Количественное исследование мочи на белок

Патологическая протеинурия является одним из наиболее важных и постоянных признаков заболеваний почек и мочевых путей. Определение концентрации белка в моче является обязательным и важным элементом исследования мочи. Выявление и количественная оценка протеинурии важна не только в диагностике многих первичных и вторичных заболеваний почек, оценка изменения выраженности протеинурии в динамике несет информацию о течении патологического процесса, об эффективности проводимого лечения. Обнаружение белка в моче даже в следовых количествах должно настораживать в отношении возможного заболевания почек или мочевых путей и требует повторного анализа. Особо следует отметить бессмысленность исследования мочи и, в частности, определения белка мочи без соблюдения всех правил ее сбора.

Все методы определения белка в моче можно разделить на:

Качественные,
Полуколичественные,
Количественные.

Все качественные пробы на белок в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. При наличии белка в исследуемом образце мочи появляется либо помутнение, либо выпадение хлопьевидного осадка.

Условия определения белка в моче на основе реакции коагуляции:

Моча должна иметь кислую реакцию. Мочу щелочной реакции подкисляют несколькими (2 — 3) каплями уксусной кислоты (5 – 10%).
Моча должна быть прозрачной. Помутнение устраняется через бумажный фильтр. Если помутнение не исчезает, добавляют тальк или жженую магнезию (около 1 чайной ложки на 100 мл мочи), взбалтывают и фильтруют.
Качественную пробу следует проводить в двух пробирках, одна из них – контрольная.
Искать помутнение следует на черном фоне в проходящем свете.

К качественным методам определения белка в моче относятся:

Как показывают многочисленные исследования, ни один из большого числа известных методов качественного определения белка в моче не позволяет получать надежные и воспроизводимые результаты. Несмотря на это, в большинстве КДЛ в России эти методы широко используются в качестве скрининга – в моче с положительной качественной реакцией в дальнейшем проводят количественное определение белка. Из качественных реакций чаще используют пробу Геллера и пробу с сульфосалициловой кислотой, однако пробу с сульфосалициловой кислотой большей частью считают наиболее подходящей для выявления патологической протеинурии. Проба с кипячением в настоящее время практически не используется в связи с ее трудоемкостью и длительностью.

В основе метода Брандберга-Робертса-Стольникова лежит кольцевая проба Геллера, поэтому при данном методе наблюдаются те же ошибки, что и при пробе Геллера.

В настоящее время для определения белка в моче все чаще используются диагностические полоски. Для полуколичественного определения белка в моче на полоске в качестве индикатора чаще всего используется краситель бромфеноловый синий в цитратном буфере. О содержании белка в моче судят по интенсивности сине-зеленой окраски, развивающейся после контакта реакционной зоны с мочой. Результат оценивается визуально или с помощью анализаторов мочи. Несмотря на большую популярность и очевидные преимущества методов сухой химии (простота, скорость выполнения анализа) данные методы анализа мочи в целом и определения белка в частности не лишены серьезных недостатков. Одним из них, приводящих к искажению диагностической информации, является большая чувствительность индикатора бромфенолового синего к альбумину по сравнению с другими белками. В связи с этим, тест-полоски в основном приспособлены к обнаружению селективной гломерулярной протеинурии, когда практически весь белок мочи представлен альбумином. При прогрессировании изменений и переходе селективной гломерулярной протеинурии в неселективную (появление в моче глобулинов) результаты определения белка оказываются заниженными по сравнению с истинными значениями. Данный факт не дает возможности использовать данный метод определения белка в моче для оценки состояния почек (гломерулярного фильтра) в динамике. При тубулярной протеинурии результаты определения белка также оказываются заниженными. Определение белка с помощью диагностических полосок не является надежным индикатором низких уровней протеинурии (большинство выпускаемых в настоящее время диагностических полосок не обладают способностью улавливать белок в моче в концентрации ниже, чем 0,15 г/л). Отрицательные результаты определения белка на полосках не исключают присутствия в моче глобулинов, гемоглобина, уромукоида, белка Бенс-Джонса и других парапротеинов.

Хлопья слизи с высоким содержанием гликопротеидов (например, при воспалительных процессах в мочевых путях, пиурии, бактериурии) могут оседать на индикаторной зоне полоски и приводить к ложноположительным результатам. Ложноположительные результаты могут также быть связаны с высокой концентрацией мочевины. Плохое освещение и нарушение цветоощущения может быть причиной неточного результата.

В связи с этим, использование диагностических полосок следует ограничить скринирующими процедурами, а результаты, полученные с их помощью, следует рассматривать лишь как ориентировочные.

Корректное количественное определение белка в моче в ряде случаев оказывается непростой задачей. Трудности ее решения определяются следующим рядом факторов:

низким содержанием белка в моче здорового человека, часто находящимся на пороге чувствительности большинства известных методов;
присутствием в моче множества соединений, способных вмешиваться в ход химических реакций;
значительными колебаниями содержания и состава белков мочи при различных заболеваниях, затрудняющими выбор адекватного калибровочного материала.

В клинических лабораториях преимущественно применяются так называемые «рутинные» методы определения белка в моче, однако они далеко не всегда позволяют получать удовлетворительные результаты.

С точки зрения специалиста-аналитика, работающего в лаборатории, метод, предназначенный для количественного определения белка в моче, должен отвечать следующим требованиям:

обладать линейной зависимостью между поглощением образовавшегося в ходе химической реакции комплекса и содержанием белка в пробе в широком диапазоне концентраций, что позволит избежать дополнительных операций при подготовке пробы к исследованию;
должен быть прост, не требовать высокой квалификации исполнителя, выполняться при малом количестве операций;
обладать высокой чувствительностью, аналитической надежностью при использовании небольших объемов исследуемого материала;
быть устойчивым к воздействию различных факторов (колебаниям состава образца, присутствию лекарственных препаратов и др.);
обладать приемлемой стоимостью;
быть легко адаптируемым к автоанализаторам;
результат определения не должен зависеть от белкового состава исследуемого образца мочи.

Ни один из известных к настоящему времени методов количественного определения белка в моче не может в полной мере претендовать на роль «золотого стандарта».

Количественные методы определения белка в моче можно разделить на турбидиметрические и колориметрические.

К турбидиметрическим методам относятся:

определение белка с сульфосалициловой кислотой (ССК),
определение белка с трихлоруксусной кислотой (ТХУ),
определение белка с бензетоний хлоридом.

Турбидиметрические методы основаны на снижении растворимости белков мочи вследствие образования суспензии взвешенных частиц под воздействием преципитирующих агентов. О содержании белка в исследуемой пробе судят либо по интенсивности светорассеяния, определяемого числом светорассеивающих частиц (нефелометрический метод анализа), либо по ослаблению светового потока образовавшейся суспензией (турбидиметрический метод анализа).

Величина светорассеяния в преципитационных методах обнаружения белка в моче зависит от множества факторов: скорости смешивания реактивов, температуры реакционной смеси, значения pH среды, присутствия посторонних соединений, способов фотометрии. Тщательное соблюдение условий реакции способствует образованию стабильной суспензии с постоянным размером взвешенных частиц и получению относительно воспроизводимых результатов.

Некоторые лекарственные препараты влияют на результаты турбидиметрических методов определения белка в моче, приводя к так называемым «ложноположительным», либо «ложноотрицательным» результатам. К ним относятся некоторые антибиотики (бензилпенициллин, клоксациллин и др.), рентгеноконтрастирующие йодсодержащие вещества, сульфаниламидные препараты.

