Моча на пцр туберкулез гемотест

Ольга, Вы большая молодец, что у вас дошли руки почитать эти приказы. Вот сижу сейчас и думаю, чтобы нас никто не обломал сейчас фразой, типа все это является лишь дополнительными методами диагностики ТБ. Вот, к примеру в 109 приказе от 2003 года, есть такая хрень:
«В качестве методов, альтернативных классическому культуральному исследованию, возможно использование автоматизированных и полуавтоматизированных систем ускоренной культуральной диагностики, основанной на использовании жидких питательных сред и различных способах индикации роста микобактерий.

С целью быстрой идентификации микобактерий туберкулезного комплекса в качестве дополнительных допускается использование методов, основанных на амплификации фрагментов генома микобактерий (полимеразная цепная реакция — ПЦР), других молекулярно-биологических методов. ПЦР-анализ может быть применен для исследования материала от больного (мокроты, промывных вод бронхов, мочи и спинномозговой жидкости), а также культур микроорганизмов.»

Наталья, вот. Держите. Это я только 2 пункта разжевывала.

А теперь подробнее.
5.6. В течение 6 дней с момента постановки пробы Манту (внимание. У ребенка отказ от манту) направляются на консультацию в противотуберкулезный диспансер (зачем? Если они не делали манту!) по месту жительства следующие категории детей:

— с впервые выявленной положительной реакцией (папула 5 мм и более), не связанной с предыдущей иммунизацией против туберкулеза;

— с длительно сохраняющейся (4 года) реакцией (с инфильтратом 12 мм и более);

— с нарастанием чувствительности к туберкулину у туберкулиноположительных детей — увеличение инфильтрата на 6 мм и более;

— увеличение менее чем на 6 мм, но с образованием инфильтрата размером 12 мм и более;

— с гиперреакцией на туберкулин — инфильтрат 17 мм и более;

— при везикуло-некротической реакции и лимфангите.

5.7. Дети, направленные на консультацию в противотуберкулезный диспансер (почему они направлены описано в пункте 5.6), родители или законные представители которых не представили в течение 1 месяца с момента постановки пробы Манту (опять 25! Манту то не ставили) заключение фтизиатра об отсутствии заболевания туберкулезом, не допускаются в детские организации.

Дети, туберкулинодиагностика которым не проводилась (это походу те 5%, которые не отказались, но у них медицинские противопоказания для постановки манту) допускаются в детскую организацию при наличии заключения врача-фтизиатра об отсутствии заболевания.
Т.е. отказ от медвмешательства — от пробы манту, отказ от противотуберкулезной помощи и есть основание не ходить по фтизиатрам и доказывать кому-то что он не верблюд.

Елена, Внимание! Человеческая просьба не писать вопросы в ЛС к автору темы. Все необходимые образцы отказов, а также советы и пути ведения диалогов имеются в теме и группе.

Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 22 октября 2013 г. № 60 “Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил СП 3.1.2.3114-13 “Профилактика туберкулеза”
(НЕ ВСТУПИЛО В СИЛУ!)
Зарегистрировано в Минюсте РФ 6 мая 2014 г.
Регистрационный № 32182

Текст обращения в ГенПрокуратуру по несоответствию с другими законами:
http://www.1796kotok.com/forum/viewtopic.php?f=26..

Наиболее интересующие нас пункты: V и VI
V. Организация раннего выявления туберкулеза у детей

5.1. В целях раннего выявления туберкулеза у детей туберкулинодиагностика проводится вакцинированным против туберкулеза детям с 12-месячного возраста и до достижения возраста 18 лет. Внутрикожную аллергическую пробу с туберкулином (далее — проба Манту) ставят 1 раз в год, независимо от результата предыдущих проб.

Ежегодный охват пробой Манту детей до 14 лет включительно должен составлять не менее 95%. В обязательном порядке обследуются дети из социально неблагополучных семей и проживающие на территории Российской Федерации дети иностранных граждан, прибывшие из неблагополучных по туберкулезу стран.

5.2. Проба Манту проводится 2 раза в год:

— детям, не вакцинированным против туберкулеза по медицинским противопоказаниям, а также не привитым против туберкулеза по причине отказа родителей от иммунизации ребенка, до получения ребенком прививки против туберкулеза;

— детям, больным хроническими неспецифическими заболеваниями органов дыхания, желудочно-кишечного тракта, сахарным диабетом;

— детям, получающим кортикостероидную, лучевую и цитостатическую терапию;

5.3. Постановка пробы Манту осуществляется средними медицинскими работниками детских, подростковых, амбулаторно-поликлинических и оздоровительных организаций, прошедших обучение в противотуберкулезных медицинских организациях и имеющих справку- допуск.

Средние медицинские работники детских, подростковых, амбулаторно-поликлинических и оздоровительных организаций проходят обучение в противотуберкулезных медицинских организациях не реже 1 раза в 2 года.

5.4. Не допускается проведение пробы Манту на дому, а также в детских и подростковых организациях в период карантина по инфекционным заболеваниям. Постановка проб Манту проводится до профилактических прививок.

5.5. Интервал между профилактической прививкой, биологической диагностической пробой и пробой Манту должен быть не менее одного месяца. В день постановки туберкулиновых проб проводится медицинский осмотр детей.

5.6. В течение 6 дней с момента постановки пробы Манту направляются на консультацию в противотуберкулезный диспансер по месту жительства следующие категории детей:

— с длительно сохраняющейся (4 года) реакцией (с инфильтратом 12 мм и более);

— увеличение менее чем на 6 мм, но с образованием инфильтрата размером 12 мм и более;

— с гиперреакцией на туберкулин — инфильтрат 17 мм и более;

— при везикуло-некротической реакции и лимфангите.

5.7. Дети, направленные на консультацию в противотуберкулезный диспансер, родители или законные представители которых не представили в течение 1 месяца с момента постановки пробы Манту заключение фтизиатра об отсутствии заболевания туберкулезом, не допускаются в детские организации.

Дети, туберкулинодиагностика которым не проводилась, допускаются в детскую организацию при наличии заключения врача-фтизиатра об отсутс

источник

Анализ на туберкулез — это полноценная возможность определить наличие опасных микобактерий в организме человека.

