Микробиологическое исследование мочи на аэробные микроорганизмы

Микробиологическое (культуральное) исследование мочи на аэробные и факультативно-анаэробные условно-патогенные микроорганизмы ( A26.28.003 )

A26 Тип — микробиологическиие исследования основных возбудителей инфекционных заболеваний
A26.28 Тип — микробиологическиие исследования основных возбудителей инфекционных заболеваний. Раздел — Почки и мочевыделительная система
A26.28.003 Микробиологическое (культуральное) исследование мочи на аэробные и факультативно-анаэробные условно-патогенные микроорганизмы (Выбранный код из номенклатуры мед. услуг )
Смежные коды:
A26.28.001 Микробиологическое (культуральное) исследование мочи на микобактерии (Mycobacterium spp.)
A26.28.002 Микроскопическое исследование мочи на кислото- и спиртоустойчивые бактерии
A26.28.004 Микроскопическое исследование осадка мочи на дрожжевые грибы
A26.28.005 Микроскопическое исследование осадка мочи на яйца шистосом (Schistosoma haematobium)
A26.28.006 Микроскопическое исследование осадка мочи на микрофиллярии вухерерии (Wuchereria bancrofti)
A26.28.007 Микробиологическое (культуральное) исследование осадка мочи на дрожжевые грибы
A26.28.008 Микроскопическое исследование осадка мочи на трихомонады (Trichomonas vaginalis)
A26.28.009 Молекулярно-биологическое исследование мочи на цитомегаловирус (Cytomegalovirus)
A26.28.010 Определение антигена возбудителя легионеллеза (Legionella/pneumophila) в моче
A26.28.011 Молекулярно-биологическое исследование мочи на Pseudomonas aeruginosa
A26.28.012 Молекулярно-биологическое исследование мочи на Streptococcus pyogenes (SGA)
A26.28.013 Молекулярно-биологическое исследование мочи на метициллин-чувствительные и метициллин-резистентные Staphylococcus aureus, метициллин-резистентные коагулазонегативных Staphylococcus spp.
A26.28.014 Молекулярно-биологическое исследование мочи на хламидию трахоматис (Chlamydia trachomatis)
A26.28.015 Молекулярно-биологическое исследование мочи на гонококк (Neisseria gonorrhoeae)
A26.28.016 Молекулярно-биологическое исследование мочи на трихомонас вагиналис (Trichomonas vaginalis)
A26.28.017 Молекулярно-биологическое исследование мочи на микоплазму гениталиум (Mycoplasma genitalium)
A26.28.018 Молекулярно-биологическое исследование мочи на микоплазму хоминис (Mycoplasma hominis)
A26.28.019 Молекулярно-биологическое исследование мочи на уреаплазмы (Ureaplasma spp.)
A26.28.020 Молекулярно-биологическое исследование мочи для выявления генов приобретенных карбапенемаз бактерий
A26.28.021 Молекулярно-биологическое исследование мочи на условно-патогенные генитальные микоплазмы (Ureaplasma parvum, Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma hominis)
A26.28.022 Молекулярно-биологическое исследование мочи на возбудителей инфекции, передаваемые половым путем (Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium)
A26.28.023 Молекулярно-биологическое исследование мочи на вирус простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2)
A26.28.024 Молекулярно-биологическое исследование мочи на уреаплазмы (Ureaplasma spp.) с уточнением вида
A26.28.025 Микробиологическое (культуральное) исследование мочи на лептоспиры (Leptospira interrogans)
A26.28.026 Молекулярно-биологическое исследование мочи на бруцеллы (Brucella spp.)
A26.28.027 Молекулярно-биологическое исследование мочи на лептоспиру интерроганс (Leptospira interrogans)
A26.28.028 Молекулярно-биологическое исследование для выявления микобактерий туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis complex) в моче
A26.28.029 Молекулярно-биологическое исследование для дифференцирования видов Mycobacterium tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG) в моче
A26.28.030 Микробиологическое (культуральное) исследование мочи на бруцеллы (Brucella spp.)
A26.28.031 Микробиологическое (культуральное) исследование мочи на кишечную палочку (Escherichia coli) с применением автоматизированного посева
A26.28.032 Молекулярно-биологическое исследование нативного препарата тканей почек/мочевыделительной системы или парафинового блока на микобактерии туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis complex)
A26.28.033 Молекулярно-биологическое исследование нативного препарата тканей почек/мочевыделительной системы или парафинового блока для дифференциации видов Mycobacterium tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG)
A26.28.034 Микроскопическое исследование мочи на микобактерий туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis)
A26.28.035 Экспресс-определение чувствительности к антибиотикам эндотоксинов в моче

Расшифровка кода медицинской услуги: A 26 . 28 . 003
Класс медицинской услуги:	A	Медицинские услуги, представляющие собой определенные виды медицинских вмешательств, направленные на профилактику, диагностику и лечение заболеваний, медицинскую реабилитацию и имеющие самостоятельное законченное значение
Раздел медицинской услуги:	26	Микробиологическиие исследования основных возбудителей инфекционных заболеваний
Анатомо-функциоанльная область	28	Почки и мочевыделительная система
Вид медицинской услуги, имеющий законченное диагностическое или лечебное значение	003	Микробиологическое (культуральное) исследование мочи на аэробные и факультативно-анаэробные условно-патогенные микроорганизмы

А/B ХХ.ХХХ.ХХХ.XXX
↑ ↑ ↑ ↑ ↑
| | | | |______ порядковый номер подгруппы
| | | |______________ порядковый номер группы
| | |_______________________ подраздел медицинской услуги
| |_____________________________ раздел медицинской услуги
|___________________________________ класс медицинской услуги

Код услуги состоит из буквенно-цифрового шифра от 8 до 11 (12*) знаков.
Первый знак обозначает класс услуги, второй и третий знаки — раздел (тип медицинской услуги), четвертый и пятый (шестой*) знаки — подраздел (анатомо-функциональная область и/или перечень медицинских специальностей), с шестого по одиннадцатый знаки (с седьмого по двенадцатый*) — порядковый номер (группы, подгруппы).

3. Перечень медицинских услуг разделен на два класса: «А» и «В», построенные по иерархическому принципу (описание выше).

источник

Исследование мочи на обнаружение аэробных и факультативно-анаэробных бактерий представляет собой количественную методику определения этиологически значимых возбудителей при инфекциях мочевых путей (ИМП) и охватывает широкий круг состояний — от бессимптомной бактеурии, с одной стороны, до острого пиелонефрита и септицемии, с другой — объединенных на основании одного общего признака: положительного результата бактериологического исследования мочи. При обнаружении возбудителей инфекций мочевых путей (первой и второй групп приоретентности) определяется титр возбудителя и чувствительность его к антибактериальным препаратам, с использованием комерческих импортных питательных сред, тест-систем на автоматическом бактериологическом анализаторе Vitek2compact.

Исследование мочи на обнаружение аэробных и факультативно-анаэробных бактерий представляет собой количественную методику определения этиологически значимых возбудителей при инфекциях мочевых путей (ИМП) и охватывает широкий круг состояний — от бессимптомной бактеурии, с одной стороны, до острого пиелонефрита и септицемии, с другой — объединенных на основании одного общего признака :положительного результата бактериологического исследования мочи. При обнаружении возбудителей инфекций мочевых путей (первой и второй групп приоретентности) определяется титр возбудителя и чувствительность его к антибактериальным препаратам ,с использованием комерческих импортных питательных сред, тест-систем на автоматическом бактериологическом анализаторе Vitek2compact.

• Неосложненные инфекции мочевых путей (МП)
• Неосложненные ИМП включают в себя эпизоды острого цистита и острого пиелонефрита у практически здоровых людей
• Острый неосложненный цистит у женщин
• Острый неосложненный пиелонефрит у женщин
• Рецидивирующие ИМП у женщин
• Бессимптомная бактериурия
• Острый неосложненный пиелонефрит у молодых людей (15-50 лет)
• Осложненные инфекции мочевых путей (МП):
1. Наличие постоянного катетера, стента или фиксатора, или периодические катетеризация мочевого пузыря.
2. Объем остаточной мочи >100 мл.
3. Обструктивная уропатия любой этиологии, в том числе нейрогенный мочевой пузырь.
4. Камни и опухоли.
5. Пузырно-мочеточниковый рефлюкс.
6. Поражения уроэпителия любой этиологии (химические, лучевые).
7. Пери- и послеопреционные ИМП.
8. Почечная недостаточность и трансплантация почек.
9. Сахарный диабет и иммунодефициты.

