Камера подсчета лейкоцитов в моче

Анализ мочи по Нечипоренко в отечественной лабораторной диагностике является наиболее распространенным методом количественного определения форменных элементов в моче. Этот метод наиболее прост, доступен любой лаборатории и удобен в амбулаторной практике, а также имеет ряд преимуществ перед другими известными количественными методами исследования осадка мочи. По методу Нечипоренко определяют количество форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров) в 1 мл мочи.

Специальной подготовки для исследования мочи по методу Нечипоренко не требуется.

Для анализа мочи по методу Нечипоренко собирается только средняя порция (в середине мочеиспускания) первой утренней мочи (достаточно 15 – 20 мл). На это обязательно следует указать пациенту. При этом необходимо соблюдать основные правила сбора мочи. Моча сразу же доставляется в лабораторию.

В стационаре для уточнения топической диагностики для исследования мочи по методу Нечипоренко может быть использована моча, полученная при раздельной катетеризации мочеточников.

мерная центрифужная пробирка,
пипетка на 10 мл,
счетная камера (Горяева, Фукса-Розенталя или Бюркера),
стеклянная палочка,
микроскоп.

Доставленную мочу хорошо перемешивают, отливают 5 – 10 мл в центрифужную градуированную пробирку и центрифугируют 3 мин при 3 500 об/мин, отсасывают верхний слой мочи, оставляя 1 мл вместе с осадком. Хорошо перемешивают осадок и заполняют камеру Горяева или любую счетную камеру. Обычным способом во всей сетке камеры подсчитывают число форменных элементов (раздельно лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров) в 1 мм 3 осадка мочи (x). Установив эту величину и подставив ее в формулу, получают число форменных элементов в 1 мл мочи:
N = x*(1000/V), где
N – число лейкоцитов, эритроцитов или цилиндров в 1 мл мочи,
x – число подсчитанных лейкоцитов, эритроцитов или цилиндров в 1 мм 3 (1 мкл) осадка мочи (при подсчете в камере Горяева и Бюркера x = H/0,9, где H – количество подсчитанных в камере клеток, а 0,9 – объем камеры, а при подсчете в камере Фукс- Розенталя x = H/3,2, так как объем камеры 3,2 мм 3 ),
V – количество мочи, взятой для исследования (если моча берется катетером из лоханки, то V обычно меньше 10), 1000 – количество осадка (в кубических миллиметрах).

Примечание. Для подсчета цилиндров необходимо просмотреть не менее 4 камер Горяева (или Бюркера) или 1 камеру Фукса-Розенталя. Количество цилиндров, сосчитанное в 4 камерах Горяева или Бюркера, затем следует разделить на 4, а уже потом полученное число можно вставлять в формулу для определения количества цилиндров в 1 мкл осадка мочи.

Для метода Нечипоренко нормальным считается содержание в 1 мл мочи лейкоцитов до 2000, эритроцитов — до 1000, цилиндры отсутствуют или обнаруживаются в количестве не более одного на камеру Фукса-Розенталя или на 4 камеры Горяева. Цифры одни и те же для взрослых и детей, для лоханочной и пузырной мочи.

технически прост, удобен, доступен;
не обременителен для обследуемого и персонала, так как не требует дополнительной подготовки пациента, сбора мочи за строго определенное время;
для исследования может быть использована средняя порция мочи (что исключает необходимость катетеризации мочевого пузыря) и моча, полученная из почек при раздельной катетеризации мочеточников для уточнения топической диагностики;
не требует большого количества мочи — определение лейкоцитурии можно проводить в небольшом количестве мочи, полученной из почки;
по количественным показателям не уступает другим методам;
легко выполним в динамике;
является унифицированным методом.

При исследовании мочи по методу Нечипоренко не учитываются суточные колебания выделения форменных элементов с мочой.

Анализ мочи по Нечипоренко позволяет выявить скрытую лейкоцитурию, которая часто наблюдается при хронических, скрытых и вялотекущих формах гломерулонефрита и пиелонефрита и не обнаруживается при ориентировочной микроскопии осадка мочи.

Метод используется для диагностики заболеваний почек. Так, преобладание эритроцитов над лейкоцитами характерно для хронического гломерулонефрита и артериосклероза почек, а преобладание лейкоцитов – для хронического пиелонефрита. Необходимо помнить, что при наличии калькулезного пиелонефрита в осадке могут преобладать эритроциты.

Неоднократное проведение исследования мочи по методу Нечипоренко в процессе лечения позволяет судить об адекватности назначенной терапии и помогает в случае необходимости скорректировать ее.

При диспансерном наблюдении метод Нечипоренко позволяет следить за течением заболевания и своевременно назначать терапию в случае обнаружения отклонений от нормы.

В детской и урологической практике, при диспансеризации широко применяется метод Нечипоренко в модификации Пытель А. Я. Сбор мочи и оборудование те же, что и при обычном методе Нечипоренко, отличие заключается в самом подсчете форменных элементов (подсчет форменных элементов осуществляется в камере Горяева, но не во всей, а только в 100 больших квадратах), в связи с чем нормальное количество лейкоцитов для данного метода отличается от такового при классическом методе Нечипоренко и это следует учитывать врачу при интерпретации полученных данных.

Мочу хорошо перемешивают, наливают 10 мл в градуированную центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин при 2000 об/мин. Удаляют верхний слой, оставляя 1 мл мочи вместе с осадком. Хорошо перемешивают осадок, заполняют камеру Горяева и производят подсчет раздельно лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров в 100 больших квадратах (1600 малых квадратов). Учитывая, что объем малого квадрата равен 1/4000 мм 3 . Подсчет форменных элементов в 1 мм 3 производят по следующей формуле:

где:
x – количество форменных элементов в 1 мм3 мочи,
a – количество форменных элементов в 100 больших квадратах,
b – количество малых квадратов, в которых производился подсчет,
c – количество мочи, взятой для центрифугирования (в миллилитрах).

При умножении полученного числа на 1000, узнают количество форменных элементов в 1 мл мочи:

K = (a*4000*1000)/(1600*10) = a*250,

где:
K – количество форменных элементов в 1 мл мочи,
a – количество форменных элементов в 100 больших квадратах.

При получении небольшого количества мочи в случае катетеризации мочеточника число форменных элементов подсчитывают в 1 мл нецентрифугированной мочи, используя ту же формулу, но исключая в знаменателе c. Тогда формула будет иметь следующий вид:

K = (a*4000*1000)/b = (a*4000*1000)/1600=a*2500.

В норме при подсчете форменных элементов в моче по методу Нечипоренко в модификации Пытель в 1 мл мочи содержится лейкоцитов – до 4000, эритроцитов – до 1000, цилиндров – до 20.

Иванова В. Н., Первушин Ю. В. и соавторы, «Методы исследования мочи и клинико-диагностическое значение показателей состава и свойств мочи» — Методические рекомендации, Ставрополь, 2005 г.
Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под ред. Е. А. Кост. Москва «Медицина» 1975 г.
Козловская Л. В., Николаев А. Ю. Учебное пособие по клиническим лабораторным методам исследования — Москва, Медицина, 1985 г.
Краевский В. А. Атлас микроскопии осадков мочи. Москва, «Медицина», 1976 г.
Руководство к практическим занятиям по клинической лабораторной диагностике под редакцией Базарновой М. А., Морозовой В. Т. — Киев, «Вища школа», 1988 г.
Справочник «Лабораторные методы исследования в клинике» под ред. проф. В. В. Меньшикова. Москва, «Медицина», 1987 г

Метод Каковского-Аддиса является унифицированным методом количественного определения форменных элементов в суточном объеме мочи. Этот наиболее трудоемкий и имеющий много недостатков метод все реже применяется на практике в последнее время.

Раздел: Анализ мочи

Метод Амбурже относится к методам количественного определения форменных элементов в моче. При этом определяется количество форменных элементов, выделенных с мочой за 1 минуту.

Раздел: Анализ мочи

Методы количественного определения форменных элементов в моче позволяют определить точное количество эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров, выделенных с мочой.

Раздел: Анализ мочи

Микроскопическое исследование осадка мочи является неотъемлемой частью общеклинического исследования и часто служит основным методом диагностики заболеваний почек и мочевыводящих путей.

Раздел: Анализ мочи

Сбор мочи проводится после тщательного туалета наружных половых органов, чтобы в мочу не попали выделения из них. Лежачих больных предварительно подмывают слабым раствором марганцевокислого калия, затем промежность вытирают сухим стерильным ватным тампоном в направлении от половых органов к заднему проходу. Собирая мочу у лежачих больных, необходимо следить, чтобы сосуд был расположен выше промежности во избежание загрязнения из области анального отверстия. Правильный сбор мочи нужен для получения достоверного результата анализа.

