Количественное определение глюкозы в моче по способу А. Я. Альтгаузена основано на качественной пробе Моора-Геллера. В основу этой пробы положено свойство глюкозы при кипячении в щелочной среде превращаться в буроокрашенные гуммиповые вещества и молочную кислоту. Интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию глюкозы в исследуемой моче. А. Я. Альтгаузен предложил шкалу цветных стандартов (рис. 3), соответствующих определенному процентному содержанию глюкозы в моче.
Для определения количества глюкозы в моче методом А. Я. Альтгаузена необходимо иметь: 1) 10% раствор едкого натра (10 г едкого патра растворяют в 70-80 мл дистиллированной воды и ею доводят объем раствора до 100 мл); 2) сахариметр Альтгаузена.
В пробирку помещают 4 мл нефильтрованной мочи, прибавляют 1 мл 10% раствора едкого натра, смешивают содержимое пробирки и кипятят над пламенем горелки в течение одной минуты. Чтобы избежать выбрасывания жидкости, пробирку периодически выносят из пламени. После кипячения пробу оставляют на 10 минут, а затем помещают в проходящем дневном свете на полоску сахариметра Альтгаузена, интенсивность окраски которой соответствует окраске пробы. При этом если окраска исследуемой пробы интенсивнее или слабее стандарта, то пробирку располагают между двумя полосками сахариметра, одна из которых окрашена слабее, а другая интенсивнее. Количество глю¬козы в моче в таком случае будет равно среднему содержанию глюкозы, указанному на этих полосках.
В случае, если цвет исследуемой пробы интенсивнее окраски последней полоски сахариметра, соответствующей 4% глюкозы, мочу разводят в 2 раза и более. Затем определение повторяют. При этом полученный результат умножают на степень разведения.
Этот метод основан на сравнении исследуемой мочи с искусственно приготовленными стандартами из мочи, не содержащей глюкозы, после добавления к ней определенного количества глюкозы.
Приготовление стандартных разведений. Разводят 1 г глюкозы в 25 мл мочи, не содержащей глюкозы (это будет основное 4% разведение), и из этого раствора готовят следующие разведения: 3 мл раствора + + 1 мл мочи (3% глюкозы); 2 мл раствора+ 2 мл мочи (2% глюкозы); 1,5 мл раствора + 2,5 мл мочи (1,5% глю¬козы); 1 мл раствора + 3 мл мочи (1% глюкозы); 0,5 мл раствора + 3,5 мл мочи (0,5% глюкозы).
Техника определения. В отдельную пробирку наливают 4 мл исследуемой мочи, а в остальные пробирки — стандартные разведения, затем прибавляют по 1 мл 10% раствора едкого натра во все пробирки.
Содержимое пробирок одновременно кипятят в течение одной минуты и определяют, к какой из стандартных пробирок с глюкозой подходит по цвету исследуемая пробирка с мочой.
В бланке анализа мочи отмечают количество глюкозы в процентах.
Для правильного суждения о количестве выделенной из организма глюкозы содержание последней высчитывают в суточной порции мочи. С этой целью одним из описанных выше способов определяют содержание глюкозы в порции мочи (в процентах), взятой из суточного ее количества, и, кроме того, определяют суточный диурез. Суточное количество глюкозы выражают в граммах. Для этого процентное содержание глюкозы умножают на число миллилитров суточной мочи и делят на 100.
Помимо глюкозы, в моче определяют и другие виды углеводов (молочный сахар, фруктозу и др.), но определение последних производят значительно реже, главным образом в детской практике и с целью идентификации отдельных углеводов.
источник
В норме у всех здоровых людей в обычных общих анализах мочи могут обнаружить лишь следы глюкозы. Стандартное ее содержание не превышает 0,7 ммоль/литр или 2,8 ммоль/сутки.
Если в результате исследования было обнаружено, что у вас повышена глюкоза в моче, то вначале следует просто пересдать анализ. Если вы повторно получите плохой результат, то следует начинать искать причины возникновения проблем.
Нередко появление сахара сопровождает острый панкреатит. Но он может появиться и вследствие развития других болезней. Например, глюкозурию центрального генеза может вызвать менингит, геморрагический инсульт, энцефалит, черепно-мозговая травма. Лихорадка также является причиной увеличения концентрации сахара в моче. Отдельно выделяют и эндокринную глюкозурию. Она может развиться в результате скачков уровня адреналина, увеличении тироксина, соматотропина, глюкокортикоидных гормонов.
Ренальная глюкозурия развивается из-за проблем с мочевыделительной системой. Это может быть последствием патологии клубочков и канальцев почек. Указанные поражения часто развиваются на фоне инфекционных заболеваний – гломерулонефрита или интерстициального нефрита. Отравление морфином, хлороформом, стрихнином, фосфором является токсической причиной появления сахара в исследуемом материале.
Также заболевание сопровождает акромегалию. Это непропорциональный рост внутренних органов, мягких тканей и скелета, вызванный избыточным продуцированием соматотропного гормона. При этом в общем анализе нередко наблюдается эозинофилия и анемия, а в моче — гиперкальциурия.
При феохромоцитоме также появляется глюкоза в моче. Причины кроются в том, что нарушается работа почек из-за развития опухоли мозгового слоя надпочечников.
Синдром Иценко-Кушинга характеризуется повышением функции надпочечников, они начинают продуцировать глюкокориткоиды в избыточном количестве. Это сопровождается появлением глюкозурии.
Также среди причин называют инфаркт, ожоги, демпинг-синдром.
Чаще всего повышение глюкозы в моче наблюдается у больных диабетом, гипертиреозом, у людей с тяжелыми поражениями печени. При этом процесс почечной фильтрации нарушается. Глюкоза, проходя через мембраны клубочков в почках, должна полностью всасываться обратно в канальцах и возвращаться в кровоток.
Для своевременного выявления заболеваний необходимо сдавать общий анализ мочи ежегодно. Ведь часто начало большинства болезней проходит практически бессимптомно.
Также важно знать, что существует 2 формы этого заболевания. Глюкоза в моче повышена может быть в результате наследственного дефекта, при котором нарушен механизм ее транспортировки. В таком случае говорят о первичной почечной глюкозурии. Схожий механизм развития наблюдается и при синдроме Фанкони или глюкоаминовом диабете. При первом заболевании нарушается работа почек, в моче обнаруживают глюкозу, избыток бикарбоната, аминокислот, фосфатов. Оно характеризуется повышенным выделением мочи, болями в костях, слабостью. Глюкоаминовый диабет проявляется сбоями в работе почек, при которых аминокислоты и сахар выводятся с мочой.
Вторичная форма может проявиться во время беременности или в результате отравления.
Для окончательной установки диагноза мало просто выслушать жалобы и собрать анамнез, необходимо достоверно определить, есть ли глюкоза в моче. Причины ее повышения устанавливаются позже. Сложность заключается в том, что глюкозурия часто протекает бессимптомно. Правда, при выраженной потере сахара с мочой некоторые пациенты жалуются на утомляемость, слабость, головокружения, чувство голода, повышение потоотделения. Также больные иногда отмечают боли в мышцах, увеличение суточной мочи, водянистый стул и нарушение сердцебиения.