Женщина должна выполнить следующие действия:
1. Тщательно вымыть руки с мылом и вытереть их чистым полотенцем.
2. Раздеться и тщательно вымыть наружные половые органы, используя для этих целей марлевый тампон и теплую мыльную воду. Моют область наружних половых органов, перемещая тампон спереди назад по направлению от лобка к заднему проходу, стараясь проникнуть во все складки.
3. Тщательно ополаскивают промежность теплой водой и высушивают стерильным марлевым тампоном. Во время этой процедуры большие половые губы должны быть разведены, к вымытым частям тела запрещается прикасаться руками.
4. Начинают мочеиспускание; первую порцию мочи не берут, среднюю порцию собирают в стерильную емкость (СК100) (примерно 1/3 баночки) и закрывают ее стерильной крышкой.
5. Контейнер маркируют и немедленно доставляют в лабораторию. Допускается хранение при температуре 4 о С не более 24 ч.
6. Для исследования лучше собирать утреннюю мочу или с интервалом 4 часа после последнего мочеиспускания.
7. Катетеризация мочевого пузыря для рутинного исследования не рекомендуется, так как она может привести к инфицированию мочевых путей. Катетером моча берется только в случаях, когда катетеризация проводится по соображениям урологического диагностического исследования. При взятии мочи прямым катетером проводится тщательный туалет области уретры. Асептически в мочевой пузырь вводится катетер, дают стечь 15 мл. мочи и затем собирают мочу в стерильный контейнер для исследования (СК100).
8. Для диагностики воспалительного процесса в почках моча собирается катетером из правой и левой почки и мочеточников в кол-ве 0,5 – 1,0 мл. в стерильный контейнер (СК100).

Мужчины доджны выполнить следующие действия:
1. Тщательно вымыть руки с мылом и вытереть их чистым полотенцем.
2. Раздеться и тщательно вымыть наружные половые органы, используя для этих целей марлевый тампон и теплую мыльную воду. Высушивают стерильным марлевым тампоном.
3. Оттянуть назад крайнюю плоть и выпустить небольшое количество мочи.
4. Среднюю порцию собирают в стерильную емкость (СК 100) (примерно 1/3 баночки) и закрывают ее стерильной крышкой.
5. Контейнер маркируют и немедленно доставляют в лабораторию. Допускается хранение при температуре 4 о С не более 24 ч.
6. Для исследования лучше собирать утреннюю мочу или с интервалом 4 часа после последнего мочеиспускания.
7. Катетеризация мочевого пузыря для рутинного исследования не рекомендуется, так как она может привести к инфицированию мочевых путей.
Катетером моча берется только в случаях, когда катетеризация проводится по соображениям урологического диагностического исследования.
При взятии мочи прямым катетером проводится тщательный туалет области уретры. Асептически в мочевой пузырь вводится катетер, дают стечь 15 мл. мочи и затем собирают мочу в стерильный контейнер (СК100) для исследования.
8. Для диагностики воспалительного процесса в почках моча собирается катетером из правой и левой почки и мочеточников в количестве 0,5 – 1,0 мл. в стерильный контейнер (СК100).
9. При простатитах проводят сбор трех порций мочи: первая и средняя — при самопроизвольном мочеиспускании, третья — через 5 – 10 мин. после массажа предстательной железы в стерильный контейнер каждая (СК100).

Нарушение правил взятия биоматериала на первом этапе исследования (преаналитический этап) может привести к контаминации материала (мочи) и получению не правильных результатов, и в связи с этим потребуется повторное исследование.

источник

Микробиологическое (культуральное) исследование на аэробную и факультативно-анаэробную флору с определением чувствительности к основному спектру антимикробных препаратов и бактериофагам

Условия подготовки определяются лечащим врачом. Взятие материала рекомендуется проводить до начала антибактериальной терапии или не ранее, чем через две недели после ее окончания.

Внимание! Для хранения и транспортировки мочи лаборатория CMD предоставляет специальные расходные материалы: контейнер со встроенным устройством для бесконтактного отбора мочи, 60 мл + вакуумная пробирка с консервантом для посева мочи. Перед сбором мочи необходимо обратиться в ближайший офис для их получения.

Моча (сбор у мужчин). Сбор мочи проводится после тщательного туалета наружных половых органов. Освободить наружное отверстие мочеиспускательного канала, оттянув кожную складку.

Моча (сбор у женщин). Сбор мочи проводится после тщательного туалета наружных половых органов, рекомендуется ввести тампон во влагалище, развести половые губы пальцами для предупреждения контаминации мочи отделяемым из влагалища и с половых губ. Не следует производить сбор мочи во время менструации.

Правила взятия биоматериала

Предпочтительно использовать утреннюю порцию мочи, при отсутствии такой возможности сбор мочи следует осуществлять не ранее чем через 4 часа после последнего мочеиспускания. Открыть крышку контейнера, повернув её против часовой стрелки. Положить крышку внешней стороной на чистую поверхность (устройством для отбора мочи вверх). Собрать среднюю порцию мочи, объёмом не более чем на 3/4 контейнера. Закрыть контейнер крышкой, повернув её по часовой стрелке. После получения мочи, она должна быть перенесена в транспортную вакуумную пробирку с консервантом.

Правила переноса мочи в вакуумную пробирку

Защитную этикетку на крышке контейнера приподнять за край, полностью не снимать.

Вакуумную пробирку вставить в углубление крышки (под защитной этикеткой). Осторожно надавить на неё до упора, удерживать, пока пробирка не заполнится мочой. Извлечь пробирку, защитную этикетку приклеить обратно на крышку для устранения возможных уколов при утилизации. Плавно перемешать мочу в пробирке, перевернув 8-10 раз. Лаборатория принимает в работу только образцы мочи, предоставленные в вакуумных пробирках с консервантом для посева.

Доставка в лабораторию в день взятия биоматериала.

Метод исследования: Микробиологический

Исследование позволяет оценить качественный и количественный состав аэробной и факультативно-анаэробной микрофлоры исследуемого биоматериала и оценить чувствительность микроорганизмов к антимикробным препаратам, что позволит врачу назначить адекватную терапию. Нормальная микрофлора человека представляет собой совокупность микроорганизмов. При развитии патологических процессов состав микроорганизмов изменяется в сторону увеличения условно-патогенных и/или появления патогенных возбудителей.

Исследование направлено на обнаружение роста возбудителей мочевых инфекций: энтеробактерий (родов Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Proteus и др.); неферментирующих грамотрицательных бактерий (родов Pseudomonas, в том числе Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter, Moraxella и др.); стрептококков (Streptococcus agalactiae (group B), и др.); энтерококков (Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium и др.); стафилококков (Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus и др.); артробактерий (Artrobacterium urealyticum).

Идентификация микроорганизмов выполняется новым автоматизированным методом с использованием современных технологий на масс-спектрометре Microflex (Bruker). На следующем этапе лабораторного исследования выполняется определение чувствительности возбудителя к лекарственным препаратам на современных микробиологических анализаторах. Выбор спектра антибиотиков зависит от выявленного возбудителя и соответствует стандартам EUCAST (Европейский комитет по определению чувствительности к антимикробным препаратам (European Committee Antimicrobial Susceptibility Testing)).

Наличие симптомов инфекционно-воспалительных заболеваний;
Подбор антибактериальной терапии;
Оценка эффективности антибактериальной терапии.

Результат бактериологического исследования стандартизирован и выдается в соответствии с выявленными этиологически значимыми микроорганизмами в количественном формате, содержит антибиотикограмму и заключение, помогающее лечащему врачу лучше сориентироваться в предоставленной информации.

Интерпретация проводится врачом с учетом клинических проявлений.

