Принцип метода. Метод базируется на колориметрическом определении концентрации крахмала до и после его ферментативного гидролиза.
1. Раствор субстрата рН 7,2—7,4. 13,3 г безводного двузамещенного фосфорнокислого натрия и 4,3 г бензойной кислоты вносят в 250 мл доведенной до кипения дистиллированной воды и некоторое время кипятят раствор. Суспендируют 0,2 г «растворимого» крахмала в небольшом количестве холодной воды и вливают в кипящую смесь, поддерживают ее в таком состоянии в течение 1 мин. Затем смесь охлаждают и доводят водой до 500 мл.
Раствор устойчив при комнатной температуре, однако его желательно готовить заново каждые двое суток либо 2 раза в неделю. Он должен сохранять прозрачность. Следует обращать особое внимание на показатель рН приготовленного субстрата (должен быть не менее 6,8). Для доведения рН раствора до необходимых значений (7,2—7,4) можно изме- нить соотношение между количеством используемого для его приготовления фосфата натрия и бензойной кислоты либо в случае получения кислого раствора добавить 5 н раствор NaOH.
2. 0,1 н основной раствор йода, который может быть получен следующими способами: а) из фиксанала; б) из кристаллического йода и йодистого калия: 30 г KI растворяют в 250 мл дистиллированной воды, туда же вносят 12,7 г йода и доводят объем дистиллированной водой до 1000 мл. Полученный раствор (Люголя) хранят в темноте, он стоек; в) из йодата калия и йодистого калия: 3,567 г йодноватокислого калия (КЮз) и 45 г KI растворяют в 800 мл воды и медленно, при помешивании, добавляют 9 мл концентрированной соляной (хлористоводородной) кислоты, а затем доливают водой до объема 1000 мл.
4. Рабочий (0,01 н) раствор йода. 25 г фтористого калия растворяют в 350 w воды, вводят 50 мл основного раствора йода и доводят водой до объема 500 мл. Годность раствора — около 2 мес при условии хранения в посудб из темного стекла в холодильнике. Рабочий раствор йода без добавления в него фтористого калия следует готовить ежедневно.
Ход определения В обычную химическую пробирку вносят 1 мл раствора крахмала, субстрат прогревают 5 мин в водяной бане при 37°С, после чего к нему добавляют 0,02 мл негемолизированной сыворотки. Пробу вновь помещают ровно на 5 мин в водяную баню (в суховоздушном термостате для этого должны быть баночки с водой). Контрольную пробу проводят так же, как опытную, но сыворотку в нее не вносят. Затем во все пробирки (опытные и контрольные) доливают по 1 мл рабочего раствора йода и по 8 мл дистиллированной воды, пробирки хорошо взбалтывают и содержащиеся в них растворы колориметрируют на любом фотометре, например ФЭКе, с красным светофильтром (630—690 нм) в кювете с шириной слоя 10 мм. При учете оптической плотности проб в качестве раствора для сравнения используют дистиллированную воду. Рассчитывают активность альфа-амилазы в г расщепленного крахмала на 1 л сыворотки за 1 ч инкубации при +37″С по формуле:
где 240 есть величина, получаемая умножением 0,4 (количество крахмала, мг, внесенного в опытную и контрольную пробы) на 600; 600 =50 • 12 (50—коэффициент пересчета на количество крахмала в г, гидролизованного 1 л сыворотки), 12 — коэффициент пересчета с 5 мин на 60 мин.
нормы: активность фермента в сыворотке крови — 16—30 г/(ч • л), моче — 28-160 г/(ч • л), в среднем — 107±5,1 г/(ч • л).
1. Для определения активности альфа-амилазы рекомендуется использовать свежую сыворотку и мочу. Наряду с утверждением, что активность фермента стабильна при комнатной температуре в течение недели, а при 4°С или при -20°С в течение месяца, имеются сведения и о том, что она снижается уже через несколько часов хранения биологического материала, как при комнатной температуре, так и при 4°С.
2. Слабый гемолиз не мешает исследованию.
3. Лимоннокислую и щавелевоуксусную плазму и плазму, приготовленную на ЭДТА, применять нельзя, так как цитраты и оксалаты ингибируют активность фермента.
4. Желательно ставить контрольную пробу на каждую исследуемую сыворотку, внося ее в пробирку после периода инкубации.
5. Интенсивность окраски йодокрахмального раствора обратно пропорциональна колебаниям температуры. Поэтому надо следить за тем, чтобы в опытной и контрольной пробе во время цветной реакции температура была постоянной.
6. Профильтрованную мочу можно использовать и неразведенной. Однако при активности фермента выше 140 г/(ч • л) мочу следует развести (или укоротить период ее инкубации), что соответственно должно учитываться при расчете активности ферментов. В случае высокой гиперферментемии мочу разводят в 100 раз.
7. Нормальные показатели активности фермента для сыворотки крови и мочи желательно проверять на донорах в каждой лаборатории.
8. При определении амилазной активности нужно иметь в виду, что слюна содержит в 1000 и 10 000 раз больше фермента, чем сыворотка. Пот также обладает амилазной активностью. Так, при закрывании встряхиваемой в руках пробирки большим пальцем активность амилазы в анализируемой пробе возрастала на 25—80%.