Турбидиметрические методы плохо поддаются стандартизации, часто приводят к получению ошибочных результатов, но, несмотря на это, в настоящее время они широко используются в лабораториях из-за невысокой стоимости и доступности реактивов. Наиболее широко в России используется метод определения белка с сульфосалициловой кислотой.

Наиболее чувствительными и точными являются колориметрические методы определения общего белка мочи, основанные на специфических цветных реакциях белков.

биуретовая реакция,
метод Лоури,
методы, основанные на способности различных красителей образовывать комплексы с белками:
- Понсо S (Ponceau S),
- Кумасси бриллиантовый синий (Coomassie Brilliant Blue)
- пирогаллоловый красный (Pyrogallol Red).

С точки зрения исполнителя, в повседневной работе лаборатории при большом потоке исследований биуретовый метод является неудобным из-за большого числа операций. В то же время, метод характеризуется высокой аналитической надежностью, позволяет определять белок в широком диапазоне концентраций и выявлять альбумин, глобулины и парапротеины со сравнимой чувствительностью, вследствие чего биуретовый метод рассматривают в качестве референтного и рекомендуют для сравнения других аналитических методов обнаружения белка в моче. Биуретовый метод определения белка в моче предпочтительно выполнять в лабораториях, обслуживающих нефрологические отделения, и использовать в тех случаях, когда результаты определения с помощью других методов представляются сомнительными, а также для определения величины суточной потери белка у нефрологических больных.

Метод Лоури, обладающий более высокой чувствительностью по сравнению с биуретовым методом, сочетает биуретовую реакцию и реакцию Фолина на аминокислоты тирозин и триптофан в составе белковой молекулы. Несмотря на высокую чувствительность, данный метод не всегда обеспечивает получение надежных результатов при определении содержания белка в моче. Причиной тому служит неспецифическое взаимодействие реактива Фолина с небелковыми компонентами мочи (чаще всего аминокислотами, мочевой кислотой, углеводами). Отделение этих и других компонентов мочи путем диализа или осаждения белков позволяет с успехом использовать данный метод для количественного определения белка в моче. Некоторые лекарственные препараты – салицилаты, хлорпромазин, тетрациклины способны оказывать влияние на данный метод и извращать результаты исследования.

Достаточная чувствительность, хорошая воспроизводимость и простота определения белка по связыванию красителей делают эти методы перспективными, однако высокая стоимость реактивов препятствует более широкому их использованию в лабораториях. В настоящее время в России все большее распространение получает метод с пирогаллоловым красным.

Проводя исследование уровня протеинурии, нужно иметь ввиду, что различные методы определения протеинурии имеют разную чувствительность и специфичность к многочисленным белкам мочи.

Исходя из эмпирических данных, рекомендуется определять белок двумя разными методами и рассчитывать истинное значение по одной из приведенных формул:

протеинурия = 0,4799 B + 0,5230 L;
протеинурия = 1,5484 B – 0,4825 S;
протеинурия = 0,2167 S + 0,7579 L;
протеинурия = 1,0748 P – 0,0986 B;
протеинурия = 1,0104 P – 0,0289 S;
протеинурия = 0,8959 P + 0,0845 L;

где:
B – результат измерения с Кумасси G-250;
L — результат измерения с реактивом Лоури;
P — результат измерения с молибдатом пирогаллола;
S — результат измерения с сульфосалициловой кислотой.

Учитывая выраженные колебания уровня протеинурии в различное время суток, а также зависимость концентрации белка в моче от диуреза, различное его содержание в отдельных порциях мочи, в настоящее время при патологии почек принято оценивать выраженность протеинурии по суточной потере белка с мочой, то есть определять так называемую суточную протеинурию. Она выражается в г/сут.

При невозможности сбора суточной мочи рекомендуется определять в разовой порции мочи концентрации белка и креатинина. Поскольку скорость выделения креатинина в течение дня достаточно постоянна и не зависит от изменения скорости мочеотделения, отношение концентрации белка к концентрации креатинина постоянно. Данное отношение хорошо коррелирует с суточной экскрецией белка и, следовательно, может использоваться для оценки выраженности протеинурии. В норме отношение белок/креатинин должно быть менее 0,2. Белок и креатинин измеряют в г/л. Важным достоинством метода оценки выраженности протеинурии по соотношению белок-креатинин является полное исключение ошибок, связанных с невозможностью или неполным сбором суточной мочи.

О. В. Новоселова, М. Б. Пятигорская, Ю. Е. Михайлов, «Клинические аспекты выявления и оценки протеинурии», Справочник заведующего КДЛ, № 1, январь 2007 г.
А. В. Козлов, «Протеинурия: методы ее выявления», лекция, Санкт-Петербург, СПбМАПО, 2000 г.
В. Л. Эмануэль, «Лабораторная диагностика заболеваний почек. Мочевой синдром», — Справочник заведующего КДЛ, № 12, декабрь 2006 г.
В.И. Пупкова, Л.М. Прасолова — Определение белка в моче и спинномозговой жидкости. Кольцово, 2007 г.
Справочник по клиническим лабораторным методам исследования. Под ред. Е. А. Кост. Москва, «Медицина», 1975 г.

Для количественного определения белка пригоден любой образец мочи. Большинство исследователей для выяснения величины суточной потери белка предпочитают определять содержание белка в моче, собранной за сутки.

Раздел: Анализ мочи

Все качественные пробы на белок в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. При наличии белка в исследуемом образце мочи появляется либо помутнение, либо выпадение хлопьевидного осадка.

Раздел: Анализ мочи

Проба с 20% сульфосалициловой кислотой относится к качественным реакциям определения белка в моче. Так как она основана на реакции коагуляции, то исследуемая моча должна соответствовать определенным требованиям: быть прозрачной и иметь кислую реакцию.

Раздел: Анализ мочи

Кольцевая проба Геллера относится к качественным реакциям определения белка в моче. Так как она основана на реакции коагуляции, то исследуемая моча должна соответствовать определенным требованиям: быть прозрачной и иметь кислую реакцию.

Раздел: Анализ мочи

источник

Нормальные показатели: белок в норме в моче содержится в минимальных количествах, которые не обнаруживаются обычными качественными реакциями. Верхняя граница нормы белка в моче – 0,033 г/л. Если содержание белка выше этого значения, то качественные пробы на белок становятся положительными.

Клиническое значение определения:

Появление белка в моче называется протеинурия. Протеинурии могут быть ложными и почечными. Экстраренальные протеинурии могут быть при наличии примесей белкового происхождения из половых органов (вагинитах, уретритах и др.), количество белка при этом незначительно – до 0,01 г/л. Почечные протеинурии могут быть функциональными (при переохлаждении, физических нагрузках, лихорадке) и органическими — при гломерулонефрите, пиелонефрите, нефрите, нефрозах, почечной недостаточности. При почечных протеинуриях содержание белка может быть от 0,033 до 10 – 15 г/л, иногда выше.

Принцип метода: основан на том, что белок под действием неорганических кислот коагулирует (становится видимым). Степень помутнения зависит от количества белка.

Обнаружение белка в моче с 20% сульфосалициловой кислотой.

Реактивы: 20% р-р сульфосалициловой кислоты. Оборудование: темный фон.

1. Требования к моче: моча должна быть кислой (или слабокислой) рН, должна быть прозрачной, для этого мочу центрифугируют. Щелочную мочу подкисляют до слабокислой реакции среды, используя для контроля индикаторную бумагу.