Выявить патологию помогает комплексное обследование: анализ крови, способ T-SPOT, флюорография, рентгенография, томография.
Именно они, в совокупности, помогут специалисту поставить верный диагноз.

Данный вид исследования называется серологическим. Он проводится на образцах крови полученной из вены. Серологические тесты для выявления туберкулеза направлены на поиск антител, которыми являются сами бактерии и вырабатываемые ими вещества. Некоторые заболевания, такие как ВИЧ, можно очень легко диагностировать данным методом. Туберкулез таким образом выявить непросто.

Тестирование путем обнаружения антител в крови чрезвычайно сложно. У людей могут быть положительные ответы, предполагающие, что у них активный процесс, даже если он отсутствует. Антитела также могут образовываться против других организмов, что может ошибочно указывать на несуществующее заболевание.

В результате вышеописанного, коммерческие серологические тесты на туберкулез, иногда называемые серодиагностическими (такие как IgA Anda-TB), имеют очень непостоянные результаты, низкую чувствительность и специфичность.

Первое значит, что будет значительное количество «ложноотрицательных» результатов: анализ не покажет наличия инфекции, которая на самом деле имеется в организме. Точно так же низкая специфичность подразумевает, что будет большое число «ложноположительных» результатов. Они подразумевают, что у взрослых или детей есть туберкулез, когда на самом деле его нет.

www.tbfacts.org

К данному виду диагностики относятся исследования, проводимые в больничных условиях. Тест крови на туберкулез в данном случае используется для подтверждения наличия скрытого или активного процесса.

Такой вид исследования полезен в тех случаях, когда у человека высок риск заражения микроорганизмами или он недавно был иммунизирован вакциной БЦЖ и имел отрицательный ответ на туберкулиновую пробу.

www.lalpathlabs.com

В чем заключается альтернативный анализ крови на туберкулез вместо Манту — Гемотест? Тестирование на туберкулез также называют исследованием на выброс интерферона-гамма или IGRA. Существует несколько видов одобренных наборов для проведения гемотеста: QuantiFERON® TB Gold In-Tube и T-SPOT®.

Врач или медицинская сестра набирает кровь из вены и отправляет её в лабораторию для проведения исследования и получения результатов:

Положительный ответ означает, что человек заражен бактериями туберкулеза. Необходимо провести дополнительные тесты, чтобы определить, имеется ли у больного скрытая инфекция или активная форма патологии.
Отрицательный ответ анализа означает, что кровь человека не реагирует. Скрытая инфекция или активная патология маловероятна.

Гемотест является предпочтительным для:

людей, иммунизированных вакциной БЦЖ;
лиц, у которых нет возможности повторно обратиться в клинику, чтобы узнать результаты.

www.cdc.gov

Микобактерии увеличивают титры антител в сыворотке. Тем не менее, пока не разработано широкодоступных тестов для повседневного использования, которые обладают высокой чувствительностью и специфичностью при диагностике у детей.

Интерферон-гамма играет важную роль в регулировании защитных реакций на инфекцию. Это привело к развитию тестов IGRA для оказания помощи врачам в диагностике скрытой и активной инфекции.

Тест обнаруживает бактерии путем измерения уровня интерферона в ответ на антигены, которые представлены микобактериями туберкулёза.

www.emedicine.medscape.com

Как проводится анализы на туберкулез у взрослых? Ежегодно на болезнь приходится примерно 1,4 миллиона смертей и 9 миллионов вновь выявленных случаев во всем мире. Микобактерии распространяются от человека к человеку через воздух (воздушно-капельным и воздушно-пылевым способом).

Они могут стать устойчивыми ко многим или ко всем антибиотикам, которые используются в настоящее время, если противомикробное лечение не проводится своевременно. Поэтому быстрое и точное обнаружение микроорганизмов патологии у пациентов с симптомами инфекции имеет большое значение для охраны здоровья в обществе.

Обычные методы выращивания культур обычно могут выявить микробов через 2-3 недели, а в некоторых случаях требуется два месяца инкубации.

Поэтому результаты доступны в день, когда был проведен анализ. В дополнение к тесту ПЦР всегда следует выращивать культуру бактерий.

Анализ нацелен на определение уникальной последовательности в конкретном гене, которая присутствует у больного человека. Кроме того, тест может показать устойчивость бактерий к изониазиду, если она имеется.

Положительный результат указывает на наличие ДНК-комплекса микобактерий. Тест не выявляет отличий между видами микроорганизмов, вызывающих туберкулез.

Отрицательный результат указывает на отсутствие ДНК микробов.

Анализ ПЦР не обнаруживает отличий между жизнеспособными организмами и их остатками, сохраняющимися в результате предшествующей инфекции. Результаты теста должны быть сопоставлены с симптомами пациента.

www.mayomedicallaboratories.com

Слизь, выделяемая из легких, может быть проверена на наличие бактерий, вызывающих инфекцию. Для этого теста сначала собирается мокрота, образующаяся после кашля, и доставляется в больницу или кабинет врача.

В лабораторных условиях лаборант наносит образец на специальное стекло и добавляет специальный краситель, который позволяет увидеть микобактерии под микроскопом.

Также слизь добавляется в питательную среду для выращивания культуры микроорганизмов, чтобы их можно было достоверно определить как возбудителей туберкулеза и узнать, какие препараты будут наиболее эффективными при лечении болезни.

Если мокрота не образуется, но требуется получить образец, тогда вдыхают распыленный концентрированный солевой раствор, который взывает кашель и вытягивает жидкость в просвет бронхов. В качестве альтернативы можно использовать бронхоскопию или получить бактерии из желудка или других мест.

Дети с активным туберкулезом не выделяют мокроту. Для них может потребоваться принять решение о лечении, основанное на сборе и выращивании микробов у человека, заразившего ребенка.

www.nationaljewish.org

Подобный тест мог бы значительно облегчить выявление болезни и лечить ее до того, как она нанесет серьезный урон здоровью человека и его окружению.