Так, в рамках исследования назначаются дополнительные анализы. Проверяется количество сахара в сыворотке крови, исследуются все порции этой биологической жидкости, в том числе и суточная. Для анализов разработаны специальные методы определения глюкозы в моче.
Наиболее распространенным способом является выяснение концентрации сахара с помощью специальных полосок с реагентами. Также наличие глюкозы диагностируют, проведя пробу Гайнеса, исследование по методу Бенедикта, Нидлера. Выяснить точную концентрацию можно с помощью поляриметрического исследования или проведя анализ по Альтгаузену.
Если вам надо сдать обычный общий анализ или целенаправленно проверить наличие сахара в моче, то не забывайте об установленных правилах сбора биологического материала. Так, вначале необходимо провести тщательный туалет наружных половых органов с помощью нейтрального мыла. Иначе в биологический материал могут попасть вещества, способствующие быстрому разложению глюкозы.
Мочу необходимо собирать в чистую посуду, желательно использовать специальные аптечные контейнеры или тщательно вымытые и стерилизованные баночки. Закрыв емкость крышкой, ее необходимо доставить в лабораторию, в которой и будут определять содержание глюкозы в моче.
Если вам сказали собрать суточную мочу, то делается это следующим образом. Первая утренняя порция сливается. Сбор начинается со второго в день мочеиспускания в полном объеме. Не забудьте, что в суточный объем необходимо собрать утреннюю мочу следующего дня. Обязательно подмывайтесь перед каждым походом в туалет. Но не надо нести всю бутыль в лабораторию для того, чтобы определить, если ли у вас глюкоза в моче, повышена она или нет. Замеряйте общий объем, перемешайте биологическую жидкость в емкости и отберите до 100 мл в чистую баночку. На специальном листе необходимо указать ваш рост, вес и общее количество собранной мочи. Кстати, на протяжении суток хранить емкость необходимо в холодильнике. Это нужно для того, чтобы не снижалась концентрация глюкозы в моче.
Для диагностики предназначены особые полоски «Глюкотест» длиной 5 см и шириной 0,5 см со специальной светло-желтой полосой. Именно этот участок пропитан ферментами и красителями, он и окрашивается в случае возникновения реакции.
Определение глюкозы в моче проводится следующим образом. Индикаторная полоска помещается в биологическую жидкость так, чтобы реактивы полностью намокли, и сразу извлекается из нее. После этого ее оставляют на 2 минуты. Как пройдет указанное время, окрас полосы сравнивают со специальной шкалой, определяя приблизительную концентрацию сахара. Если она превышает 20 г/л, то цвет полоски становится предельно возможным и далее не изменяется.
Хранить полоски необходимо при температуре до +18 градусов так, чтобы на них не попадали солнечные лучи. Дотрагиваться до индикаторного участка нежелательно.
Для его проведения создают специальный реактив. В него входят кристаллический сульфат меди, едкий натр и глицерин, которые растворяются в дистиллированной воде по отдельности, а затем смешиваются.
Проводят исследование следующим образом: 20 капель реактива прибавляют к 8 мл мочи в пробирке. В результате должен появиться голубоватый окрас. Верхнюю часть пробирки греют до начала кипения. Нижний ее отдел остается холодным для контроля. Если при этом в нагретой части пробирки голубой окрас сменяется на желтый, то, значит, глюкоза в моче повышена.
Существует и другой метод проверки наличия избыточного количества сахара в моче, основанный на тех же свойствах глюкозы восстанавливать закись меди или гидрат закиси меди из гидрата окиси меди в щелочной среде. Для этих целей готовят специальный реактив из цитрата натрия, безводного карбоната натрия, сульфата меди и воды. Из них делают растворы, которые потом смешивают.
Для проведения исследования необходимо до 10 капель мочи и 5 мл готового реактива. Их смешивают в пробирке, нагревают ее на протяжении пары минут и дожидаются остывания. Если в результате появляется осадок, а жидкость окрашивается в желтый, красный или зеленый цвет, то глюкоза в моче есть.
Этот метод считается одним из самых надежных среди качественных исследований.
Метод разработан на основе того, что глюкоза может восстанавливать нитрат висмута в металлический. Для проведения исследования готовят специальный реактив. В него входит нитрат висмута, который растирается в сегнетовой соли, 10% едкий натр. Хранится приготовленный реактив только в бутылках из темного стекла.
Проводится анализ следующим образом. Моча и реактив смешиваются в соотношении 2:1 и варятся на протяжении 3-х минут. Если присутствует глюкоза в моче, то цвет поменяется на коричневый или даже черный, а при стоянии будет виден темный осадок. Но иногда положительный результат может возникнуть не из-за наличия сахара, а в результате реакции на белок или ряд лекарственных препаратов.
С помощью указанного метода проводится не только определение глюкозы в моче, но и выяснение ее концентрации. Делается это в специальном приборе – поляриметре.
Для проведения исследования биологическую жидкость обесцвечивают и удаляют из нее белок. После этого ее заливают в аппарат, ждут несколько минут для затихания колебаний частиц и определяют концентрацию глюкозы. С помощью такого метода можно определить даже значимое повышение глюкозы в моче, ведь оно основано на свойствах этого вещества поворачивать поляризованный луч вправо. Угол вращения будет зависеть от концентрации раствора. Правда, на результаты могут повлиять β-оксимолярная кислота, стрептомицин, тетрациклиновые препараты.
Указанный способ позволяет достаточно точно определить, присутствует ли в глюкоза в моче. Для этого в биологическую жидкость добавляют 10% раствор едкого натра и кипятят ее в течение минуты. После этого ее цвет сравнивают со шкалой стандартов, приготовленной в пробирках. Этот способ используют как альтернативу полиметрическому исследованию, когда необходимо быстро выяснить уровень сахара, а необходимого оборудования нет.
Причиной появления глюкозы в моче у малышей может стать диабет. При этом у новорожденных снижена масса тела, а при появлении проблем замечается отставание в развитии. Но по одному анализу мочи диагноз не ставится, малыша тщательно обследуют, чтобы исключить другие возможные причины развития болезни.
Обнаруженная глюкоза в моче у ребенка вынуждает родителей более тщательно следить за питанием малыша. В его организм должно поступать достаточное количество углеводов, они необходимы для полноценного развития. Также важно следить, чтобы концентрация глюкозы в сыворотке крови находилась в пределах 3,5-5,5 ммоль/л. Для этого необходимо не только правильное питание, но и физические нагрузки.
Многие пациенты не знают, что значит глюкоза в моче. Они начинают паниковать и требовать назначения каких-то препаратов для нормализации состояния. Но наличие сахара в биологической жидкости является лишь сигналом проблем. Это значит, что необходимо проверить, нет ли у вас диабета, проблем с почками или надпочечниками. Также необходимо проконтролировать работу щитовидной железы. Не стоит забывать, что глюкозурия может развиться и из-за отравлений рядом веществ.
Если вы страдаете от глюкозурии и хотите узнать, как предотвратить развитие болезни у детей, то медицина тут бессильна. Никакой специфической профилактики не существует. Важно просто следить за питанием, давать необходимую физическую нагрузку, и тогда есть шанс, что организм будет работать нормально, несмотря на предрасположенность к развитию заболевания. Ведь чаще всего глюкоза в моче у ребенка появляется вследствие генных мутаций. А избежать этого нельзя. Как правило, ломается ген, отвечающий за белок, который необходим для всасывания в кровь сахара в почках. Даже если у родителей нет проблем, но у них есть малыш с глюкозурией, то при планировании следующих беременностей им в обязательном порядке необходимо посетить генетика для оценки возможных рисков.