Раздел: Анализ мочи

источник

Кулешова С.В. заведующая КДЛ, врач высшей категории
Москалева С.П.врач высшей категории
Зорина Л.В. врач высшей категории
Григорьева Е.В. врач высшей категории
Минушкина Л.О. д.м.н., профессор кафедры терапии, кардиологии и функциональной диагностики Учебно-научного медицинского центра УДП РФ

При переходе на новые методики сотрудникам лаборатории следует внимательно изучать инструкции и тестировать новинки перед составлением стандартных операционных процедур. В статье рассматриваются проблемы, с которыми может столкнуться любая лаборатория при модернизации. Успешный опыт внедрение пластиковых слайд-планшетов для исследования мочи и сложности, возникшие в процессе внедрения предложены для обсуждения.
Summary the introduction of new techniques requires careful study guide and test innovations prior to the preparation of standard operating procedures. The article discusses the problems that can face any laboratory at modernization. The successful introduction of the plastic slide plates urine and difficulties encountered in the implementation process proposed for discussion.
«С микроскопическим исследованием мочи каждый врач должен быть знаком самым обстоятельным образом, так как в некоторых случаях только путём такого исследования и возможна точная и решительная диагностика данного страдания.» В.Е. Предтеченский

Пациент К. 34 лет обратился к терапевту для получения санаторно-курортной карты. На приеме активно жалоб не предъявляет. При осмотре общее состояние удовлетворительное. Температура тела 36.6°С. Сознание ясное. Кожные покровы обычной окраски. Видимые слизистые розовые. Лимфоузлы не увеличены. Отеков нет. Системы органов дыхания, система органов пищеварения без патологии. Тоны сердца звучные, ритм правильный. ЧСС 68 в мин. Артериальное давление 120/80 мм. рт. ст. Симптом поколачивания — отрицательный. Мочеиспускание безболезненное. Даны направления на анализы в необходимом объеме. По результатам выполненных анализов патология не выявлена. Пациенту выдается медицинская справка формы №072/у. После санаторно-курортного лечения в выписном эпикризе пациенту были даны рекомендации обратиться к нефрологу в связи с изменениями в анализе мочи по методу Нечипоренко. В анализе отмечалось увеличение количества эритроцитов до 2400 клеток в мл. и лейкоцитов до 4800 клеток в мл.
Пациент К. был вызван для обследования, в ходе которого проводилось исследование мочи, крови, консультация уролога, нефролога и терапевта. Результаты анализов были в пределах референтных значений. Консультации специалистов патологии не выявили. Было решено связаться с лечащим врачом пациента К. для уточнения результатов анализов. В ходе детального и подробного опроса выяснилось, что объяснить отклонения в результате анализа мочи выполненного по методу Нечипоренко специалистам санатория тоже не удалось. Клинически данных за почечную патологию у пациента К. в течение всего срока пребывания в санатории не было. Однако, после расспросов о методах и способах исследования выяснилось, что подсчет форменных элементов в моче велся врачами не с использованием камеры Горяева, а в пластиковом планшете. Данный случай привлек наше внимание, и мы стали интересоваться случаями несоответствий клинической картины у пациентов с данными анализа мочи по методу Нечипоренко. Анализируя в течение полугода результаты пациентов, полученные в нашей лаборатории с данными этих же пациентов, полученными в других лечебных учреждениях, мы выяснили, что в ряде случаев имеются завышенные результаты анализа при использовании слайд-планшетов при отсутствии клинических проявлений болезни, функциональных изменений и при нормальных значениях анализов в нашей лаборатории.

История приборов для подсчёта клеточных элементов насчитывает уже более 150 лет. Сетки в счетных камерах, предложенных различными авторами неодинаковы как по рисунку, так и по площади.

В начале прошлого века для подсчёта клеток крови применялся аппарат Тома-Цейсса (рис.1), который в дальнейшем был заменён на камеру Предтеченского (рис.2) и , наконец в середине прошлого века прибор обрёл современный вид – сетку камеры Горяева, состоящую из 225 больших квадратов, 25 из которых разграфлены на 16 маленьких. Она и используется сегодня как основной инструмент подсчёта клеток в 1 мл.мочи по методу Нечипоренко

Рисунок 2. Сетка Предтеченского

Принцип сеток в камерах один и тот же. Они разделены на то или иное число квадратов, различным образом сгруппированных. Зная объём квадрата можно произвести расчёт и определить количество клеток в единице объёма.

Перед вводом в работу пластиковых слайд — планшетов мы решили провести исследование, целью которого было оценить воспроизводимость результатов подсчёта с помощью камеры Горяева и нового пластикового слайд-планшета.

Материал и методы исследования

В качестве материала для исследования были взяты образцы крови 16 больных. Проводился подсчёт количества лейкоцитов. В качестве контрольного измерения использовались данные автоматического гематологического анализатора Сисмекс KX-21N. Подсчёт также велся 3 независимыми врачами, которые определяли количество лейкоцитов с помощью камеры Горяева и слайд-планшета.
Камера Горяева предназначена для подсчёта форменных элементов крови и клеточных элементов спинномозговой жидкости. ТУ9443-007-29508133-2007 ,РУ МЗ № ФСР 2008/02731 от 11.06.2008 г. Технические данные камеры : площадь — 9 мм2, глубина — 0,1 мм, объём — 0,9 мм3.
Камера (слайд-планшет) для микроскопического исследования осадка мочи и других биологических жидкостей, Aptaca. Каждая ячейка снабжена сеткой для подсчёта (3х3 мм) и покрыта тонкой прозрачной пластиковой пластинкой, играющей роль покровного стекла. Каждая сетка поделена на 5 квадратов (1х1 мм), которые в свою очередь разделены на 9 маленьких квадратов (0,333х0,333 мм). Изготовлена камера из полиметилметакрилата (ПММА). Регистрационное удостоверение № ФСЗ 2011/09223 от 19 марта 2012 г. Подсчёт вёлся согласно инструкции, опубликованной на сайте производителя [5].

Для исследования мы брали образцы венозной крови, определяя количество лейкоцитов с помощью автоматического гематологического анализатора Сисмекс KX-21N ( Sysmex KX-21N ) Производитель: Roche Diagnostics (Швейцария).

Результаты исследования

Проанализировано 16 проб. Подсчет вёлся независимо 3 врачами с высшей категорией. Средние значения количества лейкоцитов по данным анализатора составили 5950±2407*109/л(M±SD), при подсчёте с помощью камеры Горяева (средние данные у 3 независимых врачей) 4916±1794,4*109/л , с помощью слайд планшета (средние данные у 3 независимых врачей) — 9477±3624*109/л. Данные подсчёта и с использованием камеры Горяева и с использованием слайд — планшета достоверно отличались от данных автоматического анализатора Sysmex KX-21 N. Для двух врачей из трёх результаты подсчёта с помощью камеры Горяева и автоматического анализатора достоверно не отличались, но существенно отличались от значений, полученных при работе со слайд-планшетом

Рисунок3. Дисперсия результатов подсчёта форменных элементов крови с помощью камеры Горяева и слайд-планшета.

Обращает на себя внимание, что при подсчёте с помощью слайд -планшета были выше не только собственно средние значения количества форменных элементов крови, но и дисперсия полученных результатов, оказавшаяся достоверно большей, чем дисперсия результатов автоматического анализатора. Наименьшая дисперсия значений количества форменных элементов наблюдалась при использовании камеры Горяева (Рис 3).

Обсуждение результатов

Проведенное нами исследование показало существенные расхождения в подсчёте количества форменных элементов крови с помощью различного лабораторного оборудования. Ранее мы, проводя подсчёт в камере клеточных элементов для анализа мочи по Нечипоренко с помощью слайд-планшета, получали результаты, которые не укладывались в референсные значения. В литературе найти описание нашей проблемы или ее решение нам не удалось.
Следует также отметить, что имелись существенные разночтения, между официальной инструкцией на русском языке, и инструкцией, полученной нами непосредственно от производителя.
Мы в работе ориентировались на инструкцию, предоставленную производителем оборудования. Для собственного исследования мы выбрали подсчёт форменных элементов крови, а не мочи, в связи с тем, что имели автоматизированный способ контроля их количества.
Следует отметить, что подсчёт клеточных элементов в камере Горяева оказался более точным. У двух врачей из трёх результаты измерений достоверно не отличались от данных автоматического анализатора. Полученные данные при использовании слайд-планшета у всех трёх врачей существенно отличались, как от данных анализатора, так и от данных, традиционного подсчёта с помощью камеры Горяева. Работа с камерой Горяева позволяет получить меньший разброс результатов, чем работа со слайд — планшетом.
Таким образом, при переходе к иному методу подсчёта (например, при замене камеры Горяева на слайд-планшет для выполнения анализа по методу Нечипоренко) использование существующих референтных значений вряд ли допустимо.
При работе с другим материалом, заменяя камеру Горяева на слайд -планшет, необходимо предварительно проверить возможность использования существующих норм. Результаты, полученные при работе со слайд-планшетами часто оказываются выше, чем при использовании других методов.
На бланке с результатом следует указывать прибор, использованный в работе – камера Горяева или пластиковый слайд-планшет. Это важно для корректного сравнения результатов.
Также необходимо учесть, что инструкция, прилагаемая к слайд-планшетам не приводит полный объём информации для безопасного использования. В случае подсчёта клеток по методу Нечипоренко нельзя пользоваться предложенной формулой в инструкции без применения коэффициента концентрации. Данные по коэффициенту приводятся в полной версии инструкции производителя, либо высчитываются самостоятельно.