2. В 2 пробирки одинакового диаметра наливают по 2 мл подготовленной мочи. 1 пробирка – контроль, 2 – опыт. В опытную пробирку добавляют 4 капли 20% сульфосалициловой кислоты.

3. Результат отмечают на темном фоне.

4. При наличии белка, моча в опытной пробирке мутнеет.

Качественное определение белка в моче тест – полосками.

Для выявления протеинурий используют различные монотест – полоски: Альбуфан, Альбустикс, Биофан Е и политесты: Трискан, Нонафан и др.

Обнаружение белка в моче по методу Робертса – Стольникова.

Принцип метода: основан на том, что белок под действием неорганических кислот коагулирует (становится видимым). Степень помутнения зависит от количества белка (т.е. кольцевая проба Геллера). При концентрации белка в моче 0,033 г/л к концу 3 минуты после наслаивания мочи появляется тонкое нитевидное белое кольцо.

Реактивы: 50% р-р азотной кислоты или реактив Робертса (98 частей насыщенного раствора поваренной соли и 2 части концентрированной соляной кислоты) или реактив Ларионовой (98 частей насыщенного р-ра поваренной соли и 2 части концентрированной азотной кислоты).

2. В пробирку наливают 2 мл 50% р-ра азотной кислоты или один из реактивов, затем осторожно по стенке пробирки с помощью пипетки наслаивают такой же объем подготовленной мочи

3. Пробу оставляют на 3 минуты

4. Через 3 минуты отчитывают результат. Результат отмечают на темном фоне в проходящем свете. Если кольцо широкое, компактное, то мочу разводят дистиллированной водой и вновь наслаивают на реактив.

5. Мочу разводят до тех пор, пока через 3 минуты не образуется тонкое нитевидное кольцо.

6. Расчет содержания белка в моче производят по формуле:

С = 0,033г/л х степень разведения.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Студент — человек, постоянно откладывающий неизбежность. 10379 — | 7281 — или читать все.

195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник

В состав рабочего места по определению белка в моче входят следующие элементы:

Пробирки химические, агглютинационные.
Набор градуированных пипеток.
Пипетки с узким оттянутым концом.
Спиртовки или газовая горелка.
Черная бумага.
Ледяная уксусная кислота.
Сульфосалициловая кислота.
Концентрированная азотная кислота.
Дистиллированная вода.

Все методики, применяющиеся для качественного определения белка в моче, основаны на свертывании белка. Свертывание белка проявляется выраженным в разной степени помутнением (от опалесценции до большой мутности) или выпадением хлопьев.

Качественное определение белка в моче может быть проведено одним из следующих способов:

кипячением с 10% раствором уксусной кислоты;
реакцией с 20% раствором сульфосалициловой кислоты;
реакцией с 50% раствором азотной кислоты (проба Геллера);
реакцией с 1% раствором азотной кислоты в насыщенном растворе поваренной соли (видоизмененная проба Геллера по Ларионовой).

Перед качественным определением белка в моче проводят следующую подготовительную работу:
1. Мутную мочу фильтруют через бумажный фильтр. Если получить прозрачный фильтрат не удается, производят повторное фильтрование через тот же фильтр или же смешивают мочу с небольшим количеством инфузорной земли или талька, после чего ее фильтруют.
2. Если моча имеет щелочную реакцию, ее подкисляют 10% раствором уксусной кислоты до слабокислой реакции под контролем лакмусовой или универсальной индикаторной бумажки.
3. При малом содержании солей (светло-желтая или бледно-желтая моча с малым удельным весом) к каждой
пробе добавляют несколько капель насыщенного раствора поваренной соли, так как недостаток солей обусловливает свертывание белка.
4. Степень помутнения наблюдают с помощью черного фона. В качестве фона используют черный картон или черную бумагу, применяемую в фотографии. Учет реакции на черном фоне позволяет выявить малейшую степень помутнения.

В отдельном штативе располагают пронумерованные пробирки. В них производят одну из описанных ниже реакций.

1. Проба кипячением с 10% раствором уксусной кислоты. Для постановки этой пробы необходим 10% раствор уксусной кислоты, который готовят следующим образом: 10 мл ледяной уксусной кислоты помещают в цилиндр и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл.

Техника определения белка. В химическую пробирку помещают 10—12 мл отфильтрованной мочи слабокислой реакции. Затем верхнюю часть пробирки с мочой осторожно нагревают до кипения и добавляют в нее 8—10 капель 10% раствора уксусной кислоты. Пробирку с мочой рассматривают на черном фоне в проходящем свете. При наличии белка в моче появляется мутность разной степени (от опалесценции до большой мутности) или выпадают хлопья. Контролем служит нижняя часть пробирки, не подвергавшаяся нагреванию. Этой пробой обнаруживают количество белка, начиная с 0,015%о (%о — promille).

2. Реакция с 20% раствором сульфосалициловой кислоты. 20 % раствор сульфосалициловой кислоты готовят следующим образом: 20 г сульфосалициловой кислоты растворяют в 70-80 мл дистиллированной воды, переводят в цилиндр емкостью 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки. Приготовленный реактив хранят в посуде из темного стекла.

Техника определения белка. В две пробирки одинакового диаметра помещают по 2—3 мл отфильтрованной мочи слабокислой реакции, в одну из пробирок к моче прибавляют 3—4 капли 20% раствора сульфосалициловой кислоты, другая пробирка служит контролем. При наличии белка в пробирке с реактивом появляется мутность или выпадают хлопья свернувшегося белка. В контрольной пробирке жидкость остается прозрачной. Сульфосалициловая кислота наряду с белком сыворотки осаждает альбумозы (пептиды), представляющие собой продукт распада белка. С целью уточнения причины помутнения мочи пробирку с мочой подогревают. Мутность, причиной образования которой оказались сывороточные белки, усиливается, мутность же, обусловленная присутствием альбумоз, исчезает. Эта проба имеет ту же чувствительность, что и предыдущая.

3. Реакция с 50 % раствором азотной кислоты (проба Геллера). 50% раствор азотной кислоты готовят следующим образом: к 50 мл азотной кислоты удельного веса 1,2-1,4 приливают 50 мл дистиллированной воды (разведение 1:1).

Техника определения белка. В узкую небольшую пробирку (тина агглютинационной) наливают 1 мл 50% азотной кислоты. В пипетку с узким оттянутым концом набирают 1 мл отфильтрованной исследуемой мочи, наслаивают на реактив и пробирку переводят в вертикальное положение. При наличии белка на границе жидкостей появляется белое кольцо. Время появления кольца, его свойства зависят от количества белка: если белка мало, то кольцо появляется не сразу, поэтому за его появлением следят в течение 2,5-3 минут. Минимальное количество белка, определяемое этим методом, 0,033°/оо. При меньшем содержании белка в моче кольцо не образуется. Учет результатов реакции производят на черном фоне в проходящем свете.

4. Реакция с 1% раствором азотной кислоты на насыщенном растворе поваренной соли — видоизмененная проба Геллера (по Ларионовой). Для проведения пробы используют 1 % раствор азотной кислоты, приготовленный на насыщенном растворе поваренной соли (реактив Ларионовой). 35 г поваренной соли растворяют в 100 мл дистиллированной поды, раствор фильтруют, к 1 мл концентрированной азотной кислоты удельного веса 1,2-1,4 приливают 99 мл приготовленного насыщенного раствора поваренной соли.