источник
Экспресс-метод определения глюкозы в моче тест-полосками «Глюкотест»
Одной из причин глюкозурии является сахарный диабет. Для лечения этого заболевания нужно назначить больному такой режим питания и введения инсулина, чтобы в моче оставались только следы глюкозы. Для этого врачу необходимо знать количество глюкозы, выделяемое больным с мочой за сутки.
Принцип. На реактивной бумаге «Глюкотест» имеется поперечная полоса светло-желтого цвета, пропитанная растворами ферментов (глюкозооксидазы, пероксидазы) и красителем. Глюкоза с помощью глюкозооксидазы (КФ 1.1.3.4.) окисляется кислородом воздуха до глюконовой кислоты с образованием пероксида водорода. Пероксид водорода в присутствии пероксидазы (КФ 1.11.1.7.) окисляет краситель, превращая его в окрашенное соединение. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию глюкозы, что определяется при сравнении с цветной шкалой из набора «Глюкотест».
Подобные тесты выпускают и зарубежные фирмы: «Биофан Г», «Глюкофан», «Тетрафан», «Пентафан» и др. Диагностические полоски могут иметь несколько зон индикаций, в том числе зону выявления и определения глюкозы в моче.
Реактивы. 1) набор диагностических полосок «Глюкотест»;
2) 0,5%, 1%, 2%, 3% растворы глюкозы,
3) 10% раствор NaOH.
Материал исследования.
Моча нормальная и патологическая (содержащая глюкозу).
Проведение анализа.
В пробирки с образцами мочи погружают полоски бумаги «Глюкотест» так, чтобы желтая полоса с реактивами была смоченной. Быстро извлекают, кладут смоченным концом на пластмассовую пластинку. Через 2 мин сравнивают окраску полоски с цветной шкалой из набора «Глюкотест». Содержание глюкозы в моче определяют по наиболее совпадающему со шкалой цвету полоски. Каждой полоске на цветной шкале соответствует определенное содержание глюкозы в моче.
Практическое значение.
Метод обладает высокой субстратной специфичностью и позволяет обнаружить в моче глюкозу в пределах 0,055-1,11 ммоль/л. Простота и скорость выполнения анализа позволяют применять этот метод как предварительный тест при массовом обследовании больных. Кроме того, он позволяет самому больному следить за содержанием глюкозы в моче и соответственно изменять диету.
Диагностические полоски ФАН и другие для полуколичественного определения нормальных и патологических компонентов мочи позволяют проводить анализ в любых условиях в присутствии больного на приеме у врача или дома. Использование индикаторных тест-полосок незаменимо для профилактики и раннего распознавания заболеваний, непосредственно у постели больного дома и в стационаре, службе скорой помощи, для массовых обследований населения с целью выявления некоторых заболеваний, в том числе самими пациентами или их родственниками в домашних условиях. К настоящему времени в республике на базе научно-технического кооператива «Анализ-Х» налажено производство сухих тест-полосок для определения содержания в моче глюкозы («Глюкотест»), кетоновых тел («Кето-уротест»), «Били-уротест» – билирубина, «ДиаФан» (кетоны, глюкоза), «ТриФан» (глюкоза, белок, рН) и др.
Реагентные зоны тест-полосок содержат сухие реактивы (ферменты и/или неферменты), способные воздействовать на определенные метаболиты биологических жидкостей с изменением окраски индикаторной зоны. Правила пользования тест-полосками сводятся к следующему: быстро окунуть тест-полоску в мочу, вынуть её и вытереть боковую кромку о край ёмкости, чтобы удалить излишнюю мочу, через 60 секунд сравнить реактивное поле с цветной шкалой на этикетке упаковки. При проведении качественного определения глюкозы в моче рекомендуют выполнять следующие указания:
1) исследуют свежесобранную мочу, полученную до приема пищи;
2) индикаторную бумагу хранить в плотно закрытом пенале, в темном и прохладном месте, но не в холодильнике;
3) соблюдают срок годности.
Для качественного определения глюкозы проводится роба Гайнеса, используются экспресс-методы с применением готового набора реактивов.
Алиментарная глюкозурия, появляющаяся через 30-60 мин после приема пищи богатой углеводами, исчезает, через 2-5 часов. Наблюдается чаще у детей грудного возраста и при беременности.
Иногда с помощью пищевой нагрузки углеводами можно получить так называемую алиментарную глюкозурию у лиц, предрасположенных к диабету, и тем самым выявить предиабетическое состояние.
Следует указать также и на возможность печеночной глюкозурии, встречающейся, например, при так называемом бронзовом циррозе печени, характерным признаком которого является наличие сахара в моче.
Концентрация глюкозы 1,7 ммоль/л в утренней порции мочи оценивается, как физиологическая глюкозурия.
физиологическая глюкозурия может наблюдаться при поступление с пищей большого количества углеводов, когда организм временно теряет способность усваивать сахар (алиментарная*), после эмоционального напряжения и стресса (эмоциональная), приёма некоторых лекарств (кофеина, кортикостероидов)
Клинические аспекты
Физиологический уровень глюкозы очень низкий (составляет порядка 0,06 — 0,085 ммоль/л) и не обнаруживается обычными лабораторными методами (Фелинга, Гайнеса, Бенедикта, Ниландера и др.), так как находятся ниже порога их чувствительности. Поэтому на данный момент времени концентрация глюкозы в первой утренней порции мочи — 1,7 ммоль/л принята за верхний предел физиологической глюкозурии. Лабораторными исследованиями показано, что содержание глюкозы в моче ниже физиологического уровня или полное ее отсутствие это показатель бактериальной инфекции — бактериурии.
Появление глюкозы в моче зависит либо от её концентрации в крови либо от процессов фильтрации и реабсорбции глюкозы в нефроне. Повышение глюкозы в крови выше 9,9 ммоль/л (средняя величина почечного порога) вызывает появление глюкозурии.
При нормальном сахаре в крови глюкозурия появляется в случае нарушения процессов реабсорбции — почечная (ренальная) глюкозурия. Ренальная глюкозурия может быть первичной (врождённой) или вторичной (возникает при хронических гломерулонефритах, нефротическом синдроме, острой почечной недостаточности и др.)
Существуют качественные и количественные методы определения глюкозы в моче. В основу качественных реакций положены восстановительные (редукция) свойства глюкозы. Между тем следует знать, что не каждое вещество, которое даёт положительную редукционную пробу является глюкозой. Если в посуде, куда собирают мочу, находились сахаристые вещества (например, банка из-под компота), то в моче может быть обнаружена сахароза. При избыточном потреблении фруктов может наблюдаться фруктозурия, пентозурия; в конце беременности или после прекращения кормления грудью отмечается лактозурия; после употребления молока, у людей, страдающих ферментопатией, наблюдается галактозурия и гипогликемия. Эти состояния ошибочно могут приниматься лабораторией за глюкозурию.