На наш взгляд эта тема представляет практический интерес, т.к .камеры для подсчёта клеток широко применяются и по сей день. Своей скромной публикацией мы открываем площадку для обсуждения. Просим откликнуться, и присоединиться к обсуждению специалистов разных направлений, в работе которых есть опыт внедрения слайд-планшетов.

Использованная литература:
1. «Руководство к клинической микроскопии.» В.Е.Предтеченский. Москва 1901 г. Типо-литография Т-ва И.Н.Кушнерев и Ко. 256 с 101ил

источник

КАМЕРЫ СЧЁТНЫЕ — приборы для подсчета форменных элементов крови, мочи и цереброспинальной жидкости, а также микроорганизмов. Предложена К. с. франц. физиологом Малассе (L. Ch. Malassez) в 1874 г.

К. с. представляют собой толстое предметное стекло с углублением, на дне к-рого выгравирована счетная сетка; над углублением накладывают шлифованное покровное стекло. Постоянная высота К. с. обеспечивается плотным притиранием покровного и предметного стекол до образования радужных ньютоновых колец (полосы интерференции).

Структурными элементами всех типов сеток являются большие и малые квадраты. Сетки различных типов — Тома, Бюркера, Предтеченского, Тюрка, Нейбауэра, Горяева, Фукса — Розенталя и др.— отличаются различным группированием больших и малых квадратов.

Известные величины — высота камеры, площадь сетки и ее делений и разведение взятой для исследования крови — позволяют высчитать количество форменных элементов в определенном объеме (1 мкл) крови (или другой среды).

Различают открытые и закрытые К. с. В закрытой камере покровное стекло притирают после ее заполнения, и при этом в нее могут попасть пузырьки воздуха. Такие К. с. (Тома — Цейсса с сеткой Тома, Дунгера с особой сеткой) неудобны в работе и не используются.

Открытые камеры (рис. 1) заполняются после притирания покровного стекла. Они имеют две сетки на одном предметном стекле. Пластинки с выгравированными сетками отграничены желобками одна от другой, а также от остальной части предметного стекла. Наличие желобков дает возможность регулировать заполнение камер. Некоторые камеры снабжены металлическими зажимами, фиксирующими покровное стекло.

Открытые К. с. впервые описал С. П. Алферов в 1883 г., затем в 1905 г. Бюркер (К. Burker). Известны открытые счетные камеры Ключарева, Гауссера и Леви, Гельбера, Глауберманна. В СССР широко применяются счетные камеры Горяева и Фукса — Розенталя. Камера Горяева с сеткой Горяева (рис. 2) имеет объем 0,9 мкл, площадь сетки 9 мм 2 . Сетка состоит из 225 больших квадратов; из них 100 — пустые, 25 — разделены каждый на 16 малых квадратов, 100 — разделены полосами.

Счетная камера Фукса — Розенталя с сеткой Фукса — Розенталя (рис. 3) имеет объем 3,2 мкл, площадь сетки 16 мм 2 , она состоит из 256 больших квадратов (квадраты, разделенные полосами, не считают).

Перед работой предметное стекло К. с. и шлифованное покровное стекло моют под струей водопроводной воды и насухо вытирают. Затем плотно притирают покровное стекло к камере (до появления радужных ньютоновых колец, ибо только при этом условии объем К. с. постоянен).

Содержимое пробирки перед заполнением камеры несколько раз перемешивают, затем оплавленным концом стеклянной палочки отбирают из пробирки, наклоняя ее, каплю крови и наносят на предметное стекло у самого края покровного стекла. Если одной капли крови недостаточно для полного заполнения К. с., добавляют еще каплю. Если кровь взята в смеситель, то первые капли из капилляра смесителя выпускают, а К. с. заполняют каплей из ампулы смесителя. Остатки жидкости с предметного стекла удаляют марлевым тампоном. Подсчет начинают через 3 мин. после заполнения камеры (за это время происходит оседание форменных элементов крови) под микроскопом при малом увеличении (объектив X 8, окуляр X 10 или X 15) и затемненном поле зрения (с прикрытой диафрагмой или при несколько опущенном конденсоре). Счету подлежат клетки, лежащие внутри квадрата (рис. 4). Клетки, пересеченные сторонами квадратов, считают следующим образом: если более половины клетки находится внутри квадрата, то ее считают, если вне — ее не считают. Клетки, пересекаемые линиями точно посередине, считают на двух смежных, правой и верхней, линиях квадратов и не считают на двух других. При использовании соответствующих разводящих р-ров эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, эозинофилы, базофилы и ретикулоциты могут быть подсчитаны в камере Горяева.

Эритроциты считают в 80 малых квадратах, т. е. в 5 больших квадратах, расположенных по диагонали. Расчет проводится по формуле:

где а — количество эритроцитов, подсчитанное в 80 малых квадратах, 80 — количество сосчитанных малых квадратов, 200 — степень разведения крови, 4000 — множитель для получения содержания эритроцитов в 1 мкл крови (объем малого квадрата 1/4000 мкл). Практически количество эритроцитов, подсчитанное в 5 больших квадратах, умножают на 10 000.

Лейкоциты подсчитывают в 1600 малых квадратах (в 100 больших квадратах). Расчет проводится по формуле:

где а — количество лейкоцитов, подсчитанное в 1600 малых квадратах, 1600 — количество сосчитанных малых квадратов, 20 — степень разведения крови, 4000 — множитель для получения содержания лейкоцитов в 1 мкл крови. Практически количество лейкоцитов, подсчитанное в 1600 малых квадратах, умножают на 50.

Тромбоциты подсчитывают в 400 малых квадратах (25 больших квадратах по диагонали сетки). Реактивами для разведения могут быть изотонический р-р хлорида натрия, различные р-ры, консервирующие тромбоциты и гемолизирующие эритроциты.

Считают тромбоциты под обычным микроскопом и с помощью фазово-контрастного устройства (см. Фазово-контрастная микроскопия) для более четкого выявления их. После разведения пробирку с кровью оставляют на 25—30 мин. для гемолиза эритроцитов. Затем содержимое пробирки повторно перемешивают и заполняют К. с., к-рую помещают на 5 мин. во влажную камеру (напр., чашки Петри с влажной ватой) для оседания тромбоцитов. Расчет проводят по формуле:

где а — количество тромбоцитов,, подсчитанное в 400 малых квадратах, 200 — степень разведения крови, 400 — число сосчитанных малых квадратов, 4000 — множитель для получения содержания тромбоцитов в 1 мкл крови. Практически количество тромбоцитов, подсчитанное в 400 малых квадратах, умножают на 2000.

Количество базофилов и эозинофилов подсчитывают в камере Горяева в 1600 малых квадратах, как и лейкоциты. Практически подсчитанное количество базофилов и эозинофилов умножают на 50.

Ретикулоциты подсчитывают в камере Горяева в 80 малых квадратах, как эритроциты. Практически подсчитанное количество ретикулоцитов умножают на 10 000.

Определение общего количества клеток в цереброспинальной жидкости (см.) лучше производить в камере Фукса — Розенталя (из-за небольшого числа лейкоцитов в цереброспинальной жидкости). Подсчитывают по всей сетке (256 больших квадратов) под малым увеличением микроскопа (окуляр X 15, объектив х 8).

При очень большом количестве клеток допускается подсчет половины сетки (с последующим умножением результата на 2). Расчет проводят по формуле:

где а — количество клеток, подсчитанное в 256 квадратах, 11/10— степень разведения, 3,2— объем камеры в мкл. Практически при подсчете в камере Фукса — Розенталя число лейкоцитов делят на 3.

В камере Горяева клетки цереброспинальной жидкости считают не менее 3 раз (также всю площадь), каждый раз заполняя камеру заново, затем берут среднее арифметическое. Расчет проводят по формуле:

где а — среднее арифметическое количество клеток, подсчитанное по всей сетке, 11/10 — степень разведения, 0,9 — объем камеры в мкл. Практически число подсчитанных лейкоцитов умножают на 1,2.

Количественное определение форменных элементов в моче проводит в камерах Фукса — Розенталя, Горяева: подсчет эритроцитов и лейкоцитов при среднем увеличении микроскопа, подсчет цилиндров — при малом. Степень разведения мочи зависит от метода исследования (см. Моча).

