования, под ред. Е. А. Кост, с. 22, М., 1975.

источник

Камера Горяева – оптическое устройство для подсчета клеток или иных соизмеримых с ними частиц в заданном объеме жидкости. Состоит из толстого предметного стекла, имеющего прямоугольное углубление (камеру) с нанесенной микроскопической сеткой и тонкого покровного стекла. Камера разработана профессором Казанского университета Горяевым Н.К. Благодаря увеличенному объему сетки отличается большей точностью подсчета, по сравнению с другими камерами (Тома, Цейса, Тюрка, Бюркера).

Технические характеристики камеры Горяева

Размеры малого квадрата камеры Горяева 0,05×0,05 мм
Размеры большого квадрата камеры Горяева 0,2×0,2 мм
Глубина камеры 0,1 мм
Объем жидкости под 1 малым квадратом 0,00025 мм3 (мкл) = 1/4000 мм3 (мкл)
Объем жидкости под 1 большим квадратом 0,004 мм3 (мкл) = 1/250 мм3 (мкл)
Объем камеры Горяева 0,9 мм3 (мкл)

Описание сетки камеры Горяева

Сетка камеры Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 малых квадратов.


Рис 1. Сетка камеры Горяева


Рис 2. Большой (1) и малый (2) квадраты сетки камеры Горяева


Рис 3. 225 больших квадратов сетки камеры Горяева


Рис 4. 100 больших квадратов сетки камеры Горяева


Рис 5. Большой квадрат камеры Горяева разделенный на 16 малых квадратов.

Обслуживание камеры Горяева

Между работой камера должна храниться в сухом месте. После работы камера дезинфицируется погружением на 30 минут в 70% раствор этилового спирта, или на 60 минут в 4% раствор формалина, после чего камера промывается дистиллированной водой и протирается мягкой салфеткой.

Правило подсчета клеток в квадрате (правило Егорова)


В квадрате считаются клетки, лежащие внутри его, а также касающиеся левой и верхней границ. Клетки, касающиеся правой и нижней границ при подсчете не учитываются.

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 20 раз 3–5% раствором уксусной кислоты с метиленовым синим (например, 20 мкл крови и 380 мкл р-ра уксусной к-ты). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать лейкоциты в 100 больших квадратах. Расчет числа лейкоцитов осуществляют, исходя из разведения крови (20) и числа больших квадратов (100), по формуле: X = (a×250×20) / 100, где Х – число лейкоцитов в 1 мкл крови; а – число лейкоцитов, посчитанных в 100 больших квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных лейкоцитов умножают на 50.

Методика подсчета эритроцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 200 раз в 0,9% растворе NaCl или растворе Гайема (берется 20 мкл крови и 4 мл раствора). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать эритроциты в 5 больших квадратах разделенных на 16 малых (т.е. в 80 малых квадратах). Рекомендуется считать клетки в квадратах, расположенных по диагонали. Расчет числа эритроцитов осуществляют, исходя из разведения крови (200) и числа малых квадратов (80), по формуле: X = (a×4000×200) / 80, где Х – число эритроцитов в 1 мкл крови; а – число эритроцитов, посчитанных в 80 малых квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных эритроцитов умножают на 10 000.

источник

Используется для подсчета количества клеток в заданном объеме жидкости и для определения числа форменных элементов в образце крови. Стандартная сетка, сторона 3 мм.

Используется для подсчета количества клеток в заданном объеме жидкости и для определения числа форменных элементов в образце крови. Стандартная сетка, сторона 3 мм.

Используется для определения количества и параметров подвижности сперматозоидов; состоит из 2 частей и оптически плоского стекла; верхняя часть служит в качестве покровного стекла и имеет сетку в центре с ячейкой 1 кв. мм, поделенной на 100 квадратов размером 0,1 х 0,1 мм. Для анализа необходима маленькая некалиброванная капля хорошо смешенного неразбавленного материала, которую надо расположить в центре камеры с помощью простой палочки и закрыть верхней частью камеры; количество сперматозоидов в любой из 10 клеток камеры соответствует концентрации в млн/мл; рекомендуется использовать микроскоп с объективом 20х.

Используется для определения количества и параметров подвижности сперматозоидов; состоит из 2 частей и оптически плоского стекла; верхняя часть служит в качестве покровного стекла и имеет сетку в центре с ячейкой 1 кв. мм, поделенной на 100 квадратов размером 0,1 х 0,1 мм. Для анализа необходима маленькая некалиброванная капля хорошо смешенного неразбавленного материала, которую надо расположить в центре камеры с помощью простой палочки и закрыть верхней частью камеры; количество сперматозоидов в любой из 10 клеток камеры соответствует концентрации в млн/мл; рекомендуется использовать микроскоп с объективом 20х.