В настоящее время появление ферментативных биохимических методик определения с использованием биохимических тест-полосок, позволяют однозначно определять глюкозурию и не допускать лабораторных ошибок.
Различают физиологическую и патологическую почечную глюкозурию.
Физиологическая глюкозурия может наблюдаться при поступление с пищей большого количества углеводов, когда организм временно теряет способность усваивать глюкозу (алиментарная), после эмоционального напряжения и стресса (эмоциональная), приёма некоторых лекарств (кофеина, кортикостероидов).
Патологические глюкозурии (от 0,3 — 0,5 г/л до нескольких грамм глюкозы в литре мочи) делятся на панкреатогенные (важнейшая из панкреатогенных — диабетическая глюкозурия) и непанкреатогенные (наблюдается при раздражении ЦНС, тиреотоксикозе, синдроме Иценко-Кушинга, акромегалии, феохромоцитоме, патологии почек, печени).
Лекарственная глюкозурия может развиваться при введении больным морфина, анестетиков, седативных средств, а также препаратов, обладающих гипергликемическим и нефротоксическим эффектами.
Разнообразие причин глюкозурии усложняет дифференциацию. Однако на практике следует исходить из следующего. До тех пор, пока соответствующие исследования не исключат возможность сахарного диабета, любой случай глюкозурии следует рассматривать как проявление этой болезни. Есть глюкозурия, исследуется содержание сахара в крови; если оно повышено, практически может быть поставлен диагноз сахарного диабета. Если содержание сахара в крови нормальное, то следует провести тест толерантности к глюкозе (ТТГ). При получении нормальных результатов ТТГ следует установить природу вещества, вызвавшего редукцию. Если обнаруженное вещество является глюкозой, то имеет место почечная глюкозурия (врождённая или вторичная).
Для правильной оценки степени выраженности глюкозурии (особенно у больных с сахарным диабетом) необходимо рассчитывать суточную потерю глюкозы с мочой.
Массовые обследования населения с целью выявления лиц, страдающих сахарным диабетом, привели к заключению, что начальные стадии этого заболевания характеризуются отсутствием каких-либо явных симптомов. По различным оценкам остаются нераспознанными от 30 до 50 % людей с сахарным диабетом. Своевременное диагностирование и применение терапии на ранних стадиях заболевания предотвращает или задерживает развитие различных осложнений.
В обязательном порядке обследованию должны подвергаться лица, у которых имеются симптомы, характерные для сахарного диабета: ожирение; гиперлипопротеинемия; полиурия; гипертония; гепатобилиарная патология; хронические инфекции мочевых и дыхательных путей; сердечно-сосудистые заболевания; хронические дерматозы и др.
Другие группы риска: лица старше 40 лет; лица с диабетической наследственностью; матери, родившие детей весом более 4,5 кг; женщины после преждевременных родов или абортов.
Примерно одна треть пациентов с глюкозурей, после алиментарной нагрузки, страдает сахарным диабетом. Определение глюкозурии другого характера также имеет существенное диагностическое значение. На данный момент времени тест определения глюкозы в моче является обязательным при исследовании мочи в клинико-диагностических лабораториях во всех странах с развитой системой здравоохранения.
Глюкозурияявляется результатом нарушения углеводного обмена вследствие патологических изменений в поджелудочной железе (сахарный диабет, острый панкреатит и т.д.).
При тяжелых формах сахарного диабета содержание глюкозы в моче может достигать 8-10%. Осмотическое давление мочи повышается. Суточный диурез возрастает до 5-10 л и более (полиурия). Развивается обезвоживание организма и как следствие его — усиленная жажда (полидипсия).
Реже встречается глюкозурия почечного происхождения, связанная с недостаточностью резорбции глюкозы в почечных канальцах.
Как временное явление глюкозурия может возникнуть при некоторых острых инфекционных и нервных заболеваниях, после приступов эпилепсии, сотрясения мозга.
Отравления морфином, стрихнином, хлороформом, фосфором также обычно сопровождаются глюкозурией.
Может быть глюкозурия алиментарного происхождения, глюкозурия беременных и глюкозурия при нервных стрессовых состояниях (эмоциональная глюкозурия).
источник
1. Определение глюкозы в моче. Моча здорового человека содержит минимальное количество глюкозы (0,16—0,83 ммоль/л), которое нельзя обнаружить обычными качественными пробами. Появление сахара в моче (глюкозу-рия) может быть физиологическим. При нормально функционирующих почках глюкозурия наблюдается только в тех случаях, когда увеличивается концентрация сахара в крови, т. е. появляется гипергликемия. Так называемый почечный порог глюкозы —концентрация сахара в крови, выше которой отмечается глюкозурия, обычно не превышает 9,9 ммоль/л (1,8 г/л).
Физиологическую глюкозурию можно наблюдать при введении с пищей большого количества углеводов (алиментарная), после эмоционального напряжения (эмоциональная), приема некоторых лекарств (кофеин, стероидные гормоны). Реже наблюдают почечную (ренальная) глюкозурию, обуславливаемую нарушением реабсорбции глюкозы в канальцах, когда глюкозурия появляется при нормальной концентрации сахара в крови. Как первичное заболевание ренальную глюкозурию встречают в виде так называемого р е н а л ь -ного диабета. Вторичные ренальные глюкозурии могут встречаться при хронических нефритах, нефрозах, амилоидозе.
Патологическая глюкозурил чаще всего бывает диабетической (сахарный диабет), реже тиреогенной (тиреотоксикоз), гипофизарной (синдром Ицен-ко — Кушинга), печеночной (цирроз печени).
Для правильной оценки глюкозурии (особенно у больных диабетом) необходимо исследовать мочу, собранную за сутки, и вычислить суточную потерю сахара с мочой.
Большинство качественных проб, применямых для определения глюкозы в моче, основано на использовании редуцирующей способности глюкозы.
Проси Гайнеса. Основана на свойстве глюкозы восстанавливать гидрат окиси меди в основной среде в гидрат закиси меди (желтый цвет) или закись меди (красный цвет).
Проси Huлaндера. Основана на восстановлении глюкозой нитрата висмута в металлический висмут. В присутствии сахара появляется окраска от коричневой до черной.
При производстве редукционных проб моча не должна содержать белка. Если в моче есть белок, ею необходимо удалить. Посторонние восстанавливающие вещества (антипирин, бензойная кислота и др.). дающие ложную реакцию, могут быть удалены, если прибавить к 9 мл мочи 1 мл 95% спирта и небольшое количество животного угля, так как упомянутые посторонние вещества адсорбируются углем, а глюкоза не адсорбируется.
Наряду с редукционными пробами последнее время широко применяется глюкозооксидазная проба. Это энзимная проба, отличающаяся значительной специфичностью
и простой техникой. Глюкозооксидаза (нотатин) представляет собой ..—d-глюкозодегидрогеназу. На первом этапе пробы из глюкозы под воздействием фермента выделяется перекись водорода. На втором этапе устанавливается наличие перекиси водорода с помощью редокс-индикатора, подобно механизму бензидиновой пробы. Глюкозопероксидазная проба положена в основу метода индикаторных бумажек. В мочу погружают бумажку, пропитанную нотатином, пероксидазой и каким-нибудь производным бен-зидина. Через 30 с при наличии глюкозы появляется синяя окраска.