Подсчет в К. с. не вполне точен. Ошибка метода составляет от 10 до 20% в зависимости от количества подсчитываемых элементов.

Следует предохранять камеры от загрязнения и попадания пыли на сетку. После работы камеру и покровное стекло моют под струей водопроводной воды и осторожно, но тщательно вытирают чистой салфеткой (можно марлевой). Затем завертывают в бумагу и убирают в коробку.

Библиография: Справочник по клиническим лабораторным методам исследования, под ред. Е. А. Кост, с. 22, М., 1975.

источник

Вряд ли найдется кто-то, кто еще ни разу не сдавал кровь из пальца на анализы. Общий анализ крови берут практически при любом заболевании. Так в чем же его диагностическая ценность и какие диагнозы он может подсказать? Разбираем по-порядку.

Основные показатели, на которые врач обращает внимание при расшифровке общего анализа крови — это гемоглобин и эритроциты, СОЭ, лейкоциты и лейкоцитарная формула. Остальные скорее являются вспомогательными.

Чаще всего общий анализ крови назначают, чтобы понять, есть ли в организме воспаление и признаки инфекции, и если да, то какого происхождения — вирусного, бактериального или другого.

Также общий анализ крови может помочь установить анемию — малокровие. И если в крови есть ее признаки — назначают дополнительные анализы, чтобы установить причины.

Еще общий анализ крови назначают, если есть подозрение на онкологический процесс, когда есть ряд настораживающих симптомов и нужны зацепки. В этом случае кровь может косвенно подсказать, в каком направлении двигаться дальше.

Другие показания обычно еще реже.

Сейчас на бланках с результатом анализов в основном используют англ. аббревиатуры. Давайте пройдемся по основным показателям и разберем, что они значат.

Это более детальная информация о тех самых WBC из предыдущего блока.

Лейкоциты в крови очень разные. Все они в целом отвечают за иммунитет, но каждый отдельный вид за разные направления в иммунной системе: за борьбу с бактериями, вирусами, паразитами, неспецифическими чужеродными частицами. Поэтому врач всегда смотрит сначала на общий показатель лейкоцитов из перечня выше, а затем на лейкоцитарную формулу, чтобы понять, а какое звено иммунитета нарушено.

Обратите внимание, что эти показатели обычно идут в двух измерениях: абсолютных (абс.) и относительных (%).

Абсолютные показывают, сколько штук клеток попало в поле зрение, а относительные — сколько эти клетки составляют от общего числа лейкоцитов. Это может оказаться важной деталью — например, в абсолютных цифрах лимфоциты вроде как в приделах нормы, но на фоне общего снижения всех лейкоцитов — их относительное количество сильно выше нормы. Итак, лейкоцитарная формула.

А теперь пройдемся по каждому из этих показателей и разберем, что они значат.

Гемоглобин — это белок, который переносит по организму кислород и доставляет его в нужные ткани. Если его не хватает — клетки начинают голодать и развивается целая цепочка симптомов: слабость, утомляемость, головокружение, выпадение волос и ломкость ногтей, заеды в уголках губ и другие. Это симптомы анемии.

В молекулу гемоглобина входит железо, а еще в его формировании большую роль играют витамин В12 и фолиевая кислота. Если их не хватает — в организме нарушается синтез гемоглобина и развивается анемия.

Есть еще наследственные формы анемии, но они случаются гораздо реже и заслуживают отдельного разбора.

В норме гемоглобин составляет 120−160 г/л для женщин и 130-170 г/л для мужчин. Нужно понимать, что в каждом конкретном случае нормы зависят от лаборатирии. Поэтому смотреть нужно на референсные значения той лаборатории, в которой вы сдавали анализ.

Повышенные цифры гемоглобина чаще всего случаются из-за сгущения крови, если человек излишне потеет во время жары, или принимает мочегонные. Еще повышенным гемоглобин может быть у скалолазов и людей, которые часто бывают в горах — это компенсаторная реакция на недостаток кислорода. Еще гемоглобин может повышаться из-за заболеваний дыхательной системы — когда легкие плохо работают и организму все время не хватает кислорода. В каждом конкретном случае нужно разбираться отдельно.

Снижение гемоглобина — признак анемии. Следующим шагом нужно разбираться какой.

Эритроциты — это красные клетки крови, которые транспортируют гемоглобин и отвечают за обменные процессы тканей и органов. Именно гемоглобин, а точнее — его железо, красит эти клетки в красный.

Нормы для мужчин — 4,2-5,6*10*9/литр. Для женщин — 4-5*10*9/литр. Которые опять-таки зависят от лаборатории.

Повышаться эритроциты могут из-за потери жидкости с потом, рвотой, поносом, когда сгущается кровь. Еще есть заболевание под названием эритремия — редкое заболевание костного мозга, когда вырабатывается слишком много эритроцитов.

Снижении показателей обычно является признаком анемии, чаще железодефицитной, реже — другой.

Норма — 80-95 для мужчин и 80-100 для женщин.

Объем эритроцитов уменьшается при железодефицитной анемии. А повышается — при В12 дефицитной, при гепатитах, снижении функции щитовидной железы.

Повышается этот показатель редко, а вот снижение — признак анемии или снижения функции щитовидной железы.

Повышение значений почти всегда свидетельствует об аппаратной ошибке, а снижение – о железодефицитной анемии.

Это процентное соотношение форменных элементов крови к ее общему объему. Показатель помогает врачу дифференцировать, с чем связана анемия: потерей эритроцитов, что говорит о заболевании, или с избыточным разжижением крови.

Это элементы крови, ответственные за формирование тромботического сгустка при кровотечениях. Превышение нормальных значений может свидетельствовать о физическом перенапряжении, анемии, воспалительных процессах, а может говорить о более серьезных проблемах в организме, среди которых онкологические заболевания и болезни крови.

Снижение уровня тромбоцитов в последние годы часто свидетельствует о постоянном приеме антиагрегантов (например, ацетилсалициловой кислоты) с целью профилактики инфаркта миокарда и ишемического инсульта головного мозга.

А значительное их снижение может быть признаком гематологических заболеваний крови, вплоть до лейкозов. У молодых людей — признаками тромбоцитопенической пурпуры и других заболеваний крови. Так же может появляться на фоне приема противоопухолевых и цитостатических препаратов, гипофункции щитовидной железы.

Это основные защитники нашего организма, представители клеточного звена иммунитета. Повышение общего количества лейкоцитов чаще всего свидетельствует о наличии воспалительного процесса, преимущественно бактериальной природы. Также может оказаться признаком так называемого физиологического лейкоцитоза (под воздействием боли, холода, физической нагрузки, стресса, во время менструации, загара).

Нормы у мужчин и женщин обычно колеблются от 4,5 до 11,0*10*9/литр.

Снижение лейкоцитов – признак подавления иммунитета. Причиной чаще всего являются перенесенные вирусные инфекции, прием некоторых лекарств (в том числе нестероидных противовоспалительных и сульфаниламидов), похудение. Гораздо реже — иммунодефициты и лейкозы.

Самый большой пул лейкоцитов, составляющий от 50 до 75% всей лейкоцитарной популяции. Это основное звено клеточного иммунитета. Сами нейтрофилы делятся на палочкоядерные (юные формы) и сегментоядерные (зрелые). Повышение уровня нейтрофилов за счёт юных форм называют сдвигом лейкоцитарной формулы влево и характерно для острой бактериальной инфекции. Снижение — может быть признаком вирусной инфекции, а значительное снижение — признаком заболеваний крови.

Второй после нейтрофилов пул лейкоцитов. Принято считать, что во время острой бактериальной инфекции число лимфоцитов снижается, а при вирусной инфекции и после неё – повышается.

Значительное снижение лимфоцитов может наблюдаться при ВИЧ-инфекции, при лейкозах, иммунодефицитах. Но это случается крайне редко и как правило сопровождается выраженными симптомами.

Редкие представители лейкоцитов. Повышение их количества встречается при аллергических реакциях, в том числе лекарственной аллергии, также является характерным признаком глистной инвазии.

Самая малочисленная популяция лейкоцитов. Их повышение может говорить об аллергии, паразитарном заболевании, хронических инфекциях, воспалительных и онкологических заболеваниях. Иногда временное повышение базофилов не удается объяснить.

Самые крупные представители лейкоцитов. Это макрофаги, пожирающие бактерии. Повышение значений чаще всего говорит о наличии инфекции — бактериальной, вирусной, грибковой, протозойной. А также о периоде восстановления после них и о специфических инфекциях — сифилисе, туберкулезе. Кроме того может быть признаком системных заболеваниях — ревматоидный артрит и другие.

Если набрать кровь в пробирку и оставить на какое-то время — клетки крови начнут падать в осадок. Если через час взять линейку и замерить, сколько миллиметров эритроцитов выпало в осадок — получим скорость оседания эритроцитов.

В норме она составляет от 0 до 15 мм в час у мужчин, и от 0 до 20 мм у женщин.