9. Активность альфа-амилазы повышают ионы кальция.
10. Если определение активности альфа-амилазы мочи откладывается более чем на 1 ч после взятия крови, моча должна быть заморожена.
11. Ход ферментативной реакции во многом зависит от качества используемого субстрата.
источник
Альфа-амилаза (диастаза) – это фермент, осуществляющий гидролитическое расщепление полисахаридов до декстринов, мальтозы и глюкозы. Конечные продукты действия амилазы не дают цветной реакции с йодом. Наиболее богаты амилазой поджелудочная и слюнные железы. Амилаза секретируется в кровь, главным образом, из этих органов.
Плазма крови человека содержит преимущественно амилазу двух типов: панкреатическую и слюнную, третий тип амилазы – крупная или макроамилаза. С мочой выделяется, в основном, панкреатическая амилаза, что является одной из причин, почему определение амилазы в моче более информативно, чем в крови для оценки функционального состояния поджелудочной железы. Считают, что 65% амилазной активности мочи обусловлено панкреатической амилазой, в то время, как 60% амилолитической активности сыворотки обеспечивается амилазой слюнных желез. При остром панкреатите панкреатическая амилаза увеличивается в сыворотке до 89%, а в моче до 92% без изменения показателей амилазы слюнных желез.
Активность амилазы в крови и моче подвергается значительным изменениям в течение дня, а также отмечены индивидуальные различия. Колебания активности амилазы вызывают необходимость ее исследования в суточной моче для оценки функции поджелудочной железы.
Существующие методы определения активности α-амилазы делятся на 2 группы:
1. Метод конечной точки – основан на определении остатка нерасщепленного крахмала по степени интенсивности его реакции с йодом (метод Каравея).
α-амилаза сыворотки крови – 16-30 г/ч*л
1. Сыворотка крови не должна быть гемолизирована.
2. Условия проведения опыта имеют большое значение, в частности точное время инкубации 5 минут, поэтому не рекомендуется проводить одновременное исследование более 5 сывороток.
3. Определение активности α-амилазы в моче проводится аналогично определению в крови, однако при гиперамилазурии рекомендуется разводить мочу с последующим пересчетом.
4. На активность α-амилазы влияют лекарственные препараты – антибиотики, обезболивающие, а также алкоголь.
Повышение активности амилазы, главным образом, встречается при заболеваниях поджелудочной железы.
При остром панкреатите активности фермента в крови и моче увеличивается более чем в 10 раз. Гиперамилаземия наступает непосредственно после начала заболевания, достигает максимума к 12-24 часам, после чего активность фермента быстро снижается и приходит к норме на 2-6 день. Обычно, гипрамилазурия длится дольше, чем увеличение активности фермента в сыворотке, поэтому на 2-3 день после болевого приступа более информативно определять активность α-амилазы в моче.
При хроническом панкреатите, раке поджелудочной железы повышение активности фермента не столь значительное. Кроме того, может быть незначительное увеличение активности фермента при заболеваниях, сопровождающихся сходной клинической картиной с острым панкреатитом: остром аппендиците, перитоните, прободной язве желудка и т.д.
Следовательно, резко выраженная амилаземия позволяет отдифференцировать острый панкреатит от хронических заболеваний поджелудочной железы, а также от других острых заболеваний брюшной полости.
Почти всегда амилаземия сопровождается амилазурией. Но определение активности амилазы мочи является менее точным показателем диагностики, т.к. выход амилазы в мочу связан с функцией почек. Незначительное повышение амилазы в крови при снижении ее уровня в моче можно объяснить нарушением выделительной функции почек.
Снижение амилазной активности наблюдается при некрозе поджелудочной железы, заболеваниях печени (гепатиты, циррозы), обширных ожогах, сахарном диабете, кахексии и т.д.
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:
Лучшие изречения: Для студента самое главное не сдать экзамен, а вовремя вспомнить про него. 9914 — | 7445 — или читать все.
195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.
Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно
источник
Количественное определение активности амилазы мочи по Вольгемуту
ПРИНЦИП МЕТОДА: Определение активности амилазы в биологических жидкостях (моча, ликвор, слюна, сыворотка крови) основано на определении минимальной активности (количества) фермента, катализирующего в стандартных условиях гидролиз добавленного крахмала. Амилазная активность мочи выражается количеством мл крахмала, которое расщепляется ферментом, содержащимся в 1 мл неразведенной мочи, при температуре 45ºC за 15 минут.
Расчет: Предположим, что полный гидролиз крахмала произошел в первых 4-х пробирках. В четвертой пробирке (где разведение мочи 1:16), 1/16 мл мочи гидролизует 2 мл 0,1% крахмала, значит 1 мл неразведенной мочи расщепит 32 мл 0,1% крахмала. Следовательно, активность амилазы мочи равна 32 единицы. В норме активность амилазы мочи равна 16-64 единицы.
Клинико-диагностическое значение.