Техника определения белка такая же, как и при реакции с 50% раствором азотной кислоты (проба Геллера), но вместо 1 мл 50% раствора азотной кислоты в пробирку наливают 1 мл реактива Ларионовой и на него наслаивают 1 мл мочи. Появление белого кольца на границе жидкостей указывает на наличие белка в исследуемой моче. Проба по Ларионовой так же чувствительна, как и проба Геллера.

5. Колориметрическая (сухая) проба качественного определения белка. Колориметрическая (сухая) проба качественного определения белка в моче основана на воздействии, которое оказывает белок на цвет индикатора в буферном растворе.

Техника определения белка. Кусочек индикаторной бумаги, предназначенный для определения белка погружают в мочу на короткое время. Пробу считают положительной, если бумажка окрашивается в сине-зеленый цвет.

Количественное определение белка в моче основано на том, что при наслаивании мочи, содержащей белок, на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой на границе двух жидкостей образуется белое кольцо, причем если четкое белое кольцо появляется к 3 минутам, то содержание белка равно 0,033%о или 33 мг в 1000 мл мочи. Появление кольца ранее 3 минут свидетельствует о большем содержании белка в моче.
При количественном определении белка в моче выполняют следующие правила:

Количественное определение белка производят только в тех порциях мочи, где он был обнаружен качественно.
Определение производят с тщательно отфильтрованной мочой.
Точно соблюдают технику наслаивания исследуемой мочи на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой в соотношении реактива с мочой (1:1).
Время появления кольца определяют по секундомеру: при окончательном расчете количества белка учитывают время наслаивания мочи на азотную кислоту, которое равно 15 секундам.
Разведение мочи производят исходя из свойства кольца. При этом каждое последующее разведение мочи готовят из предыдущего.
Определение колец производят на черном фоне.

Наиболее распространены два метода количественно¬го определения белка в моче: метод Робертса — Стольникова — Брандберга и метод С. Л. Эрлиха и А. Я. Альтгаузена.

Метод Робертса-Стольникова-Брандберга. По этому способу количество белка в моче определяют путем разведения ее до тех пор, пока при очередном наслаивании мочи на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой кольцо появится точно к 3 минутам. Расчет количества белка производят, умножая 0,033%о на степень разведения мочи. Полученный результат выражает количество белка в миллиграммах на 1000 мл мочи, т. е. в promille (%о).
Метод С. Л. Эрлиха и А. Я. Альтгаузена. В штатив помещают ряд агглютинационных пробирок, в которые предварительно наливают по 1 мл 50% раствора азотной кислоты или реактива Ларионовой. Исследуемую мочу берут отдельной чистой, сухой пипеткой с узким оттянутым концом и наслаивают на реактив, после чего включают секундомер. За временем появления кольца следят, располагая пробирку на черном фоне. При появлении кольца секундомер выключают.

При наслаивании мочи в зависимости от количества белка может появиться компактное, широкое или нитевидное кольцо. Компактное, широкое кольцо появляется тотчас же после наслаивания мочи на реактив. Нитевидное кольцо может появиться сразу, до истечения одной минуты, или в промежутке от одной до 4 минут.

При появлении нитевидного кольца в пределах от одной до 4 минут производить разведение мочи не нужно!
Для вычисления количества белка в этом случае достачно использовать предложенную авторами таблицу-план (табл. 1).

Пример 1. При наслаивании мочи на реактив нитевидное кольцо образовалось через 2 минуты. Если бы кольцо образовалось к 3 минутам, то количество белка было было бы равно 0,033%о.

В данном же случае кольцо образовалось раньше. Соответственная поправка, согласно таблице-плану, для времени в 2 минуты равна 1+1/8. Это значит, что белка в данной порции мочи будет в 1+1/8 раза больше, чем 0,033°/оо, т. е. 0,033%о X(1+1/8) = 0,037°/оо.

При появлении нитевидного кольца до 1 минуты, т. е. через 40-60 секунд, производят одно разведение мочи в 1,5 раза (2 части мочи + 1 часть воды), а затем вновь наслаивают разведенную мочу на реактив и регистрируют появление кольца. При расчете результатов учитывают, что моча была разведена в 1,5 раза.

Пример 2. После наслаивания разведенной в 1,5 раза мочи нитевидное кольцо появилось к 2 минутам. Если бы кольцо появилось к 3 минутам, то белка было бы 0,033%. Соответственная поправка согласно таблице-плану, для времени в 2 минуты равна 1+1/8. Белка в моче содержится 0,033%оX1,5X(1+1/8) = 0,056%о.

Если нитевидное кольцо появляется сразу, мочу разводят в 2 раза (1 часть мочи + 1 часть воды). Разведенную мочу вновь наслаивают на реактив и отмечают появление кольца по истечении 1 минуты.

Пример 3. При наслаивании разведенной в 2 раза мочи на реактив нитевидное кольцо появилось через 1 минуту 15 секунд. Тогда количество белка в исследуемой моче по аналогии с прежними расчетами будет равно
0,033%оХ2Х(1+3/8) = 0,091%.
В случае появления широкого кольца мочу разводят в 4 раза (1 часть мочи + 3 части воды).
При последующем наслаивании разведенной мочи нитевидное кольцо может образоваться как до, так и по истечении одной минуты. В таких случаях расчет количества белка производят по аналогии с предыдущими примерами, т. е. 0,033% о умножают на степень разведения и на соответственную поправку.

Пример 1. Кольцо после разведения мочи в 4 раза появилось сразу же. Мочу разводят в 2 раза. После наслаивания мочи, разведенной в 8 раз (4X2), нитевидное кольцо образовалось через 1,5 минуты. В таком случае количество белка равно 0,033%оХ8X1,25 = 0,33%о и т. д.
При появлении компактного кольца мочу разводят в 8 раз (1 часть мочи+ 7 частей воды). При последующем наслаивании разведенной мочи на реактив может образоваться либо компактное, либо широкое, либо нитевидное кольцо.

Пример 2. При наслаивании мочи на азотную кислоту тотчас же образовалось компактное кольцо. Мочу разводят в 8 раз (1 часть мочи + 7 частей воды) и вновь производят ее наслаивание. При этом опять получилось компактное кольцо. Тогда мочу разводят еще в 8 раз (для этого в цилиндр или в пробирку берут 1 часть разведенной мочи и прибавляют к ней 7 частей воды). После очередного наслаивания разведенной мочи нитевидное кольцо образовалось сразу. Мочу разводят в 2 раза (1 часть мочи + 1 часть воды). После очередного наслаивания разведенной мочи нитевидное кольцо образовалось к 2 минутам. Расчет количества белка данной порции мочи производят так: 0,033,%оX8X8X2X(1+1/8) = 4,8%о.

Помимо таблицы-плана, имеется таблица с рассчитанными цифрами белка (табл. 2). Если моча не разведена, то количество белка отыскивают в графе «Цельная неразведенная моча». При разведении мочи в целое число раз (8,4,2) используют табл. 1. При разведении мочи в 1,5 раза используют табл. 2.

В соответствующих графах таблицы наводят время появления кольца и степень разведения мочи.
Цифра, находящаяся в точке пересечения горизонтальной и вертикальной линий, проведенных от этих двух показателей, указывает на количество белка в исследуемой моче (%о).