В 2016 году было зарегистрировано более 10 миллионов новых случаев туберкулеза, и в результате этого заболевания погибло 1,7 миллиона человек. Примерно в 40 процентах случаев инфекция не определяется до тех пор, пока симптомы не станут очевидными.

В настоящее время туберкулез диагностируется с использованием кожного теста или путем культивирования бактерий из мокроты человека. Но оба эти метода занимают несколько дней или недель до получения результатов, а второй (бактериологический метод) может быть выполнен только обученным персоналом — микробиологами.

Алессандра Лучини и ее команда разработали анализ мочи на туберкулез, который дает ответ через 12 часов. Тест обнаруживает определенный вида сахара, который покрывает поверхность микобактерий и обычно попадает в физиологическую жидкость инфицированных людей в низких концентрациях.

Анализ использует крошечные клетки, встроенные в специальный краситель, который может захватывать и улавливать молекулы углеводов. Это позволяет обнаруживать сахар в низких концентрациях, что делает его в 1000 раз более точным, чем предыдущие методы обнаружения микроорганизмов в моче.

Во время проведения клинических испытаний, данным методом выявили 48 человек с туберкулезом. Теперь ученые хотят сделать тест более простым в использовании и испытать его на тысячах добровольцев. Если все пойдет хорошо, анализ может стать доступен для широкого использования в течение ближайших трех лет.

www.newscientist.com

Данный тест является уникальным методом диагностики заболевания. Также известен как анализ титров гамма-интерферона (IGRA). В клиническом исследовании тест продемонстрировал чувствительность и специфичность, превышающую 95%.

По данным Центра по Контролю и Профилактике Заболеваний, проба может быть использована вместо анализа Манту в большинстве случаев и является предпочтительной для людей, вакцинированных БЦЖ, а также для тех лих, которые вряд ли вернутся повторно в больницу для получения результатов.

Пробы не помогают отличить скрытую туберкулезную инфекцию от активного процесса. Лейкоциты большинства людей, инфицированных микроорганизмами туберкулеза, будут высвобождать особое вещество (гамма-интерферон). Тест измеряет уровень иммунного ответа человека на микобактерии.

www.tspot.com

www.emedicine.medscape.com

www.cdc.gov

IGRA — это тесты крови, которые могут помочь в диагностике заболевания, включая как латентную инфекцию, так и активную форму патологии.

Сейчас используется три вида анализов, которые включают:

QuantiFERON®-TB Gold;
QuantiFERON®-TB Gold In-Tube;
Т-SPOT®.

У IGRA есть несколько преимуществ перед пробой Манту. Ребенку и взрослому достаточно одного посещения больницы для проведения теста, результаты доступны в течение 24 часов. Предыдущая вакцинация БЦЖ не вызывает ложноположительного ответа.

Существуют некоторые ограничения на использование IGRA. Образцы крови должны быть исследованы в течение 8-30 часов после сбора, пока лейкоциты все еще живые, а любые ошибки при обращении с пробами могут снизить точность. Кроме того, имеются ограниченные данные о способности анализов прогнозировать риск развития туберкулеза в будущем.

Следует соблюдать осторожность при обследовании детей в возрасте до 5 лет, лиц недавно зараженных микобактериями, людей с ослабленным иммунитетом или подвергающихся серийному либо повторному тестированию.

Наборы для проведения анализов крови на антитела стоят дороже, чем расходные материалы, используемые для туберкулиновой пробы.

www.medscape.com

По сравнению с сывороткой, жидкость полости рта имеет ряд преимуществ: низкое содержание белка, простой сбор и простоту хранения. Слюна ранее использовалась для диагностики таких системных заболеваний, как гепатит, ВИЧ, почечные расстройства, сердечно-сосудистые болезни, аутоиммунные патологические процессы, рак, диабет и другие инфекционные состояния.

Эти исследования выглядят многообещающе для пользы диагностики туберкулеза. Однако, пока выявление заболевания с использованием слюны невозможно.

источник

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет увеличить число копий ДНК бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы. Для диагностики достаточно одной молекулы ДНК. Синтезированное количество ДНК идентифицируют методами иммуноферментного анализа или электрофореза. ПЦР-диагностика позволяет обнаружить возбудителя на самых ранних этапах инфекционного процесса, в любой биологической среде организма, с возможностью количественного определения вирусов или бактерий.

Микобактерии туберкулеза это палочкообразная бактерия, известная также под названием туберкулезной бациллы. Основной видовой признак микобактерий туберкулеза – патогенность, т.е. способность жить и размножаться в тканях живого организма и вызывать специфические ответные реакции, приводящие к определенной нозологической форме патологии – туберкулезу. Микобактерии обладают своеобразной капсулой из молекул жирных кислот, которая позволяет им выдерживать весьма суровые условия окружающей среды и выживать внутри клеток иммунной системы человека (макрофагов), где все другие микробы погибают под действием ферментов. Передача инфекции происходит воздушно-капельным путем. Маловероятна возможность заражения через предметы, принадлежащие больным туберкулезом. В связи с тем, что микроб медленно размножается, больные туберкулезом выделяют очень незначительное число бактерий, а значит, для заражения здорового человека требуется длительный контакт с больным. Заразными являются только те больные туберкулезом, у которых эта инфекция обнаруживается в активной стадии. Однако больные, получающие адекватное лечение против туберкулеза на протяжении хотя бы 2 недель, уже не опасны. Высокая чувствительность ПЦР позволяет обнаружить в исследуемом материале (мокрота, промывные воды бронхов, моча, пунктаты различных органов) единичные клетки или даже фрагменты ДНК микобактерий в исследуемом материале.