Может повышаться, если эритроциты чем-то отягощены — например белками, которые активно участвуют в иммунном ответе: в случае воспаления, аллергической реакции, аутоимунных заболеваний — ревматоидный артрит, системная красная волчанка и другие. Может повышаться при онкологических заболеваниях. Бывает и физиологическое повышение, объясняемое беременностью, менструацией или пожилым возрастом.

В любом случае — высокий СОЭ всегда требует дополнительного обследования. Хоть и является неспецифическим показателем и может одновременно говорить о многом, но мало о чем конкретно.

В любом случае по общему анализу крови практически невозможно поставить точный диагноз, поэтому этот анализ является лишь первым шагом в диагностике и некоторым маячком, чтобы понимать, куда идти дальше. Не пытайтесь найти в своем анализе признаки рака или ВИЧ — скорее всего их там нет. Но если вы заметили любые изменения в анализе крови — не откладывайте визит к врачу. Он оценит ваши симптомы, соберет анамнез и расскажет, что делать с этим анализом дальше.

Мы заметили, что в комментариях очень много вопросов по расшифровке анализов, на которые мы не успеваем отвечать. Кроме того, чтобы дать хорошие рекомендации — важно задать уточняющие вопросы, чтобы узнать ваши симптомы. У нас в сервисе очень хорошие терапевты, которые могут помочь с расшифровкой анализов и ответить на любые ваши вопросы. Для консультации переходите по ссылке.

источник

Камера Горяева – оптическое устройство для подсчета клеток или иных соизмеримых с ними частиц в заданном объеме жидкости. Состоит из толстого предметного стекла, имеющего прямоугольное углубление (камеру) с нанесенной микроскопической сеткой и тонкого покровного стекла. Камера разработана профессором Казанского университета Горяевым Н.К. Благодаря увеличенному объему сетки отличается большей точностью подсчета, по сравнению с другими камерами (Тома, Цейса, Тюрка, Бюркера).

Технические характеристики камеры Горяева

Размеры малого квадрата камеры Горяева 0,05×0,05 мм
Размеры большого квадрата камеры Горяева 0,2×0,2 мм
Глубина камеры 0,1 мм
Объем жидкости под 1 малым квадратом 0,00025 мм3 (мкл) = 1/4000 мм3 (мкл)
Объем жидкости под 1 большим квадратом 0,004 мм3 (мкл) = 1/250 мм3 (мкл)
Объем камеры Горяева 0,9 мм3 (мкл)

Описание сетки камеры Горяева

Сетка камеры Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 малых квадратов.

Рис 1. Сетка камеры Горяева

Рис 2. Большой (1) и малый (2) квадраты сетки камеры Горяева

Рис 3. 225 больших квадратов сетки камеры Горяева

Рис 4. 100 больших квадратов сетки камеры Горяева

Рис 5. Большой квадрат камеры Горяева разделенный на 16 малых квадратов.

Обслуживание камеры Горяева

Между работой камера должна храниться в сухом месте. После работы камера дезинфицируется погружением на 30 минут в 70% раствор этилового спирта, или на 60 минут в 4% раствор формалина, после чего камера промывается дистиллированной водой и протирается мягкой салфеткой.

Правило подсчета клеток в квадрате (правило Егорова)

В квадрате считаются клетки, лежащие внутри его, а также касающиеся левой и верхней границ. Клетки, касающиеся правой и нижней границ при подсчете не учитываются.

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 20 раз 3–5% раствором уксусной кислоты с метиленовым синим (например, 20 мкл крови и 380 мкл р-ра уксусной к-ты). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать лейкоциты в 100 больших квадратах. Расчет числа лейкоцитов осуществляют, исходя из разведения крови (20) и числа больших квадратов (100), по формуле: X = (a×250×20) / 100, где Х – число лейкоцитов в 1 мкл крови; а – число лейкоцитов, посчитанных в 100 больших квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных лейкоцитов умножают на 50.

Методика подсчета эритроцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 200 раз в 0,9% растворе NaCl или растворе Гайема (берется 20 мкл крови и 4 мл раствора). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать эритроциты в 5 больших квадратах разделенных на 16 малых (т.е. в 80 малых квадратах). Рекомендуется считать клетки в квадратах, расположенных по диагонали. Расчет числа эритроцитов осуществляют, исходя из разведения крови (200) и числа малых квадратов (80), по формуле: X = (a×4000×200) / 80, где Х – число эритроцитов в 1 мкл крови; а – число эритроцитов, посчитанных в 80 малых квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных эритроцитов умножают на 10 000.

источник

Лабораторная камера Горяева, названная в честь русского врача, профессора Казанского университета Горяева Н.К., является специальным монолитным предметным стеклом, предназначенным для подсчета количества клеток в заданном объеме жидкости. Кроме того, используя камеру Горяева можно определить увеличение микроскопа. Камеры Горяева широко применяются в области клинических и биомедицинских исследований.

Популярные области применение камеры Горяева:

Подсчет форменных элементов крови
- Подсчет эритроцитов
- Подсчет лейкоцитов
- Подсчет ретикулоцитов
- И т.п.
Подсчет форменных элементов мочи
Исследование эякулята – оценка количественных и качественных параметров сперматозодиов
Вычисление концентрации спор в вакцине
Подсчет ооцист в препарате
И т.п.

Камеры Горяева выпускаются в двух модификациях: двухсеточные (двухкамерные) и четырехсеточные (четырехкамерные). В определении цены камеры Горяева важную роль играет качество шлифовки стекла, метод нанесения сетки – лазерная гравировка или же вакуумное напыление.

Что собой представляет камера Горяева? Камера Горяева есть не что иное, как прозрачное монолитное предметное стекло поперечными прорезями и нанесенной специальным образом микроскопической сеткой. В случае двухкамерной камеры Горяева мы имеем четыре прорези, образующие три поперечно расположенных площадки, при этом средняя площадка разделена продольной прорезью на две одинаковых камеры, на каждой из поверхности площадки которых нанесена сетка. В случае же четырехкамерной камеры Горяева мы получаем предметное стекло с пятью прорезями, образующих четыре площадки, при этом две внутренние дополнительно разделены продольной прорезью для получения четырех камер с нанесенной микроскопической сеткой на поверхности площадок.

Рассмотрим более подробно особенности сетки. Специальная сетка наносится на внутренние площадки, расположенные ниже соседних боковых площадок на 0.1мм. Боковые площадки предназначены для притирания покровного стекла до появления Ньютоновских колец. Как правило, используют специальное покровное стекло для камеры Горяева с закругленными краями. После притирания покровного стекла создается камера, закрытая с двух боковых сторон, а с двух других остаются щели (так называемые, капиллярные пространства), через которые и заполняют камеру. Что конкретно представляет собой сетка? Микроскопическая сетка камеры Горяева расчерчена на большие и маленькие квадраты, сгруппированные различными способами. Сетка Горяева содержит 225 больших квадратов (15 рядов по 15 больших квадратов в каждом), разграфленных вертикально, горизонтально, крест-накрест и неразграфленных. При этом размеры малых делений клетки сетки составляют 0.05мм, а больших – 0.2мм. Важно, что малый квадрат со стороной 0.05мм во всех сетках является постоянной величиной. Не трудно рассчитать, что площадь малого квадрата равна 0.0025 мм2, а большого квадрата – 0.04мм2 . Тогда получаем, что объем жидкости над квадратом, образованным большими делениями сетки Горяева, составляет 0.004 микролитра.

Подсчитав количество форменных элементов (ФЭ) над большим квадратом, можно подсчитать плотность данного типа клеток в суспензии по формуле:

где X — количество ФЭ/мл, M- количество ФЭ над большим квадратом.

При работе с камерой Горяева важно следить, чтобы ее рабочие поверхности оставались сухими и чистыми. Кроме того, при подсчете форменных элементов нельзя допускать наличие воздушных пузырей на сетке камеры, так как они могут мешать точности подсчета.

После работы с камерами Горяева следует выполнить их дезинфекцию одним из допустимых способов:

Погружение в 70%-ный раствор этилового спирта на 30 минут
Погружение в 4%-ный раствор формалина на 60 минут при комнатной температуре.

Приведем примеры применения камеры Горяева и некоторые формулы.

Прежде чем приступить к проведению лабораторных исследований, рекомендуется тщательно протереть камеру Горяева небольшим кусочком чистого бинта, слегка смоченного в спирте. Мы не советуем использовать для этих целей вату, так как она может оставить волокна. Таким же образом следует обработать и покровное стекло для камеры Горяева. Учтите, что при использовании низкокачественного спирта на поверхностях может образоваться осадок, тем или иным образом мешающий проведению исследований. Чтобы избежать появления связанных с этим явлением нежелательных эффектов, рекомендуется дополнительно протереть камеру и покровное стекло чистым марлевым шариком без спирта. Притирание покровного стекла к камере должно быть выполнено очень тщательно до появления на месте контакта радужных колец (так называемых, цветных колец Ньютона) с обоих краев. Для лучшего притирания можно воспользоваться одной хитростью и слегка выдохнуть воздух на камеру и покровное стекло, так чтобы небольшое количество влаги сконденсировалось на поверхностях стекол, что обеспечит лучший контакт.