Количественное определение глюкозы в моче. Поляриметрическим методом по углу вращения поляризованного луча (глюкоза вращает поляризованный свет вправо) можно определить концентрацию глюкозы в моче. Аппараты, при помощи которых определяют угол вращения поляризованного света, называются поляриметрами. Поле зрения поляриметра разделено на две или три части. При отсутствии оптически активной жидкости в трубке поляриметра анализатор не задерживает света и все части одинаково освещены. При наличии в трубке оптически активной жидкости плоскость поляризованного света отклоняется, и часть зрительного поля затемнена. Диском, к которому прикреплен анализатор, поворачивают его до тех пор, пока все зрительное поле не становится равномерно освещенным. Угол вращения анализатора отражает угол вращения плоскости поляризации, который пропорционален проценту содержания глюкозы в моче. Величину угла отмечают по шкале. Этот способ позволяет получить довольно точные данные.
Колориметрический метод Альтгаузена основан на цветной реакции, получаемой при нагревании раствора глюкозы с раствором едкого натра. К 4 мл мочи добавляют 1 мл 10% раствора едкого натра или едкого кали и кипятят 1 мин. Через 10 мин цвет жидкости в пробирке сравнивают с рядом цветных стандартов, по которому определяют результат. Колориметрию можно производить не только визуально, но и при помощи фотометра.
Определение кетоновых (ацетоновых) тел. Содержание в моче кетоновых тел называется кетонурией. К кетоновым телам относятся три соединения: ацетон, ацетоуксусная кислота и р-оксимасляная кислота. Большая часть жиров и некоторые белки способствуют образованию кетоновых тел. Кетоновые тела быстро окисляются в тканях до СО2 и воды, поэтому с мочой за сутки выводится около 20—50 мг кетоновых тел.
Кетонурия может быть следствием повышенного образования кетоновых тел и следствием нарушения их распада. Чаще всего кетонурию приходится наблюдать при тяжелом сахарном диабете, но она встречается и при углеводном голодании. Кетонурия на почве голода и истощения возможна при тяжелых токсикозах, продолжительных желудочно-кишечных расстройствах, дизентерии, а также может появляться в послеоперационном периоде, при сильном раздраженииЦНС.
В норме с мочой выделяются минимальные количества кетоновых тел, которые не обнаруживаются сущее твующими качественными пробами. Качественные реакции на кетоновые тела основаны па появлении цветной реакции при их взаимодействии с нитропруссидом натрия в основной среде. Наибольшее распространение получила проба Ланге, которая заключается в том, что на исследуемую мочу после добавления к пей нитропруссида и уксусной кислоты наслаивают аммиак; при положительной пробе па границе жидкостей образуется фиолетовое кольцо.
2. Отек легких:
— строфантин 0.05% — 0,25 мл до 1 мл
2. Диуретики: Диуретические и дегидратационные средства
· Фуросемид ( 20-60 мг до 160 мг)
Этакриновая кислота ( 50-100 мг в 50 – 100 мл 5% р-ра глюкозы)
3. Альфаадреноблокаторы: тропафен. Блокаторы альфа- адренорецепторов
4. Наркотические анальгетики:
— строфантин 0.05% — 0,25 мл до 1 мл
2. Альфаадреноблокаторы: тропафен.
3. ГК: Глюкокортикостероиды за 2-3 часа
преднизолон (60- 150 мг в 100 – 200 мл физ р-ра
studopedia.org — Студопедия.Орг — 2014-2019 год. Студопедия не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования (0.002 с) . 
источник
Метод основан на цветной реакции, получаемой при нагревании раствора глюкозы со щелочью. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию глюкозы в моче.
Реактивы: 10% раствор едкого натра, дист. вода.
Ø К 2 мл мочи в пробирке добавить 1 мл 10% р-р едкого натра
Ø Выдержать 5 минут на кипящей водяной бане. При наличии глюкозы в моче образуется окрашивание (от жёлтого до бурого).
Ø Добавить 4 мл дист. воды
Ø ФЭК: кювета 10 мм, зеленый светофильтр, контроль дист. вода
Ø Расчет по калибровочному графику
Можно приготовить цветную шкалу в пробирках (стандарты). Готовят следующие растворы глюкозы: 0,5; 1; 1,5; 2; 3 и 4% и обрабатывают их так же, как исследуемую мочу.
БИОМЕДИЦИНСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ: Фотоэлектроколориметрический метод анализа относится к методам определения концентрации вещества в окрашенном растворе по интенсивности окраски. Метод широко применяется в медицине для определения концентраций окрашенных веществ в биологических жидкостях и тканях. Он может быть использован для измерения концентраций и неокрашенных веществ, если эти вещества могут быть переведены в окрашенное состояние с помощью подходящего реагента.
Самостоятельная работа с исследовательским этапом
ü прочитать и законспектировать методы определения глюкозы в моче в рабочих тетрадях;
ü затем получить у преподавателя образцы биологического материала;
ü провести самостоятельную исследовательскую работу пользуясь методическим материалом;
ü полученные результаты исследования оформить согласно требованиям заполнения бланков анализа.