Туберкулeз – системное заболевание, вызванное специфическими микобактериями. Обычно поражаются лёгкие, но возможно также специфическое поражение лимфатических узлов, костей, почек. Пути передачи воздушно-капельный и контактный. При острой форме заболевания появляется температура, общая слабость, одышка, кашель с отхождением мокроты. Нельзя уберечь себя от туберкулеза, т.к. возбудитель болезни — микобактерия туберкулеза или «палочка Коха» — передается воздушно-капельным путем, поэтому заразиться можно где угодно, даже не вступая в контакт с больным. Практически неизлечимый туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью может развиться у больного, нерегулярно принимающего лекарства или незакончившего полный курс лечения. Это и происходит в сложившихся сейчас в России условиях, когда даже самые необходимые препараты доступны далеко не всем, а тюрьмы, являются я самым мощным источником форм туберкулёза устойчивых к антибиотикам. С целью профилактики заболевания каждый должен обследоваться, либо ежегодное флюорографическое исследование лёгочной ткани, либо определение в сыворотке крови антител к микобактериям. Определение антител к возбудителю туберкулеза в сыворотке крови — перспективный метод лабораторной диагностики данного заболевания, который может быть альтернативой широко применяемому в настоящее время бактериологическому исследованию. Ряд существенных недостатков, которые имеет бактериологический метод — значительная длительность исследования, эффективность его в основном при легочных формах туберкулеза, трудности со сбором мокроты — ограничивают его использование. Серологическая диагностика, в частности иммуноферментный анализ на наличие антител к микобактериям туберкулеза, позволяет сократить время лабораторного подтверждения клинического диагноза, решить проблемы, связанные с диагностикой внелегочных форм туберкулеза, сбором мокроты у детей. Выявление диагностически значимого титра антител к микобактериям туберкулеза позволяет оценить напряженность поствакцинального иммунитета, заподозрить туберкулезную инфекцию, подтвердить клинический диагноз. Титр антител при острой форме инфекции увеличивается в 5-6 раз в сравнении с нормативным значением.

Туберкулез — опасное заболевание, которое успешно лечится при своевременной диагностике.

Одно из наиболее информативных исследований, позволяющих выявить недуг на ранней стадии, носит название метод ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Анализ ПЦР — не только самое информативное, но и одно из самых доступных исследований, которое позволяет выявить туберкулез на ранних стадиях.

Все живые микроорганизмы, включая вирусы и бактерии, содержат в своей структуре молекулы РНК и ДНК. Выделив эти кислоты, можно с большой достоверностью сказать, какие чужеродные агенты присутствуют в крови человека, и поставить точный диагноз.

Суть метода ПЦР заключается в особой обработке образцов биологических жидкостей, в результате чего можно определить, к какому виду относятся присутствующие в нем микроорганизмы.

Методика ПЦР применяется у людей с тяжелыми поражениями легких в тех случаях и респираторными проявлениями (сильный кашель, кровохаркание), когда точно диагностировать болезнь по клиническим симптомам невозможно.

Рекомендуется пройти исследование и после непосредственного контакта с носителем заболевания. В число преимуществ, которыми он обладает, входят:

скорость выполнения — для получения результата не нужно выращивать культуру возбудителя или проводить другие сложные процедуры;
высокая информативность — при диагностике туберкулеза точность анализа достигает 90% и выше;
высокая чувствительность и специфичность — для выявления возбудителей болезни в материале может содержаться всего одна клетка вируса;
универсальность — для анализа подходят практически любые биологические жидкости: мокрота, кровь, смывы бронхов.

Для сравнения: точность микроскопии мазков мокроты, которая используется для выявления туберкулеза, составляет всего 40-50%, а при низком количестве возбудителей снижается до 10% и меньше. Культуральные исследования мокроты более информативны, но для получения результатов требуется от 2 до 8 недель.

Можно использовать ПЦР на туберкулез вместо Манту, если у человека имеются какие-либо противопоказания к пробе.

К недостаткам методики относится риск получения ложноотрицательного результата. Иными словами, отсутствие в мокроте, крови или моче специфического ДНК еще не говорит об отсутствии туберкулеза у больного.

Важно. При диагностике туберкулеза у детей чувствительность анализа ПЦР ниже, чем у взрослых, и составляет около 25-83%.

Фото 1. Делать ПЦР вместо Манту ребенку, это хороший вариант, если он аллергик или часто болеет.

Процедура проведения анализа ПЦР проводится посредством специального прибора под названием амплификатор, и состоит из четырех этапов. Для проведения исследования необходимы участки ДНК, с которых начинается синтез молекул, нуклеотиды (основы молекул ДНК), а также полимераза, или фермент, ускоряющий проведение процедуры.

Забор биологического материала (мокрота, кровь, смывы бронхов).
Прогревание образца до температуры около 98% для разрушения первичной структуры цепочки ДНК.
Отжиг, или снижение температуры на несколько градусов, чтобы связать праймер с нитью ДНК.
Синтез молекул, необходимых для получения результата.

После проведения 25-30 подобных циклов образуется определенное количество копий ДНК вирусов, по которым легко определить возбудителя заболевания.

Внимание: анализ ПЦР не отличает «мертвые» микроорганизмы от «живых», поэтому результат может быть положительным в течение определенного времени после проведенного лечения.

Если сдается анализ крови ПЦР на туберкулез, то нет необходимости в специальной подготовке, но больным рекомендуется придерживаться общих правил: воздержаться от приема пищи не менее чем на 8 часов, исключить алкоголь и прием медикаментозных препаратов, не курить в течение часа перед забором материала.

Мокроту собирают в утреннее время после чистки зубов и тщательного полоскания полости рта.

Если экссудат выделяется плохо, накануне вечером следует принять отхаркивающий препарат или сделать ингаляцию. Диагностическую ценность имеет мокрота со слизью, гноем, белыми или желтоватыми вкраплениями.

Если взять мокроту на анализ невозможно, для выявления возбудителей заболевания используются смывы из бронхов. Такой анализ не требует подготовки, а забор материала выполняется следующим образом. С помощью гортанного шприца больному вливают в трахею раствор хлорида натрия, который вызывает сильный кашель — выкашлянная жидкость используется для исследования.

Внимание. Результат анализа искажают антибиотики, гепарин и другие препараты, использующиеся для местного лечения, поэтому исследование рекомендуется проводить через 10-14 дней после приема.

Определение ДНК возбудителей туберкулеза: комплекса микобактерий: M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG, M. microti, M. africanum в моче методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени.