Центральная часть сетки состоит из 2 перекрещивающихся полос по 15 линий, на которые наложена сетка 12 х 12.
Предназначена для определения количества клеток в единице объема.
Камеры упакованы в пластиковую коробочку и снабжены двумя покровными стеклами.

Используется для подсчета форменных элементов крови; сетка представляет собой 2 перекрещивающиеся полосы на 20 линий.
Камеры упакованы в пластиковую коробочку и снабжены двумя покровными стеклами.

Используется для подсчета ферментных элементов спинно-мозговой жидкости. Основа — крупная сетка 4 х 4, каждое окно которой поделено на 16 клеточек. Камеры упакованы в пластиковую коробочку и снабжены двумя покровными стеклами.

Используется для определения числа форменных элементов в образце мочи;
материал — полистирол; сетка состоит из 5 квадрантов, поделенных на 9 клеточек (3 х 3).

Читайте также:  Чем лечить почки моча мутная

Камеры счётные для микроскопии — устройства для подсчета форменных элементов крови, мочи, сперматозоидов, цереброспинальной жидкости, микроорганизмов. Это специальные предметные стекла с углублением посередине, имеющим глубину от 0,1 до 0,2 мм, на дне которого выгравирована счётная сетка, состоящая из квадратов определённой площади. Подсчет проводят в счетных камерах, на фиксированных окрашенных мазках или на мембранных фильтрах. При подсчете микроорганизмов непосредственно под микроскопом учитывают как живые, так и мертвые клетки, что дает завышенные результаты о числе жизнеспособных клеток.

В зависимости от количества и группировки квадратов сетки различают камеры — Горяева, Маклера, Ньюбауэра, Фукса-Розенталя, отличающихся группированием больших и малых квадратов. Счётные камеры изготавливаются из оптического стекла (многоразовые) или пластика (одноразовые). Могут иметь одну камеру для подсчёта клеток (однокамерные) или же несколько (2, 4 или 10 камер). При работе с камерой её рабочие поверхности должны быть чистыми и сухими. Во время подсчета форменных элементов недопустимо наличие пузырей воздуха на сетке камеры, так как это мешает точности подсчета.

Камера счётная Горяева — камера для подсчета количества клеток в заданном объёме жидкости; используют для определения числа форменных элементов в крови, клеток эукариот в культуре и пр. Производится из толстого и прочного предметного стекла с прорезями, которые образуют особые поперечно расположенные площадки. Сетки камеры Горяева разделены на установленное количество квадратов; стандартная сетка — сторона 3 мм. Камеры Горяева производятся в различных исполнениях: исполнение 1 — сетка нанесена методом вакуумного напыления и исполнение 2 и 3 — сетка нанесена методом гравировки.

Камера счётная Маклера — камера для определения количества и параметров подвижности сперматозоидов, имеет алюминиевый корпус со стеклянной вставкой, покровное стекло в алюминиевой рамке; состоит из 2 частей и оптически плоского стекла; верхняя часть служит в качестве покровного стекла и имеет сетку в центре с ячейкой 1 кв. мм, поделенной на 100 квадратов размером 0,1 х 0,1 мм; рекомендуется использовать микроскоп с объективом 20х.

Камера счётная Ньюбауэра — камера для определения количества клеток в единице объема. Центральная часть сетки состоит из 2 перекрещивающихся полос по 15 линий, на которые наложена сетка 12 х 12.

источник

Дата: 30.06.2019 г. Цена: 10 700 руб.

Камера для подсчёта клеток в биологических образцах мочи (Упаковка 100 шт.) — предназначена для микроскопического исследования осадка мочи и других биологических жидкостей. Камера представляет собой пластиковый планшет на 10 ячеек, где каждая ячейка снабжена сеткой для подсчета (3х3 мм) и покрыта тонкой прозрачной пластиковой пластинкой, которая играет роль покровного стекла. Каждая сетка поделена на 5 квадратов (1х1 мм), они в свою очередь разделены на 9 маленьких квадратов (0, 333х0, 333 мм).
Технические характеристики:
Габариты камеры. 32 х 83 мм
Габариты ячейки. 9 х 7 мм
Упаковка. 100 шт.
Страна производитель. Италия.
Преимущества:
— Изготовлена из полиметилметакрилата (ПММА)
— Просты в использовании;
— Интернет-магазин «Пять Капель» работает только непосредственно с производителями, поэтому мы предлагаем только самые выгодные и честные цены на свой товар!
— Мы предоставляем любые виды доставки по России и странам СНГ. Специально для Вас мы подберем самый выгодный способ доставки!