Возможно, что при положительной качественной пробе на белок кольцо при наслаивании на 50% раствор азотной кислоты не образуется. Это значит, что в моче белка меньше 0,033%о. В таких случаях количество белка в бланке анализа обозначают термином «следы».

Если белок определен количественно, в бланке анализа мочи отмечают содержание белка в promille, например «белок — 0,66%о».

Помимо количественного определения белка в отдельной порции мочи, рассчитывают суточное его количество в граммах. С этой целью собирают суточную мочу, измеряют ее количество и определяют содержание белка в promille. Затем производят расчет. Например, суточное количество мочи равно 1800 мл, белок — 7°/оо. Значит, белка в суточном количестве мочи содержится: 1,8X7 = 12,6 г.

источник

Моча – это важная биологическая жидкость в организме человека. Большая часть продуктов обмена удаляется именно с ней. У здорового человека ее состав имеет относительно фиксированные значения. При возникновении заболевания некоторые показатели изменяются, что дает возможность лечащим врачам уточнить поставленный диагноз. Выявить проблемы в работе почек поможет анализ суточной мочи на белок.

Это лабораторное исследование, с помощью которого определяют количество выделившейся жидкости за сутки. Такой метод применяется для оценки состояния функционирования почек. Состав урины:

вода, которая составляет 97%;
калий;
натрий;
креатинин;
мочевина;
соли в виде сульфатов, фосфатов и хлоридов.

Каждого компонента в норме должно содержаться определенное количество, отклонение от которого считается патологией. При исследовании суточного анализа мочи на белок норма для взрослых мужчин и женщин одинаковая. При нормальной работе почек это вещество не должно попадать в урину или его может содержаться незначительное количество 40-80 мг. Выделение 150 мг и более считается патологией. Однако с возрастом, особенно после 60 лет, допускается небольшое превышение допустимого показателя, и связано это с возрастными изменениями в организме. В некоторых случаях выявление белка объясняется неправильной подготовкой перед сбором биоматериала или погрешностями в питании. У детей норма зависит от возраста, веса и площади поверхности тела.

По результатам лабораторных исследований суточной урины получают следующие сведения:

Объем жидкости, который выделяется в течение суток из организма. В среднем, он составляет 1750 мл и может колебаться как в меньшую, так и в большую сторону в зависимости от объема выпитой жидкости.
Сахар. Особенно важен этот показатель для пациентов, страдающих сахарным диабетом.
Оксалаты. Превышение сверх допустимых границ чревато образованием в почках песка и камней.
Метанефрин. Это вещество образуется после распада гормонов. Отклонения от нормы в сторону увеличения – это признак патологии почек, сердечно-сосудистой системы и др.
Белок. У здоровых людей этого показателя не должна наблюдаться в урине. Это один из важных параметров, который выявляется при суточном анализе мочи. Завышенный уровень свидетельствует о признаках патологии почек, болезнях центральной нервной системы. Помимо общего количества белка, лабораторное исследование биологической жидкости позволяет обнаружить и белковые соединения, которые также важны для правильной постановки диагноза.

Ввиду того что изменения в качественном и количественном составе урины начинаются раньше, чем симптомы болезни, анализ позволяет своевременно выявить патологию. Показаниями к назначению этого вида исследований у взрослых и детей является наличие следующих заболеваний:

амилоидоза (нарушение обмена белков);
сахарного диабета;
нефропатии, которая проявляется отеками ног;
ишемии сердца;
почечной недостаточности.

Для большей информативности и получения наиболее объективной информации по итогам анализа суточной мочи на белок следует соблюдать определенные правила, которые обязательны для выполнения и заключаются в следующем:

За сутки или более исключить употребление витаминных комплексов, антикоагулянтов и диуретических средств.
За сутки изменить рацион. Отказаться от острой, жирной и сладкой пищи, а также алкогольных и кофейных напитков.
Не сдавать биоматериал во время месячных.
Для сбора урины приобрести в аптечном учреждении специальную тару или можно воспользоваться стеклянной банкой, объемом не менее трех литров.

Правила сбора биоматериала общие как для взрослых мужчин, так и для женщин и детишек, которые достигли определенного возраста и могут самостоятельно пользоваться горшком.

Непосредственно перед сбором урины необходимо выполнить туалет наружных половых органов.
Первая порция биоматериала не учитывается. Однако фиксируется время утреннего мочеиспускания.
Собирают всю выделяемую жидкость в течение 24 часов. В ночное время также продолжается сбор урины.
Тару с биоматериалом рекомендуется хранить при температуре не выше 8 градусов и не ниже 5.
Сразу после забора последней порции, собранную мочу следует тщательно перемешать.
Предварительно у доктора следует уточнить, как сдавать суточный анализ мочи на белок в лабораторию. Существует два способа. Около 100 мл биоматериала отливают в емкость маленького размера и относят в лабораторию или можно доставить весь суточный объем в большой таре.
В случае, когда имеет значение изменение диуреза за сутки, то доктор рекомендует фиксировать объем любой потребляемой жидкости в течение 24 часов.

Таким термином обозначают высокие показатели белковых веществ в урине. С ее помощью отслеживают работу почек. Различают протеинурию следующих видов. Легкая – не является предвестником заболеваний и возникает по естественным причинам. Умеренная и выраженная – эти виды свидетельствуют о проблемах в работе почек. В этих случаях, кроме белка в суточном анализе мочи, присутствуют такие симптомы, как:

боли в костях;
головокружение;
потеря аппетита;
сонливость;
тошнота;
рвота;
сильная утомляемость.

Причины появления белка в урине:

сердечная недостаточность;
болезни центральной нервной системы;
гипертиреоз;
инфекционный эндокардит.

Основным фактором, оказывающим влияние на появление в урине белковых соединений, являются неполадки в усвоении этого вещества. Различают протеинурию:

Канальцевую. При некоторых заболеваниях невозможно или затруднительно всасывание белков.
Клубочковую. В этом случае белковые молекулы не задерживаются и вместе с жидкостью выводятся. Такое явление характерно при следующих патологиях: пиелонефрит, повреждение почек токсинами, гломерулонефрит.
Экстраренальная. Присутствуют повреждения мочевыводящих путей, характерные для уретритов, кольпитов и циститов.

Белок – это строительный материал, принимающий участие в различных процессах в организме индивида. Выявление его в урине считается признаком развития патологических процессов. Почечные тельца теряют целостность и вместе с вредными веществами в мочу попадает белок, а причиной такого сбоя является воспалительный процесс в почках. Анализ урины позволяет своевременно распознать болезнь, удостовериться в правильной работе почек в самый ответственный и важный период в жизни женщины. Любое, даже самое незначительное выявление белка у беременных в суточном анализе мочи – это признак начала развития патологии. Причинами его появления являются следующие заболевания:

гломерулонефрит;
красная волчанка;
нефрит;
гипертония;
диабет сахарный.

С целью диагностики заболеваний почек используют простой метод – это суточной анализ мочи на белок. Соблюдение условий для правильного сбора мочи является обязательным для любой женщины в положении.

Наружные половые органы должны быть чистыми. Подмываться можно с использованием обычного мыла. Использовать антисептики или травяные сборы запрещено, так как они исказят достоверность результатов.
Собирают урину в чистую сухую тару с широким горлом.

В случае обнаружения в моче белка доктор назначает лечение, которое защитит плод от отрицательного влияния заболевания, ставшего причиной появления веществ белковой природы в урине. Далее следует выяснить причину этого явления. В большинстве случаев она кроется в нарушении работы почек. Появление белка в биоматериале во второй половине беременности – это один из симптомов гестоза. Затем присоединяются отеки, перепады артериального давления.