Внимание! Чувствительность к спектру антибиотиков проводится в случае обнаружения роста патогенной флоры, выявленной в любом количестве и условно-патогенной флоры в количестве более 10 4 КОЕ/мл.

Производитель бактериофагов: ФГУП “НПО “Микроген” Минздрава России, имеющий филиалы в Н.Новгороде, Перми, Уфе

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 года, должны производиться врачом соответствующей специализации.

» [«serv_cost»]=> string(4) «1080» [«cito_price»]=> NULL [«parent»]=> string(3) «542» [10]=> string(1) «1» [«limit»]=> NULL [«bmats»]=> array(3) array(3) string(1) «N» [«own_bmat»]=> string(2) «12» [«name»]=> string(38) «Моча (средняя порция)» > [1]=> array(3) string(1) «N» [«own_bmat»]=> string(2) «12» [«name»]=> string(48) «Моча (собранная катетером)» > [2]=> array(3) string(1) «N» [«own_bmat»]=> string(2) «12» [«name»]=> string(55) «Моча (при надлобковой пункции)» > > >

Биоматериал и доступные способы взятия:

Тип	В офисе
Моча (средняя порция)
Моча (собранная катетером)
Моча (при надлобковой пункции)

Подготовка к исследованию:

Правила взятия биоматериала

Правила переноса мочи в вакуумную пробирку

Защитную этикетку на крышке контейнера приподнять за край, полностью не снимать.

Доставка в лабораторию в день взятия биоматериала.

Метод исследования: Микробиологический

Наличие симптомов инфекционно-воспалительных заболеваний;
Подбор антибактериальной терапии;
Оценка эффективности антибактериальной терапии.

Интерпретация проводится врачом с учетом клинических проявлений.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Центральный офис: 111123, Россия, Москва, ул. Новогиреевская, д.3а, метро «Шоссе Энтузиастов», «Перово»
+7 (495) 788-000-1, info@cmd-online.ru

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

источник

Анализ мочи Посев мочи и определение чувствительности обнаруженных микробов к антибактериальным препаратам – наиболее востребованные микробиологические исследования в клинических лабораториях. После дыхательной (респираторной) системы, мочевыделительная система больше всего подвержена инфицированию. Микробиологический анализ мочи проводится в бактериологической лаборатории. Эти анализы назначают с целью постановки (или исключения) диагноза инфекционных заболеваний мочевыделительной системы у пациентов без явных симптомов, которые подвержены риску инфицирования мочевыводящих путей.

Для проведения микроскопического исследования требуется чистая средняя порция мочи (см таблицу 1). Необходимо, чтобы этот образец был взят до начала терапии антибактериальными препаратами, поскольку они быстро оказывают эффект и титр (количество) бактерий быстро снижается, в результате чего результаты анализа будут искажены. В том случае если пациент уже принимает антибактериальные препараты, это нужно указать в направлении на исследование.

ТАБЛИЦА 1.
Получение чистой средней порции мочи

Получение из мочевого пузыря образца мочи без бактерий, которые могут попасть в порцию мочи из:

— Кожи
— Наружных половых органов
— Перианальной области
— Нижней трети уретры
— Окружающей среды (на любых поверхностях вне контейнера для сбора мочи)

Любые бактерии, находящиеся в уретре, вымываются первой порцией мочи при мочеиспускании (эту порцию не собирают для анализа). Другие потенциальные возможности попадания бактерий в образец мочи для анализа необходимо избегать путем соблюдения определенных правих асептики.

Протокол сбора мочи для женщин

1. Тщательно вымыть руки с мылом и высушить
2. Пальцами одной руки раздвинуть половые губы
3. Вымыть с мылом область вокруг отверстия уретры (мыть нужно в направлении спереди-назад) и высушить
4. При мочеиспускании небольшую порцию мочи (примерно 20 мл) выпустить в унитаз, остальную порцию мочи собрать в стерильный контейнер для сбора мочи
5. Сразу закрыть контейнер крышкой (пробкой), не касаясь при этом краев контейнера или внутренней поверхности крышки (пробки)

Протокол сбора мочи для мужчин

1. Тщательно вымыть руки с мылом и высушить
2. Отодвинуть крайнюю плоть и вымыть с мылом область отверстия уретры с мылом
3. При мочеиспускании небольшую порцию мочи (примерно 20 мл) выпустить в унитаз, остальную порцию мочи собрать в стерильный контейнер для сбора мочи
4. Сразу закрыть контейнер крышкой (пробкой), не касаясь при этом краев контейнера или внутренней поверхности крышки (пробки)

В свое время взятие мочи для микробиологического анализа проводили путем катетеризации. И эта методика была широко распространенной до тех пор, пока не обнаружили, что сам процесс катетеризации несет большой риск инфицирования. Тем не менее этот способ применяют и сегодня у пациентов с постоянным катетером. В дренажной сумке катетера любые бактерии в моче быстро размножаются. Поэтому забор мочи из дренажной сумки не проводят, поскольку это исказит показатель титра бактерий мочи в мочевом пузыре.

Для проведения микробиологического анализа при постоянной катетеризации пациента, забор мочи проводят из изолированного рукава дренажной трубки при помощи шприца и иглы, соблюдая правила асептики. В этом случае асептика очень важна по следующим причинам:

Минимизация риска инфицирования пациента с установленным катетером
Минимизация риска возможного перекрестного инфицирования медицинского персонала и окружающих (в том числе других пациентов)
Минимизация риска попадания в образец мочи для анализа бактерий из окружающей среды.

Для микробиологического исследования мочи идеальным образцом считается моча, взятая непосредственно из мочевого пузыря. В здоровом состоянии моча всегда стерильна. Если в моче выявляют бактерии, это свидетельствует о патологическом процессе. С помощью аспирации путем надлобковой пункции можно получить мочу не загрязненную бактериями в дистальном отделе уретры.

Это инвазивная процедура, при которой в надлобковой области стерильной иглой прокалывают кожу и мышцы живота. Поскольку аспирация потенциально опасна, ее проводят только в случае, если невозможно получить чистую порцию мочи (например, у детей младшего возраста).

Для проведения микробиологического анализа мочу нужно собирать в стерильную посуду. Необходимое количество мочи для исследования – 5-10 мл, поэтому не обязательно полностью заполнять емкость.

Моча является подходящей средой для развития бактерий. То есть, любые бактерии, которые находятся в моче на момент ее сбора, продолжают размножение в лабораторной емкости. В результате такого роста результат анализа может быть ложным. Поэтому необходимо доставить в лабораторию образец мочи не позднее чем через 2-3 часа с момент сбора, а в направлении нужно указать время взятия образца. Если по каким-либо причинам образец невозможно доставить в лабораторию в указанный промежуток времени, либо доставка задерживается, мочу нужно хранить в холодильнике (при низких температурах рост бактерий замедляется).

Посев мочи непосредственно после ее сбора можно проводить с помощью современных методов. Для этого используют специальную пластинку, покрытую питательной средой (пластинка погружается в образец мочи, высушивается и отправляется в лабораторию).

Доставленный в лабораторию образец мочи для микробиологического исследования проходит следующие этапы:

Макроскопический осмотр
Микроскопическое исследование
Посев на питательную среду с целью обнаружения бактерий

В случае выявления в моче патогенных микроорганизмов, проводят определение их устойчивости и чувствительности к ряду антибактериальных препаратов.

Моча здорового человека в норме прозрачная и имеет желтый или желто-соломенный цвет. Конечно, по внешнему виду мочи нельзя ставить диагноз или делать какое-либо заключений, но присутствие инфекции в моче можно предположить. Инфекция мочевыделительной системы, как и другая инфекция, сопровождается привлечением большого количества лейкоцитов для борьбы с микробами. В области инфекционного поражения выделяется гной – воспалительный экссудат, который содержит погибающие и мертвые клетки. Одной из причин помутнения мочи является наличие гноя – пиурия (лекоцитурия). Тем не менее, прозрачная моча (без мути) не гарантирует отсутствие инфекции, как и мутная моча не является точным признаком инфицирования (помутнение мочи может происходить по другим причинам). Кроме этого, при инфицировании некоторыми видами бактерий моча может приобретать неприятный запах.