При отсутствии специальных покровных стекол, прилагающихся к камере Горяева, можно использовать обычные стандартные покровные стекла.

Помимо целевого использования камеры Горяева для подсчета форменных элементов крови и т.п., данное стекло может расцениваться как своеобразный эталон для определения увеличения микроскопа. Для этого следует воспользоваться следующей формулой:

X=(p1-p2)/(a*N)

где X – это увеличение микроскопа; p1 – положение левой границы клетки камеры Горяева; p2 – положение правой границы клетки или группы клеток; N – количество клеток между измеряемыми границами; a — размер клетки камеры Горяева (равен 0,05 мм).

Камера Горяева также используется для подсчёта количества клеток в культуре.

Для подсчета клеточных элементов в жидкостях, содержащих их в меньших концентрациях, используются аналогичные по конструкции камеры Фукса-Розенталя и Нажотта, имеющие большую глубину – 0.2 мм и 0.5 мм соответственно. Эти же камеры используются в альгологии для количественного учета фитопланктона. Часто камера Фукса-Розенталя используется для подсчета форменных элементов спинномозговой жидкости. В отличие от камеры Горяева, большие квадраты сетки Фукс-Розенталя не разграфлены и сгруппированы по 16 квадратов, причем каждая такая группа ограничена тройными линиями.

Наиболее часто камеры Горяева используются именно для определения форменных элементов крови при проведении лабораторных исследований. Так для подсчета эритроцитов кровь необходимо развести в 200 раз, лейкоцитов – в 20 раз. Количество форменных элементов (ФЭ) в 1мкл крови определяют по формуле:

где N – искомое количество ФЭ в 1 мкл крови; m – число ФЭ в определенном количестве малых квадратов; q – количество малых квадратов сетки камеры Горяева, в которых подсчитывались ФЭ, s – степень разведения крови.

Для подсчета эритроцитов используются 5 больших или 80 малых квадратов сетки, расположенных по диагонали. Таким образом, получаем следующую формулу:

Для подсчета лейкоцитов можно использовать один из трех методов:

1. Лейкоциты считают в 64 больших (пустых) квадратах

2. Лейкоциты считают по всей сетке в 169 больших квадратах (рекомендуется для образцов крови с выраженной лейкопенией)

3. Лейкоциты считают в 100 больших квадратах (64 пустых + 36 разграфленных квадратов по периметру сетки)

Таблица нормальных значений:

Форменные элементы	Норма
Эритроциты	Мужчины	4 000 000 – 5 100 000 в 1 мкл
Эритроциты	Женщины	3 700 000 – 4 700 000 в 1 мкл
Лейкоциты	4 000 – 9 000 в 1 мкл

Для определения ФЭ в мочевом осадке при анализах мочи по Нечипоренко, Аддис-Каковскому, Амбурже осуществляется по всей сетке Горяева и рассчитывается по формуле:

где N – число ФЭ в 1 мкл осадка; m – число ФЭ, подсчитанных по всей сетке; 0.676 – объем камеры Горяева (мкл)

источник

Камера Горяева — небольшое приспособление, необходимое для подсчета форменных элементов, полученных из биологических жидкостей человека. Оптическое приспособление выглядит, как стекло, внутрь которого помещается небольшое количество исследуемого материала. Оно широко используется для лабораторных методов исследования в медицинских учреждениях. Осуществляют подсчет лейкоцитов в камере Горяева по методике Нечипоренко, Амбурже.

Устройство представлено толстым стеклом, внутри которого имеется углубление. На нем нанесена сетка, видимая только под микроскопом, по которой врач-лаборант подсчитывает клетки. Сверху камеры помещаются предметные стекла таким образом, чтобы исследуемый материал сдавливался с двух сторон.

Камера Горяева производится в 2 вариантах:

двухсеточная (состоит из 2 камер);
четырехсеточная (состоит из 4 камер).

Цена приспособления зависит от его качества. Производитель должен отшлифовать стекло, правильно нанести сетку с помощью лазера или вакуумного напыления.

Сетка Горяева состоит из 225 квадратов. Они бывают большими и малыми. Врач перемещает микроскоп над ними слева направо, вниз, затем справа налево, пока все поля не закончатся.

Чтобы приспособление показывало верные результаты, за ним необходимо ухаживать. Камеру необходимо тщательно протирать перед применением. Для этого используют бинт, который смачивают в спирте. Стерилизующая жидкость должна быть качественная, чтобы на поверхности стекла не осталось осадка. Стекло готово к работе, если на нем появились радужные кольца на обеих поверхностях.

Важно! Нельзя использовать для протирания камеры вату, так как она содержит волокна, которые могут остаться на поверхности стекла, что затруднит исследование.

Камера Горяева идёт в стандартной комплектации, с покровными стеклами. Если они отсутствуют или сломались, возможно использование обычных стекол, соответствующих по размеру.

Во время работы с камерой и предметными стеклами врач-лаборант должен надевать перчатки. Это предотвращает попадание отпечатков пальцев, которые будут мешать в работе с микроскопом.

После завершения работы камера должна быть продезинфицирована. Для этого ее погружают целиком в раствор этилового спирта. Время дезинфекции составляет 30 минут. Если используется другой стерилизатор, время удлиняется до 1 часа. После завершения данного этапа устройство обрабатывают водой и протирают насухо.

Для подсчета лейкоцитов с помощью камеры Горяева необходимо подготовить образец крови и само приспособление. Для этого выполняются следующий пункты:

разведение биологической жидкости раствором уксусной кислоты с метиленовым синим в пропорции 1:20;
стекло протирают спиртом и сухой марлевой салфеткой до появления специфических колец, при этом важно не повредить поверхность;
пустое стекло предварительно просматривают под микроскопом, чтобы предотвратить попадание инородных предметов;
полученную разведенную кровь добавляют на углубление камеры с помощью стеклянной палочки;
жидкость должна распределится равномерно, для этого выжидают 1-2 минуты после ее нанесения;
на предметное стекло направляют микроскоп, подсчитывают все лейкоциты;
полученную цифру вставляют в формулу, которая подсчитывает общее количество лейкоцитов в объёме жидкости.

Внимание! Если в жидкость попал воздух, подсчет лейкоцитов невозможен. Камеру промывают дистиллированной водой, наливают разведенную кровь повторно.

Подсчет лейкоцитов в камере Горяева с уксусной кислотой уничтожает все эритроциты, а метиленовый синий дает окрашивание белых кровяных телец.

При получении данных пациентами или врачом следует учитывать, что метод не является достаточно точным. Лаборант может ошибиться в подсчете, пропустить некоторые клетки. Более информативные данные получают при подсчете лейкоцитов с помощью полуавтоматических анализаторов, которые в точности измеряют число клеток в 1 мл биологической жидкости.

Подсчет клеток осуществляет, учитывая что кровь разводилась в 20 раз, клетки считались в 100 квадратах. Поэтому используют следующую формулу:

L=(a×250×20)×10 6 /100

L – обозначение лейкоцитов, которые необходимо рассчитать;
a – количество подсчитанных лейкоцитов;
250 – число, при умножении на которое получается количество клеток на 1 мкл крови, так как объём большого квадрата составляет 1/250 мкл;
20 – разведение материала при подсчете лейкоцитов в камере Горяева;
100 – число больших квадратов;
10 6 – число мкл в 1 квадрате.

Подробно о том, как правильно подсчитать лимфоциты.

По формуле выводится количество лейкоцитов на 1 литр крови. У здорового человека это число составляет 4-9×10 9 /л. Показатели могут варьировать в норме, слега выходя за пределы значений, в зависимости от следующих факторов:

возраст;
прием пищи;
время суток;
состояние организма.

Если после подсчета формулы, показатель резко возрастает или снижается, исследования проводят повторно. После подтверждения результата бланк анализа передают пациенту или врачу.

Повышение лейкоцитов происходит при:

инфекционных, вирусных, грибковых заболеваниях (это означает, что организм борется с болезнью);
злокачественных и доброкачественных новообразованиях, которые приводят к резкому увеличению количества форменных элементов крови.

Снижение количества лейкоцитов появляется при нарушениях иммунной системы. Возможны следующие состояния:

врожденный или приобретенный иммунодефицит;
патологические состояния красного костного мозга, приводящие к снижению продукции форменных элементов крови.

С помощью камеры Горяева исследуется осадок урины. Для этого биологическую жидкость оставляют на некоторое время в пробирке. Форменные элементы, другие вещества осаждаются на дно пробирки. С помощью стеклянной палочки берётся небольшое количество мочи с осадком, добавляется в полость камеры.