Всем женщинам рекомендуется при беременности:

суточный анализ мочи на белок;
регулярное посещение доктора;
контроль за давлением;
питание, усиленное витаминными комплексами;
умеренное потребление жидкости;
отказ от специй и по возможности от соли или уменьшение ее количества до минимума.

Расшифровку анализов следует доверить своему доктору. В случае выявления патологических причин появления белковых веществ в урине необходимую терапию назначает только медицинский работник. Не рекомендуется самостоятельно лечиться и увлекаться нетрадиционными методами. При выявлении причин, не связанных с патологическими процессами, уделяют особое внимание рациону. Важно помнить, что эффективность терапии зависит от своевременной диагностики.

источник

Моча – биологическая жидкость. Она вырабатывается в почках, в ней содержатся продукты обменных процессов, которые требуется вывести из организма. Моча формируется при прохождении крови сквозь фильтр в почках. Он не способен пропускать слишком большие молекулы, таковыми являются и молекулы протеинов.

У здорового человека в моче не содержится белок, редко выявляются незначительные его следы. Содержание белка в разовой общей пробе больше 0,1 г на 1 л говорит о протеинурии. Показатели суточного анализа мочи на белок должны быть в пределах 0,15 г на 1 л. Превышение нормы является симптомом заболевания.

Лабораторная диагностика утренней мочи помогает установить протеинурию, но не позволяет определить степень ее выраженности. Помимо этого, метод недостаточно чувствителен по отношению к низкомолекулярным белкам.

При обнаружении протеинурии в общих анализах с целью установления степени тяжести патологии необходимо проведение исследования суточной урины. Важно понимать, что это исследование также не поможет установить вид протеинурии, этиологию отклонения от нормы, поэтому всегда дополняется другими методами диагностики – лабораторными, инструментальными.В нормальном состоянии суточная потеря белка равняется 40 – 80 мг, количество может незначительно меняться. Если выводится больше 150 мг – это протеинурия. В соответствии с объемом белка в урине, собранной в течение 24 часов, устанавливается степень патологического состояния:

легкая, или микроальбуминурия, – от 0,3 до 1 г;
умеренная – от 1 до 3 г;
тяжелая – больше 3 г.

Сбор суточной мочи и ее анализ позволяет диагностировать разные заболевания, которые могут не проявиться при общем исследовании.

Если патологий нет, то концентрация белка всегда в пределах нормы. Так происходит, потому что при правильном функционировании всех органов белок проходит фильтрацию почками, не попадает в урину. Объем сахара и белка в суточном анализе мочи позволяет доктору поставить диагноз и подобрать дополнительные методы для его подтверждения. Обычно этот вид исследования проводится при выявлении протеинурии в результатах общего анализа.Также анализ суточной порции биоматериала требуется при подозрениях на некоторые заболевания:

нарушения почечной фильтрации;
сахарный диабет;
ишемия сердечной мышцы;
патологии соединительной ткани разного происхождения, особенно на стадиях обострения;
нефропатия.

Некоторые пациенты начинают волноваться уже при обнаружении в урине минимального объема белка. Но это не повод для переживаний. Такие отклонения могут быть следствием нерационального питания, когда в организм попадает избыточное или недостаточное количество белков. Также исказить результаты анализа могут слишком интенсивные физические нагрузки.

При сильной протеинурии врач предполагает развитие нефропатии или аутоиммунных болезней, причины также могут заключаться в отравлении, особенно часто это происходит после передозировки лекарственными средствами. В любом случае врачи назначают проведение дополнительной диагностики.

Доктора обязательно контролируют содержание белка в моче у беременных женщин, чтобы вовремя выявить возможные нарушения здоровья будущей матери и ребенка. Но высокая его концентрация – не всегда отклонение. Так часто происходит при употреблении перед сдачей урины молочных продуктов, мяса в большом количестве.

Протеинурия у беременных зачастую выявляется после стрессовых ситуаций, нервного переутомления. Но есть и патологические причины – это цистит, пиелонефрит, уретрит. Самое опасное из патологических состояний для женщины в положении и для ее будущего ребенка, которое сопровождается высокой концентрацией белка в суточном анализе урины, – это гестоз.

При отсутствии лечения развиваются сильные отеки по всему телу, цефалгия, эпигастральные боли, судороги. Это состояние опасно для здоровья беременной и ее будущего ребенка.Сдавать анализ мочи при беременности требуется каждые 2 месяца, на позднем сроке – чаще. Правила сбора материала простые:

накануне не включать в рацион соленые, кислые продукты, мясо в больших количествах;
собирать урину следует утром, после пробуждения;
перед забором урины принять душ;
отвезти анализ в лабораторию в течение часа после сбора;
не трясти тару во время перевозки.

При исследовании обязательно учитывается оттенок, реакция, удельный вес урины. При обнаружении отклонений врач дополнительно назначает диагностику в стационарных условиях, включающую анализ суточной мочи.

Для получения максимально достоверных результатов обследования требуется соблюдать некоторые правила перед тем, как сдавать мочу:

в день проведения анализа необходимо отказаться от использования диуретиков, употребления мочегонных продуктов, также любых препаратов, которые оказывают прямое или косвенное влияние на работу почек;
придерживаться привычного режима потребления жидкости;
не изменять привычный рацион.

Для исключения искажения данных анализа нужно предотвратить влияние случайных факторов, четко следовать правилам сбора урины.

Обязательно выполнять все правила этапа подготовки к анализу:

За сутки нужно исключить алкоголь и кофе, отказаться не только от лекарств, но и от витаминных комплексов.
Женщинам не следует делать анализ в период менструации. Сбор урины при месячных проводится в крайних случаях, но полученные данные в любом случае окажутся неточными.
Собирают мочу в специальный контейнер – он стерильный, продается в любой аптеке. Рекомендуется использовать небольшие емкости, затем выливая урину в общую.
Не обязательно стерилизовать емкости, достаточно тщательно их промыть.

Как уже было сказано, при суточном анализе мочи на белок ее требуется собирать в специально подготовленную емкость.Важно четко следовать инструкции, как сдавать суточный анализ:

перед мочеиспусканием необходимо провести туалет наружных половых органов с мылом, затем смывая его водой;
потом органы вытираются чистой сухой салфеткой;
первую утреннюю порцию мочи не следует собирать, но важно отметить время мочеиспускания;
полученная в течение следующих 24 часов урина собирается в один большой сосуд.

После каждого добавления новой порции сосуд тщательно закрывается и ставится в холодильник. Температура хранения — от +4 до +8 градусов по Цельсию. После завершения сбора фиксируется объем жидкости.

Также на емкость приклеивается бумага с информацией о пациенте, временем начала забора и его окончания. Весь объем мочи, собранной за сутки, не передается в лабораторию. Ее нужно тщательно перемешать и отлить 100-200 мл в отдельную тару для анализа.

Есть некоторые факторы, сильно изменяющие результаты исследования суточной мочи. Причины появления ложно завышенного показателя могут быть такими:

загрязнение мочи калом;
прием бикарбоната натрия, пенициллинов, сульфаниламидов, цефалоспоринов;
использование рентгеноконтрастных средств, содержащих йод.

Ложное занижение показателей провоцирует повышенный диурез, форсированный приемом диуретиков, употреблением большого количества жидкости, мочегонных продуктов.