Микроскопическое исследование мочи предполагает анализ определенного объема полученного образца под микроскопом на предмет наличия эритроцитов и лейкоцитов. В здоровом состоянии моча может содержать незначительное количество этих клеток. Значительное повышение количества лейкоцитов в моче свидетельствует об инфекционном процессе. Отметим, что повышение количества лейкоцитов в моче может наблюдаться при полном отсутствии бактерий, как и наличие явного очага инфекции в мочевыделительной системе без значительного повышения количества лейкоцитов. Гематурия (повышение количества эритроцитов в моче) может быть вызвана как инфекционным процессом, так и другими причинами (например, болезнь почек).

Также в моче могут обнаруживаться эпителиальные клетки, которые слущиваются с поверхности отделов мочевыделительной системы. У женщин в моче могут быть обнаружены эпителиальные клетки, которые слущиваются с половых путей, что не имеет никакого отношения к патологии мочевыделительной системы, а лишь свидетельствует о нарушении правил сбора мочи и может содержать бактерии из женского полового тракта.

Микроскопическое исследование, которое входит в перечень общего анализа мочи, позволяет обнаруживать бактерии, если они содержатся в большом количестве.

Гарантированно подтвердить или опровергнуть наличие в моче бактерий можно только в культуре мочи (культура мочи – совокупность жизнеспособных бактерий в моче). Бактериологическое исследование подразумевает размещение определенного объема мочи в чашке Петри на плотной культуральной среде, содержащей все необходимые компоненты для роста бактерий. Затем закрытую чашку Петри помещают в термостат при температуре 37°C (оптимальная температура для роста бактерий) на 24 часа. На поверхности плотной культуральной среды рост любых бактерий проявляется в виде образования колоний. В каждой колонии содержится огромное количество бактерий, которые произошли от единственной клетки микроорганизма, которая находилась в моче. Таким образом, количество колоний на культуральной среде позволяет определить количество микробных клеток в образце мочи. Если культуральная среда с размещенным в ней образцом мочи не изменяется (колонии не образуются), значит моча стерильна.

Учитывая тот факт, что моча здоровых людей может содержать небольшое количество бактерий из нижней трети уретры (см статью «Инфекция мочевыводящих путей» ), бактериурия (наличие бактерий в образце) не является основанием для постановки диагноза инфекционного заболевания мочевыделительной системы. Впервые термин «значительная бактериурия» применили микробиологи Касс и Финленд в 1956 году при диагностике инфекционного поражения мочевого тракта. Ученые выяснили, что, за некоторым исключением, если количество бактерий в 1 мл мочи превышает показатель 100 000 (10 5 ), можно ставить диагноз инфекции мочевыделительной системы. Более поздние исследование показали, что симптомы инфекционного заболевания могут возникать при меньшем количестве бактерий (10 3 /мл), а также, что при количестве бактерий более 10 5 /мл у некоторых пациентов, какие-либо симптомы инфекционных заболеваний полностью отсутствовали. Несмотря на это критерий Касса до сих пор широко применяется и наличие в моче бактерий в количестве более 10 5 /мл является основанием для постановки диагноза.

Начальную концентрацию бактерий в образце мочи определяют путем подсчета образовавшихся колоний при посеве известного объема мочи. Каждая колония возникает в результате деления одной клетки микроорганизма, поэтому колонии получаются чистыми (состоят только из одного вида бактерий). Каждый вид бактерий имеет специфический макроскопический вид колоний. Несмотря на это, для точной идентификации вида бактерий проводят другие исследования.

Инфекционное заболевание мочевыводящих путей могут вызывать несколько типов бактерий (чаще всего – Escherichia Coli, также известная как Кишечная палочка). Очень редко встречаются случаи смешанной инфекции (смешанная инфекция часто обнаруживается у пациентов с постоянным катетером). При обнаружении нескольких видов бактерий, когда в посеве не доминирует ни один из них, вероятнее всего, что бактерии в мочу попали в нижней трети уретры или из аногенитальной области (то есть, образец мочи был неправильно собран). Если на культуральной среде наблюдается рост колоний одного вида бактерий (чистый рост), количество которых превышает 10 5 /л, можно ставить диагноз инфекции мочевыводящих путей (см таблицу 2).

ТАБЛИЦА 2.
Распространенные бактерии, вызывающие инфекционное поражение мочевыделительной системы

Физиологическое присутствие

Случаи инфекционного поражения мочевыделительной системы, %

Доля пациентов, инфицированных в стационаре, %

источник

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: мочу собирают вобъеме 3—5 мл при естественном мочеиспускании (средняя порция) или путем катетеризации. Микробиологическое исследование начинают не позднее Ь^2_3. после взятия мочи, так как находящиеся в ней микроорганизмы быстро размножаются при комнатной температуре; допускается хранение мочи вхолодильнике не более 1сут.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ:

Бактериологическое исследование.Используют количественный метод секторных посевов, позволяющий определить степень бактериурии — число микробных клеток в 1 мл мочи. Посев мочи делают на чашку Петри с питательным агаром с помощью стандартной бактериологической петли. Вначале делают 30—40 штрихов в секторе А, затем прожигают петлю и делают 4 штриховых посева из сектора А в сектор I и таким же способом из I сектора во И, из II — вIII сектор (рис. 12.1.3). Чашки инкубируют втечение суток при 37 °С, подсчитывают число выросших колоний и определяют степень бактериурии (табл. 12.1.4).

Рис.12.1.3. Секторные посевы для количественного определения бактерий в моче. Объяснение в тексте.

Число колоний в секторах	Количество бактерий в 1 мл мочи
А	I	II	III

Таблица 12.1.4. Определение степени бактериурии методом секторных посевов

1—6 — — — Менее 10 3

Несосчитываемое 20—30 — — 5-Ю 5

Несосчитываемое 40—60 — — 10 6

Несосчитываемое 100-140 10—20 — 5-Ю 6

Несосчитываемое Несосчи- 30—40 — 10 7

Несосчитываемое То же 60—80 Единичные 10 8

Степень бактериурии 10 5 микробных клеток и выше в 1 мл мочи указывает на воспалительный процесс. Показатель 10 3 микробных клеток в 1 мл мочи свидетельствует об отсутствии воспалительного процесса и обычно связан с контаминацией мочи. Степень бактериурии 10 4 расценивают как сомнительный результат, исследование необходимо повторить.

Параллельно с количественным учетом изучают выросшие колонии, выделяют и идентифицируют чистые культуры бактерий, определяют их чувствительность к антибиотикам. Количественное определение степени бактериурии имеет важное диагностическое значение и является одним из критериев эффективности антибактериальной терапии.

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Стафилококковый анатоксин (очищенный и адсорбированный). Получают из нативного токсина путем его обезвреживания и осаждения трихлоруксусной кислотой с дополнительной очисткой этиловым спиртом и адсорбцией на гидрате оксида алюминия. Обладает высокими иммуногенными свойствами. Применяют для активной иммунизации с целью профилактики стафилококковых инфекций и для лечения стафилококковых заболеваний.

Стафилококковая вакцина. Взвесь коагулазоположительных золотистых стафилококков, инактивированных нагреванием. Применяют с целью лечения при длительно и вяло текущих стафилококковых заболеваниях. Чаще используют аутовакцину.

Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый.

Гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови, содержащая стафилококковый антитоксин. Готовят из крови животных или людей, иммунизированных стафилококковым адсорбированным анатоксином. Применяют для специфического лечения при стафилококковых заболеваниях.

Стафилококковый бактериофаг (жидкий). Фильтрат фаголи-зата стафилококков. Применяют наружно, внутрикожно, внутримышечно для лечения при стафилококковых заболеваниях.

Диагностические стафилококковые фаги. Набор типоспеци-фических фагов для фаготипирования стафилококков.

О-стрептолизин сухой. Лиофильно высушенный фильтрат бульонной культуры стрептококка — активного продуцента О-стрептолизина. Применяют для серодиагностики — определения антител к О-стрептолизину в сыворотках крови больных стрептококковыми инфекциями (чаще ревматизмом).