Туберкулёз (от лат. tuberculum — бугорок) – распространённое, социально зависимое заболевание человека. Болеют им и животные. Возбудитель туберкулёза открыт Р. Кохом в 1882 г. Это кислотоустойчивые аэробные бактерии (74 вида) рода mycobacterium, широко распространённые в почве, воде и у животных. У человека чаще всего возбудителем является Mycobacterium tuberculosis. Второй по частоте является Mycobacterium bovis. Оба вида очень очень устойчивы ко многим факторам внешней среды, а в организме очень долго остаются жизнеспособными и могут вызвать заболевание через многие годы после заражения. Очень важно, что микобактерии туберкулёза могут образовывать так называемые L-формы. Сохраняясь в организме, они создают противотуберкулёзный иммунитет. Длительное время туберкулёз может протекать скрыто и обнаруживаться случайно, хотя нередко уже проявляются такие симптомы, как слабость, быстрая утомляемость, субфебрильная температура, ночная потливость, а в крови – анемия и лейкопения. В настоящее время, несмотря на все достижения антимикробной терапии, туберкулёз угрожает будущему нации. Поэтому все методы диагностики, особенно его латентных форм являются крайне важными.

Существует много методов лабораторной диагностики туберкулёза: микроскопия мазка (чаще всего для этого используют мокроту), классический культуральный метод, ИФА. Всем им присущи достоинства, но и определённые недостатки, в частности, обнаружение микобактерий только в случае их достаточного количества.

В последние годы для диагностики используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Её высокая чувствительность позволяет обнаружить в исследуемом материале единичные клетки и даже их фрагменты ДНК. Метод исключает перекрёстные реакции и специфичность достигает 100%. ПЦР позволяет дифференцировать ограниченные и диссеминированные формы туберкулёза, особенно у детей даже при отрицательных результатах микробиологических исследований.

определяемый фрагмент — специфичные участки ДНК микобактерий;
специфичность определения — 100%;
чувствительность определения-100 копий ДНК микобактерии в образце.

Исследование для выявления возбудителя туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микобактерии в образце биоматериала.

источник

ПЦР на туберкулез необходимо сдать всем, кто хочет знать нюансы своего состояния при данном недуге. Для изъятия посева при подозрении на туберкулезную форму поражения легких оптимальным вариантом будет использовать то, что является содержимым желудка (это определяет такие показатели, как иммуноглобулин, СОЭ, микобактерии и лейкоциты). Кроме того, для подтверждения полученного диагноза или при подозрении на туберкулез, может использоваться томография, проба Манту, ИФА.

Усиление и обнаружение являются изотермическими и происходят одновременно в режиме реального времени. Продукт амплификации выделяют гибридизацией с зондом типа и последующим излучением флуоресцентного сигнала. Флуоресценция измеряется во время каждого цикла амплификации и позволяет контролировать.

Это более быстрый метод благодаря сокращению времени амплификации, уменьшению размеров полученных ампликонов и устранению всех процедур обнаружения после усиления. Система обнаружения флуоресценции обеспечивает большую чувствительность и позволяет использовать широкий диапазон приборов для количественной оценки усиленного использования замкнутой системы для усиления и обнаружения минимизирует риск перекрестного загрязнения ампликонами. Наиболее важные ограничения представлены уменьшенной возможностью использования мультиплексной техники и невозможностью определения молекулярного веса усиления, причем последнее имеет решающее значение для определения специфичности.

ПЦР рекомендуется проводить в утреннее время. Это настоятельно рекомендуется проводить до того, как содержимое области желудка опустошится от всего массива мокроты, которая была проглочена за ночь (последний проведенный День борьбы с туберкулезом регламентировал это). В связи с этим, ПЦР на наличие туберкулеза необходимы, как и томография, ИФА и Манту. Они позволяют выявлять микобактерии и состояние мочи, СОЭ, общий иммуноглобулин и определять актуальное состояние легких.

Однако это потенциальное смещение можно преодолеть, проанализировав кривые плавления. Кривые плавления получают путем графической корреляции кинетики диссоциации комплементарных последовательностей нуклеиновой кислоты при изменении температуры. Анализ кривых плавления позволяет различать ампликоны разной длины и обнаруживать все неспецифические усиления, которые могут присутствовать.

В настоящее время существует множество методов обнаружения амплифицированных, которые, однако, прослеживаются в двух форматах и могут использоваться как в качественных, так и в количественных процедурах. Стоит отметить, что приборы с более высокой аналитической способностью имеют более медленный термоциклинг, чем инструменты с меньшей мощностью. Целевая количественная оценка возможна с помощью любого инструмента. Как только происходит гибридизация зонда, сложный эфир акридиния переплетается в двойной спирали, тем самым защищаясь от гидролитического действия подходящего селективного реагента, в то время как маркер несвязанного зонда без защиты может быть легко разрушен.

Следует отметить, что анализ на туберкулез должен осуществляться при соблюдении дополнительных норм и учете некоторых нюансов:

посев осуществляется в течение трех раз, однако аспирацию всего, что находится в желудке, необходимо осуществлять в условиях стационара;
посев наличествующих масс в желудке выявляет микобактерии менее чем в 50% диагнозов, даже при самых оптимальных условиях – вместо них рекомендовано УЗИ;
результат отрицательного характера не может исключать вероятности развития туберкулеза, при котором изменяется СОЭ, иммуноглобулин и другие показатели;
еще менее восприимчив посев материалов при ПЦР на патологическое состояние, полученного в рамках бронхоскопического обследования, исключающий подозрения на .

Если анализ крови на туберкулез и аналогичная проба положительны (это подтверждает Манту, томография, ИФА и дополнительная диагностика), требуется назначение противотуберкулезной терапии. Это необходимо и в других случаях, а именно при контакте с человеком с , что подтверждает рентген легких и общая симптоматика.

Обнаружение гибридов осуществляется с использованием химиолулометрометра, который детектирует световые излучения, испускаемые эфирами акридиния, соответственно возбужденными. Вся последовательность амплификации и обнаружения происходит в одной трубе и завершается менее чем за три часа.

Недавние данные, по-видимому, подтверждают хорошую эффективность и на невосстанавливающие материалы, такие как гной, биопсия и спинномозговая жидкость. Поскольку мишень представляет собой скоропортящуюся молекулу, образцы не могут быть охлаждены до 4 ° С в течение более 2-3 дней. Часть образца, используемая для теста, составляет 450 мкл. Реагенты, содержащиеся в комплекте, позволяют выполнить 50 тестов.