Якорь для магнитной мешалки Z 40 40*8, фторопласт, овальной формы — Перемешивающий элемент (магнитный якорь), который может использоваться в любых типах магнитных мешалок. Характеристики: — Длинна: 40 мм; — Диаметр: 8 мм. -.

Санкт-Петербург Цена: 380 руб.

Сульфат железа (II) 7-водный (железный купорос) «Ч» ф.50 кг представляет собой порошок светло-зеленого цвета. Широко используется в машиностроении, цветной металлургии, химической, деревообрабатывающей и текстильной.

Санкт-Петербург Цена: 10 200 руб.

Характеристики: Внешний размер 328 x 328 x 332 Объем, литр 20 Вес, кг 0.59 Материал полипропилен (PP) Верхний диаметр 328 Вкладываемый Нет Диаметр основания 268 мм Код 04687 Количество в еврофуре 82 м 2 8320 Количество на паллете.

Санкт-Петербург Цена: 750 руб.

Белорусские винные дрожжи — это специально выведенная культура одноклеточных грибов, приспособленная для применения именно в домашних условиях для сбраживания плодово-ягодного сырья. Используются для получения.

Санкт-Петербург Цена: 249 руб.

Характеристики: • Расход: 1 упаковка рассчитана на 15-20 литров продукта; • Устойчивость: высокая • градус получаемого продукта — 18; • Срок годности: 1 год Профессиональные дрожжи»Хмельные»созданы специально.

Санкт-Петербург Цена: 150 руб.

Сушка для посуды 300*400мм — предназначена для сушки лабораторной посуды и пластикового поддона для воды. Подходит для сушки лабораторной посуды любого вида (пробирки, колбы, стаканы и пр.). Технические характеристики: -.

Санкт-Петербург Цена: 1 770 руб.

Пробки целлюлозные №15P (14-16, 5 мм), Heinz (Упаковка 100 шт.) Предназначена для использования в микробиологии, вирусологии и биотехнологии при работе со стерильными средами и культурами во всех типах пробирок, колб и флаконов.

Санкт-Петербург Цена: 5 000 руб.

Цилиндры для хранения пипеток предназначен для хранения пипеток, предохраняя их от повреждения и откалывания кончиков. Может использоваться при стерилизации пипеток в автоклаве (при этом необходимо снять крышку из.

Санкт-Петербург Цена: 5 880 руб.

Прихватка для горячих предметов, силиконовый каучук. Предназначена для защиты при работе с горячими сосудами с температурой до +260°С и холодными с температурой до -57°С Характеристики: — Размер прихватки: 96х185 мм -.

Санкт-Петербург Цена: 3 760 руб.

Воронка делительная цилиндрическая на 250мл со шлифом 29/32 — этот инструмент применяется для разделения жидких несмешивающихся веществ разной плотности. Изделие произведено из термостойкого стекла, способного.

Санкт-Петербург Цена: 1 160 руб.

Отдам новый промокод на первый заказ в интернет-магазине Озон. Код купона — OZON5C094 . Его нужно ввести при регистрации на сайте или первом.

Санкт-Петербург Цена: договорная

Покупаем акции ОАО Завод Пелла и любые другие акции по всей России Покупка акций Завод Пелла в любом городе У нас лучшая цена акций.

Санкт-Петербург Цена: договорная

Р СпецКрепеж изготавливает болт откидной ГОСТ 3033-79 следующих размеров:М12, М14, М16, М20, М22, М24, М27, М30, М36, М42, М48. Материал 35, 45, 40Х,14Х17Н2.

Санкт-Петербург Цена: договорная

Куплю LB-52U, ОК 74.70, ОК 53.70, OK 46.00, уонии 13/55 есаб Покупаем ESAB OK 61.30, 61.35,61.85, 63.35, 67.60, 67.75 и другие. Электроды нержавеющие Приобретаем ОЗЛ-6.

Санкт-Петербург Цена: договорная

памперсы для взрослых тена 3 шесть упаковок не.

Санкт-Петербург Цена: 350 руб.

Куплю задвижки чугунные Куплю задвижки стальные Куплю шаровые краны латунные резьбовые фланцевые сварные. Куплю продукция danfoss hawle.