Антибиотики. Грамположительные бактерии — р-лак-тамные антибиотики, ванкомицин, тетрациклины, аминогли-козиды, макролиды, линкомицины, сульфаниламиды, фторхи-нолоны и др.

Грамотрицательные бактерии — р-лактамы, спектр действия которых сдвинут в сторону грамотрицательных микроорганизмов, хлорамфеникол, аминогликозиды, тетрациклины, сульфаниламиды, фторхинолоны и др.

Тема 12.2. АНАЭРОБНЫЕ БАКТЕРИИ — ВОЗБУДИТЕЛИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ И РАНЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ

1. Биологические свойства возбудителей анаэробных гнойно-воспалительных и раневых инфекций, их па-тогенность, экология, особенности инфекций и эпидемиология вызываемых заболеваний.

2. Микробиологическая диагностика гнойных заболеваний, вызванных неспорообразующими анаэробами.

3. Микробиологическая диагностика газовой гангрены.

4. Микробиологическая диагностика столбняка.

5. Биохимические и молекулярно-биологические методы диагностики анаэробной инфекции.

6. Диагностические, профилактические и лечебные препараты.

1. Мазки из чистых культур Clostridium perfringens, С. teta-ni, Bacteroides fragilis. Мазки из раневого отделяемого, содержащие смешанную микрофлору (клостридии, стафилококки, грамотрицательные бактерии и др.).

2. Методика посева для выделения патогенных анаэробов.

3. Аппаратура и питательные среды для выращивания анаэробов.

4. Определение ct-токсина клостридий в раневом отделяемом с помощью летициназной пробы.

Дата добавления: 2016-03-27 ; просмотров: 698 | Нарушение авторских прав

источник

Неспорообразующие грамотрицательные анаэробы

и другие виды рода Bacteroides

и другие виды рода Prevotella

Неспорообразующие грамположительные анаэробы

Peptostreptococcus spp. Propionibacterium acnes

Спорообразующие грамположительные анаэробы

Clostridium perfringens Clostridium novyi Clostridium septicum Clostridium histolyticum Clostridium ramosum Clostridium sporogenes Clostridium tetani

Бактерии, перечисленные выше, вызывают гнойно-воспалительные процессы различной локализации, в том числе ангины, фурункулы, циститы и пиелиты, плевриты, перикардиты, сепсис и др. Многие из этих возбудителей встречаются в нормальной микрофлоре человека и проявляют свою патогенность только при нарушении нормальной экологии.

Стафилококки, стрептококки, протей, эшерихии и анаэробные бактерии нередко вызывают смешанную инфекцию как в разнообразных сочетаниях между собой, так и с другими микроорганизмами — вирусами, грибами.

Тема 12.1.АЭРОБНЫЕ БАКТЕРИИ -ВОЗБУДИТЕЛИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И РАНЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ

1. Биологические свойства возбудителей гнойно-воспалительной и раневой инфекции, их патогенность, экология, особенности инфекции и эпидемиология вызываемых заболеваний.

2. Микробиологическая диагностика.

3. Диагностические препараты, профилактические и лечебные препараты.

А Демонстрация

1. Рост а- и р-гемолитических стрептококков на кровяном агаре.

2. Рост и образование пигмента P.aeruginosa на агаре.

3. Диагностические и лечебно-профилактические препараты.

1. Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей гнойных инфекций: S.aureus, S.pyogenes, P.aeruginosa, E.coli, P.vulgaris. Окраска по методу Грама.

2. Микроскопировать и зарисовать мазки из гноя, содержащие возбудителей: стафилококков, стрептококков. Окраска по методу Грама.

3. Ознакомиться с питательными средами, применяемыми при микробиологической диагностике гнойных и раневых инфекций. Указать назначение отдельных питательных сред.

4. Микробиологическое исследование при раневых и гнойных инфекциях:

а) указать материал, подлежащий исследованию;

б)микроскопический метод: микроскопировать мазок
из гноя, окраска по методу Грама. Сделать вывод;

в) наметить план дальнейшего исследования.

▲ Задание студентам

1.Микробиологическое исследование гноя:

а) учесть результат посева гноя на кровяной агар в
чашке Петри, описать подозрительные колонии,
отметить наличие гемолиза, составить план даль
нейшего исследования;

б) учесть результаты определения лецитиназы и плаз-
мокоагулазы у выделенной культуры стафилококка.
Сделать вывод;

в) учесть результаты определения чувствительности
культуры стафилококка к антибиотикам. Сделать
вывод.

2. Микробиологическое исследование мочи. Определить количество бактерий в 1 мл мочи по результатам метода секторных посевов. Дать заключение.

3. Серодиагностика ревматизма. Ознакомиться с описанием стрептолизиновой реакции. Внести в протокол результаты определения анти-О-стрептолизина всыворотке крови больного. Сделать вывод.

4. Дать краткую характеристику демонстрируемым антимикробным, диагностическим и лечебно-профилактическим препаратам.

▲ Методические указания

Материал для исследования: раневое отделяемое, гной, экссудат, моча, мазки со слизистых оболочек (носоглотки, зева и др.), кровь при подозрении на сепсис.

• Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование(схема 12.1.1). Изисследуемого материала (за исключением крови) готовят мазки для первичной бактериоскопии, окрашивают по методу Грама и микроскопируют. Наличие впрепаратах грамположительных кокков, располагающихся в виде гроздевидных скоплений (рис. 12.1.1; на вклейке), позволяет поставить предварительный диагноз стафилококковой инфекции. Следует иметь в виду, что в патологическом материале стрептококки редко образуют типичные скопления, чаще располагаются поодиночке или небольшими группами по 2—3 бактерии.

Бактериологическое исследование.Испытуемый материал засевают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром

Рис. 1.4.Культура дрожжей Sac—charomyces cerevisiae приразных методах микроскопии К с. 14. а — микроскопия мазка, окрашенного метиленовым синим; б — тем-нопольная микроскопия; в — фазо-во-контрастная микроскопия- г — люминесцентная микроскопия. Окраска корифосфином.

Рис.2.2.1. Смесь стафилококков и кишечных палочек. К с. 23. Окраска по методу Грама.

Рис.2.2.2. Возбудитель туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis)

в мокроте. К с. 25. Окраска по методу Циля—Нильсена.

Рис.2.2.4. Возбудитель дифтерии (Corynebacterium diphtheriae). К с. 26.

Окраска по методу Нейссера. Видны зерна волютина.

Рис.2.2.3. Споры и вегетативные

клетки возбудителя сибирской

язвы (Bacillus anthracis). К с. 25.

Рис.2.2.5. Капсула Klebsiellae pneumoniae. К с. 26. Окраска по методу Бурри—Гинса.

Рис.3.2.1. «Пестрый ряд». К с. 46.

а — ферментация углевода до кислоты и газа; б — отсутствие ферментации;

в — образование индола; г — образование сероводорода.

Рис.6.2. Постановка опыта специфической трансдукции (схема).Я’ с. 26

реципиент E — coli 1ас «; в — Рост колоний реципиентного „» рп Т^- ВДо; г *» ^Раженная транслирующим фагом X dgal культура b.coli lac ; д — рост колоний трансдуктантов (красного цвета), несущих ген gal, на среде Эндо.

Рис.6.1. Постановка опыта трансформации. К с. 68. контает С пе?™г5 НК ‘ в ™ еленно ? из B.subtilis; б — реципиент B.subtilis; в —

селенной с^Л ЫХ ба,СГерИЙ С ДНК; Г

рост колоний Рекомбинантов на штамма н L?™ со _й С1 Р ептоми «ином; д — отсутствие роста реципиентного 1мма на селективной среде со стрептомицином; е — рост колоний реципиентного штамма на среде без стрептомицина.

Рис.6.3. Постановка опыта по конъюгации. К с. 70. а — рост колоний бактерий донора на минимальной среде без стрептомицина; б — рост колоний рекомбинантов на селективной среде со стрептомицином без лейцина; в — рост колоний бактерий реципиентов на полной среде со стрептомицином и лейцином; г — отсутствие роста бактерий донора на среде со стрептомицином; д — донор-культура E.coli F , lei , su 5 ; е — контакт между бактериями донора и реципиента; ж — реципиент-культура E.coli F», lei», st/; з — отсутствие роста бактерий реципиента на селективной среде со стрептомицином без лейцина.