Для выявления алгоритма лечения, при идентификации крови на туберкулез, применяются результаты идентификации восприимчивость к специфическим средствам возбудителя. Он должен быть получен в рамках обследования больного, который контактировал с пациентом. В этом случае диагностика тоже должна включать такие меры, как Манту, томография, анализы мочи и по отношению к микобактериям. Не менее важным критерием являются антитела к туберкулезу у детей и людей постарше.

В инструкциях по эксплуатации комплекта. Процедура включает включение положительных и отрицательных контролей усиления, которые поставляются с комплектом: средствам управления не требуется применять процедуры извлечения. Так как комплект лишен внутреннего контроля амплификации, если тест отрицательный при наличии положительного микроскопического исследования для устойчивых спирто-кислотных бацилл, рекомендуется проверить наличие амплификации в образце. Если тест все еще отрицательный, было продемонстрировано присутствие ингибиторов.

Если больной и источник его заражения неизвестны, а также, если у него идентифицируется присутствие устойчивого штамма туберкулеза, осуществляется посев материала (мочи, мокроты), полученного от человека. Результаты в плане состояния легких, на которые опиралась диагностика, важны для взрослых и при назначении лечения ребенку.

Суспензию, полученную, как указано выше, можно использовать для контроля процедуры экстракции мишени. Фермент, конъюгированный с авидин-пероксидазой, связывается с биотинилированным ампликоном, который после гибридизации со специфическим зондом, закрепленным на магнитных микрочастицах, расположен на дне трубки обнаружения. Добавление хромогенного субстрата определяет образование цветного комплекса.

Поведение с отрицательными образцами при микроскопическом исследовании не так важно, когда чувствительность метода снижается, особенно в отношении внелегочных образцов. Процедура должна выполняться в трех отдельных областях: одна для подготовки реагентов, одна для подготовки образцов и контролей, а другая для амплификации и обнаружения. Материалы, содержащиеся в комплекте, позволяют проводить 96 испытаний.

Анализ крови на туберкулез, как и ПЦР, имеет свои преимущества. Последний из представленных способов является основной методикой, основанной на идентификации соотношении нуклеиновых кислот по отношению к микобактериям, который используется у больных при туберкулезе. В качестве идентификаторов компонентов туберкулеза применяются специальные последовательности ДНК нуклеотидного типа, которые следует сдать и сделать общий анализ у детей.

Тест может быть завершен примерно через шесть часов. В каждом блоке из 12 трубок положительные и отрицательные элементы управления должны быть вставлены рядом с образцами. Каждая реакция ко-усиливает и обнаруживает внутренний контроль усиления. Основываясь на чтении внутреннего контроля усиления, результаты выборки выражаются с помощью алгоритма, такого как положительный, отрицательный или неопределенный. Данные, имеющиеся в литературе, показывают, что система надежна и надежна, предлагая характеристики, сравнимые с другими испытаниями на рынке.

Следует отметить, что легких у взрослых и при осуществлении ребенку, выявляет специфичность и восприимчивость различных вариантов. При этом точность ПЦР более 90% (для посева мокроты и мочи представленные результаты следует принимать за 100% по отношению к микобактериям).

Диагностика туберкулеза легочной системы у детей при помощи ПЦР, однако, не настолько ценна.

Часть дезактивированного образца, используемого для испытания, составляет 500 мкл. Реагенты, содержащиеся в наборе, позволяют проводить 96 испытаний и могут храниться при комнатной температуре. Тест может быть завершен примерно через три часа. Процедура предполагает использование двух контрольных, положительных и отрицательных для каждой аналитической сессии. Элементы управления изготовлены из нуклеиновой кислоты и поэтому не участвуют в стадии экстракции, которая применяется только к клиническим образцам.

Невозможность считывания элементов управления не позволяет прибору оценивать результаты, которые выражаются в виде числового индекса, пропорционального испускаемому флуоресцентному сигналу. Положительный контроль можно получить из контрольного фонда. Связывание с праймером идентифицирует высококонсервативные последовательности, присутствующие во всех видах комплексных микобактерий туберкулеза. Литературные данные в этом отношении крайне ограничены и в настоящее время ограничены только абстракциями.

В сравнении с клинической диагностикой туберкулеза легочной системы у детей, следует отметить, что специфичность ПЦР может колебаться от 80 до 100%. Восприимчивость же составляет от 25 до 83% у детей и людей постарше. Проба Манту (которая называется туберкулинодиагностика), а также томография и общий сбор могут демонстрировать более точные итоговые результаты. В связи с этим рекомендована дополнительная диагностика с их помощью.

По-видимому, недавнее использование автоматических экстракторов дает одинаково достоверные результаты. Общее время испытания составляет около пяти часов. Поскольку в литературе в настоящее время нет литературы для количественного диагностического подхода, этот подход в настоящее время не поощряется. Набор обеспечивает положительный контроль, который может использоваться как в качестве внутреннего регулятора усиления, так и для проверки любых дефектов извлечения.

На данный момент нет научных работ для этих продуктов, которые позволяют провести минимальную оценку. По этой причине было принято решение не упоминать их в этой главе. Ожидается, что эти лаборатории будут участвовать во внешней программе качества для каждого аспекта микобактериальной диагностики, включая усиление.

Наиболее это необходимо для идентификации соотношения мочи и иммуноглобулина применительно к ребенку и другим лицам, для которых требуется наиболее тщательная диагностика.

Рассказывая о преимуществах ПЦР при идентификации поражения легочной системы, нельзя не отметить недостатки представленной методики, в частности, то, что:

Крайний срок для отправки ответов уникален и составляет около трех месяцев. . Во время испытаний на усиление рабочий процесс должен быть однонаправленного типа, исходящего из области подготовки реагента, в зону подготовки образца к участкам усиления и после амплификации, в идеале области должны быть расположены в отдельных помещениях, оборудованных фильтрующей зоной и всем необходимым оборудованием. Тестирование должно проводиться квалифицированным персоналом с опытом молекулярной биологии. Чтобы свести к минимуму риск загрязнения окружающей среды от ампликонов, предлагается очистить зоны работать с гипохлоритом натрия в течение 15 минут, затем промыть деионизированной водой.