Санкт-Петербург Цена: 8 633 руб.

Куплю задвижки чугунные Куплю задвижки стальные Куплю шаровые краны латунные резьбовые фланцевые сварные. Куплю продукция danfoss hawle.

Санкт-Петербург Цена: 9 426 руб.

Куплю задвижки чугунные Куплю задвижки стальные Куплю шаровые краны латунные резьбовые фланцевые сварные. Куплю продукция danfoss hawle.

Санкт-Петербург Цена: 755 руб.

Куплю фланцевые затворы с ДВОЙНЫМ ЭКСЦЕНТРИСЕТОМ Диаметром 400 500 600 700 800 900 1000 1200 1400 Давлением 10, 16 Оплата наличными сразу на месте. Жду.

Санкт-Петербург Цена: 828 000 руб.

Куплю фланцевые затворы с ДВОЙНЫМ ЭКСЦЕНТРИСЕТОМ Диаметром 400 500 600 700 800 900 1000 1200 1400 Давлением 10, 16 Оплата наличными сразу на месте. Жду.

источник

Лабораторная камера Горяева, названная в честь русского врача, профессора Казанского университета Горяева Н.К., является специальным монолитным предметным стеклом, предназначенным для подсчета количества клеток в заданном объеме жидкости. Кроме того, используя камеру Горяева можно определить увеличение микроскопа. Камеры Горяева широко применяются в области клинических и биомедицинских исследований.

Популярные области применение камеры Горяева:

  • Подсчет форменных элементов крови
    • Подсчет эритроцитов
    • Подсчет лейкоцитов
    • Подсчет ретикулоцитов
    • И т.п.
  • Подсчет форменных элементов мочи
  • Исследование эякулята – оценка количественных и качественных параметров сперматозодиов
  • Вычисление концентрации спор в вакцине
  • Подсчет ооцист в препарате
  • И т.п.

Камеры Горяева выпускаются в двух модификациях: двухсеточные (двухкамерные) и четырехсеточные (четырехкамерные). В определении цены камеры Горяева важную роль играет качество шлифовки стекла, метод нанесения сетки – лазерная гравировка или же вакуумное напыление.

Что собой представляет камера Горяева? Камера Горяева есть не что иное, как прозрачное монолитное предметное стекло поперечными прорезями и нанесенной специальным образом микроскопической сеткой. В случае двухкамерной камеры Горяева мы имеем четыре прорези, образующие три поперечно расположенных площадки, при этом средняя площадка разделена продольной прорезью на две одинаковых камеры, на каждой из поверхности площадки которых нанесена сетка. В случае же четырехкамерной камеры Горяева мы получаем предметное стекло с пятью прорезями, образующих четыре площадки, при этом две внутренние дополнительно разделены продольной прорезью для получения четырех камер с нанесенной микроскопической сеткой на поверхности площадок.

Рассмотрим более подробно особенности сетки. Специальная сетка наносится на внутренние площадки, расположенные ниже соседних боковых площадок на 0.1мм. Боковые площадки предназначены для притирания покровного стекла до появления Ньютоновских колец. Как правило, используют специальное покровное стекло для камеры Горяева с закругленными краями. После притирания покровного стекла создается камера, закрытая с двух боковых сторон, а с двух других остаются щели (так называемые, капиллярные пространства), через которые и заполняют камеру. Что конкретно представляет собой сетка? Микроскопическая сетка камеры Горяева расчерчена на большие и маленькие квадраты, сгруппированные различными способами. Сетка Горяева содержит 225 больших квадратов (15 рядов по 15 больших квадратов в каждом), разграфленных вертикально, горизонтально, крест-накрест и неразграфленных. При этом размеры малых делений клетки сетки составляют 0.05мм, а больших – 0.2мм. Важно, что малый квадрат со стороной 0.05мм во всех сетках является постоянной величиной. Не трудно рассчитать, что площадь малого квадрата равна 0.0025 мм2, а большого квадрата – 0.04мм2 . Тогда получаем, что объем жидкости над квадратом, образованным большими делениями сетки Горяева, составляет 0.004 микролитра.

Подсчитав количество форменных элементов (ФЭ) над большим квадратом, можно подсчитать плотность данного типа клеток в суспензии по формуле:

где X — количество ФЭ/мл, M- количество ФЭ над большим квадратом.