| Задание №1. Качественное определение глюкозы в моче методом Гайнеса-Акимова | Примечание:Моча должна быть прозрачной и не содержать белок. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Посуда, оборудование и реактивы: | · химические пробирки · штативы для пробирок · градуированные пипетки · пастеровские пипетки · резиновые груши · реактив Гайнеса · водяная баня | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Ход исследования: | Ø В пробирку наливают 3-4 мл реактива Гайнеса и добавляют 8-12 капель мочи. Ø Нагревают на водяной бане 1 минуту. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Интерпретация полученных результатов: | При наличии глюкозы в моче цвет синего реактива меняется от зеленого, желтого до кирпично- красного и появляется осадок | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Задание №2. Качественное определение глюкозы в моче с тест полосками (полуколичественное). | Примечание: Полоски хранят при температуре от +8 до +18 °С, избегая попадания на них прямых солнечных лучей; не рекомендуется дотрагиваться рукой до цветной шкалы полоски. ВНИМАНИЕ! При наличии на посуде для сбора мочи остатков моющих средств (плохо вымытая и отмытая посуда) существует большая вероятность возникновения ложноположительных или ложноотрицательных результатов исследования. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Посуда, оборудование, реактивы | · тест-полоски для определения глюкозы | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Ход определения: | Мочу перемешивают. Тест-полоску погружают в исследуемую мочу так, чтобы полоса с реактивами оказалась смоченной, после этого ее немедленно извлекают из мочи и на 2 мин оставляют на пластмассовой пластинке. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Интерпретация полученных результатов: | По истечении 2 мин сразу же сравнивают изменившуюся окраску цветной полосы на бумаге со шкалой, имеющейся в комплекте | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Задание №3. Запишите полученные данные анализа мочи на глюкозу в рабочих тетрадях | Проба мочи № ___
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Задание №4. Количественное определение глюкозы в моче на ФЭКе | Примечание:Моча должна быть прозрачной и не содержать белок, т.к. белок является оптически активным веществом и коагулирует по действием реактивов и нагревания. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Посуда, оборудование, реактивы | · химические пробирки · штативы для пробирок · градуированные пипетки на 1 мл · резиновые груши · 10% раствор едкого натра · дистиллированная вода · водяная баня · песочные часы на 5 минут · ФЭК (фотоэлектроколориметр) · кювета 10 мм | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Ход определения: | К 2 мл мочи в пробирке добавить 1 мл 10% р-р едкого натра. Выдержать 5 минут на кипящей водяной бане. Добавить 4 мл дист. воды Измерить на фотоэлектроколориметре (зеленый светофильтр) против контроля в кювете длиной оптического пути 10 мм. Контролем дист. водой. Из 40% раствора глюкозы (можно использовать ампулы глюкозы для инъекций) приготовить 20 мл 4% раствора (в качестве разводящей жидкости использовать мочу, не содержащую глюкозу). Из 4% раствора приготовить разведения: 4%, 3%, 2%, 1,5%, 1%, 0,5% по схеме: | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Интерпретация полученных результатов: | Расчет ведут по калибровочному графику, учитывая показания экстинции (оптическая плотность). | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Задание №5. Запишите полученные данные анализа мочи на глюкозу в рабочих тетрадях | Проба мочи № ___
В нормальной моче глюкоза содержится в минимальных количествах, которые не обнаруживаются обычными методами, применяемыми в лаборатории. Глюкозы в моче в норме НЕТ. Контрольные вопросы и задания А. Ответьте на поставленные вопросы, используя рабочую тетрадь 1. Раскройте понятие «глюкозурия». 2. Назовите классификацию глюкозурий. 3. Назовите причины развития алиментарной глюкозурии. 4. Назовите причины развития эмоциональной глюкозурии. 5. Перечислите патологические глюкозурии и причины их развития. 6. При какой концентрации глюкозы в крови она начинает фильтроваться в мочу? 7. Какой вид глюкозурии можно предположить при следующих лабораторных показателях: уровень глюкозы в крови – 5,0 ммоль/л; реакция на сахар в моче положительная? 8. Расскажите методику обнаружения глюкозы в моче реакцией Гайнеса – Акимова. 9. Принцип метода Гайнеса- Акимова, реактивы, особенности их приготовления. 10. Как сделать цветную шкалу Альтгаузина. 11. Сбор мочи больного сахарным диабетом на анализ. 12. Что может повлиять на анализ глюкозы в моче? 13. Как приготовит 4% раствор глюкозы 10 мл? 14. Почему белок в моче мешает определению глюкозы на ФЭКе? 15. Почему моча больного сахарным диабетом водянистого цвета. Б.Запишите в рабочей тетради термины и дайте им обозначение, используя изученный материал
1. Знать теоретический и практический материал. 2. Отвечать на контрольные вопросы. 4. Подготовить лекционный материал: — причины и виды глюкозурий. Литература для самостоятельной подготовки: Камышников В.С. Методы клинических лабораторных исследований М: МЕДпресс-информ, 2011. Стр. 37-41, 57-63 Кишкун А.А. Клиническая лабораторная диагностика. – М.: ГЭОТАР – Медиа, 2008. Папиллярные узоры пальцев рук — маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни. Поперечные профили набережных и береговой полосы: На городских территориях берегоукрепление проектируют с учетом технических и экономических требований, но особое значение придают эстетическим. Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰). Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ — конструкции, предназначенные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой. источник Унифицированный метод определения с помощью индикаторных полосок Реактивная бумага “Глюкотест” представляет собой полоски бумаги 0,5 ґ 5 см, имеющие поперечную полосу светло-желтого цвета, пропитанную раствором ферментов и красителя. С помощью бумаги “Глюкотест” можно обнаружить глюкозу в моче и ориентировочно определить ее концентрацию. Ход исследования Содержание глюкозы в моче определяют по наиболее совпадающему со шкалой цвету полоски. Полоски хранят при температуре от +8 до +18 °С, избегая попадания на них прямых солнечных лучей; не рекомендуется дотрагиваться рукой до цветной шкалы полоски. Исследуют свежесобранную мочу; при содержании в моче глюкозы более 20 г/л интенсивность окраски цветной полосы становится предельной (соответствует 2% по шкале) и далее не меняется. Унифицированные методы обнаружения глюкозы в моче. Проба Гайнеса Метод основан на способности глюкозы восстанавливать в щелочной среде при нагревании гидрат окиси меди (синего цвета) в гидрат закиси меди (желтого цвета) и закись меди (красного цвета). Для того чтобы из гидрата окиси меди при нагревании не образовался черный осадок окиси меди, к реактиву добавляют глицерин, гидроксильные группы которого связывают гидрат окиси меди. Необходимые реактивы 2. 50 г едкого натра растворяют в 400 мл дистиллированной воды. 3. 