Определение активности амилазы мочи и сыворотки крови широко используется в клинической практике для диагностики заболеваний поджелудочной железы. При острых панкреатитах амилазная активность мочи и сыворотки крови увеличивается в десятки раз, особенно в первые сутки заболевания, а затем постепенно возвращается к норме. При почечной недостаточности амилаза в моче отсутствует. В детском возрасте увеличение активности амилазы наблюдается при эндемическом паротите, что указывает на одновременное поражение поджелудочной железы вирусом паротита.
Определение концентрации глюкозы в слюне энзиматическим(А) и колориметрическим(Б) методом
окисление глюкозы до глюкуроновой кислоты с помощью фермента глюкозооксидазы и образовании в ходе реакции перекиси водорода.Перекись+субстрат+фер-т пероксидаза= окрашенный продукт.
С(оп.)= Е(оп.)/ Е(ст.) х С (ст.) С(ст.)=5, 55 ммоль/л Е(ст.)=0,156 ммоль/л
Гл +о-толуидин = синезелен.окр-е, интренсивность кот. Прямо пропроц. Конц-ии Гл и определяется в фотоколориметре.
Уменьшение конц-ии Гл-поражениея паренхимы печени, нар-е ферм.акт-ти при распаде гликогена, гипофункция щитовидной, надпочечников, гипофиза, передозировка инсулина у больных сах. Диабетом, нар-я всас-я углеводов, при потерях крови.
Эмульгирование жира
ПРИНЦИП МЕТОДА: Эмульгирование жира различными амфифильными веществами происходит благодаря их адсорбции на границе раздела двух фаз — гидрофобной и гидрофильной.
В эмульсиях может происходить два явления – коагуляция и коалесценция.
Коагуляция – объединение частиц дисперсной фазы в агрегаты вследствие сцепления (адгезия) частиц при их соударении.
Соударения происходят в результате броуновского движения, а также седиментации, перемещения частиц в электрическом поле.
Характерные признаки коагуляции: увеличение мутности, появление хлопьевидных образований – флоккул, расслоение исходно устойчивой к седиментации системы с выделением дисперсной фазы в виде коагулянта.
Коалесценция – слияние капель жидкости внутри другой жидкости. В результате коалесценции происходит уменьшение степени дисперсности эмульсий, пен, аэрозолей вплоть до их расслоения на две фазы (жидкость – жидкость или жидкость – газ). Коалесценция происходит в результате флуктуции порыва пленок подвижной среды, разделяющих жидкие и газообразные частицы, что является причиной широкого разброса в значениях времени пленок, характеризующего устойчивость частиц коалесценции.
В результате коагуляции происходит слипание жировых частиц. При размешивании соединившиеся частицы легко разъединяются дисперсионной средой с восстановлением эмульсии, поэтому коагуляция не вызывает разрушения эмульсий с выделением исходных фаз.
При коалесценции капелек, наступающей при разрушении адсорбционных слоев, эмульсии необратимо разрушаются.
Роль эмульгаторов при образовании эмульсий в основном сводится к следующему: они способствуют снижению межфазной энергии и предохраняют диспергированные капельки при их сближении от слияния.
Анализ желудочного сока
который в сыворотке крови обусловлен в основном количеством, качеством растворенного белка и температурой. Влияние других компонентам сыворотки крови на коэффициент преломления значительно меньше. Определение коэффициента преломления проводят с помощью рефрактометров.
РАСЧЕТ: Определив показатель преломления по таблице, вычисляют процент содержания белка в сыворотке крови, для перехода к единицам системы СИ (г/л), результат следует умножить на 10.
НОРМА: содержание общего белка в плазме (сыворотке) крови здорового человека составляет 6.5-8.5 % или 65-85 г/л.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Тест основан на реакции креатинина с пикратом натрия, как описано Яффе. Креатинин реагирует с
щелочным пикратом, формируя красный комплекс. Для измерения выбирается временной интервал с
отсутствием влияния других компонентов сыворотки. Изменение оптической плотности образующегося
комплекса пропорционально концентрации креатинина в пробе.
КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Креатинин является результатом разрушения креатина, компонента мышц, который может трансформироваться в АТФ, она является источником энергии для клеток. Продукция креатинина зависит
от объема мышечной массы, варьирует незначительно, и уровни обычно очень стабильны.
Креатинин выделяется почками. С развитием почечной недостаточности происходит накопление в
крови мочевины, креатинина и мочевой кислоты. Повышение уровня креатинина может означать почечную
недостаточность. Клинический диагноз не должен ставиться по результатам одного теста,
он должен базироваться на совокупности клинических и других лабораторных данных.
Повышение значений: Физическая нагрузка. Акромегалия, гигантизм.Сахарный диабет. Инфекции.Гипотиреоз. Мясная пища. Увеличенный сердечный выброс. Беременность.Ожоги.Отравление окисью углерода.Белковая диета. Повышенный метаболизм. Анемии.
Снижение значений: Гипертиреоз. Анемии. Паралич, мышечная дистрофия, заболевания с уменьшением мышечной массы (например, нейрогенная атрофия, полимиозит и т.п.). Воспалительные и метаболические заболевания с вовлечением мышц. Развернутая стадия заболеваний почек. Лейкоз.Вегетарианская пища. Креатинин снижается в моче, оттекающей от почки со стороны стеноза почечной артерии.