Дальнейшие подсчеты аналогичны методу исследования крови. Определяется количество клеток в 100 квадратах, полученный результат подставляется в формулу.

Методика подсчета лейкоцитов в моче с помощью камеры Горяева является недостаточно точной, так как возможны следующие нарушения:

ошибка в подсчете;
забор недостаточного количества осадка;
нахождение большего количества лейкоцитов в другой части мочи.

Поэтому при спорных результатах врачи рекомендуют пройти исследование урины с помощью полуавтоматических анализаторов. Но при подсчете лейкоцитов с помощью камеры Горяева возможно обнаружение врачом лаборантом дополнительных образований:

Полуавтоматический анализатор выявляет только заданный параметр.

В норме лейкоциты не должны находиться в урине. Возможно незначительное их количество, которое отличается по полу:

3 клеток у мужчин;
5 клеток у женщин.

Если количество показателей повышено, это означает, что образовался воспалительный процесс в одном из отделов мочевыделительного пути.

Камера Горяева — устройство, которое используется в медицинских учреждениях. Метод не даёт стопроцентной гарантии полученных результатов. Но врач может с помощью микроскопа найти другие клетки или образования, которые помогут поставить диагноз.

Екатерина Беликова, врач лабораторной диагностики, специально для Mirmam.pro

источник

Пиурия — макроскопически выявляемое наличие гноя в моче.

Присутствие гноя в свежевыпущенной моче доказывается диффузным ее помутнением, наличием комочков, хлопьев и нитей, не исчезающих после ее подогревания и добавления в нее нескольких капель 10 % раствора хлористоводородной иди уксусной кислоты, а также микроскопией осадка мочи.

Клинически выделяют три вида пиурии: 1-ю — начальную (инициальную), 2-ю — конечную (терминальную), 3-ю — полную (тотальную).

Источником пиурии могут быть паренхима почки, почечная лоханка, мочеточники, мочевой пузырь, мочеиспускательный канал или мужские половые органы (предстательная железа, семенные пузырьки), откуда при воспалительном процессе лейкоциты проникают в мочевые пути. Гной в моче появляется при вскрытии в мочевой пузырь гнойников параметрия, аппендикулярного абсцесса и т.д. Ориентировочно установить источник пиурии можно с помощью трехстаканной пробы. Больной мочится поочередно в 3 стакана, и содержимое каждого из них исследуют макро- и микроскопически.

Наличие гнойной мочи только в 1-м стакане (инициальная пиурия) указывает на воспалительный процесс в уретре, 3-м (терминальная пиурия) — на воспалительный процесс в предстательной железе или семенных пузырьках. Наличие гноя во всех 3 стаканах (тотальная пиурия) является признаком воспалительного процесса в почке, почечной лоханке, мочевом пузыре или гнойного очага, вскрывшегося в мочевые пути. Важно, чтобы при проведении данной пробы в мочевом пузыре содержалось достаточное количество мочи.

Поэтому больного нужно предупредить, чтобы он предварительно не мочился несколько часов. Отличить почечную пиурию от пузырной можно путем промывания мочевого пузыря. При локализации воспалительного процесса в почке промывание мочевого пузыря не влияет на степень пиурии, а при локализации в мочевом пузыре она становится менее выраженной.

У здоровых людей в моче постоянно содержится небольшое количество лейкоцитов. О лейкоцитурии принято говорить, если в осадке мочи содержится 6 и больше лейкоцитов в поле зрения микроскопа. В выявлении лейкоцитурии исключительно важное значение имеет методика сбора мочи. У женщин моча может быть загрязнена во время акта мочеиспускания выделениями из влагалища, у мужчин — из препуциального мешка, у девочек — из вульвы. Поэтому мочу следует собирать после тщательной обработки наружных половых органов и наружного отверстии уретры антисептическими растворами.

Для получения сравнимых результатов при микроскопическом исследовании осадка мочи соблюдают стандартные условия. Берут постоянно одно и то же количество (10 мл) предварительно тщательно перемешанной мочи и центрифугируют ее в одинаковых условиях (5 мин при 2000 об/мин). Затем быстрым наклоном пробирки сливают прозрачный верхний слой, а оставшийся осадок переносят пипеткой с тонко оттянутым концом на середину предметного стекла и накрывают покровным.

Осадок мочи исследуют при спущенном конденсоре или суженной диафрагме микроскопа. Препарат вначале просматривают при малом увеличении (окуляр 7 или 10, объектив 7), а затем при среднем (окуляр тот же, объектив 40). Определяют количество лейкоцитов и других форменных элементов в поле зрения микроскопа при среднем увеличении.

Правильно интерпретировать полученные данные при небольшом количестве лейкоцитов в осадке мочи бывает нелегко, так как содержание лейкоцитов определяется трудно учитываемыми сведениями: небольшим числом лейкоцитов в поле зрения (3—7, 2—8 и т.д.), скоплениями в слизи до числа лейкоцитов, которые с трудом можно сосчитать. Учитывая это, в настоящее время в сомнительных случаях применяют количественные методы выявления лейкоцитурии. Они заключаются в подсчете количества лейкоцитов в определенном объеме мочи или в моче, выделенной больным за определенный период времени.

Так, например, определяют количество форменных элементов в моче, выделенной за сутки (метод Каковского—Аддиса), за 1 ч (метод Рофе), за 1 мин (метод Амбюрже); содержание лейкоцитов в 1 мл мочи (метод Нечипоренко) или в 1 мм 3 нецентрифугированной мочи (метод Стансфилда—Уэбба). В основе всех количественных методов исследования лежит определение числа форменных элементов (отдельно лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров) в 1 мм 3 осадка мочи с помощью счетной камеры (гемоцитометра).

В 1910 г. А.Ф.Каковский первым предложил заменить обычный метод исследования осадка мочи более точным количественным определением в нем форменных элементов. Спустя 15 лет Аддис (1925) предложил методику определения форменных элементов в суточной моче, во многом аналогичную методу Каковского. Мочу собирают в течение 10 или 12 ч, удобнее всего ночную порцию (с 22 до 8 ч утра).

Если больной за это время опорожняет мочевой пузырь неоднократно, то для предотвращения форменных элементов от разрушения необходимо добавлять в сосуд с мочой 4—5 капель формальдегида или другой стабилизатор. Из общего количества выделенной за это время мочи для центрифугирования берут такое, которое больной выделил за 12 мин, т.е. за 1/5 ч. Это количество определяют по формуле:

где Х — количество мочи, выделенное за 12 мин (мл); V — количество мочи, собранной за 10-12 ч (мл); t — время, в течение которого собирали мочу для исследования (ч); 5 — число, на которое нужно разделить результат, чтобы получить объем мочи, выделенной за 1/5 ч, т.е. за 12 мин.

Мочу центрифугируют в градуированной пробирке 5 мин — при 2000 об/мин. 1 мл мочи оставляют в пробирке, не нарушая осадка. Осадок смешивают с оставленной мочой и каплю взвеси помещают в камеру Горяева для подсчета форменных элементов в 1 мм 3 . Лейкоциты подсчитывают в 100 больших квадратах, что соответствует 1600 маленьких квадратов сетки Горяева.

Поскольку основной счетной единицей камеры Горяева, как и большинства других счетных камер, является маленький квадрат, объем которого равен 1/4000 мм 3 , лейкоциты подсчитывают в 1 мм 3 осадка мочи по общей для всех количественных методик формуле:

где X — количество лейкоцитов в 1 мм 3 осадка мочи; а — количество лейкоцитов в 100 больших квадратах; b — количество маленьких квадратов, в которых подсчитывались лейкоциты.

Зная количество лейкоцитов в 1 мм 3 осадка мочи, легко вычислить их наличие в суточном количестве мочи по формуле:

где Н — количество лейкоцитов в суточной моче, х — количество лейкоцитов в 1 мм 3 осадка мочи. Количество лейкоцитов умножают на 1000, так как для исследования оставляли 1 мл (1000 мм 3 ) осадка мочи. Полученное число будет означать количество лейкоцитов в моче, выделенной за 1/5 ч, так как осадок получен при центрифугировании из этого количества мочи. Для установления количества лейкоцитов в суточной моче полученное число умножают на 5 (за 1 ч) и на 24 (за 24 ч). Так как 1000, 5 и 24 являются постоянными величинами, для определения количества лейкоцитов в суточной моче необходимо количество лейкоцитов в 1 мм 3 осадка мочи умножить на 120 тыс.

Недостатками пробы являются ее обременительность для больного и персонала, а также невозможность определения источника лейкоцитурии, поскольку не исключается попадание гноя из наружных половых органов, мочеиспускательного канала и предстательной железы.

где Н — количество лейкоцитов в 1 мл мочи; х — количество лейкоцитов в 1 мм 3 осадка мочи; S — количество мочи, взятой для центрифугирования (мл).