15 г глицерина растворяют в 200 мл дистиллированной воды. Далее первый и второй растворы смешивают и тотчас же приливают третий раствор. Реактив стоек. Ход исследования При бактериурии глюкоза мочи быстро разлагается. Проба Бенедикта Необходимые реактивы 2. Отдельно растворяют 17,3 г сульфата меди в 100 мл воды. Смешивают оба раствора, непрерывно взбалтывая, после охлаждения доливают водой до 1 л. Ход исследования Проба Бенедикта является самой надежной, так как при большом разведении мочи (8—10 капель мочи на 5 мл реактива) восстанавливающее действие других редуцирующих веществ мочи выражено слабо. Проба Нилендера Унифицированный поляриметрический метод определения содержания глюкозы источник Методическая разработка № 5 по учебной практике на тему занятия: «Выполнение клинического анализа мочи -качественные и количественные методы определения глюкозы в мочеДля дошкольников и учеников 1-11 классов 16 предметов ОРГВЗНОС 25 Р. Государственное автономное образовательное учреждение среднего профессионального образования Республики Крым «Евпаторийский медицинский колледж» План занятия (практическое) № 5 Тема занятия: Выполнение клинического анализа мочи — количественные методы определения глюкозы в моче Дисциплина (МДК) 01.01. Теория и практика лабораторных общеклинических исследований Специальность: 31.02.03. Лабораторная диагностика Приобрести первоначальный практический опыт работы при проведении лабораторных общеклинических исследований Отработать практические навыки и умения Развивать навыки самообразования, творческие способности студентов Продолжить развитие учебно-интеллектуальных умений; Устанавливать причинно-следственные связи продолжить формирование эволюционных представлений о развитии органического мира, передачи наследственного материала воспитывать уважение к людям, науки, их достижениям продолжить формирования умения работать в коллективе, принимать совместные решения продолжить формирования здорового образа жизни Анатомия и физиология человека Физико-химические методы исследования и техника лабораторных работ Место проведения: лаборатория 405 Количество часов: 4 академических Обеспечение занятия: стол лаборанта, оборудование для проведения всех этапов общеклинического исследования, реактивы посуда; мультимедийное оснащение, таблицы, схемы, алгоритмы. Камышников В. С. «Методы клинических лабораторных исследований», «Мединформ», Москва, 2015г А. А. Кишкун «Клиническая лабораторная диагностика», «ГОТАР – Медиа» — 2011 г Профильные web — c айты интернет — ресурсы: http://www.labnbo.narod.ru — сайт лаборатории наследственных болезней обмена содержит информацию о лабораторной диагностике редких наследственных заболеваний, их клинических проявлениях и возможностях лечения.http://www.medlab.scn.ru — онлайн журнал для специалистов, нормативные документы, методические рекомендации, эксперт-клуб, выставка лабораторных фирм, форум, полезная информация о лабораторных анализах.Проводить работы с соблюдением правил работы в КДЛ, санитарно-противоэпидемиологического режима, техники безопасности. Готовить биологический материал, реактивы, лабораторную посуду, оборудование; 4. Проводить общий анализ мочи: определять ее физические и химические свойства, исследовать под микроскопом осадок; 5. Проводить функциональные пробы; 6. Проводить дополнительные химические исследования мочи (определение пигментов мочи, кетоновых тел и прочее); 7. Проводить количественные исследования осадка мочи; 8. Работать на анализаторах мочи; задачи, структуру, оборудование, правила работы и технику безопасности в лаборатории клинических исследований; основные методы и диагностическое значение исследований физических, химических показателей мочи; морфологию клеточных и других элементов мочи; Этапы обработки лабораторной посуды и критерии унификации ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество. ОК 3. Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них ответственность. ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для эффективного выполнения возложенных на него профессиональных задач, а также для своего профессионального и личностного развития. ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в профессиональной деятельности. ОК 8. Самостоятельно определять задачи профессионального и личностного развития, заниматься самообразованием, осознанно планировать и осуществлять повышение своей квалификации. ОК 9. Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной деятельности. ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности. ПК 1.1. Готовить рабочее место для проведения лабораторных общеклинических исследований. ПК 1.2 . Проводить лабораторные общеклинические исследования биологических материалов; участвовать в контроле качества. ПК 1.3. Регистрировать полученные результаты лабораторных общеклинических исследований. ПК 1.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты. Организационный момент 2 мин. Мотивация (цели) занятия 3 мин. Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний) 15 мин. Инструктаж самостоятельной работы студентов 15 мин. Практическая часть 135 мин. Подведение итогов занятия, оценка работы студентов 8 мин. (Приветствие, проверка присутствующих, внешнего вида студентов, сообщение темы, учебных целей занятия) Инструктаж по охране труда ( роспись в журнале по технике безопасности ) Формирование общих и профессиональных компетенций, приобретение первоначального практического опыта работы по специальности в части освоение основного вида профессиональной деятельности. Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний) : 1. тесты по пройденному материалу (с применением web -сервиса Kahoot . it или Plickers ) б) подведение итогов контроля: Оценивание, замечания по работе. а) подготовка студентов к самостоятельной работе ( проведение инструктажа по выполнению заданий): В течении рабочего времени обучающиеся должны отработать навыки по подготовке лабораторной посуды к проведению исследований. б) самостоятельная работа студентов: (алгоритмы выполняемых работ) Промаркировать полученный биоматериал пробирки, направления и бланки анализов Организовать рабочий стол лаборанта для проведения физического исследования мочи Организовать рабочий стол для качественного определения глюкозы реакцией Гайнеса-Акимова, «глюкотестом» Организовать рабочий стол для количественного определения глюкозы в моче ортотолуидиновым методом Организовать рабочий стол для количественного определения глюкозы в моче глюкозооксидазным методом Выполнить клинический анализ мочи — ОАМ Составить схему определения глюкозы методом ортотолуидиновым методом Составить схему определения глюкозы глюкозооксидазным методом в) подведение итогов самостоятельной работы Записать в дневники выводы о проделанной работе Проверка преподавателем работ студентов Подведение итогов занятия, оценка работы студентов Преподаватель высшей квалификационной категории, кандидат биологических наук Зейналиева Э. Н. Алгоритм качественного определения глюкозы в моче Реакция Гайнеса-Акимова Принцип. В основу большинства методов положены восстанавливающие свойства глюкозы. В реакции Гайнеса-Акимова восстанавливается сульфат меди последовательно в гидроксид меди желтого цвета и в оксид меди кирпично-красного цвета. Реакция протекает при нагревании в щелочной среде. Реактив : (по прописи Акимова): 13,3 г химически чистого сульфата меди растворяют в 400 мл дистиллированной воды (раствор 1); в другой посуде растворяют 50 г гидроксида натрия в 400 мл дистиллированной воды (раствор 2); далее разводят 15 г глицерина в 200 мл дистиллированной воды (раствор 3). Смешивают растворы 1 и 2, и к этой смеси при постоянном помешивании прибавляют небольшими порциями раствор 3. Получают готовый реактив синего цвета. Он годен в течение длительного времени. Ход определения : 1. В пробирку помещают 3 – 4 мл реактива Гайнеса- Акимова и 8 – 12 капель мочи, нагревают ее над пламенем до закипания смеси, 2. Затем кипятят в течение 1 – 2 мин или кипятят на водяной бане. 3. При наличии глюкозы голубой цвет переходит в желтый, а при отсутствии цвет реактива Гайнеса-Акимова не изменяется. 