Количественное определение активности амилазы мочи по Вольгемуту
ПРИНЦИП МЕТОДА: Определение активности амилазы в биологических жидкостях (моча, ликвор, слюна, сыворотка крови) основано на определении минимальной активности (количества) фермента, катализирующего в стандартных условиях гидролиз добавленного крахмала. Амилазная активность мочи выражается количеством мл крахмала, которое расщепляется ферментом, содержащимся в 1 мл неразведенной мочи, при температуре 45ºC за 15 минут.
Расчет: Предположим, что полный гидролиз крахмала произошел в первых 4-х пробирках. В четвертой пробирке (где разведение мочи 1:16), 1/16 мл мочи гидролизует 2 мл 0,1% крахмала, значит 1 мл неразведенной мочи расщепит 32 мл 0,1% крахмала. Следовательно, активность амилазы мочи равна 32 единицы. В норме активность амилазы мочи равна 16-64 единицы.
Последнее изменение этой страницы: 2017-01-24; Нарушение авторского права страницы
источник
Амилаза – это органическое белковое вещество (фермент) поджелудочной и слюнных желез. В процессе ферментации пищи амилаза исполняет функцию расщепления полисахаридов (крахмала и гликогена) до простых углеводов, содержащих моносахаридные остатки, иначе олигосахаридов.
При лабораторной микроскопии крови и мочи оценивается диастаза (панкреатическая α-амилаза, прошедшая фильтрацию в почечном аппарате). Амилаза в моче не определяется в рамках общего анализа. Исследование фермента назначается отдельно, для оценки состояния здоровья и работоспособности поджелудочной железы.
Показатель диастазы в биохимическом составе крови менее информативен для диагностики, поскольку в системный кровоток попадает незначительное количество вещества. В организме животных и человека активной является α-амилаза. Другие разновидности вещества β-амилаза и γ-амилаза содержатся в растениях.
Анализ мочи на амилазу назначается при наличии симптомов, сопровождающих воспалительные процессы в органах пищеварительного тракта:
- функциональное расстройство кишечника с характерным газообразованием и болевым синдромом;
- затруднительное и болезненное пищеварение (диспепсия);
- беспричинная тошнота и рефлекторный выброс содержимого желудка (рвота);
- боли в левой области живота на фоне субфебрильной температуры тела (37-38 °С);
- учащенное мочеиспускание (поллакиурия) с незначительным выделением мочи.
Микроскопия альфа-амилазы регулярно проводится пациентам с хроническим панкреатитом, диабетикам, людям, страдающим заболеваниями почек, и онкобольным. Данные анализа используются при диагностике функциональных нарушений поджелудочной железы, сахарного диабета и преддиабетического состояния.
Лабораторная оценка содержания амилазы в моче проводится у взрослых пациентов и у детей (независимо от возраста). Высокая концентрация диастазы фиксируется в период острого проявления симптоматики (временной интервал составляет от 12 до 72 часов). Максимальной отметки показатели достигают через 24 часа после начала приступа.
Альфа-амилаза не имеет гендерной принадлежности, поэтому существенных различий в анализах мужчин и пробах, взятых у женщин, нет. Исключение составляет перинатальный период в жизни женщины. Вследствие смены гормонального статуса в женском организме происходит кардинальная перестройка, что отражается на количественном содержании гормонов и ферментов в биожидкостях (крови и урине).
Плановое определение концентрации амилазы производится в рамках первого и последнего скрининга. Незначительное превышение уровня диастазы во время беременности патологией не является. Очень высокие показатели указывают на воспалительный процесс. В этом случае женщине необходима госпитализация и подробное обследование.
По возрастной принадлежности низкий уровень панкреатического фермента является нормой для младенцев. У пожилых людей при условии отсутствия хронических патологий эндокринной системы диастаза в моче может снижаться вследствие возрастных особенностей организма. К анормальным изменениям это не относится.
Анализ имеет две разновидности:
- Разовый сбор мочи. Пациенту необходимо собрать урину однократно, утром, и сдать ее в лабораторию.
- Суточный диурез. Моча собирается на протяжении суток при каждом мочеиспускании в специальную емкость. Далее перемешивается, и часть биожидкости отправляется на исследование.
Второй вариант обеспечивает более высокую информативность результатов, поскольку содержание фермента в урине в течение дня нестабильно. Выбор разновидности исследования зависит от решения лечащего врача.
В ходе экспертизы исследуемый биоматериал вступает в реакцию с йодом и нагретым крахмалом. Индикатором концентрации фермента служит цветовой оттенок жидкости. Ознакомиться с результатами можно на следующий день после сдачи анализа.
Для получения объективных данных о содержании альфа-амилазы в моче необходимо придерживаться врачебных рекомендаций по сбору анализа и предварительной подготовке. В противном случае исследование покажет неверные значение, что отразится на дальнейшем лечении пациента.