отрицательные итоги ПЦР не могут являться 100% фактором, указывающим на отсутствие заболевания и патологии вместо других типов;
ПЦР не всегда может применяться у людей с усугубленным поражением легочной системы и в ситуациях, при которых по определенным данным диагноз не получается определить;
наименее полезна ПЦР в идентификации туберкулеза у людей с иммунодефицитами, а также в диагностике заболевания внелегочного типа.

Другие методы диагностики и всемирный день борьбы с туберкулезом указывают на то, что микобактерии правильнее всего идентифицировать, когда осуществляется томография, проба Манту и другие мероприятия у детей и людей постарше.

Скорость и точность диагностики существенно влияют на лечение туберкулезной болезни, что позволяет снизить распространение инфекции и снизить затраты, связанные с изоляцией и лечением пациентов. В целом, коммерческие тесты продемонстрировали чувствительность 96% и специфичность 85%, чувствительность 66% и специфичность 98%, обнаруженную у пациентов с отрицательной микроскопией в образцах с положительной микроскопией. Что касается низкой специфичности, обнаруженной в положительных образцах для микроскопического исследования, следует отметить, что она была оштрафована включением во многих работах образцов с отрицательной культурой, поступающих от пациентов в терапии.

Множество руководств, как и всемирный день борьбы с туберкулезом, указывают на то, что наиболее показательна диагностика будет при использовании различных методик: томография, проба Манту, анализ мочи и дополнительные методы идентификации микобактерии. Важным критерием при осуществлении диагностики является ее последовательность и частотность.

Аналогичная проблема возникла в исследованиях, в которых культура проводилась только с твердой почвой: ложные негативы из-за отсутствия чувствительности этого метода способствовали, по-видимому, низкой специфичности. Диагностические значения нечетного отношения, чувствительность и специфичность, связанные с четырьмя коммерческими испытаниями на амплификацию.

Читайте также: Соли и щелочи в моче

По мнению некоторых авторов, следует использовать коммерческие тесты амплификации. Для исключения туберкулеза у пациентов с положительной микроскопией и подозрением на микобактериоз. Чтобы подтвердить диагноз туберкулеза у пациентов с сильным клиническим подозрением, но с отрицательным микроскопическим исследованием. Это аргументы, которые могут быть разделены с методологической точки зрения, даже если первое кажется чрезмерно ограничительным.

Кроме того, показаны дополнительные способы, отвечающие на вопрос, как провериться на туберкулез. Речь идет о флюорографии, пункции, бронхоскопии и даже УЗИ (информативно далеко не во всех ситуациях, сопряженных с туберкулезом, поэтому дополнительно следует осуществить анализ крови и мокроты, Манту). Вместо них недопустимо осуществлять другие тесты, потому что они не окажутся на 100% результативными.

Исследование подтверждает, что коммерческие тесты дают более точные результаты по респираторным материалам, чем к внелегочному происхождению, тогда как по сравнению с внутренними испытаниями они оказались менее чувствительными, но значительно более конкретными. Кроме того, хорошая специфичность регистрируется на некоторых внелегочных материалах, таких как ликер, плевральная жидкость, гнойный узел и моча лимфатических узлов, хотя и с более низкой чувствительностью, чем на респираторных материалах.

В таблице 2 показано, как результат прямых тестов амплификации влияет на вероятность того, что пациенты с отрицательной микроскопией и с различной степенью клинического подозрения могут пострадать от туберкулеза легких. Таблица была получена с учетом, в отношении тестов на усиление, средней чувствительности и специфичности 4% и 7% соответственно. Как вы можете видеть, необходимо, чтобы клиническое подозрение было по крайней мере «промежуточным», чтобы получить положительный результат теста с точки зрения прогнозируемости заболевания.

Для того чтобы всемирный день борьбы с туберкулезом оказался менее востребованным днем, следует учитывать дополнительные характеристики при диагностике по отношению к микобактериям. Одной из целей ПЦР является исключение формирования осложнений и возможность исключения воспаления.

В связи с этим следует уделять внимание пункции, как методике удаления излишнего соотношения мокроты. Способ может применяться не во всех ситуациях, однако многими пульмонологами он воспринимается не только как диагностическое мероприятие, но и как терапевтическое. Поэтому перед ее применением следует проконсультироваться со специалистом и делать это на каждом этапе развития заболевания.

В случае низкого клинического подозрения положительный результат может вместо этого увеличить вероятность заболевания не более чем на 50%. Наконец, при наличии сильного клинического подозрения отрицательность теста не сильно снижает вероятность заболевания. Кроме того, следует иметь в виду, что вероятности, указанные в таблице, были рассчитаны с учетом того, что чувствительность и специфичность прямых тестов амплификации остаются постоянными независимо от субъекта клинического подозрения. Фактически, поскольку чувствительность, как правило, выше, когда клиническое подозрение выше, из этого следует, что клиническая полезность прямых тестов амплификации еще ниже в случае низкого клинического подозрения.

Учитывая преимущества и недостатки ПЦР, можно утверждать, что для наиболее точной постановки диагноза правильно будет использовать дополнительные методики. Это позволит с максимальной точностью установить степень поражения организма и вероятность развития осложнений. Именно при таком подходе к диагностике можно говорить об эффективном лечении заболевания.

Что такое ПЦР диагностика
Ответственность перед сдачей анализов
Процесс сбора анализов
Как расшифровываются результаты

В последнее время ПЦР на туберкулез считается наиболее точным анализом, хотя и существуют другие методы. Данное заболевание набирает обороты, поэтому специалисты стараются изобрести новые технологии по выявлению палочки Коха в организме. Всем известно, что туберкулез является инфекционной болезнью, которая может передаваться как воздушно-капельным путем, так и через насекомых и т.д. поэтому крайне важно проводить периодические обследования.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет всего в течение нескольких часов обнаружить возбудителя инфекции, причем выявить можно даже 1-2 молекулы среди огромного количества. Данный тест имеет массу достоинств, которые проявляются в следующем:

100%-ное выявление, так как в биологической пробе определяется от 10 до 100 клеток;
специфичность ДНК МБТ является очень высокой;
скорость анализ имеет от 4 до 4,5 часа;
диагностика туберкулеза легких, что практически нереально для других методов;
выявляется особенный фрагмент, который имеется только в конкретном возбудителе.