Рис. 10.4.1. Кожно-аллергическая проба. К с. 144.

Рис. 12.1.2. Колонии стафилококка на кровяном агаре. А’с. 162.

Рис. 12.1.1. Staphylococcus aureus и Streptococcus pyogenes в гное. Окраска по методу Грама. К с. 160.

Рис. 12.2.1. Clostridium perfringens в отечной жидкости. К с. 174.

Рис. 13.2.1. Рост бактерий семейства Enterobacteriaceae на дифференциально-диагностических

средах. К с. 194. а — колонии Escherichia coli и Salmonella typhi на среде Эндо; б — колонии Salmonella typhi на висмут-сульфитном агаре.

Рис. 13.3.1. Vibrio cholerae. К с. 203 Окраска по методу Грама.

Рис. 14.1.1. Streptococcus pneumoniae в мокроте. К с. 214.

Рис. 14.2.1. Рост Corynebacteri-

um diphtheriae на кровяно-тел-

Рис. 14.3.2. Микрокультура Mycobacterium tuberculosis. К с. 240. Окраска по методу Циля — Нильсена.

Рис. 14.3.1. Рост Mycobacterium

tuberculosis на среде Левенштей-

Рис. 15.2.1. N. gonorrhoeae в гное

из мочеиспускательного канала.

Рис. 16.1.1. Yersinia pestis в гное

Окраска метиленовым синим.

Рис.16.1.3. Brucella melitensis (чистая культура). К с. 266.

Рис. 16.1.4. Bacillus anthracis (мазок из гноя). К с. 269.

Рис. 16.1.2. Francisella tularensis

Рис. 17.1.1. Borrelia recurrentis в

Окраска по методу Романовского —

Рис. 18.1.1. Титрование вируса гриппа в РТГА с куриными эритроцитами. К с. 292. Объяснение в тексте.

Рис.19.1.1. Тельца Бабеша —Нег-ри в нейронах гиппокампа. Срез головного мозга человека. К с. 305. Окраска по методу Романовского — Гимзы.

(ЖСА) для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37 °С в течение суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза (рис. 12.1.2; на вклейке). На ЖСА S.aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих ле-цитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком. Для окончательного установления вида стафилококка 2—3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последующим определением их дифференциальных признаков (табл. 12.1.1).

Таблица 12.1.1. Дифференциальные признаки стафилококков

Вид

S.aureus

S.sapro-phyticus

маннита в анаэробных условиях + — +

Чувствительность к новобиоцину S S R

Условные обозначения:(+) — наличие признака; (—) — отсутствие признака; S — чувствительный; R — резистентный.

Для постановки реакции на плазмокоагулазу плазму крови, разведенную в 2 раза, разливают по 0,4 мл в пробирки, вносят туда по одной петле каждой исследуемой культуры стафилококка и помещают в термостат при 37 °С. Через 2, 4 и 24 ч отмечают результаты опыта. При наличии плазмокоагулазы образуется сгусток. В некоторых случаях наряду с плазмокоагу-лазой и лецитиназой определяют фибринолизин, гиалуронидазу, ДНКазу.

Для установления источника внутрибольничной инфекции выделяют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионосителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых бактериофагов. Фаги разводят до титра, указанного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а затем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно размеченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 «С. Результаты оценивают на следующий день по наличию лизиса культуры (см. рис. 5.3.2).

Определение чувствительности стафилококка к антибиотикам — см. тему 7.2.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.

Иммунохимические исследования. Основаны на обнаружении антигенов (токсинов и ферментов) возбудителя в материале от больного с помощью чувствительных серологических реакций.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

• Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций (схема 12.1.2)

Бактериоскопическое исследование. Мазки для первичной бактериоскопии готовят из патологического материала (за исключением крови), окрашивают по методу Грама и микроско-пируют. При положительном результате обнаруживают цепочки грамположительных кокков (см. рис. 12.1.1). Следует иметь в виду, что в патологическом материале стрептококки редко образуют типичные скопления, чаще располагаются поодиночке или небольшими группами по 2—3 бактерии.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 «С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из колоний, готовят мазок, окрашивают по методу Грама и микро-скопируют. Для получения чистой культуры 1—3 подозрительные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном. На кровяном агаре Streptococcus pyogenes образует мелкие, величиной с булавочную головку, мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк в отличие от стафилококка дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев или зерен, оставляя среду прозрачной.

По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) aj-гемолитические, или зеленящие, образующие зеленоватую зону частичного гемолиза; 3) р-гемолитические, образующие вокруг колонии полностью прозрачную зону гемолиза.

Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам (табл. 12.1.2). Серогруппу стрептококков определяют в реакции преципитации с экстрактом из исследуемой культуры (полисахаридным преципитиногеном С) и группоспецифи-

ческими сыворотками (обычно 4 наиболее распространенные серогруппы — А, В, С иD). Развернутое серологическое исследование и типирование стрептококков проводят главным образом для эпидемиологического обследования.

Таблица 12.1.2. Дифференциальные признаки стрептококков

Вид	Рост при	Рост на средах, содержащих	желчь (40%)
10’С	45 °С	метиленовый синий (0,1 %)	хлорид натрия (6,5 %)

Вид	Рост при рН 9,6	Термоустойчивость при 60 °С в течение 30 мин	Образование растворимого гемолизина	Антигенная группа (серо-группа)
О	S

Условные обозначения: (+) — наличие признака; (—) — отсутствие признака; (+) — наличие признака у одних штаммов и отсутствие его у других штаммов данного вида.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.

Иммунохимические исследования. При отдельных нозологических формах стрептококковой инфекции устанавливают наличие специфических антигенов в крови больного с помощью РСК, реакции преципитации и др.

Серодиагностика.Проводят при подозрении на ревматизм. Для подтверждения диагноза ревматизма определяют антитела к О-стрептолизину. Реакция основана на нейтрализации (подавлении) антителами, содержащимися в сыворотке крови больного, способности О-стрептолизина вызывать гемолиз. Реакцию ставят со стандартным сухим О-стрептолизином (табл. 12.1.3).

Для постановки реакции исследуемую сыворотку прогревают при 56 °С в течение 30 мин и разводят фосфатным буфером

1:50, 1:250, 1:1000. Диагностический препарат О-стрептолизина также разводят буфером и применяют в количестве 0,3 мл, в котором содержится 1 рабочая доза О-стрептолизина. Рабочая доза — количество О-стрептолизина, которое почти полностью нейтрализуется половиной международной единицы анти-О-стрептолизина стандарта ГИСК. О-стрептолизин в рабочей дозе должен вызывать полный лизис 0,2 мл 5 % взвеси эритроцитов. Разведенную сыворотку и другие ингредиенты разливают по пробиркам так, как указано в табл. 12.1.3, и инкубируют. После инкубации отмечают последнюю пробирку, в которой сыворотка еще нейтрализует рабочую дозу О-стрептолизина (гемолиз отсутствует). Титр сыворотки выражают числом единиц анти-О-стрептолизина в 1 мл (АЕ St-О в 1 мл). В табл. 12.1.3 приведено число АЕ St-О в1 мл сыворотки при нейтрализации О-стрептолизина различными разведениями сыворотки. Титр анти-О-стрептолизина до 250 АЕ St-О обнаруживается у практически здоровых людей. При ревматизме с первых дней болезни антитела к О-стрептолизину выявляются в высоких титрах — 500 АЕ St-О и выше.

• Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных грамотрицательными аэробными бактериями

Бактериоскопическое исследование.Из исследуемого материала (гной, раневое отделяемое, участки ожоговой ткани и др.) готовят мазки, окрашивают по методу Грама и микроско-пируют. Обнаружение в мазках грамотрицательных бактерий позволяет сделать предварительное заключение.