Одинаковыми условиями для разового анализа и суточного диуреза являются:
- приобретение в аптеке специального стерильного контейнера для мочи;
- устранение из рациона соленых продуктов, острых маринадов, приправ и специй (минимум за 12 часов до сбора урины);
- временное исключение из меню свеклы, спаржи, моркови, ревеня, ежевики из-за их особенности окрашивать мочу, спиртосодержащих напитков (за 24 часа);
- отказ от диуретических лекарств, кортикостероидов, анаболических препаратов, оральных контрацептивов за (2-3 дня);
- ограничение физической активности накануне сбора урины при разовом анализе, при суточном диурезе – на протяжении всех 24 часов;
- проведение процедуры гигиены наружных половых органов непосредственно перед мочеиспусканием.
При разовом анализе сдавать на экспертизу необходимо среднюю порцию утренней мочи. Для этого вначале следует помочиться в унитаз, далее в специальную емкость, и затем – снова в унитаз. Контейнер плотно закрыть и доставить в лабораторию в течение 2-х часов. Суточный анализ начинается в 6 часов утра.
Первую порцию урины (после пробуждения) собирать не нужно, поскольку она содержит компоненты слизи. При всех последующих мочеиспусканиях урину необходимо собирать в одну большую тару. Собранный биоматериал должен храниться в холодильнике, в герметично закрытом виде. Спустя сутки вся собранная урина перемешивается.
Аптечный контейнер наполняется биожидкостью (для оценки достаточно 30 мл), закрывается крышкой и сдается в лабораторию. Гигиена половых органов является необходимой процедурой перед каждым мочеиспусканием на протяжении 24 часов. По рекомендации врача, пациент записывает общее количество урины, выделившееся за сутки, и основные съеденные за это время продукты.
У грудных детей правильно собрать мочу помогает специальный педиатрический мочеприемник, который прикрепляется между ножек малыша. После того, как младенец помочится, урину необходимо перелить в стерильный аптечный контейнер и герметично закрыть.
Для женщин обязательным условием является введение во влагалище тампона перед процедурой (альтернативой может служить спонджик), во избежание попадания в контейнер секрета влагалищных желез. Нельзя сдавать мочу во время фолликулярной фазы менструального цикла (период кровяных выделений).
Лабораторной величиной измерения концентрации диастазы в моче является Ед/л или Ед/ч. Норма амилазы в моче, собранной однократно, отличается от нормы суточного диуреза. Референсные значения для взрослых составляют:
- разовый анализ – от 10 Ед/л до 490 Ед/л;
- суточный диурез – от 10 Ед/л до 600 Ед/л.
Для ребенка грудного возраста нормативными показателями считаются от 5 Ед/л до 65 Ед/л. Увеличение активности фермента – это клинический признак острого состояния или рецидива хронических заболеваний органов пищеварения, слюнных желез, мочевыделительной и эндокринной систем.
Для установления точной причины повышения диастазы пациента направляют на общий и биохимический анализ крови и ряд процедур дополнительной диагностики. В зависимости от предполагаемого диагноза, назначается:
- УЗИ органов брюшной полости;
- расширенный анализ крови на определение толерантности к глюкозе и уровня гликированного гемоглобина, на уровень гормонов и ферментов.
- ФГДС (фиброгастродуоденоскопия);
- общий клинический и развернутый биохимический анализ мочи;
- копрограмма (анализ кала);
- обследование на томографе (МРТ, КТ).
Повышенная концентрация амилазы в урине может сигнализировать о развитии:
- острого воспаления поджелудочной железы (панкреатита);
- рецидива хронического панкреатита (возможного прогрессирования тяжелого осложнения болезни – панкреонекроза);
- синдрома нарушения продвижения пищи по пищеварительному тракту (кишечной непроходимости);
- сахарного диабета или сопутствующего заболеванию острого осложнения – диабетического кетоацидоза;
- воспаления серозного покрова брюшины (перитонита);
- язвенного или эрозивного поражения двенадцатиперстной кишки и желудка;
- внематочной беременности;
- злокачественных или доброкачественных опухолей в поджелудочной железе;
- холелитиаза (желчнокаменной болезни) и уролитиаза (наличие конкрементов в мочевом пузыре и протоках);
- ХПН (хронической почечной недостаточности);
- алкогольной интоксикации;
- паразитарных инвазий;
- острого контагиозного поражения слюнных желез, поджелудочной железы, семенников (эпидемический паротит, иначе свинка);
- острого и хронического аппендицита.
У женщин высокая диастаза фиксируется на фоне хронических гинекологических заболеваний. При подтверждении возможного диагноза устанавливается долгосрочный контроль над уровнем диастазы и других биохимических показателей. Если анализ показывает значительно сниженный уровень альфа-амилазы, значит, изменения связаны с дефицитом пищеварительного фермента.
В этом случае рассматриваются заболевания печени (гепатит, цирроз, рак), врожденная патология поджелудочной железы (муковисцидоз), ферментная недостаточность врожденного или приобретенного характера (ферментопатия). При сниженном содержании фермента бывает повышена активность щитовидной железы по производству гормонов. В этом случае диагностируется гипертиреоз.
Низкая концентрация α-амилазы наблюдается у пациентов в постоперационном периоде после хирургического вмешательства в органы брюшной полости. В особенности влияет частичная или полная панкреатэктомия (резекция поджелудочной железы). Сниженный показатель фермента не позволяет органам пищеварения полноценно перерабатывать и усваивать углеводы. Нарушается процесс метаболизма, развиваются хронические заболевания ЖКТ (желудочно-кишечного тракта).