При работе с камерой Горяева важно следить, чтобы ее рабочие поверхности оставались сухими и чистыми. Кроме того, при подсчете форменных элементов нельзя допускать наличие воздушных пузырей на сетке камеры, так как они могут мешать точности подсчета.

После работы с камерами Горяева следует выполнить их дезинфекцию одним из допустимых способов:

  1. Погружение в 70%-ный раствор этилового спирта на 30 минут
  2. Погружение в 4%-ный раствор формалина на 60 минут при комнатной температуре.

Приведем примеры применения камеры Горяева и некоторые формулы.

Прежде чем приступить к проведению лабораторных исследований, рекомендуется тщательно протереть камеру Горяева небольшим кусочком чистого бинта, слегка смоченного в спирте. Мы не советуем использовать для этих целей вату, так как она может оставить волокна. Таким же образом следует обработать и покровное стекло для камеры Горяева. Учтите, что при использовании низкокачественного спирта на поверхностях может образоваться осадок, тем или иным образом мешающий проведению исследований. Чтобы избежать появления связанных с этим явлением нежелательных эффектов, рекомендуется дополнительно протереть камеру и покровное стекло чистым марлевым шариком без спирта. Притирание покровного стекла к камере должно быть выполнено очень тщательно до появления на месте контакта радужных колец (так называемых, цветных колец Ньютона) с обоих краев. Для лучшего притирания можно воспользоваться одной хитростью и слегка выдохнуть воздух на камеру и покровное стекло, так чтобы небольшое количество влаги сконденсировалось на поверхностях стекол, что обеспечит лучший контакт.

При отсутствии специальных покровных стекол, прилагающихся к камере Горяева, можно использовать обычные стандартные покровные стекла.

Помимо целевого использования камеры Горяева для подсчета форменных элементов крови и т.п., данное стекло может расцениваться как своеобразный эталон для определения увеличения микроскопа. Для этого следует воспользоваться следующей формулой:

X=(p1-p2)/(a*N)

где X – это увеличение микроскопа; p1 – положение левой границы клетки камеры Горяева; p2 – положение правой границы клетки или группы клеток; N – количество клеток между измеряемыми границами; a — размер клетки камеры Горяева (равен 0,05 мм).

Камера Горяева также используется для подсчёта количества клеток в культуре.

Для подсчета клеточных элементов в жидкостях, содержащих их в меньших концентрациях, используются аналогичные по конструкции камеры Фукса-Розенталя и Нажотта, имеющие большую глубину – 0.2 мм и 0.5 мм соответственно. Эти же камеры используются в альгологии для количественного учета фитопланктона. Часто камера Фукса-Розенталя используется для подсчета форменных элементов спинномозговой жидкости. В отличие от камеры Горяева, большие квадраты сетки Фукс-Розенталя не разграфлены и сгруппированы по 16 квадратов, причем каждая такая группа ограничена тройными линиями.

Наиболее часто камеры Горяева используются именно для определения форменных элементов крови при проведении лабораторных исследований. Так для подсчета эритроцитов кровь необходимо развести в 200 раз, лейкоцитов – в 20 раз. Количество форменных элементов (ФЭ) в 1мкл крови определяют по формуле:

где N – искомое количество ФЭ в 1 мкл крови; m – число ФЭ в определенном количестве малых квадратов; q – количество малых квадратов сетки камеры Горяева, в которых подсчитывались ФЭ, s – степень разведения крови.

Для подсчета эритроцитов используются 5 больших или 80 малых квадратов сетки, расположенных по диагонали. Таким образом, получаем следующую формулу:

Для подсчета лейкоцитов можно использовать один из трех методов:

1. Лейкоциты считают в 64 больших (пустых) квадратах

2. ​ Лейкоциты считают по всей сетке в 169 больших квадратах (рекомендуется для образцов крови с выраженной лейкопенией)

3. Лейкоциты считают в 100 больших квадратах (64 пустых + 36 разграфленных квадратов по периметру сетки)

Таблица нормальных значений:

Форменные элементы Норма
Эритроциты Мужчины 4 000 000 – 5 100 000 в 1 мкл
Женщины 3 700 000 – 4 700 000 в 1 мкл
Лейкоциты 4 000 – 9 000 в 1 мкл

Для определения ФЭ в мочевом осадке при анализах мочи по Нечипоренко, Аддис-Каковскому, Амбурже осуществляется по всей сетке Горяева и рассчитывается по формуле:

где N – число ФЭ в 1 мкл осадка; m – число ФЭ, подсчитанных по всей сетке; 0.676 – объем камеры Горяева (мкл)

источник