С помощью этой диагностики можно своевременно не только обнаружить инфекцию, но и изолировать человека и назначить ему соответствующее лечение. Особенно это касается туберкулеза, потому что точное расположение палочки Коха выявить проблематично. Кроме того, данный анализ способен исследовать устойчивость микобактерий к определенному медицинскому препарату, тем самым определяется метод лечения. Чтобы провести полимеразную цепную реакцию на устойчивость, используют гены, запоминающие невосприимчивость к некоторым лекарствам, после чего через двое суток можно получить результат. Это благотворно сказывается на профилактике заболевания.

Следует отметить, что ПЦР выявляет возбудителей не только туберкулезной палочки, но и многих других заболеваний и даже ВИЧ. Анализ проводится с любой биологической жидкостью. Это могут быть:

кровь;
моча;
выделения половых органов;
мокрота;
жидкость спинномозговая;
соскоб со всех органов.

Собранный материал помещается в специальный амплификатор, то есть реактор, где находятся некоторые ферменты, благодаря которым идет цепная реакция по удвоению ДНК инфекции. После этого производится расшифровка. Результат, как правило, бывает либо положительный, либо отрицательный.

Назначается диагностика туберкулеза в тех случаях, когда, во-первых, существуют основные симптомы болезни, во-вторых, человек очень длительное время болеет острыми заболеваниями дыхательных путей и, в-третьих, люди контактируют с больными туберкулезом. Но врач может провести данный анализ и при наличии сомнительных снимков после рентгенологического обследования.

На полимеразную цепную реакцию могут направить такие специалисты, как пульмонолог, фтизиатр, терапевт, а детей – педиатр. Конечно, есть правила, которые необходимо соблюдать пациенту перед сдачей, например, крови на туберкулез. Прежде всего, нельзя употреблять пищу за 4-5 часов до сдачи, а за сутки до этого нужно исключить из своего рациона жирные и аллергенные продукты. Также желательно не использовать антибиотики и личные средства гигиены в виде гелей.

Но не только больной обязан соблюдать необходимые условия. То же относится и к врачам. Чтобы забор анализов на туберкулез был проведен правильно, нужно делать это только в стерильных условиях, иначе в жидкую среду могут попасть другие микроорганизмы, следовательно, интерпретация будет неверной. Все инструменты, приборы и контейнеры тоже должны быть в стерильном виде.

Итак, материал собирается в специальные контейнеры, которые при необходимости специалист дает пациенту. Например, моча собирается только первая после пробуждения человека утром. Но при этом необходимо провести утренние водные процедуры в соответствующих местах. Мочи для сбора достаточно от 20 до 30 мл. А вот синовиальную жидкость из спинного мозга и прочие сложные анализы берет только высококвалифицированный специалист, находящийся в стационарных условиях.

У женской половины человечества мазок берет только гинеколог на специализированном кресле, а у мужчин соскоб или мазок забирается из мочеиспускательного канала (из наружной части). Из зева мазок берет врач специальной лопаткой или другими инструментами. Кровь берется непосредственно из вены стерильными шприцами.

На последнем этапе сбора доктор с учетом всех требований транспортировки и хранения направляет образец в специальную лабораторию для дальнейшего исследования. Для этого персонал лаборатории помещает кровь или прочие мазки в пробирку, в которую заблаговременно добавлено вещество, препятствующее преждевременному старению образца.

В случае с кровью, что особенно важно, данное вещество не позволяет ей свернуться, следовательно, наличие сгустков исключено. Пробирки при этом не встряхиваются, так как можно повредить состояние эритроцитов. Это все нужно для того, чтобы легче и быстрее было определить все компоненты крови.

Потом кровь на туберкулез центрифугируют, чем отделяют от плазмы клеточный осадок, который и изучается под микроскопом. Изучив первоначальные данные, добавляют фермент (транскриптазу) и при определенном температурном режиме проводят следующую цепную реакцию. Благодаря этому образуются фрагменты генетического материала, которые и подвергаются расшифровке.

Не всегда анализ бывает правдивым. Ложноположительный результат бывает только в том случае, если не соблюдены все требования по подготовке и сдаче мазков и т.д. Именно поэтому следует как пациенту, так и врачам строго придерживаться всех правил, о которых говорилось выше.

Расшифровка может быть как простой, так и сложной. К первой относится определение «отрицательно» или «положительно», что свидетельствует о том, что при отрицательной расшифровке пациенту не о чем беспокоиться, т.к. инфекций не обнаружено.

При положительных результатах простой формы количество содержащихся возбудителей является ничтожно малым. Дело в том, что в медицине существуют определенные нормы, благодаря которым можно определить степень устойчивости к заболеваниям.

источник

Туберкулез — опасное заболевание, которое успешно лечится при своевременной диагностике.

скорость выполнения — для получения результата не нужно выращивать культуру возбудителя или проводить другие сложные процедуры;
высокая информативность — при диагностике туберкулеза точность анализа достигает 90% и выше;
высокая чувствительность и специфичность — для выявления возбудителей болезни в материале может содержаться всего одна клетка вируса;
универсальность — для анализа подходят практически любые биологические жидкости: мокрота, кровь, смывы бронхов.

Фото 1. Делать ПЦР вместо Манту ребенку, это хороший вариант, если он аллергик или часто болеет.

Забор биологического материала (мокрота, кровь, смывы бронхов).
Прогревание образца до температуры около 98% для разрушения первичной структуры цепочки ДНК.
Отжиг, или снижение температуры на несколько градусов, чтобы связать праймер с нитью ДНК.
Синтез молекул, необходимых для получения результата.

Мокроту собирают в утреннее время после чистки зубов и тщательного полоскания полости рта.

источник