Во избежание получения ложных данных следует правильно готовиться к анализу и затем правильно собирать урину.

Если содержание белка в норме, это свидетельствует о правильной работе почек, об отсутствии патологий, увеличивающих этот показатель. Его концентрация сильно изменяется на протяжении всего дня, в какой-то мере на этот процесс влияет количество употребляемой белковой пищи – при избыточном поступлении белок полностью не усваивается, поэтому выводится вместе с мочой.

Нормальная концентрация белка в урине для общего анализа – 0,014 г/л, норма белка при беременности несколько выше – до 0,033 г/л, у ребенка доходит до уровня 0,036 г/л. Большие отклонения говорят о наличии протеинурии. Содержание суточного белка в моче в норме в среднем равняется 108 мг/л.

Суточный анализ мочи на белок позволяет оценить фильтрационные способности почек. При нарушениях работы клубочкового аппарата в урину попадают даже большие молекулы белка. Причиной могут стать:

наследственные патологии развития;
воспалительные процессы в почках;
аутоиммунные заболевания;
интоксикация;
инфекции.

При суточной потере белка меньше 500 мг/л можно говорить о развитии хронической формы пиелонефрита или других нарушениях функций почек, когда происходит незначительное поражение клубочкового аппарата.

При существенном превышении нормы у взрослого (более 500 мг/л) врач может предположить следующие патологии:

гломерулонефрит в хронической форме или во время обострения;
почечный амилоидоз;
нефрит токсической природы;
нефропатию, вызванную сахарным диабетом;
сердечную недостаточность в тяжелой форме.

Тяжелая степень протеинурии чаще всего выявляется при нефротическом синдроме.

При поражении мочевыводящих путей (очаговом или диффузном) протеинурии сопутствует гематурия. Если дополнительно выявляется лейкоцитурия, это свидетельствует о воспалительном процессе, вызванном инфекцией.

Выявление в урине белка может быть признаком инфекций, поражения центральной нервной системы. Протеинурия во второй половине беременности появляется чаще всего при гестозе или позднем токсикозе.

Не нужно полагать, что повышение белка – неопровержимое свидетельство опасного заболевания. Это только синдром, который указывает на наличие проблемы в организме, вызывающей нарушение фильтрационной функции почек. Для постановки диагноза используются дополнительные методы исследования.

Сдать анализ на суточную концентрацию белка в моче недостаточно для выявления заболевания и выбора эффективного лечения.

Данные, полученные после исследования урины на белок, помогают только определить вероятные причины. Опираясь на них, врач подбирает дополнительные методы инструментальной диагностики, чтобы выявить заболевание.

Определение концентрации белка в суточной моче помогает вовремя распознать прогрессирование опасных патологий. Но результаты будут достоверными только при правильной подготовке к сбору материала.

источник

Исследование мочи на белок имеет важное значение в диагностическом отношении. Белковые вещества в моче показывают на патологический процесс.

Небольшое количество белка может быть обнаружено сложными методами и у здоровых животных. Эти ничтожные следы белка не принимаются во внимание и мочу здоровых животных клинически принято считать свободной от белка.

При патологических состояниях почечный фильтр теряет способность задерживать белки крови и они начинают поступать в большом количестве в мочу. В зависимости от факторов, которые обусловливают появление белка в моче, различают альбуминурию—физиологическую и патологическую.

К физиологическим альбуминуриям принято относить: алиментарную альбуминурию, альбуминурию новорожденных и альбуминурию рожениц. Количество белка при физиологических альбуминуриях бывает незначительным, состояние это является переходящим и, кроме того, в моче обычно не обнаруживается других компонентов, свидетельствующих о поражении почек, а также нет и соответствующих клинических проявлений. При анализе альбуминурии, помимо количественного определения белка и микроскопии осадка, необходимо тщательное исследование животного и особенно самой почки, а также и органов, функционально с ней связанных.

Патологическая альбуминурия наблюдается при многих заболеваниях и служит не критерием болезни, а одним из признаков заболевания, часто не определяющим сущности страдания.

Истинная, или реальная, альбуминурия встречается при острых воспалительных и дегенеративных заболеваниях почек. Количество белка, поступающего в мочу, зависит от степени поражения и распространенности. При диффузных поражениях, охватывающих равномерно почечную паренхиму, обычно отмечается большое количество белка в моче, в то время как одностороннее поражение или очаговое заболевание почек протекает с незначительной альбуминурией. При нефрозах количество белка достигает высокой сте-

Пени, в то время как хроническое заболевание почек протекает с незначительной альбуминурией, а в ряде случаев белок в моче не отмечается совсем.

Застойная гиперемия почек, возникающая на почве некомпенсированного порока сердца, сопровождается умеренной альбуминурией.

Из патологических процессов, не связанных непосредственно с почками, можно назвать заболевание крови паразитарного характера, лейкемии, первичные и вторичные анемии, тяжелые заболевания кишечника, такие, как энтерит, микозы кишечника, паратуберкулез крупного рогатого скота, тяжелые инфекционные и лихорадочные заболевания, при которых имеет место понижение кровяного давления и дегенерация почечного эпителия.

Скопление углекислоты в крови может при тяжелых страданиях легких служить причиной появления альбуминурии, которая является быстро-проходящей.

Кроме истинной альбуминурии, необходимо учитывать альбуминурию ложную или случайную, которая является следствием примеси белка в нижних мочевых путях—мочевом пузыре или уретре.

Для исследования мочи на белок необходимо, чтобы она была свободной от различных примесей (истечение из влагалища, фекалий и т. д.) и прозрачной.

Просветление мочи достигается различными способами—отстаиванием, фильтрованием и центрифугированием. Наиболее быстро просветление мочи достигается центрифугированием, после чего моча становится обычно совершенно прозрачной и только в отдельных случаях слегка опалесцирует. При незначительном помутнении мочи достаточно бывает отстаивания в течение одного часа.

Сильно мутную мочу можно просветлить фильтрованием через бумажный фильтр. При аммиачном брожении мутную мочу взбалтывают с животным углем, инфузорной землей или углекислым барием. При малых альбуминуриях этот метод непригоден, так как часть белка адсорбируется. Шпет в этих случаях рекомендует для объективной оценки полученных результатов сравнивать испытуемую мочу с нативной, не подвергавшейся обработке.

Для просветления мутной и слизистой мочи лошади очень удобен метод Кулакова. Моча наливается в узкий стеклянный цилиндр, закрывается ватной пробкой, которая стеклянной палочкой или специальными щипцами продавливается через слой мочи до дна цилиндра. Над пробкой после этого про-давливания появляется совершенно прозрачная моча, пригодная для химического исследования на белок.

Качественное исследование на белок. В ветеринарной практике нашли широкое применение следующие пробы.

Проба кипячением. В пробирку набирается 5—10 мл испытуемой мочи. Щелочная моча подкисляется несколькими каплями 10%-ной азотной или уксусной кислоты до нейтральной или слабокислой реакции и на пламени горелки нагревается до кипения.

Помутнение жидкости или выпадение хлопчатого осадка указывает на присутствие белка. При отрицательном результате можно добавить к горячей моче равный объем насыщенного раствора поваренной соли. Моментально^ помутнение всей жидкости свидетельствует о наличии в моче белка. В комбинат ции с реакцией на высаливание проба с кипячением является достаточно чувствительной и довольно простой.