Панкреатическая альфа-амилаза (диастаза) представляет собой пищеварительный фермент, под действием которого происходит переработка сложных углеводов (крахмала и гликогена). В анализе мочи амилаза является индикатором ферментативной функции поджелудочной железы и слюнных желез. Сбор урины для исследования α-амилазы производится двумя способами, каждому из которых соответствует норма содержания фермента.
Метод сбора | Расшифровка | Норма |
разовый анализ | однократная порция утренней урины | от 10 Ед/л до 490 Ед/л |
суточный диурез | общее количество мочи, выделенное за 24 часа | от 10 Ед/л до 600 Ед/л – для |
Повышение диастазы в моче свидетельствует о наличии острых или хронических болезней эндокринной системы, органов системы пищеварения, почечного аппарата или слюнных желез. Заболевание может быть диагностировано по результатам лабораторного анализа либо пациента направляют на расширенное обследование, по итогам которого доктор определяет дальнейшую тактику лечения.
Сниженный показатель фермента указывает на нарушения метаболизма, заболевания печени и врожденные патологии. Не представляет опасности низкий уровень только для детей до года (нормативным показателем является от 5 Ед/л до 65 Ед/л). Уровень амилазы в моче – важнейший диагностический критерий, поэтому при самостоятельном сборе урины необходимо строго соблюдать врачебные рекомендации.
источник
Моча собирается в течение 24 часов на обычном питьевом режиме (1,5-2,0 л в сутки). Утренняя моча сбрасывается, следующие порции мочи, включая утреннюю порцию следующего дня, собираются в чистый сосуд емкостью не менее 2 л. Контейнер с мочой в течение всего периода сбора биоматериала хранить в холодильнике при +4-6ºС. Объем собранной мочи измеряется (обязательно!) с точностью до 50 мл (четверть стакана), перемешивается. Для исследования отливается 50 мл собранной мочи в стерильный пластиковый контейнер с закручивающейся крышкой (контейнер можно получить в регистратуре CMD).
Доставка образца в лабораторию — в течение 1-2 часов, с указанием диуреза (объёма собранной мочи).
Метод исследования: химический колориметрический
Альфа-амилаза мочи (диастаза) — фермент, определение активности которого в моче важно при диагностике острого панкреатита. При остром панкреатите активность α-амилазы в моче возрастает через 4-8 ч после подъема активности фермента в сыворотке и возвращается к норме через 3-5 сут. после возвращения к нормальным значениям амилазы сыворотки. При почечной недостаточности тест может быть недостаточно информативен.
Референсные значения (вариант нормы):
Параметр | Референсные значения | Единицы измерения | |||||||||||||||||||||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Альфа-амилаза | string(3) «320» [«cito_price»]=> string(3) «640» [«parent»]=> string(2) «21» [10]=> string(1) «1» [«limit»]=> NULL [«bmats»]=> array(1) array(3) string(1) «Y» [«own_bmat»]=> string(2) «12» [«name»]=> string(27) «Моча (суточная)» > > > | ||||||||||||||||||||||||||||||||
Биоматериал и доступные способы взятия: |
| ||||||||||||||||||||||||||||||||
Подготовка к исследованию: | Моча собирается в течение 24 часов на обычном питьевом режиме (1,5-2,0 л в сутки). Утренняя моча сбрасывается, следующие порции мочи, включая утреннюю порцию следующего дня, собираются в чистый сосуд емкостью не менее 2 л. Контейнер с мочой в течение всего периода сбора биоматериала хранить в холодильнике при +4-6ºС. Объем собранной мочи измеряется (обязательно!) с точностью до 50 мл (четверть стакана), перемешивается. Для исследования отливается 50 мл собранной мочи в стерильный пластиковый контейнер с закручивающейся крышкой (контейнер можно получить в регистратуре CMD). Доставка образца в лабораторию — в течение 1-2 часов, с указанием диуреза (объёма собранной мочи). Метод исследования: химический колориметрический Альфа-амилаза мочи (диастаза) — фермент, определение активности которого в моче важно при диагностике острого панкреатита. При остром панкреатите активность α-амилазы в моче возрастает через 4-8 ч после подъема активности фермента в сыворотке и возвращается к норме через 3-5 сут. после возвращения к нормальным значениям амилазы сыворотки. При почечной недостаточности тест может быть недостаточно информативен. Референсные значения (вариант нормы):
Повышение активности фермента происходит главным образом при заболеваниях поджелудочной железы. При остром панкреатите активность в крови и моче возрастает в 10‑30 раз. Гиперамилаземия наступает в начале заболевания, достигает максимума к 12‑24 ч, затем снижается и приходит к норме на 2‑6 день. Однако при тотальном панкреонекрозе может не отмечаться повышение активности амилазы. Возрастание активности фермента выявляется при беременности, почечной недостаточности, кишечной непроходимости, заболеваниях желчных путей, диабетическом кетоацидозе, некоторых опухолях легких и яичников, поражении слюнных желез. Выявление повышенного количества изоферментов P‑ или S‑типа не патогномонично для какого‑либо заболевания. Низкие уровни фермента в сыворотке крови не имеют существенного значения. источник Принцип метода: В качестве субстрата для a-амилазы используется мальтотриозид, связанный с хромогеном 2-хлор-п-нитрофенолом. Под действием a-амилазы субстрат гидролизуется с выделением окрашенного 2-хлор-п-нитрофенола, мальтотриозы и глюкозы. Реакция протекает быстро и не требует присутствия в реакционной смеси коферментов. Скорость гидролиза субстрата прямо пропорциональна активности a-амилазы в пробе и изеряется спектрофотометрически при длине волны 405 нм. Субстрат-ХНФ ————> ХНФ + глюкоза + Мальтотриоза Линейность метода: до 1500 Е/л. a-Амилаза в негемолизированной сыворотке сохраняет стабильность при комнатной температуре (18-25°С) в течение 7 дней, при температуре хранения 2-8°С в течение 2 месяцев. 1) Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 405 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37°С; 3) Автоматические пипетки на 25 мкл и 1000 мкл; В качестве источника фермента можно использовать и слюнную жидкость (слюну предварительно разбавить дистиллированной водой в 100 раз), но диапазон нормы при этом варьирует в значительной степени. 6) Рабочий реагент (субстрат – 1,8 ммоль/л в МЕS-буфере (рН 6,0±0,1)). Рабочий реагент годен для применения, если его оптическая плотность не выше 0,6 ед.опт.плотн. при длине волны 405 нм и нет мутности. Перед проведением анализа реагенты следует прогреть до температуры измерения (37°С). Перемешать содержимое пробирки и включить секундомер. Измерить оптическую плотность пробы против дистиллированной воды при длине 405 нм ровно через 1 мин. Повторить измерение 3 раза с интервалом 1 мин. Рассчитать изменение оптической плотности за каждую минуту, а затем вычислить среднее измерение оптической плотности в минуту (Dо.п./мин). Расчет активности a-амилазы по фактору проводят по формуле: где Dо.п./мин – среднее изменение оптической плотности в минуту; 1,025 – общий объем раствора в кювете; 1000 – коэффициент перевода мл в л; 12,9 – коэффициент миллимолярного поглощения 2-хлор-п-нитрофенола; 0,025 – объем сыворотки в мл; 1,0 – длина оптического пути. При внесении каких-либо изменений в перечисленные параметры фактор следует пересчитать. Если активность a-амилазы превышает 1500 Е/л (точка вне зоны линейности калибровочного графика), анализируемую сыворотку следует развести 1:1 физиологическим раствором и повторить измерение, а полученный результат расчета умножить на 2. Клинико-диагностическое значение: a-Амилаза – это эндогидролаза и в организме человека представлена несколькими изоферментами: фермент секретируется слюнными железами (S-тип), поджелудочной железой (Р-тип); небольшая активность фермента обнаружена в печени, скелетных мышцах, слезной жидкости, секрете молочных желез и различных опухолях. Активность a-амилазы в сыворотке значительно возрастает за счет Р-изофермента при различных заболеваниях поджелудочной железы (панкреатит, абсцесс, травма, рак). При повреждениях слюнных желез (рак слюнных желез, эндемический паротит, макроамилаземия) активность a-амилазы в сыворотке также увеличивается, но за счет S-изофермента. Оба изофермента a-амилазы имеют небольшую молекулярную массу (45 000), поэтому фильтруются в почках и экскретируются с мочой. Повышение активности амилазы мочи (диастаза) при остром панкреатите наступает на 6-10 часов позднее, чем в сыворотке крови. источник С какой целью проводится определение альфа-амилазы в крови и в моче? Амилаза представляет собой фермент, активно участвующий в пищеварении. Она расщепляет сложные углеводы, в основном, крахмал, до мальтозы и глюкозы. Основная часть амилазы в организме вырабатывается поджелудочной железой и слюнными железами. Незначительные ее количества образуются в железистой ткани кишечника, яичниках. Уровень амилазы в крови в норме постоянный, он не зависит от количества принятой пищи. Из изомеров амилазы наибольшее клиническое значение имеет альфа-амилаза. Именно по количеству альфа-амилазы судят о нарушении функций органов, участвующих в ее образовании. Активность амилазы в моче напрямую зависит от ее концентрации в крови. Когда выполняют определение уровня альфа-амилазы? Изменение уровня амилазы в организме может наблюдаться при патологии органов, участвующих в ее образовании, и некоторых других органов, тесно связанных с первыми в функциональном отношении. Какие врачи назначают, и где можно сделать анализы крови и мочи на альфа-амилазу? Анализ на содержание альфа-амилазы обычно назначают терапевты, гастроэнтерологи, эндокринологи, хирурги, врачи-инфекционисты. Исследование уровня альфа-амилазы в крови и в моче можно выполнить в биохимических лабораториях диагностических центров и лечебных учреждений. Что является материалом для исследования, как правильно подготовиться и собрать материал? Материалом для исследования являются кровь и моча. Для анализа используют венозную кровь. Забор крови производят натощак в день исследования. Мочу для анализа собирают в течение суток. Ее следует хранить в холодильнике, а перед направлением на анализ перемешать и отобрать порцию 50 мл в специальный контейнер. Также необходимо измерить и записать общее количество мочи, выделенной за сутки. Собирать мочу при необходимости можно и в течение более короткого времени (нескольких часов). При этом фиксируют время начала и окончания сбора материала и общее количество собранной мочи, затем ее перемешивают и отливают 50 мл для анализа. Результаты исследований в норме Значения альфа-амилазы в норме: в крови – 20–120 единиц в литре, в моче – 1–17 единиц в час. Клиническое значение метода Определение значений амилазы в крови и моче используется врачами многих специальностей с целью диагностики различной патологии, а также для дифференциальной диагностики заболеваний, протекающих со схожей клинической симптоматикой. Повышение уровня амилазы наблюдается при патологических процессах в поджелудочной железе. К ним относятся острый и хронический панкреатиты, кисты, опухоли и травмы поджелудочной железы. Часто причиной повышенного уровня фермента становятся дискинезии желчевыводящих путей, камни желчного пузыря и протоков, опухоли желчевыделительной системы. Вследствие нарушения оттока желчи и попадания ее в панкреатический выводной проток развивается воспалительный процесс в поджелудочной железе (билиарный панкреатит). Незначительное повышение уровня амилазы может быть вызвано воспалительным процессом в слюнных железах при паротите, однако этот показатель не является основным в диагностике данной инфекции. Еще менее значима роль желез слизистой оболочки кишечника. При тотальном его поражении вирусными кишечными инфекциями может наблюдаться повышение ферментативной активности амилазы. Снижение этого показателя отмечается при недостаточности поджелудочной железы при панкреонекрозе (отмирании ткани железы), сахарном диабете, после оперативных вмешательств (например, частичного удаления поджелудочной железы), при муковисцидозе. Информация размещена на сайте только для ознакомления. Обязательно необходима консультация со специалистом. Отзывы размещенные на данном сайте являются личным мнением лиц их написавших. Не занимайтесь самолечением! источник Исследование альфа амилазы врачи назначают в основном для диагностика панкреатита. Однако этот анализ может дать ценную информацию и в случае других заболеваний. Что показывает повышение α-амилазы в крови или моче? Нужно ли беспокоиться, если этот показатель выходит за рамки нормы, а симптомов никаких нет? Это фермент, который расщепляет и помогает переваривать сложные углеводы – гликоген и крахмал(«amylon» в переводе с греческого – крахмал). Производится она в основном экзокринными железами — слюнными и поджелудочной, небольшое количество производится железами яичников, маточных труб и легких. Основная масса этого фермента содержится именно в пищеварительных соках: в слюне и панкреатическом секрете. Но небольшая концентрация присутствует и в сыворотке крови, так как клетки любых органов и тканей постоянно обновляются. В крови содержится две фракции α-амилазы:
Однако исследование отдельных фракций амилазы проводят редко, только по специальным показаниям. Чаще всего достаточно определить общую амилазу. В сочетании с клиническими симптомами ее повышение подтверждает диагноз острого панкреатита. Это самое распространенное показание для данного анализа. Амилаза в данном случае будет повышена именно за счет панкреатической фракции. Молекула ее небольшая и хорошо фильтруется через почечные канальцы, поэтому при повышении ее содержания в крови, она будет повышена и в моче (альфа амилазу в моче принято называть диастазой). Ферменты – это белки, которые катализируют расщепление каких-либо сложных веществ. Активность их измеряется обычно в МЕ (международных единицах). За 1 МЕ активности фермента принимается такое его количество, которое катализирует расщепление 1 мкмоль вещества за 1 минуту в стандартных условиях. В качестве расщепляемого субстрата при определении активности амилазы раньше применялся крахмал, в качестве индикатора – йод (который, как известно, окрашивает крахмал в синий цвет). Чем менее интенсивная окраска субстрата после взаимодействия его с исследуемой сывороткой – тем большая активность амилазы в ней. Сейчас используются современные спектрофотометрические методы.
У детей выработка этого фермента намного ниже. Альфа амилаза у новорожденных детей продуцируется в незначительных количествах, по мере роста и развития системы пищеварения синтез ее возрастает. Альфа амилаза, норма содержания в крови по возрасту
Если происходит повреждение клеток поджелудочной или слюнной железы, содержимое их в больших количествах начинает всасываться в кровь, а также усиленно выводиться с мочой. Часть утилизируется в печени. При болезнях органов выделения (печени, почек) ее уровень также повышается.
Выявление снижения этого фермента в крови имеет меньшую диагностическую ценность, чем повышение. Обычно такая ситуация свидетельствует о массивном некрозе продуцирующих секрет клеток поджелудочной железы при остром воспалении, или же уменьшением их количества при хроническом процессе. Пониженная альфа амилаза в сыворотке может стать дополнительным критерием диагностики таких состояний:
Снижение амилазы наблюдается при массивных ожогах, токсикозе беременных, сахарном диабете. Повышенный уровень холестерина и триглицеридов также может занижать показатели амилазы. источник |