4. На практике чаще к 1 капле мочи прибавляют 9 капель реактива и кипятят на водяной бане 1 – 2 мин. 5. На результаты анализов могут влиять и другие редуцирующие вещества мочи (ацетилсалициловая кислота, ПАСК, кофеин, антибиотики, поливитамины, аскорбиновая кислота, хлорамин, желчные кислоты, билирубин), от которых необходимо избавляться. Определение глюкозы с использованием методов «сухой» химии Методология «сухой» химии реализуется с применением специальных полосок, реагентные зоны которых содержат сухие реактивы (ферменты и/или неферменты), способные воздействовать на определенные метаболиты биологических жидкостей с изменением окраски индикаторной зоны. Для экспресс-выявления глюкозы в моче и ее полуколичественного определения используются тест-полоски ФАН чешской фирмы «Лахема»; «Уритест-1», «Уритест-2» фирмы «Кормэй»; «Глюкотест» фирмы «Рош-Диагностика» («Берингер-Мангейм») и др. Реакция при помощи индикаторной бумаги «Глюкотест» Пр инцип. Метод основан на специфическом окислении глюкозы с помощью фермента глюкозооксидазы. Образовавшаяся при этом перекись водорода разлагается вторым ферментом — пероксидазой – и окисляет добавленный краситель (ортотолуидин, бензидин). В результате краситель изменяет свой цвет, что свидетельствует о наличии глюкозы в моче. Выпускается индикаторная бумага «Глюкотест» для полуколичественного определения глюкозы в моче. На этикетке упаковки обозначены условия хранения, срок годности, дата выпуска и др. Каждый комплект содержит 100 полосок индикаторной бумаги, пластмассовую пластинку белого цвета, цветную шкалу и инструкцию по проведению исследования. Индикаторная бумага имеет размер 0,5×5 см и поперечную полосу светло-желтого цвета. Эта полоса нанесена вблизи одного из краев бумаги и пропитана раствором ферментов и красителя. При проведении качественной реакции на присутствие глюкозы в моче при помощи индикаторной бумаги «Глюкотест» рекомендуют выполнять следующие методические указания: исследовать свежесобранную мочу, полученную до приема пищи; индикаторную бумагу хранить в темном закрытом пенале при температуре 8°С; использовать индикаторную бумагу в течение оптимального срока годности (8 мес. со дня выпуска). Ход определения . 1.Из пенала извлекают пластмассовую пластинку, цветную шкалу и одну полоску индикаторной бумаги. 2 – 3 капли исследуемой мочи наносят на индикаторную полоску светло-желтого цвета так, чтобы она была полностью увлажнена, или опускают полоску в мочу. 2. Затем полоску бумаги кладут на пластмассовую пластинку белого цвета и оставляют на 2 мин при комнатной температуре, после чего сравнивают окраску поперечной полосы на бумаге с цветной шкалой. Если первоначальный цвет полосы на бумаге существенно не меняется, то глюкоза в моче отсутствует. 3. При наличии глюкозы (от 5,55 до 111 ммоль/л) цвет полосы меняется от светло-зеленого до интенсивно-зеленого. При содержании глюкозы в моче более 111 ммоль/л максимальная интенсивность окраски цветной полосы на реактивной бумаге остается без изменений. При высоком содержании глюкозы в моче ее необходимо развести и полученный результат умножить на степень разведения. Количественное определение глюкозы Унифицированые способы количественного определения глюкозы в моче по цветной реакции с ортотолуидином и глюкозооксидазный метод. Количественное определение глюкозы производят только в тех порциях мочи, в которых она была обнаружена качественно. При определении глюкозы в суточном количестве мочи у больных сахарным диабетом исследуют три порции мочи, собранные через каждые 8 часов. Во избежание ложноположительных результатов перед определением глюкозы приостанавливают лечение тетрациклином, хлортетрациклином, так как они выделяются с мочой и искажают результаты определений. Алгоритм Количественное определение глюкозы в моче ортотолуидиновым методом Принцип. Глюкоза образует с ортотолуидином в кислой среде при нагревании зелено-синее окрашивание, интенсивность которого пропорциональна концентрации глюкозы. Оборудование: штатив, пробирки, ФЭК Реактивы: 1. Раствор трихлоруксусной (ТХУ) кислоты (30 г/л): 3 гТХУ доводят дистиллированной водой до 100 мл. 2. Стабилизированный раствор ортотолуидина в ледяной уксусной кислоте (в 94 мл ледяной уксусной кислоты растворяют 0,15 г тиомочевины и добавляют 6 мл ортотолуидина). Реактив стоек при хранении в холодильнике. 3. Стандартный раствор глюкозы: в мерную колбу на 100 мл вносят 50 мл раствора бензойной кислоты (2 г/л), прибавляют 500 мг высушенной до постоянной массы глюкозы; после полного растворения глюкозы доливают раствором бензойной кислоты (2 г/л) до метки. Концентрация глюкозы в приготовленном растворе равна 5 г/л (27,5 ммоль/л). Из стандартного раствора готовят рабочий раствор, содержащий 1 г/л (5,5 ммоль/л) глюкозы. Ход определения . 1. Мочу разбавляют в 2 – 10 раз. В пробирку для центрифугирования наливают 0,1 мл мочи, добавляют 1,0 мл раствора ТХУ (30 г/л). 2. Хорошо перемешивают содержимое, центрифугируют 5 мин при 1500 об./мин. 3. В опытную пробирку приливают 0,5 мл надосадочной жидкости, добавляют 4,5 мл ортотолуидина, смесь нагревают точно 8 мин в хорошо кипящей водяной бане. 4. Пробирки необходимо покрывать фольгой и строго соблюдать временной и температурный режим. 5. Пробирку вынимают, охлаждают под водопроводной водой до комнатной температуры (18-22°С) и фотометрируют окрашенный раствор опытной пробы по отношению к холостой пробе (длина волны 590-650 нм с оранжевым или красным светофильтром) и толщине слоя 1 см не позже, чем через 20 мин после обработки. 6. Снимают показания абсорбции (экстинкции, или оптической плотности). 7.Раствор для контроля (достаточно одного раствора для целой серии определений). К 0,5 мл раствора ТХУ (30 г/л) добавляют 4,5 мл ортотолуидинового реактива. Смесь не центрифугируют, но обрабатывают так же, как и опытные пробы. 8. Стандартный раствор. К 0,1 мл стандартного раствора глюкозы (концентрация 1,0 г/л) добавляют 1,0 мл раствора ТХУ (30 г/л), перемешивают, отбирают 0,5 мл, добавляют 4,5 мл ортотолуидинового реактива и обрабатывают параллельно с опытной пробой. 9. Расчет ведут по формуле: где Соп– концентрация глюкозы в пробе в ммоль/л; Сст– концентрация глюкозы в стандартном растворе в ммоль/л; Еоп– оптическая плотность опытной пробы; Ест– оптическая плотность стандартной пробы. Полученный результат умножают на степень разведения. Пример: Еоп=0,6. Ест=0,3. Сст=5,5 ммоль/л. Соп=0,6:0,3×5,5= 11,0 ммоль/л. Коэффициенты пересчета: % глюкозы в моче × 55,5 = ммоль/л; мг% глюкозы в моче × 0,0555 = ммоль/л. Для определения глюкозы мочу собирают за 24 ч и измеряют ее объем. Определяют содержание глюкозы вышеописанным способом. Например, содержание глюкозы составляет 4,1 ммоль/л, суточный диурез 1,5 л., следовательно, в суточном количестве мочи концентрация глюкозы равна 4,1 ммоль/л × 1,5=6,15 ммоль/л. Количественное определение глюкозы в моче глюкозооксидазным методом Принцип. Глюкоза в присутствии фермента глюкозооксидазы окисляется кислородом воздуха с образованием перекиси водорода. Образующаяся перекись водорода под действием пероксидазы окисляет субстрат с образованием окрашенного продукта, определяемого фотометрически. Оборудование: штатив, пробирки, пипетки, ФЭК 2. Реагент (смесь ферментов). 3. Стандарт глюкозы 5,55 ммоль/л. 4. Стандарт глюкозы 16,0 ммоль/л 1.Приготовление рабочего реагента: за несколько часов до проведения анализа (рекомендуется за сутки) содержимое флакона 2 растворяют буферным раствором из флакона 1 (до полного растворения реагента), количественно переносят во флакон 1 и перемешивают. Внимание! Рабочий реагент хранится в темном месте при температуре 2-8°С в течение месяца. 2. Мочу перед анализом разводят дистиллированной водой в соотношении 1:5 или 1:10, в зависимости от качественной реакции, результат умножают на коэффициент разведения. 3. Реакционную смесь перемешивают и инкубируют 15 мин при 37°С на водяной бане или в термостате при предварительно прогретом рабочем реагенте. Измеряют оптическую плотность опытной пробы Апр и стандарта Аст против холостой пробы. Стабильность окраски – 15 мин. 4. Концентрацию глюкозы в моче С в ммоль/л определяют по формуле: где Сст – концентрация одного из стандартов глюкозы, которому соответствует оптическая плотность Аст 5. Для определения глюкозы в суточной моче мочу собирают за 24 ч и измеряют ее объем. 6. Определяют содержание глюкозы вышеописанным способом. Например, содержание глюкозы составляет 3,2 ммоль/л, суточный диурез 1,3 л, следовательно, в суточном количестве мочи концентрация глюкозы равна 3,2 ммоль/л-1,3 = 4,16 ммоль/л. Примечание: в настоящее время для определения глюкозы в моче используют сертифицированные коммерческие наборы реагентов. источник |