Проба Геллера. В пробирку наливают прозрачную испытуемую мочу. С помощью пипетки под мочу подслаивается концентрированная азотная кислота. Синев рекомендует мочу наслаивать на кислоту. В присутствии белка на границе двух жидкостей получается белое рыхлое кольцо различной толщины в зависимости от количества белка, находящегося в моче. При незначительных альбуминуриях кольцо возникает спустя 2—3 минуты после подслаивания или наслаивания жидкостей. Проба с азотной кислотой дает положительный результат при наличии в моче 0,033% белка.

Проба концентрированной азотной кислотой дает положительный результат не только с сывороточными белками, но и с альбумозой, бальзамическими веществами и нуклеоальбуминами. В присутствии мочекислых солей и красящих веществ в моче на границе двух жидкостей получаются цветные кольца. Осадок из альбумоз исчезает при нагревании и вновь появляется при охлаждении испытуемой порции мочи, а нуклеоальбумин растворяется в избытке азотной кислоты. Муть с бальзамических и смолистых веществ растворяется после прибавления двойного объема спирта или больших количеств эфира.

Проба Бедекера. Мочу предварительно необходимо разбавить водой в равных количествах, чтобы исключить возможность осаждения мочекислых солей. Затем к 5 мл мочи добавляют по каплям 10%-ный раствор уксусной кислоты до совершенно ясной кислой реакции. Если после этого появляется муть, то мочу необходимо профильтровать, чтобы избавиться от нуклеоальбумина, муцина или уратов. Затем в мочу добавляют 3—4 капли 10%-ного раствора железосинеродистого калия (избыток реактива растворяет белок). В зависимости от количества белка появляется опалесценция, муть или хлопчатый осадок. Эта проба выявляет сывороточный белок и альбумозу. Последняя растворяется при кипячении и вновь появляется после охлаждения.

Эта проба может быть видоизменена следующим образом. Непосредственно перед исследованием смешивают в равных объемах 10%-ный раствор уксусной кислоты и 10%-ный раствор железосинеродистого калия и на эту смесь наслаивается прозрачная разбавленная пополам моча. Положительная реакция характеризуется появлением белого хлопчатого осадка на границе двух жидкостей. Проба с железосинеродистым калием обнаруживает белок в количестве 0,002% (моча не должна содержать цинка).

Проба Танрета. Реактив состоит из 1,35 сулемы, 3,32 йодистого калия, 20,0 уксусной кислоты и 60,0 дистиллированной воды. Реактив добавляют к профильтрованной моче по каплям. Положительная реакция характеризуется появлением мути или белого хлопчатого осадка. Пробой с сулемой выявляется сывороточный белок и альбумоза. Если при нагревании мочи осадок исчезает, а после охлаждения появляется вновь, то это говорит о наличии в моче альбумозы. Проба с сулемой особенно пригодна для обнаружения в моче альбумозы.

Проба Роча и Вильяма. В качестве реактива используется 20%-ный раствор сульфосалициловой кислоты (по нашим наблюдениям, вполне пригоден для использования и 10%-ный раствор). В профильтрованную мочу реактив добавляют по каплям. При наличии сывороточного белка получается муть или выпадает белый хлопчатый осадок. Эта проба обладает большой чувствительностью, давая положительную реакцию при разведении белка в моче 1 : 50 000.

Рухлядев эту пробу особенно рекомендует для исследования мочи лошади. Ют реактива растворяются углекислые соли, находящиеся в большом количестве в моче лошади, моча просветляется, избавляя тем самым от предварительного фильтрования или отстаивания в спешных случаях.

Приблизительное определение количества белка в моче возможно при известном навыке по интенсивности получаемой реакции. Более точные результаты получаются при проведении количественных проб. Аналитический способ по весу хлопотлив для клинической практики и требует большой осмотрительности.

Наиболее простым и широко распространенным способом количественного определения белка является метод Эсбаха и скоростной метод Ауфрехта.

Метод Эсбаха. Для определения количества белка по этому методу необходимо иметь специальный альбуминометр, предложенный автором, который представляет собой толстостенную, градуированную, с закруглен ым или коническим дном пробирку на ножке или в специальной подставке. Кроме альбуминометра, необходимо иметь также реактив Эсбаха следующего состава: 1,0 пикриновой кислоты, 2,0 лимонной кислоты и 100,0 дистиллированной воды.

Моча высокого удельного веса разбавляется пополам дистиллированной водой, моча щелочная подкисляется раствором виннокаменной кислоты.

Испытуемая моча наливается до метки—И (метка И—моча) и затем до метки Р наливается реактив. Альбуминометр затем закрывается резиновой пробкой и осторожно, чтобы не вспенивать мочу, поворачивается несколько раз (2—3 минуты). В присутствии белка получается или помутнение или взвешенный в жидкости рыхлый белый осадок. После этого альбуминометр оставляют стоять при комнатной температуре на 24 часа, после чего количество белка определяется по шкале, нанесенной на стенке альбуминометра.

Каждое деление нижнего конца альбуминометр а соответствует разведению белка 1 : 1 000. Если проба ставилась с мочой, разведенной водой, то показания альбуминометра следует умножить на степень разведения.

Следует учесть, что при лечении хинином, антипирином и бальзамическими веществами может выпадать осадок и при отсутствии в моче белка.

Метод Ауфрехта является ускоренным методом определения количества белка в моче. Для постановки пробы необходимо иметь альбуминометр Ауфрехта, представляющий собой градуированную центрифужную пробирку, центрифугу и реактив следующего состава: 1,5 пикриновой кислоты, 3,0 лимонной кислоты и 100,0 дистиллированной воды.

В альбуминометр наливают 4 мл кислореагирующей или подкисленной мочи и 3 мл реактива. Пробирка закрывается резиновой пробкой и медленно несколько раз переворачивается. Центрифугирование производится в течение 2—3 минут, после чего определяется количество выпавшего осадка. Разведения мочи водой при этом методе не требуется.

В практическом отношении очень удобной является следующая количественная проба: в градуированную центрифужную пробирку наливают 10 мл профильтрованной и подкисленной мочи и затем последовательно добавляют 1 мл уксусной кислоты, 1 мл воды и 3 мл 10%-ного раствора желтой кровяной соли. После 3-минутного центрифугирования при 2 000 оборот определяется процент содержания белка из расчета 0,5% белка на каждые 0,25 мл осадка.

Из других методов определение количества белка в моче заслуживает внимания метод Робертса—Стольникова.

Метод Робертса — Стольников а. Метод количественного определения белка по Стольникову основан на наблюдении над предельной чувствительностью пробы с концентрированной азотной кислотой, по которой ровно через 3 минуты после наслаивания мочи на реактив появляется белое кольцо. Количество белка, при котором появляется положительная реакция, равняется 0,033%. Задача заключается в том, чтобы приготовить такое разведение мочи, которое дало бы положительную реакцию ровно через 3 минуты после наслаивания. В этом разведении количество белка и будет равно 0,033%.

Техника определения. В один ряд пробирок набирают по 2 мл крепкой азотной кислоты, а в другой по 2 мл мочи, разведенной в 10 раз (1 мл мочи на 9 мл воды). Затем делается новое разведение мочи добавлением дистиллированной мочи в количествах, указанных в таблице. После этого разбавленная моча наслаивается на кислоту и по часам учитывается разведение, которое дает положительную реакцию ровно через 3 минуты. По прилагаемой таблице нетрудно найти содержание белка в неразбавленной моче.

источник