Бактериологическое исследование.Для выделения культуры Pseudomonas aeruginosa исследуемый материал засевают в чашки Петри на основные (МПА) или селективные питательные среды (агар, содержащий цитилпиридиний хлорид, который угнетает рост сопутствующей микрофлоры — ЦПХ-агар). Посевы инкубируют при 37 °С в течение суток. P.aeruginosa образуют круглые плоские слизистые колонии, окрашивая среду характерным сине-зеленым пигментом. При бактериоскопии темнопольным методом нативных препаратов, приготовленных из колоний, в «раздавленной» или «висячей» капле обнаруживают подвижные и слегка изогнутые палочки; в мазках, окрашенных по методу Грама, — грамотрицательные палочки. Чистые культуры P.aeruginosa идентифицируют по биохимическим признакам и образованию пигмента.

Для эпидемиологического анализа госпитальных инфекций определяют серовары в реакции агглютинации, пиоциновары и фаговары.

Для выделения энтеробактерий исследуемый материал засе-

вают на одну из дифференциально-диагностических сред, например на среду Эндо (см. тему 3.1). Для выделения бактерий рода Proteus используют метод Шукевича (см. тему 3.1).

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.Иммунохимические исследования. Патогенные штаммы P.aeruginosa выделяют различные растворимые белковые (экзотоксины и экзоферменты) и небелковые (экстрацеллюлярная слизь) антигены, которые могут быть обнаружены вматериале от пациента (из очага, вкрови или моче) с помощью чувствительных серологических реакций (ИФА и др.).

• Микробиологическая диагностика сепсиса

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь; при септико-пиемиях исследуют также материал из первичных и вторичных местных очагов инфекции. Кровь берут впериод подъема температуры до начала антибиотикотерапии из локтевой вены вколичестве не менее 10 мл у взрослых и 5 мл у детей, так как микроорганизмы находятся вкрови в сравнительно небольших количествах. Посевы делают у постели больного в колбы с 50—100 мл питательной среды. Сравнительно большие объемы питательной среды (в 10 раз превышающие количество крови) необходимы для устранения бактерицидного действия сывороточных белков.

В случае необходимости транспортировки крови к ней добавляют антикоагулянты: цитрат или оксалат натрия, декстран сульфат, гепарин. В качестве добавки к среде для выделения бактерий из крови используют полианетолсульфонат натрия, являющийся антикоагулянтом и одновременно угнетающий бактерицидную активность сыворотки, фагоцитоз, инактиви-рующий комплемент и нейтрализующий лизоцим.

Бактериологическое исследование.Является ведущим при лабораторной диагностике сепсиса. Посевы производят на жидкие среды обогащения: сахарный бульон и др.; при подозрении на анаэробную флору — на тиогликолевую среду, среду Китта— Тароцци или другие элективные среды для анаэробов (см. тему 3.1) и инкубируют их при 37 °С в течение 10 дней при ежедневном контроле. В случае отсутствия роста микроорганизмов дают отрицательный ответ. При наличии роста делают мазки, которые окрашивают по методу Грама. Выделенную чистую

культуру микроорганизмов идентифицируют и определяют ее чувствительность к антибиотикам.

При оценке результатов необходимо исходить из того, что сепсис является тяжелым общим инфекционным заболеванием, развивающимся в условиях резкого угнетения всех основных механизмов иммунитета. Возбудителями сепсиса являются различные патогенные и условно-патогенные микроорганизмы. Однократный посев крови- при сепсисе не всегда приводит к выделению культуры. Более информативным является трехкратный посев крови с суточным интервалом. На фоне антибиотикотерапии кровь у больных для посева следует брать 5—6 раз.

• Микробиологическое исследование мочи

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ:

Рис.12.1.3. Секторные посевы для количественного определения бактерий в моче. Объяснение в тексте.

Число колоний в секторах	Количество бактерий в 1 мл мочи
А	I	II	III

Таблица 12.1.4. Определение степени бактериурии методом секторных посевов

1—6 — — — Менее 10 3

Несосчитываемое 20—30 — — 5-Ю 5

Несосчитываемое 40—60 — — 10 6

Несосчитываемое 100-140 10—20 — 5-Ю 6

Несосчитываемое Несосчи- 30—40 — 10 7

Несосчитываемое То же 60—80 Единичные 10 8

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый.

Диагностические стафилококковые фаги. Набор типоспеци-фических фагов для фаготипирования стафилококков.

Тема 12.2. АНАЭРОБНЫЕ БАКТЕРИИ — ВОЗБУДИТЕЛИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ И РАНЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ

2. Микробиологическая диагностика гнойных заболеваний, вызванных неспорообразующими анаэробами.

3. Микробиологическая диагностика газовой гангрены.

4. Микробиологическая диагностика столбняка.

5. Биохимические и молекулярно-биологические методы диагностики анаэробной инфекции.

6. Диагностические, профилактические и лечебные препараты.

2. Методика посева для выделения патогенных анаэробов.

3. Аппаратура и питательные среды для выращивания анаэробов.

4. Определение ct-токсина клостридий в раневом отделяемом с помощью летициназной пробы.

а Заданиядля выполнения лабораторной работы

1.Бактериоскопическое исследование: приготовить мазки из гноя, окрасить их по методу Грама и микроско-пировать. Сделать предварительное заключение и наметить ход дальнейшего исследования.

2. Сделать окончательное заключение о возбудителе или возбудителях раневой инфекции на основании бакте-риоскопических, бактериологических и других данных, полученных из бактериологической лаборатории.

▲ Методические указания

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: гной, раневое отделяемое, кусочки мышечной ткани, перевязочный материал и др., кровь — при сепсисе. Для обеспечения бескислородных условий взятие материала производят шприцем с хорошо притертым поршнем до полного его заполнения и вытеснения воздуха. Затем шприц надевают на иглу, вставленную через резиновую пробку в пробирку со смесью инертных газов (N₂ + Н₂) и С0₂, и вводят в нее исследуемый материал, который изучают в микробиологической лаборатории. Используют также различные специальные транспортные среды, в которые помещают материал, взятый у больных.

• Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных неспорообразующими анаэробными бактериями

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: гной из очага, кровь — при сепсисе.

МЕТОДЫДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование(см. схему 12.1.1). Из исследуемого материала (за исключением крови) готовят мазки для первичной бактериоскопии, окрашивают по методу Грама и микроскопируют. Наличие в препаратах бактерий позволяет поставить ориентировочный диагноз и наметить план дальнейшего исследования.

Бактериологическое исследование.Посевы производят на элективные обогатительные среды для анаэробов (среда Китта—Та-роцци, тиогликолевый бульон или полужидкий тиогликолевый агар), содержащие специальные добавки (гемин, витамин К и др.), и инкубируют при 37 °С втечение 24—48 ч. После просмотра выросшей культуры делают мазки, окрашивают их по методу Грама и микроскопируют. Бактериоскопия дает возможность установить однородность или неоднородность куль-

туры, а по морфологии клеток и тинкториальным свойствам ориентировочно отнести ее к определенному роду. Для получения чистой культуры делают пересевы на плотные среды в чашки Петри и инкубируют в анаэробных условиях 3—4 сут до формирования изолированных колоний. После изучения колоний их пересевают на элективные среды. Идентификацию выделенной чистой культуры производят на основании присущих ей дифференциальных признаков, которые определяют также в строго анаэробных условиях (табл. 12.2.1).

Таблица 12.2.1. Дифференциальные признаки неспорообразующих и спорообразующих анаэробных бактерий

Признак	Бактерии
Рер-	Рер-	Veil-	Вас-	C.per-	C.no-	C.se-	C.so-	C.hi-
to-	tost-	lone l-	teroi-	frin-	vy	pti-	rdel-	stoty-
сос- CUS	repto-сос-cus	la	des	gens	cum	li	ticum

Условные обозначения: (+) — наличие признака; (—) — отсутствие признака; х — непостоянный признак; (+) — отсутствие признака у большинства штаммов; (±) — наличие признака у большинства штаммов; с — слабая ферментация.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.Биохимические имолекулярно-биологические исследования. Анаэробные бактерии вырабатывают специфические метаболиты, включая летучие жирные кислоты с короткой цепью, спирты и нелетучие органические кислоты. Для их обнаружения в материале от больного используют ГЖХ (см. главу 11).

• Микробиологическая диагностика раневой анаэробной кло-стридиалъной инфекции — газовая гангрена (схема 12.2.1).