Применение метода Нечипоренко в повседневной практике на протяжении многих лет показало его преимущество во многих отношениях. Во-первых, он не обременителен для больного и персонала, поскольку не нужно собирать мочу за строго определенный промежуток времени и определять ее количество. Во-вторых, его можно использовать для исследования небольшого количества мочи, полученного из почки при катетеризации мочеточников.

В-третьих, результаты исследования получают значительно быстрее, чем при применении других методик количественного определения лейкоцитурии. В-четвертых, методика позволяет исследовать среднюю порцию мочи, что исключает попадание гноя из мочеиспускательного канала, предстательной железы и семенных пузырьков, что имеет принципиальное значение при выявлении источника лейкоцитурии.

Границы нормальных и патологических показателей лейкоцитурии довольно относительны. Для интерпретации полученных данных следует учитывать нормальные и патологические показатели лейкоцитурии при применении различных количественных методик.

С целью определения источника лейкоцитурии и степени активности воспалительного процесса применяется метод суправитальной окраски осадка мочи, который предложили в 1949 г. R.Stemheimer и B.I.Malbin. Штернгеймер и Мальбин показали, что лейкоциты мочи отличаются друг от друга по внешнему виду и в зависимости от морфологических особенностей окрашиваются специальной краской (водно-алкогольная смесь 3 частей генцианвиолета и 97 частей шафранина) либо в красный, либо в бледно-голубой цвет. Лейкоциты, окрашенные в голубой цвет, бывают двух видов.

Лейкоциты первого вида не отличаются от обычных сегментоядерных. Лейкоциты второго вида увеличены в размере в 2— 3 раза, округлой формы, иногда с вакуолизацией протоплазмы. Их ядро многодольчатое или представляется разделенным на 2—3 сферических ядра и обычно темнее протоплазмы. Гранулы протоплазмы этих лейкоцитов находятся в состоянии броуновского движения.

Лейкоциты второго вида принято именовать клетками Штернгеймера—Мальбина. Они представляют собой обычные жизнеспособные сегментоядерные нейтрофильные лейкоциты, проникающие в мочу из очага воспаления в почечной паренхиме и меняющие вид и форму в строго определенных условиях, среди которых наиболее важными являются изменения осмотических свойств мочи и осмотической резистентности лейкоцитов, попавших в мочу.

Клетки Штернгеймера—Мальбина обнаруживают примерно у 50 % больных острым пиелонефритом и у 25 % больных хроническим пиелонефритом. Клетки Штернгеймера—Мальбина не являются патогномоничными для пиелонефрита, поскольку могут содержаться в секрете предстательной железы, выделениях из влагалища. Если попадание в мочу секрета предстательной железы и влагалищного содержимого исключено, то клетки Штернгеймера—Мальбина указывают на наличие неспецифического воспалительного процесса в почке и его активность, так как лейкоциты данного вида практически отсутствуют в моче при остром и хроническом цистите.

В связи с тем что жизнеспособные лейкоциты превращаются в моче в клетки Штернгеймера-Мальбина лишь при низкой осмотической концентрации и поэтому далеко не всегда могут быть обнаружены. В.С.Рябинский и В.Е.Родоман (1966) предложили методику исследования в осадке мочи активных лейкоцитов. Метод основан на том, что жизнеспособные лейкоциты, попавшие в мочевые пути из очага воспаления в почке, обязательно превращаются в моче с низким осмотическим давлением в крупные клетки с подвижностью гранул их протоплазмы.

Мочу у больных получают при самостоятельном мочеиспускании из средней порции после обработки наружных половых органов и наружного отверстия уретры дезинфицирующим раствором. К осадку центрифугированной мочи добавляют 1 каплю краски следующего состава: эозина — 250 мг, 1 % фенола 2 мл, 40 % формалина 0,5 мл, глицерина 10 мл, дистиллированной воды 87,5 мл. Ю.А.Пытель и С.Б.Шапиро (1970) рекомендуют производить окраску осадка мочи с помощью 1 % водного раствора метиленового синего. Осадок исследуют под микроскопом при увеличении в 800—900 раз.

При отсутствии клеток Штернгеймера—Мальбина к осадку мочи добавляют равное количество дистиллированной воды, содержимое пробирки смешивают и повторно исследуют под микроскопом спустя 5—7 мин. О наличии активных лейкоцитов свидетельствует появление крупных светло-голубых лейкоцитов с подвижными гранулами в протоплазме. Активные лейкоциты обнаруживают у 87,8 % больных острым пиелонефритом и у 79,8 % больных хроническим пиелонефритом. Они отсутствуют в моче лишь при полной окклюзии мочеточника или в стадии ремиссии хронического пиелонефрита.

Особенно важное диагностическое значение активные лейкоциты имеют в серозной стадии острого пиелонефрита, когда в почке отсутствуют деструктивные изменения и незначительная лейкоцитурия обусловлена проникновением жизнеспособных лейкоцитов из очага воспаления в межуточной ткани почки через сохранившие анатомическую целость канальцы в просвет нефрона.

При исследовании осадка мочи больных после трансплантации почек Б.В.Петровский и соавт, (1969) обнаружили преобладание лимфоцитов. В.П.Ситникова и соавт. (1973) отметили, что при пиелонефрите у детей преобладает нейтрофильный профиль лейкоцитурии, а при гломерулонефрите — лимфоцитарный. Это позволяет использовать исследование профиля лейкоцитурии при дифференциальной диагностике различных нефропатий, а также при отличии реакции отторжения от гнойно-воспалительного процесса в пересаженной почке.

Методика исследования заключается в следующем. Собирают среднюю порцию мочи, центрифугируют в течение 5 мин при 2000 об/мин, сливают надосадочную жидкость.

К осадку добавляют 2 капли метанола для предотвращения paзрушения клеток при высушивании. Небольшое количество осадка помещают тонким слоем на предметное стекло. Высушенный мазок фиксируют в метаноле несколько минут и окрашивают в течение 5—10 мин красителем Гимзы. Промытый и высушенный мазок исследуют под иммерсионной системой микроскопа с подсчетом лейкоцитарной формулы. Для получения правильных результатов необходимо, чтобы ОПМ была не ниже 1,012—1,014, рН мочи в пределах 5,0—6,5 и лейкоцитарная формула определялась при подсчете не менее 100 клеток.

При наличии активного хронического воспалительного процесса в почке лейкоцитурии и активных лейкоцитов в осадке мочи не отмечается. Отсутствие изменений в моче и клинически выраженного обострения нередко ставит практического врача в затруднительное положение, особенно если нет характерных для хронического пиелонефрита изменений по данным других методов исследования.

В связи с этим с целью выявления скрытой лейкоцитурии стали применять провокационные пробы, которые позволяют получить у больных хроническим пиелонефритом увеличенное количество лейкоцитов в моче. В настоящее время применяют пирогенный, преднизолоновый, парафиновый, нафталановый, озокеритовый и другие провокационные тесты.

Пирогенный тест впервые применили Pears и Houghtorn в 1958 г. Они вводили внутривенно препарат пирексал, который вызывает кратковременную лихорадку и провоцирует выделение лейкоцитов из очага воспаления в почке в мочу. Н.Г.Мкервали (1968) применила в качестве пирогенного вещества пирогенал. Пирогенал вводят внутримышечно в количестве 50 мкг после сбора утренней порции мочи. Затем собирают 3-часовые порции мочи и одну порцию мочи через 24 ч после введения препарата.

В каждой порции определяют количество форменных элементов в 1 мл мочи, а также клетки Штернгеймера—Мальбина, или клетки активных лейкоцитов. В связи с часто возникающими побочными реакциями и осложнениями при введении пирогенных веществ (тяжелая лихорадка, озноб, тошнота, рвота, головные (боли, слабость, артралгии и т.д.) пирогенные тесты не нашли широкого Практического применения.

Кац, Веласкес и Бордо (1962) предложили заменить пирогенный тест преднизолоновым. Они установили, что кортикостероиды, аналогично пирогенным веществам, провоцируют выделение лейкоцитов с мочой. Преднизолоновый тест проводят по следующей методике. Утром собирают среднюю порцию мочи при самостоятельном мочеиспускании. После этого медленно в течение 3—5 мин вводят внутривенно 30—50 мг (в зависимости от массы больного) преднизалона, разведенного в 10 мл изотонического раствора хлорида натрия. Примерно через 3—4 ч после введения преднизолона и на следующее утро аналогичным образом собирают мочу на исследование.

Определяют количество лейкоцитов и других форменных элементов в 1 мл каждой порции мочи, а также наличие в осадке мочи клеток Штернгеймера—Мальбина, или активных лейкоцитов. Тест считается положительным при содержании свыше 4000 лейкоцитов в 1 мл мочи после введения преднизолона и появлении в осадке мочи клеток Штернгеймера—Мальбина, или активных лейкоцитов.

источник