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: раневое отделяемое, отечная жидкость, кусочки мышечной ткани, перевязочный материал, кетгут. Рекомендуется брать материал из разных участков очага поражения, особенно из глубоких слоев. Кровь — при сепсисе.

Бактериоскопическое исследование.Проводят путем микроскопии мазков, приготовленных из отечной жидкости или некротизированной ткани. Наличие в препаратах крупных (1—1,5×3—10 мкм) грамположительных палочек, некоторые из которых (C.perfringens) образуют макрокапсулу (рис. 12.2.1; на вклейке), позволяет поставить предварительный диагноз.

Бактериологическое исследование.Исследуемый материал вносят в несколько пробирок со средой Китта—Тароцци, железо-сульфитным агаром (среда Вильсона—Блера) и молоком. Часть пробирок прогревают при 80 «С в течение 30 мин для уничтожения неспорообразующих бактерий. Посевы инкубируют в обычном термостате при 37 «С. C.perfringens растет в глубине среды. В молоке уже через 3—4 ч посева образуется губкооб-разный сгусток, содержащий пузырьки газа и отделившуюся прозрачную жидкость. Через сутки на среде Китта—Тароцци отмечается помутнение и газообразование, а на железосуль-фитном агаре несколько позднее появляются черные колонии в глубине агарового столбика. Для получения культур других видов клостридий требуются более строгие анаэробные условия. Из всех посевов делают мазки, окрашивают их по методу Грама и микроскопируют. При положительном результате обнаруживаются крупные грамположительные палочки.

Для получения чистой культуры делают пересевы на сахарный кровяной агар в чашки Петри и инкубируют в строго анаэробных условиях при 37 °С в течение 3—4 дней. Выросшие колонии пересевают в пробирки со средой Китта—Тароцци. Идентификацию чистой культуры производят на основании признаков, перечисленных в табл. 12.2.1. Идентификация по биохимическим признакам осуществляется традиционными методами или с помощью тест-систем для определения специфических бактериальных ферментов или метаболитов.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.Иммунохимические исследования. Лецитиназная проба: для быстрого обнаружения и серологической идентификации а-токсина клостридий в раневом отделяемом определяют его лецитиназ-ную активность в реакции нейтрализации (РН) с моновалентными антисыворотками против токсинов клостридий разных видов (табл. 12.2.2). С этой целью исследуемый материал (раневое отделяемое) помещают в пробирки с раствором лецитина и добавляют антисыворотки. Присутствие лецитиназы в раневом отделяемом выявляется помутнением жидкости в пробирке. При нейтрализации лецитиназной активности токсина соответствующей антисывороткой жидкость остается прозрачной.

Таблица 12.2.2. Постановка лецитиназной пробы для определения и идентификации токсиновклостридий в РН (форма протокола)

Реагент	Количество реагента, мл
пробирка	пробирка	пробирка	пробирка
Исследуемый материал 0,3	0,3 0,3 0,3
Лецитин 0,1	0,1 0,1 —
Раствор хлорида натрия 0,1	0,2
Сыворотка анти- C.perfringens —	0,1
Сыворотка анти- С.novy —	0,1
Инкубация при 37 «С в течение 46—60 мин
Учет результатов (наличие
помутнения)

Примечание. При учете результатов используют обозначения: (+) — наличие помутнения; (—) — отсутствие помутнения.

ГЖХ используют для обнаружения в материале от больного специфических метаболитов клостридий, включая летучие жирные кислоты с короткой цепью, спирты и нелетучие органические кислоты (см. главу 11).

Биопроба.Для серологической идентификации токсинов также можно использовать биопробу. Проводят РН токсина на лабораторных животных. С этой целью смесь исследуемого токсина с моновалентными антитоксическими сыворотками (к токсинам C.perfringens или других видов клостридий) вводят подкожно морской свинке. В случае нейтрализации токсина животное выживает; при отрицательной реакции морская свинка погибает через 30 мин — 4ч после инъекции.

• Микробиологическая диагностика столбняка (см. схему 12.2.1)

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кусочки ткани вокруг предполагаемых входных ворот инфекции, перевязочный материал, кетгут. Рекомендуется брать материал из разных участков очага поражения, особенно из глубоких слоев. При подозрении на столбняк у женщин после родов или аборта — выделения из матки, у новорожденных — выделения из пупочной раны.

Бактериологическое исследование. Материал засевают в среду Китта—Тароцци и инкубируют в анаэробных условиях при 37 °С в течение 3—4 сут, наблюдая придонный рост бактерий. Затем делают посевы на сахарный агар в чашки Петри, в столбик сахарного питательного агара впробирке. Посевы также инкубируют в анаэробных условиях. На поверхности кровяного агара C.tetani образует нежные прозрачные колонии, окруженные малозаметной зоной гемолиза. Для получения чистой культуры подозрительные колонии пересевают в пробирки со средой Китта—Тароцци исохраняют их под слоем вазелинового масла или в эксикаторе, заполненном смесью инертных газов. Для определения способности выделенной чистой культуры к образованию столбнячного токсина (токси-генности) используют серологические реакции (преципитации в геле и др.) с антителами к тетаноспазмину. Бактериологический метод используют в качестве дополнительного метода для подтверждения диагноза, поскольку он не дает своевременного результата.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.Иммунохимические исследования. Токсин в материале может быть обнаружен с помощью серологических реакций in vitro (ИФА и др.). Метод позволяет получить ответ в течение нескольких часов и обеспечивает своевременную диагностику заболевания.

Биопроба.Проводят для обнаружения столбнячного токсина в исследуемом материале. С этой целью материал растирают встерильной ступке с песком, заливают изотоническим раствором хлорида натрия для экстрагирования токсина и фильтруют через бумажный фильтр. Фильтрат вводят внутримышечно белым мышам. Животным контрольной группы вводят смесь фильтрата с антитоксической сывороткой. Через 1—2 сут у мышей появляется ригидность мышц хвоста и задних конечностей. В результате резкого сокращения хвостовых мышц хвост поднимается в виде дуги. Затем подопытные животные погибают. У животных в контрольной группе признаки инток-

Эшерихиоз Шигеллез (бактериальная дизентерия)

сикации отсутствуют вследствие нейтрализации токсина антисывороткой. В настоящее время биопроба практически не применяется.

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Антитоксические противогангренозные сыворотки— моновалентные(антиперфрингенс, антиэдематиенс — антинови, анти-септикум и др.) и поливалентная.Сыворотки получают путем иммунизации лошадей соответствующими анатоксинами, с последующей очисткой и концентрацией методом ферментативного гидролиза (диаферм-3). Препараты выпускаются в жидком и сухом виде. Применяют для экстренной пассивной профилактики и специфической иммунотерапии газовой гангрены.

Адсорбированный столбнячный анатоксин.Получен путем обезвреживания формалином столбнячного токсина с последующей его очисткой, концентрацией и адсорбцией на гидрате оксида алюминия. Входит в состав ассоциированной коклюш-но-дифтерийно-столбнячной вакцины и других препаратов. Применяют для активной иммунизации против столбняка.

Противостолбнячная сыворотка.Получена из крови лошадей, гипериммунизированных столбнячным анатоксином. Очищена и концентрирована методом диаферм-3. Активность измеряется в международных единицах. Применяют для экстренной пассивной профилактики и лечения столбняка.

Иммуноглобулинчеловеческий противостолбнячный.Получен из гамма-глобулиновой фракции крови доноров, ревакциниро-ванных очищенным адсорбированным столбнячным анатоксином. Применяют для экстренной пассивной профилактики и лечения столбняка.

Антибиотики.Грамположительные бактерии — р-лактамные антибиотики, ванкомицин, тетрациклины, макро-лиды, линкомицины, метронидазол.

Грамотрицательные бактерии — р-лактамы, спектр действия которых сдвинут в сторону грамотрицательных микроорганизмов, хлорамфеникол, тетрациклины, сульфаниламиды, метронидазол.

Аминогликозиды и фторхинолоны, как правило, не активны по отношению к анаэробным микробам.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Для студента самое главное не сдать экзамен, а вовремя вспомнить про него. 9914 — | 7445 — или читать все.

195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник