Найти скорость изменения содержания белка в моче больного

Патологическая протеинурия является одним из наиболее важных и постоянных признаков заболеваний почек и мочевых путей. Определение концентрации белка в моче является обязательным и важным элементом исследования мочи. Выявление и количественная оценка протеинурии важна не только в диагностике многих первичных и вторичных заболеваний почек, оценка изменения выраженности протеинурии в динамике несет информацию о течении патологического процесса, об эффективности проводимого лечения. Обнаружение белка в моче даже в следовых количествах должно настораживать в отношении возможного заболевания почек или мочевых путей и требует повторного анализа. Особо следует отметить бессмысленность исследования мочи и, в частности, определения белка мочи без соблюдения всех правил ее сбора.

Все методы определения белка в моче можно разделить на:

Качественные,
Полуколичественные,
Количественные.

Все качественные пробы на белок в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. При наличии белка в исследуемом образце мочи появляется либо помутнение, либо выпадение хлопьевидного осадка.

Условия определения белка в моче на основе реакции коагуляции:

Моча должна иметь кислую реакцию. Мочу щелочной реакции подкисляют несколькими (2 — 3) каплями уксусной кислоты (5 – 10%).
Моча должна быть прозрачной. Помутнение устраняется через бумажный фильтр. Если помутнение не исчезает, добавляют тальк или жженую магнезию (около 1 чайной ложки на 100 мл мочи), взбалтывают и фильтруют.
Качественную пробу следует проводить в двух пробирках, одна из них – контрольная.
Искать помутнение следует на черном фоне в проходящем свете.

К качественным методам определения белка в моче относятся:

Как показывают многочисленные исследования, ни один из большого числа известных методов качественного определения белка в моче не позволяет получать надежные и воспроизводимые результаты. Несмотря на это, в большинстве КДЛ в России эти методы широко используются в качестве скрининга – в моче с положительной качественной реакцией в дальнейшем проводят количественное определение белка. Из качественных реакций чаще используют пробу Геллера и пробу с сульфосалициловой кислотой, однако пробу с сульфосалициловой кислотой большей частью считают наиболее подходящей для выявления патологической протеинурии. Проба с кипячением в настоящее время практически не используется в связи с ее трудоемкостью и длительностью.

В основе метода Брандберга-Робертса-Стольникова лежит кольцевая проба Геллера, поэтому при данном методе наблюдаются те же ошибки, что и при пробе Геллера.

В настоящее время для определения белка в моче все чаще используются диагностические полоски. Для полуколичественного определения белка в моче на полоске в качестве индикатора чаще всего используется краситель бромфеноловый синий в цитратном буфере. О содержании белка в моче судят по интенсивности сине-зеленой окраски, развивающейся после контакта реакционной зоны с мочой. Результат оценивается визуально или с помощью анализаторов мочи. Несмотря на большую популярность и очевидные преимущества методов сухой химии (простота, скорость выполнения анализа) данные методы анализа мочи в целом и определения белка в частности не лишены серьезных недостатков. Одним из них, приводящих к искажению диагностической информации, является большая чувствительность индикатора бромфенолового синего к альбумину по сравнению с другими белками. В связи с этим, тест-полоски в основном приспособлены к обнаружению селективной гломерулярной протеинурии, когда практически весь белок мочи представлен альбумином. При прогрессировании изменений и переходе селективной гломерулярной протеинурии в неселективную (появление в моче глобулинов) результаты определения белка оказываются заниженными по сравнению с истинными значениями. Данный факт не дает возможности использовать данный метод определения белка в моче для оценки состояния почек (гломерулярного фильтра) в динамике. При тубулярной протеинурии результаты определения белка также оказываются заниженными. Определение белка с помощью диагностических полосок не является надежным индикатором низких уровней протеинурии (большинство выпускаемых в настоящее время диагностических полосок не обладают способностью улавливать белок в моче в концентрации ниже, чем 0,15 г/л). Отрицательные результаты определения белка на полосках не исключают присутствия в моче глобулинов, гемоглобина, уромукоида, белка Бенс-Джонса и других парапротеинов.

Хлопья слизи с высоким содержанием гликопротеидов (например, при воспалительных процессах в мочевых путях, пиурии, бактериурии) могут оседать на индикаторной зоне полоски и приводить к ложноположительным результатам. Ложноположительные результаты могут также быть связаны с высокой концентрацией мочевины. Плохое освещение и нарушение цветоощущения может быть причиной неточного результата.

В связи с этим, использование диагностических полосок следует ограничить скринирующими процедурами, а результаты, полученные с их помощью, следует рассматривать лишь как ориентировочные.

Корректное количественное определение белка в моче в ряде случаев оказывается непростой задачей. Трудности ее решения определяются следующим рядом факторов:

низким содержанием белка в моче здорового человека, часто находящимся на пороге чувствительности большинства известных методов;
присутствием в моче множества соединений, способных вмешиваться в ход химических реакций;
значительными колебаниями содержания и состава белков мочи при различных заболеваниях, затрудняющими выбор адекватного калибровочного материала.

В клинических лабораториях преимущественно применяются так называемые «рутинные» методы определения белка в моче, однако они далеко не всегда позволяют получать удовлетворительные результаты.

С точки зрения специалиста-аналитика, работающего в лаборатории, метод, предназначенный для количественного определения белка в моче, должен отвечать следующим требованиям:

обладать линейной зависимостью между поглощением образовавшегося в ходе химической реакции комплекса и содержанием белка в пробе в широком диапазоне концентраций, что позволит избежать дополнительных операций при подготовке пробы к исследованию;
должен быть прост, не требовать высокой квалификации исполнителя, выполняться при малом количестве операций;
обладать высокой чувствительностью, аналитической надежностью при использовании небольших объемов исследуемого материала;
быть устойчивым к воздействию различных факторов (колебаниям состава образца, присутствию лекарственных препаратов и др.);
обладать приемлемой стоимостью;
быть легко адаптируемым к автоанализаторам;
результат определения не должен зависеть от белкового состава исследуемого образца мочи.

Ни один из известных к настоящему времени методов количественного определения белка в моче не может в полной мере претендовать на роль «золотого стандарта».

Количественные методы определения белка в моче можно разделить на турбидиметрические и колориметрические.

К турбидиметрическим методам относятся:

определение белка с сульфосалициловой кислотой (ССК),
определение белка с трихлоруксусной кислотой (ТХУ),
определение белка с бензетоний хлоридом.

Турбидиметрические методы основаны на снижении растворимости белков мочи вследствие образования суспензии взвешенных частиц под воздействием преципитирующих агентов. О содержании белка в исследуемой пробе судят либо по интенсивности светорассеяния, определяемого числом светорассеивающих частиц (нефелометрический метод анализа), либо по ослаблению светового потока образовавшейся суспензией (турбидиметрический метод анализа).

Величина светорассеяния в преципитационных методах обнаружения белка в моче зависит от множества факторов: скорости смешивания реактивов, температуры реакционной смеси, значения pH среды, присутствия посторонних соединений, способов фотометрии. Тщательное соблюдение условий реакции способствует образованию стабильной суспензии с постоянным размером взвешенных частиц и получению относительно воспроизводимых результатов.

Некоторые лекарственные препараты влияют на результаты турбидиметрических методов определения белка в моче, приводя к так называемым «ложноположительным», либо «ложноотрицательным» результатам. К ним относятся некоторые антибиотики (бензилпенициллин, клоксациллин и др.), рентгеноконтрастирующие йодсодержащие вещества, сульфаниламидные препараты.

Турбидиметрические методы плохо поддаются стандартизации, часто приводят к получению ошибочных результатов, но, несмотря на это, в настоящее время они широко используются в лабораториях из-за невысокой стоимости и доступности реактивов. Наиболее широко в России используется метод определения белка с сульфосалициловой кислотой.

Наиболее чувствительными и точными являются колориметрические методы определения общего белка мочи, основанные на специфических цветных реакциях белков.

биуретовая реакция,
метод Лоури,
методы, основанные на способности различных красителей образовывать комплексы с белками:
- Понсо S (Ponceau S),
- Кумасси бриллиантовый синий (Coomassie Brilliant Blue)
- пирогаллоловый красный (Pyrogallol Red).

С точки зрения исполнителя, в повседневной работе лаборатории при большом потоке исследований биуретовый метод является неудобным из-за большого числа операций. В то же время, метод характеризуется высокой аналитической надежностью, позволяет определять белок в широком диапазоне концентраций и выявлять альбумин, глобулины и парапротеины со сравнимой чувствительностью, вследствие чего биуретовый метод рассматривают в качестве референтного и рекомендуют для сравнения других аналитических методов обнаружения белка в моче. Биуретовый метод определения белка в моче предпочтительно выполнять в лабораториях, обслуживающих нефрологические отделения, и использовать в тех случаях, когда результаты определения с помощью других методов представляются сомнительными, а также для определения величины суточной потери белка у нефрологических больных.

Метод Лоури, обладающий более высокой чувствительностью по сравнению с биуретовым методом, сочетает биуретовую реакцию и реакцию Фолина на аминокислоты тирозин и триптофан в составе белковой молекулы. Несмотря на высокую чувствительность, данный метод не всегда обеспечивает получение надежных результатов при определении содержания белка в моче. Причиной тому служит неспецифическое взаимодействие реактива Фолина с небелковыми компонентами мочи (чаще всего аминокислотами, мочевой кислотой, углеводами). Отделение этих и других компонентов мочи путем диализа или осаждения белков позволяет с успехом использовать данный метод для количественного определения белка в моче. Некоторые лекарственные препараты – салицилаты, хлорпромазин, тетрациклины способны оказывать влияние на данный метод и извращать результаты исследования.

Достаточная чувствительность, хорошая воспроизводимость и простота определения белка по связыванию красителей делают эти методы перспективными, однако высокая стоимость реактивов препятствует более широкому их использованию в лабораториях. В настоящее время в России все большее распространение получает метод с пирогаллоловым красным.

Проводя исследование уровня протеинурии, нужно иметь ввиду, что различные методы определения протеинурии имеют разную чувствительность и специфичность к многочисленным белкам мочи.

Исходя из эмпирических данных, рекомендуется определять белок двумя разными методами и рассчитывать истинное значение по одной из приведенных формул:

протеинурия = 0,4799 B + 0,5230 L;
протеинурия = 1,5484 B – 0,4825 S;
протеинурия = 0,2167 S + 0,7579 L;
протеинурия = 1,0748 P – 0,0986 B;
протеинурия = 1,0104 P – 0,0289 S;
протеинурия = 0,8959 P + 0,0845 L;

где:
B – результат измерения с Кумасси G-250;
L — результат измерения с реактивом Лоури;
P — результат измерения с молибдатом пирогаллола;
S — результат измерения с сульфосалициловой кислотой.

Учитывая выраженные колебания уровня протеинурии в различное время суток, а также зависимость концентрации белка в моче от диуреза, различное его содержание в отдельных порциях мочи, в настоящее время при патологии почек принято оценивать выраженность протеинурии по суточной потере белка с мочой, то есть определять так называемую суточную протеинурию. Она выражается в г/сут.

При невозможности сбора суточной мочи рекомендуется определять в разовой порции мочи концентрации белка и креатинина. Поскольку скорость выделения креатинина в течение дня достаточно постоянна и не зависит от изменения скорости мочеотделения, отношение концентрации белка к концентрации креатинина постоянно. Данное отношение хорошо коррелирует с суточной экскрецией белка и, следовательно, может использоваться для оценки выраженности протеинурии. В норме отношение белок/креатинин должно быть менее 0,2. Белок и креатинин измеряют в г/л. Важным достоинством метода оценки выраженности протеинурии по соотношению белок-креатинин является полное исключение ошибок, связанных с невозможностью или неполным сбором суточной мочи.

О. В. Новоселова, М. Б. Пятигорская, Ю. Е. Михайлов, «Клинические аспекты выявления и оценки протеинурии», Справочник заведующего КДЛ, № 1, январь 2007 г.
А. В. Козлов, «Протеинурия: методы ее выявления», лекция, Санкт-Петербург, СПбМАПО, 2000 г.
В. Л. Эмануэль, «Лабораторная диагностика заболеваний почек. Мочевой синдром», — Справочник заведующего КДЛ, № 12, декабрь 2006 г.
В.И. Пупкова, Л.М. Прасолова — Определение белка в моче и спинномозговой жидкости. Кольцово, 2007 г.
Справочник по клиническим лабораторным методам исследования. Под ред. Е. А. Кост. Москва, «Медицина», 1975 г.

Для количественного определения белка пригоден любой образец мочи. Большинство исследователей для выяснения величины суточной потери белка предпочитают определять содержание белка в моче, собранной за сутки.

Раздел: Анализ мочи

Все качественные пробы на белок в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. При наличии белка в исследуемом образце мочи появляется либо помутнение, либо выпадение хлопьевидного осадка.

Раздел: Анализ мочи

Проба с 20% сульфосалициловой кислотой относится к качественным реакциям определения белка в моче. Так как она основана на реакции коагуляции, то исследуемая моча должна соответствовать определенным требованиям: быть прозрачной и иметь кислую реакцию.

Раздел: Анализ мочи

Кольцевая проба Геллера относится к качественным реакциям определения белка в моче. Так как она основана на реакции коагуляции, то исследуемая моча должна соответствовать определенным требованиям: быть прозрачной и иметь кислую реакцию.

Раздел: Анализ мочи

источник

Нормальные показатели: белок в норме в моче содержится в минимальных количествах, которые не обнаруживаются обычными качественными реакциями. Верхняя граница нормы белка в моче – 0,033 г/л. Если содержание белка выше этого значения, то качественные пробы на белок становятся положительными.

Клиническое значение определения:

Появление белка в моче называется протеинурия. Протеинурии могут быть ложными и почечными. Экстраренальные протеинурии могут быть при наличии примесей белкового происхождения из половых органов (вагинитах, уретритах и др.), количество белка при этом незначительно – до 0,01 г/л. Почечные протеинурии могут быть функциональными (при переохлаждении, физических нагрузках, лихорадке) и органическими — при гломерулонефрите, пиелонефрите, нефрите, нефрозах, почечной недостаточности. При почечных протеинуриях содержание белка может быть от 0,033 до 10 – 15 г/л, иногда выше.

Принцип метода: основан на том, что белок под действием неорганических кислот коагулирует (становится видимым). Степень помутнения зависит от количества белка.

Обнаружение белка в моче с 20% сульфосалициловой кислотой.

Реактивы: 20% р-р сульфосалициловой кислоты. Оборудование: темный фон.

1. Требования к моче: моча должна быть кислой (или слабокислой) рН, должна быть прозрачной, для этого мочу центрифугируют. Щелочную мочу подкисляют до слабокислой реакции среды, используя для контроля индикаторную бумагу.

2. В 2 пробирки одинакового диаметра наливают по 2 мл подготовленной мочи. 1 пробирка – контроль, 2 – опыт. В опытную пробирку добавляют 4 капли 20% сульфосалициловой кислоты.

3. Результат отмечают на темном фоне.

4. При наличии белка, моча в опытной пробирке мутнеет.

Качественное определение белка в моче тест – полосками.

Для выявления протеинурий используют различные монотест – полоски: Альбуфан, Альбустикс, Биофан Е и политесты: Трискан, Нонафан и др.

Обнаружение белка в моче по методу Робертса – Стольникова.

Принцип метода: основан на том, что белок под действием неорганических кислот коагулирует (становится видимым). Степень помутнения зависит от количества белка (т.е. кольцевая проба Геллера). При концентрации белка в моче 0,033 г/л к концу 3 минуты после наслаивания мочи появляется тонкое нитевидное белое кольцо.

Реактивы: 50% р-р азотной кислоты или реактив Робертса (98 частей насыщенного раствора поваренной соли и 2 части концентрированной соляной кислоты) или реактив Ларионовой (98 частей насыщенного р-ра поваренной соли и 2 части концентрированной азотной кислоты).

2. В пробирку наливают 2 мл 50% р-ра азотной кислоты или один из реактивов, затем осторожно по стенке пробирки с помощью пипетки наслаивают такой же объем подготовленной мочи

3. Пробу оставляют на 3 минуты

4. Через 3 минуты отчитывают результат. Результат отмечают на темном фоне в проходящем свете. Если кольцо широкое, компактное, то мочу разводят дистиллированной водой и вновь наслаивают на реактив.

5. Мочу разводят до тех пор, пока через 3 минуты не образуется тонкое нитевидное кольцо.

6. Расчет содержания белка в моче производят по формуле:

С = 0,033г/л х степень разведения.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: При сдаче лабораторной работы, студент делает вид, что все знает; преподаватель делает вид, что верит ему. 9224 — | 7267 — или читать все.

195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник

Анализ на белок в моче сдается при диагностике многих заболеваний. Белок в моче, или протеинурия – состояние, при котором молекулы белка обнаруживаются в моче. В норме их там быть не должно, или они могут присутствовать в следовых количествах. Наличие остаточного белка в анализе мочи является вариантом нормы.

В норме у здорового человека выделение белка с мочой не превышает 8 мг/дл или 0,033 г/л в сутки.

У здоровых людей белок в моче должен отсутствовать, либо обнаруживаться в крайне незначительных количествах. Белок в моче диагностируется как протеинурия: это патологическое явление, которое требует консультации врача и проведения ряда дополнительных обследований. Белок в моче может появляться по разным причинам.

Белок в моче или так называемая протеинурия это состояние когда в моче присутствуют молекулы белка, которые в номе в моче отсутствуют или встречаются в очень малом количестве. Протеины представляют собой строительный материал входящие в состав всего нашего организма, включая мышцы, кости, внутренние органы волосы и даже ногти. Так же белок участвует в огромном количестве процессов происходящих в нашем теле на клеточном и молекулярном уровне. Важная функция белков это поддержка онкотического давления, обеспечивая тем самым гомеостаз в организме. В почечных клубочках здорового человека постоянно фильтруется относительно небольшое количество низкомолекулярных плазменных белков. В моче белка обычно нет или содержится очень мало. Таким образом, белок в моче — несомненный признак того, что функция фильтров почек — так называемых сосудистых клубочков — нарушена.

Анализ на белок в моче предназначен для определения количества содержащихся в моче протеинов, таких как альбумин.

Белок в моче (протеинурия) — экскреция белков с мочой, превышающая нормальные (30-50 мг/сут) значения, как правило, выступающая признаком поражения почек.

Нормальным результатом обычного анализа мочи является уровень белка в моче от 0 до 8 мг/дл. Нормальный показатель суточного анализа мочи на белок — меньше 150 мг за 24 часа.

Допустимая норма белка в моче при беременности, которую медики не относят к симптомам каких-либо угроз, – содержание белка до 0,14 г/л.

Существует классификация протеинурии по степеням в зависимости от количества белка выделяемого с мочой в миллиграммах за сутки

Микроальбуминурия (30–150 мг)
Легкая протеинурия (150–500 мг)
Умеренная протеинурия (500–1000 мг)
Выраженная протеинурия (1000–3000 мг)
Нефрит (more than 3500 мг)

Днём с мочой белка выделяется больше, чем ночью. Также белок может быть обусловлен попаданием в мочу влагалищных выделений, менструальной крови, спермы.

Ниже представлены наиболее частые причины появления белка в моче. Белок в моче может быть свидетельством следующих заболеваний:

Миеломная болезнь вызывает появление определенного белка в моче котрый называется М-протеин или миеломны протеин.
Сиситемные заболевания: системная красная волчанка (СКВ) – может проявляться громерулонефритом или волчаночным нефритом, синдром Гуд-Пасчера и т.д.
Сахарный диабет. Белок, обнаруженный в моче при сахарном диабете – альбумин.
Длительно повышенное давление (атериальная гипертензия)
Инфекции. Воспалительные процессы в почках
Химиотерапия
Опухоли мочеполовой системы
Отравления
Травмы почек
Длительные охлаждения
ожоги

Определение концентрации белка в моче является обязательным и важным элементом исследования мочи.

Протеинурия — появление белка в моче, является частым, почти обязательным симптомом поражения почек или мочевыводящих путей. Иногда протеинурия сопровождается отеками, наличием гноя или крови в моче, но чаще всего протеинурия протекает без симптомов.

Как правило микроальбуминурия или легкая протеинурия не сопровождаются клиническим проявлением. Зачастую симптомов нет или они не выражены. Ниже представлены некоторые симптомы, которые чаше встречаются при длительно присутствующей протеинурии.

Боль в костях из-за потери большого количества белка (чаще при миеломной болезни)
Быстрая утомляемость как следствие анемии
Головокружение, сонливость как следствие повышенного уровня кальция в крови
Нефропатия. Может проявляться депонированием белка в пальцах рук и ног
Измененияе цвета мочи. Покраснение или потемнение мочи как следствие присутствия клеток крови. Приобретение белесоватого оттенка по причине присутствия большого количества альбумина.
Озноб и лихорадка при наличии воспаления
Тошнота и рвота, потеря аппетита

Белок в моче и микроальбуминурия диагностируется определением белка в суточной моче (за 24 часовой период). Сбор мочи в течение 24 часов осуществлять пациенту может быть очень неудобно, особенно в условиях повседневной жизни. Таким образом врачи прибегают к определению белка в разовой порции мочи методом электорофореза.

Лабораторный тест с определением количества белка или альбумина в моче особенно рекомендован у лицам с почечной недостаточностью и диабетом.

Если в анализе мочи обнаружено повышенное количество белка, то повторный тест должен быть выполнен через 1-2 недели. Если во втором тесте подтверждается наличие белка в моча, то это подтверждает наличие перманентной протеинурии и следующим этапом должно быть определение функции почек.

Ваш доктор порекомендует вам выполнение биохимического анализа крови для определения уровня азотистых оснований, а именно мочевины и креатинина. Это продукты жизнедеятельности организма, которые в норме элиминируются почками, и если мочевина и креатинин в крови повышены, это указывает на наличие функциональных нарушений в данном органе.

Если белок в моче это следствие сахарного диабета или гипертензии, то безусловно необходимо лечить исходную причину. В случае сахарного диабета ваш врач порекомендует вам соблюдать диету, в случае безуспешности диеты подберет необходимую лекарственную терапию. В отношении артериальной гипертензии важно контролировать артериальное давление. На фармацевтическом рынке в отношении данных заболеваний представлено большое количество препаратов. Несомненно, залогом успеха является правильно подобранная схема лечения. Важно контролировать уровень артериального давления не выше 140/80.

Так же необходим контоль потребления сахара, соли, количества потребляемого белка

источник

У здорового человека незначительное количество белка всегда выделяется с мочой. Согласно современным воззрениям, выделение белка (экскреция) с мочой в количестве более 150 мг/сут является признаком болезненного состояния, которое называется протеинурия. Если в течение суток с мочой выводится более 3500 мг (3,5 г) белка, то это состояние называется нефротической протеинурией. Эти числа рекомендованы Американской академией семейных врачей (American Academy of Family Physicians).

Дискуссия про нормальное содержание белка в моче тесно связана с методом, которым его измеряют. Часто можно встретить информацию, что у здорового человека в моче белок не наблюдается вообще. Причиной этого является использование устаревших лабораторных методов измерения, чувствительность которых не позволяла установить малые концентрации белка. Вообще, у здорового человека количество белка, выводится с мочой колеблется в широких пределах. Появление в справочниках нормы содержания белка мочи в 0,033 г/л (в разовой порции) является следствием использования границ нормы в 20-50 мг/сут (после пересчета на суточное количество мочи в 1,5 литра). Эта граница является также приемлемой, хотя и заниженной, ведь 10-15% здоровых людей имеют большие значения экскреции, вплоть до 150 мг/сут.

С мочой выводятся различные виды белков. Около 20% белков мочи имеют небольшую массу, которая соответствует иммуноглобулинам, 40% – это альбумин, и еще 40% – протеины Тамма-Хорсфла. Кроме того, с мочой в ощутимых количествах выводится трансферрин. Количество других белков в моче меньше доли процента.

История изучения белка в моче

Этот анализ имеет удивительно долгую историю, которая начинается с замечания Гиппократа: «Если пена появляется на поверхности мочи, то это указывает на болезнь почек». Конечно, появление пены свидетельствует о высоком содержании белков, являющихся поверхностно-активными веществами.

Одну из первых попыток научно установить связь между свойствами мочи и болезнями почек осуществил Деккерз (Dekkers) из Нидерландов во второй половине XVII века. Он предложил теорию, согласно которой причиной всех болезней является потеря полезных веществ с мочой. По результатам исследования нескольких образцов мочи он сообщал, что «она имела сладкий вкус и после кипячения с уксусной кислотой появлялся осадок, а маслянистый слой всплывал на поверхность». Жаль, но выдающийся голландец не провёл аналогичных исследований мочи у других пациентов, и поэтому не заметил очевидную связь между протеинурией, гликозурией и состоянием истощения.

Детальное клиническое описание больных тяжелой протеинурией с образованием отеков предоставил Теодор Цвингер III из Базеля в начале XVIII века, впрочем он не проводил химических исследований мочи и не установил связи между состоянием почек и болезнью. Это сделал Доменико Котужно (Cotugno) из Неаполя почти 50 лет назад. Он первым описал альбуминурию в моче при нефротическом синдроме. Доктор Котужно выполнял тест с уксусной кислотой и нагреванием для выявления альбумина в моче, с целью установить эффективность лечения мочегонными средствами. Также он применял этот тест для поиска белка в жидкости отеков (транссудата) и в плазме крови.

Наконец, в начале XIX века связь между протеинурией, заболеванием почек и клиническими признаками нефротического синдрома стала общепризнанным. Джон Блэкал (John Blackall) первым систематически изучил альбуминурию. Он использовал работы Котужно и установил, что обычная моча не должна содержать белок. Блэкал также первым заметил липемический характер сыворотки крови у пациентов с сильною отечностью. Джон Босток (1773-1846) первый связал протеинурию с уменьшением количества белка в крови. Босток, химик и врач из Ливерпуля, количественно оценивал белок в мочу и сыворотке крови методами, которые опирались на изменения удельного веса, и отметил, что чем больше белка в моче, тем ниже его уровень в крови.

Современный взгляд на протеинурию впервые приведены в работе парижского врача Сабатье (Sabatier), опубликованной в 1834 году. Им предложен следующий механизм образования отеков: «. поскольку сыворотка крови обедняется альбумином, она становится более подвижной и легче проходит сквозь стенки артериальных капилляров».

Механизм попадания белка в мочу

Фильтрация плазмы крови с образованием мочи происходит в структуре почки, которая называется нефрон. В нефроне находится сосудистый клубочек или гломерула, представляющая собой извилистые капилляры, поверхность которых имеет многочисленные микроскопические отверстия, т.н. фенестры, через которые и происходит процесс фильтрации плазмы крови, то есть первый этап образования мочи. Диаметр и структура этих отверстий такова, что они пропускают только воду и некоторые соединения, которые должны выводиться из организма.

Далее находится трехслойная базальная мембрана, которую можно представить как сетку из тонких клеточных нитей (микрофибрилл), которая погружена в протеогликановый матрикс – полужидкое вещество, которое состоит из мукополисахаридов, присоединенных к белковым молекулам. Эта базальная мембрана вместе с сосудистым клубочком и большими эпителиальными клетками – подоцитами, формируют комплексный фильтрационный барьер, через который фильтруется кровь и образуется первичная моча. В норме он не пропускает клеток крови и большую часть белков с большой молекулярной массой.

Белки с молекулярной массой менее 20000 дальтон легко проходят через стенку клубочкового капилляра. Однако, следует заметить, что дальнейший путь первичной мочи проходит через проксимальную трубочку (длинный извилистый каналец), где белки частично возвращаются в кровоток (этот процесс называют реабсорбцией). Именно в канальцах полностью поглощаются и возвращаются в кровь глюкоза, вода, хлорид натрия, аминокислоты и витамины.

Виды протеинурии и болезни, при которых увеличивается количество белка в моче

В зависимости от происхождения различают пять типов протеинурии – клубочковая или гломерулярная, тубулярная (канальцевая), протеинурия перегрузки (overflow), постуральная (ортостатическая) и смешанная протеинурия. Из них только постуральная протеинурия может наблюдаться у здорового человека, остальные типы возникают при заболеваниях.

Как уже отмечалось, протеинурия – это увеличение общего количества белка в моче более нормы. В зависимости от того, насколько много белка выделяется с мочой, можно предположить определенные типы протеинурии:

Уровни белка в моче при различных типах протеинурии (при норме до 0,15 г / сут)

Количество белка в моче за сутки	Тип протеинурии
0,15-2,0 г	Легкая гломерулопатия, тубулярная протеинурия, протеинурия перегрузки
2,0-4,0 г	Обычно гломерулярная протеинурия
Більше 4,0 г	Всегда гломерулярная протеинурия

Самой распространенной причиной патологической протеинурии являются заболевания почек, которые поражают сосудистый клубочек или гломерулу. Поэтому такой вид протеинурии получил название клубочковой или гломерулярной. Повреждённые клубочки изменяют свою проницаемость для белков большой массы, что приводит к потере с мочой альбумина и иммуноглобулинов. Гломерулярная протеинурия может привести к значительным потерям белка; его экскреция с мочой в количествах превышающих 2 г в сутки указывает именно на эту форму болезни.

Причиной возникновения гломерулярной (клубочковой) протеинурии является гломерулонефрит. На самом деле, гломерулонефрит – это название, которое объединяет различные болезни, поражающие сосудистый клубочек почки. Причиной гломерулонефрита могут быть инфекции, вызванные микробами (преимущественно стрептококками) или вирусами. Значительное распространение имеет гломерулонефрит у больных сахарным диабетом (диабетическая нефропатия) и у гипертоников. Кроме того, наблюдают гломерулонефрит аутоиммунного происхождения.

Тубулярная протеинурия возникает вследствие болезней, которые мешают процессу реабсорбции (возврат в кровоток) компонентов первичной мочи, который происходит в проксимальных канальцах (тубулах). Этот вид протеинурии характеризуется умеренными потерями белка с мочой, преимущественно менее 2 г/сут, поскольку большая часть белковых молекул фильтруется до попадания в канальцы – в гломерулах (сосудистом клубочке).

К распространенным причинам тубулярной (канальцевой) протеинурии принадлежит гипертоническая нефропатия, вызванная нарушением кровоснабжения почек и различными поражениями тканей почки. Кроме того, широко применяемые препараты группы нестероидных противовоспалительных средств (НПВС) также способны вызвать это расстройство.

Причиной протеинурии перегрузки является синтез организмом значительных количеств низкомолекулярных белков. Их концентрация возрастает до такого уровня, что канальцы не способны эффективно возвращать их в кровоток (осуществлять реабсорбцию) и они поступают в мочу. Чаще всего к появлению протеинурии перегрузки приводит перепроизводство иммуноглобулинов, которое возникает при множественной миеломе (раковое заболевание, которое проявляется неконтролируемым делением плазматических клеток костного мозга).

Смешанный тип протеинурии возникает при гломерулонефрите. Его причиной является поступление значительных количеств альбумина (вследствие поражения гломерулы) в канальцы, где он уменьшает реабсорбцию низкомолекулярных белков, что характерно для канальцевой протеинурии. Таким образом, в случае смешанного типа протеинурии имеются признаки одновременно клубочковой и канальцевой патологии.

Постуральная (ортостатическая) протеинурия наблюдается у здоровых лиц. Под ортостатической протеинурией имеется в виду увеличение поступления белка с мочой при изменении положения тела, наблюдаемой преимущественно в подростковом возрасте. Есть сведения, что ортостатическая протеинурия сопровождается изменениями в тканях почек, следовательно ее доброкачественность и безвредность возможно будет отвергнута в результате дальнейших исследований.

Кроме условно доброкачественной ортостатической протеинурии диагностируется еще и функциональная протеинурия, которая не связана с изменениями в тканях почек. Среди ее причин: эмоциональный стресс, лихорадка, значительная физическая нагрузка, переохлаждение и сердечная недостаточность. После устранения исходной причины уровень белка в моче возвращается в норму.

Способы определения количества белка в моче

Для полуколичественного быстрого определения количества белка в моче в большинстве ситуаций используются тестовые полоски. При отсутствии белка цвет тестовой панели есть желтым. Белки, имеющиеся в моче, реагируют с системой буфер-краситель и меняют цвет панели в разные оттенки зеленого. Результаты оцениваются как негативные (белка менее 100 мг/л), следы (100-200 мг/л), 1 + (300 мг/л), 2+ (1000 мг/л), 3 (3000 мг/л) или 4+ (10000 мг/л). Этот способ преимущественно обнаруживает альбумин; он менее чувствителен к глобулинам.

Преимуществом использования тестовой полоски является простота и доступность, недостатком – небольшая точность. Причиной ложных положительных результатов определения белка в моче с применением тестовой полоски:

щелочная реакция мочи (рН более 7,5)
длительное пребывание ленты в моче;
измерения в концентрированной моче;
большое количество эритроцитов в моче (гематурия);
наличие гноя, спермы или влагалищных выделений в моче;
присутствие в моче пенициллина или сульфаниламидов.

Причиной ложных негативных результатов являются:

измерения в разведенной мочи
наличие в моче преимущественно низкомолекулярных белков (не альбумина).

Остальные методы выполняются в условиях лаборатории. Краткая справка о распространенных лабораторных способах определения содержания общего белка:

Тест с использованием сульфосалициловой кислоты позволяет качественно и надежно контролировать уровень протеинурии. Преимуществом этого теста является его чувствительность к широкому спектру белков, в том числе и низкомолекулярных. Этот метод требует лишь нескольких миллилитров свежей мочи. После реакции с сульфосалициловой кислотой образуется мутность, уровень которой измеряют аппаратно. Ложные результаты вызываются употреблением пенициллина, сульфаниламидов и рентгенографических красителей. Ложно-отрицательный результат возникает с щелочной мочой или разбавленным образцом.

Среди методов, используемых в автоматизированных анализаторах, встречаются колориметрические, турбидиметрические, электрофоретические и иммунологические. Все они имеют свои недостатки и преимущества. Из колориметрических методов биуретовая реакция (Biuret) имеет низкую чувствительность, метод Coomassie Brilliant Blue (кумасси бриллиантовый синий) имеет малый линейный диапазон. Активно применяют колориметрию с использованием красителя пирогалолового красного, который вместе с молибдатами формирует красный комплекс. В присутствии белка образуется сине-пурпурный комплекс, поглощение которого прямо пропорционально концентрации белка в образце.

Дополнительные исследования при увеличенном содержании белка в моче

Результаты измерения уровня белка в моче, полученные с использованием тестовой полоски или сульфосалициловой кислотой, плохо отражают реальное их количество. Пациенты с устойчивой протеинурией должны проводить количественный анализ белка в моче с помощью суточного образца.

Сбор суточного образца проводится так: первая утренняя порция сливается в унитаз, а все последующие, вместе с утренней мочой на следующий день, собираются в емкость соответствующего объема (не менее 2 литров). После добавления последней порции мочи (утром следующего для после начала собирания) вся собранная моча тщательно перемешивается, ее объем записывается, отливается до 50 мл и направляется в лабораторию на исследование, вместе с информацией про ее общее количество.

Для контроля качества собирания в образце мочи следует измерить уровень креатинина. Дело в том, что креатинин выделяется пропорционально мышечной массе, и его количество, выводимое с мочой, остается относительно постоянным. Молодежь и мужчины среднего возраста выделяют от 16 до 26 мг креатинина на килограмм веса в день, а женщины теряют от 12 до 24 мг/кг креатинина в сутки. У пациентов с истощением и пожилых экскреция (выделение) креатинина может быть меньше.

Альтернативой сбору суточного образца мочи, является определение соотношения количества белка в моче к креатинину мочи, которое устанавливается в обычном образце. Опытами доказана эффективность такого определения и его соответствие анализу суточной мочи при некоторых заболеваниях, включая сахарный диабет, преэклампсию и ревматические заболевания. Новые эксперименты показывают, что соотношение белка к креатинину в моче является более точным показателем протеинурии, чем анализ суточного образца. Это соотношение примерно такое же, как и количество граммов белка, выделяемого с мочой за сутки. Например, соотношение менее 0,2 равен 0,2 г белка в сутки и считается пределом нормы, а соотношение 3,5 эквивалентно экскреции 3,5 г белка на 24 часа и считается тяжелой протеинурией.

После выявления протеинурии следует провести микроскопическое исследование осадка мочи. Вместе они могут свидетельствовать о различных расстройства:

Жировые капли и тельца – нефротический синдром (содержание белка должно составлять более 3,5 г в суточной порции мочи)
Лейкоциты или слепок лейкоцитов с бактериями – инфекции мочевыводящих путей;
Слепок лейкоцитов без бактерий – поражение интерстициальной ткани почек;
Неизмененные эритроциты – повреждение мочевыводящих путей в нижней части;
Измененные эритроциты – поражение верхней части мочевыводящих путей
Слепленные эритроциты – поражение гломерул;
Воскообразные, эпителиальные и зернистые цилиндры – хронические болезни почек;
Эозинофилы – острый нефрит, вызванный интоксикацией (например медикаментами);
Гилиановые цилиндры – болезни почек отсутствуют, пациент обезвожен.

Микроскопическая гематурия не приводит к увеличению уровня белка в моче, в отличие от макроскопической. Кроме того, наличие измененных эритроцитов может свидетельствовать о клеточный инсульт и, соответственно, заболевания клубочков (гломерул).

источник

У здоровых людей в суточном количестве мочи содержится 50-100 мг белка.

Обнаружение белка в моче (протеинурия ) — один из наиболее важных и практически значимых признаков поражения почек и мочевыводящих путей, который может быть как изолированным, так и сочетаться с другими изменениями мочевого осадка в виде эритроцитурии, лейкоцитурии, цилиндрурии, бактериурии.

Содержание белка в отдельных порциях мочи, собранной в течение суток, может колебаться в значительных пределах. Для большинства здоровых людей характерна небольшая протеинурия в пределах 50 мг/сут, в то время как в популяции протеинурия достигает более существенных величин. Протеинурия в «норме» имеет негауссовский характер распределения , и верхняя граница протеинурии, равная 0,020-0,050 г/сут или до 0,033 г/л, имеет место у большинства здоровых людей, но не у всех. У незначительной части (10-15%) протеинурия может достигать 150 мг/сут. Кроме того, в клинической практике имеют значение особенности используемых методов, «захватывающих» различный спектр протеинов мочи. Общепринятыми методами (проба с сульфосалициловой кислотой для качественного определения, биуретовая реакция — для количественного) в моче здорового человека белок, как правило, не обнаруживают. Поэтому если в моче при проведении общего анализа мочи обычными методами обнаружены следы белка или концентрация его составляет 0,033 г/л, необходимо повторить анализ, поскольку даже минимальное количество должно настораживать в отношении возможного заболевания почек. В сомнительных случаях следует определять суточную потерю белка с мочой. Для выявления изменений белкового спектра мочи при патологических состояниях необходимо иметь представление не только о качественном, но и количественном составе белков в норме. Днём с мочой белка выделяется больше, чем ночью. Экскреция белка с мочой, превышающая 100-120 мг/сут, часто связана с заболеванием почек, что обусловливает необходимость проведения дальнейшего обследования пациента.

В моче здоровых людей обнаружено более двухсот белков, имеющих различное происхождение: одни фильтруются из плазмы крови, другие имеют почечное происхождение или секретируются эпителием мочевого тракта. При использовании современных методов исследования в норме в моче обнаруживают более 30 белков сыворотки крови. В моче также можно выявить различные тканевые белки, которые способны проходить через клубочек (попадают из поджелудочной железы, сердца, печени, Аг групп крови А и В, трансплантационные Аг и пр.). Часть белков попадает в мочу в результате нормальной тубулярной секреции или естественных процессов обновления почечной ткани: растворимый Аг гломерулярной базальной мембраны, урокалликреин, эритропоэтин.

Референтные величины суточной протеинурии

К белкам почечного происхождения относится и количественно преобладающий белковый компонент нормальной мочи — мукопротеин Тамма-Хорсфалла (в норме в моче 30-50 мг/сут), синтезируемый эпителиальными клетками восходящего отдела петли Хенле и начального сегмента дистальных извитых канальцев за исключением macula densa.

По патогенетическим механизмам развития различают клубочковую, ту-булярную и смешанную протеинурии. Клубочковая протеинурия развивается вследствие структурного повреждения гломерулярных капилляров. К нарушению избирательной проницаемости гломерулярного фильтра приводят патологические иммунные (гуморальные, клеточные) реакции, дегенеративные и склерозирующие процессы. Тубулярная протеинурия возникает в результате нарушения канальцевой абсорбции (заболевания канальцев почек) нескольких фильтруемых в норме белков (у здорового человека они в дальнейшем реабсорбируются и катаболизируются эпителиальными клетками проксимальных канальцев). Кроме того, некоторые протеины секретируют в мочу клетки канальцев. Протеинурия может возникнуть вследствие избыточного образования некоторых белков (концентрация фильтруемого белка в плазме крови превышает способность канальцев ре-абсорбировать его, что наблюдают при парапротеинемиях — миеломной болезни, болезни лёгких цепей). С другой стороны, в ряде случаев протеи-нурия при парапротеинемиях может быть связана и с поражением клубочков (например, вследствие развития амилоидоза).

Тубулярный тип протеинурии характеризуется нарушением реабсорб-ции белков в проксимальных канальцах почек и преимущественной экскрецией с мочой низкомолекулярных протеинов (мол. масса до 40 000). В норме низкомолекулярные белки, профильтровавшиеся из плазмы крови, практически полностью реабсорбируются в проксимальных канальцах. При тубулярных повреждениях реабсорбция низкомолекулярных белков в проксимальных канальцах почек снижается, что приводит к их повышенной экскреции с мочой. Тубулярная протеинурия обычно не превышает 2 г/1,73 м 2 /сут.

Повышение экскреции низкомолекулярных белков наблюдают и при гломерулонефритах (смешанный тип протеинурии), поскольку при высокой фильтрационной нагрузке альбумин снижает тубулярную реабсорбцию низкомолекулярных белков, конкурируя за общие транспортные механизмы. В качестве индикатора тубулярной протеинурии чаще всего используют определение в моче Р₂-микроглобулина (мол. масса 11 800), ретинол-связывающего белка (мол. масса 21 000), а1микроглобулина (мол. масса 27 000), цистатина С (мол. масса 13 000), а также исследуют активность ферментов мочи, имеющих почечное происхождение. Повышение альбуминурии при нормальной экскреции b₂-микроглобулина характерно для клубочковой протеинурии, а преобладающая экскреция b₂-микроглобули-на — для канальцевой протеинурии. Впрочем, экскреция b₂-микроглобу-лина с мочой возможна не только при повреждении почечных канальцев при различных заболеваниях почек, но и при онкологической патологии, миеломной болезни, лимфогранулематозе, болезни Крона, гепатитах и т.д.

Кроме того, существует большая вероятность получения ошибочных результатов исследования из-за влияний факторов преаналитического этапа на содержание этого белка.

Патологическая протеинурия может быть преренальной, ренальной и постренальной.

Преренальная, или «перегрузочная», протеинурия не связана с поражением почек, а возникает в результате ряда заболеваний или патологических состояний, сопровождающихся повышенным синтезом низкомолекулярных белков (с мол. массой 20 000-40 000), которые циркулируют в крови и фильтруются нормальными клубочками, но полностью не реабсорбируются (из-за их высокой концентрации в плазме). Наиболее часто перегрузочная протеинурия представлена лёгкими цепями Ig (белок Бенс-Джонса), миоглобином, Hb, лизо-цимом и наблюдается при миеломной болезни, макроглобулинемии Вальдестрёма, внутрисосудистом гемолизе, рабдомиолизе, моноцитар-ном лейкозе и некоторых других заболеваниях.

Ренальная протеинурия обусловлена поражением клубочков и/или канальцев почек. В зависимости от локализации патологического процесса в нефроне закономерно меняется состав и количество протеинов в моче. При преимущественном поражении клубочков почек в основном страдает процесс фильтрации, что приводит к гломерулярному типу протеинурии, который может быть связан с потерей полианионного слоя или с нарушением целостности гломерулярных базальных мембран. В первом случае через незаряженный барьер проходят низкомолекулярные белки, в том числе альбумин (3,6 нм), трансферрин (4 нм), но не IgG (5,5 нм); во втором случае в мочу попадают и крупномолекулярные белки. Способность повреждённого клубочкового барьера пропускать в мочу белковые молекулы различной молекулярной массы меняется в зависимости от степени и характера повреждения. По составу белков мочи выделяют три типа протеинурии: высокоселективный, селективный и неселективный. При высокоселективном типе в моче обнаруживают низкомолекулярные белковые фракции (до 70 000, в основном альбумин). При селективной протеинурии в моче выявляют белки как при высокоселективном типе, так и с мол. массой до 150 000, при неселективной протеинурии — с мол. массой 830 000-930 000. Для характеристики селективности протеинурии определяют индекс селективности, который рассчитывают как отношение клиренсов высокомолекулярных белков (чаще всего IgG) к низкомолекулярным (альбумину или трансферрину). Низкая величина этого отношения ( 0,1 свидетельствует о неселективном характере протеинурии. Таким образом, индекс селективности протеинурии отражает степень проницаемости клубочкового фильтрационного барьера для макромолекул. Это имеет важное диагностическое значение, так как селективная протеинурия характерна для пациентов с болезнью минимальных изменений и предполагает высокую чувствительность к терапии ГК. В то же время неселективная протеинурия связана с более грубыми изменениями базальной мембраны и возникает при различных морфологических вариантах первично хронического гломерулонефрита (мембранозная нефропатия, мембранозно-пролиферативный гломеруло-нефрит, фокально-сегментарный гломерулосклероз), вторичном гломеру-лонефрите и, как правило, свидетельствует о резистентности к ГК.

? Постренальная протеинурия обусловлена попаданием воспалительного экссудата, богатого белком, в мочу при заболеваниях мочевыводящих путей (цистит, простатит).

В зависимости от суточной потери белка выделяют следующие степени протеинурии.

Слабо выраженная — экскреция белка 0,1-0,3 г/сут.

Умеренная — экскреция белка 0,5-1 г/сут.

Выраженная — экскреция белка 1-3 г/сут.

Более высокие степени протеинурии расценивают как проявление нефротического синдрома.

Определение содержания белка в суточном количестве мочи даёт более полное представление о заболевании и должно быть обязательным при обследовании больных с любой патологией почек. Определение содержания белка в суточной моче позволяет врачу адекватно оценивать потери белка у пациента (и, соответственно, проводить их коррекцию), активность патологического процесса в почках и эффективность проводимого лечения.

Для определения достоверной величины протеинурии необходимо правильно собрать суточную мочу. В случае сомнений в достоверности сбора суточной мочи это легко проконтролировать, определив концентрацию креатинина в анализируемой моче. У женщин с нормальной мышечной массой выделение креатинина составляет 15-20 мг/(кг.сут), у мужчин — 20-25 мг/(кг.сут). Получение в результате расчётов величин ниже указанных, вне зависимости от количества доставленной на исследование мочи, свидетельствует о её неправильном сборе. В таких случаях результаты суточной протеинурии будут недостоверны (занижены).

У здоровых людей белок Бенс-Джонса в моче отсутствует. Приблизительно в 20% случаев множественной миеломы опухолевые клетки синтезируют только лёгкие цепи Ig. Из-за низкой молекулярной массы они быстро удаляются из кровотока и не могут быть обнаружены в сыворотке крови. Однако их можно выявить в моче. Лёгкие цепи Ig, которые осаждаются при нагревании мочи до температуры 45-55 °C известны как белок Бенс-Джонса. Белок Бенс-Джонса находят в моче при парапротеинемиях (ми-еломная болезнь, болезнь Вальденстрёма, некоторые формы ретикулёзов и лимфаденозов).

Парапротеины в моче в норме отсутствуют.

При иммуноглобулинопатии увеличение концентрации сывороточных протеинов, в особенности макроглобулинов, или Ig, объединённых в иммунные комплексы с факторами свёртывания крови или иными Аг, обусловливает повышение вязкости крови, что в свою очередь приводит к нарушениям кровообращения в мелких сосудах и повреждению их стенок иммунными комплексами. В этих случаях в первую очередь страдают почки, что проявляется протеинурией. Характеристика протеинурий необходима для уточнения природы иммуноглобулинопатий. Одна из причин протеинурии — появление патологических белков в моче у больных мие-ломной болезнью. Повышенное содержание общего белка мочи отмечают почти у 90% таких больных. Иммуноэлектрофорез белков мочи позволяет выявить патологические PIgА, РIgМ, PIgG, Н-цепи, белок Бенс-Джонса. Приблизительно 15-20% всех случаев миеломной болезни представлены миеломой Бенс-Джонса, характеризующейся образованием исключительно моноклональных лёгких цепей. Моноклональные лёгкие цепи также обнаруживают в 50-60% случаев IgG- и IgA-парапротеинемий и практически у всех больных D-миеломой. При макроглобулинемии Вальденстрёма белок Бенс-Джонса обнаруживают в 60-70% случаев, но общее количество белка в моче не превышает 200 мг/сут. Идентификация белка Бенс-Джон-са в моче имеет особое диагностическое и прогностическое значение. Этот белок, проникая в канальцы, повреждает их эпителий и инфильтрирует интерстиций, в результате чего происходит склерозирование стромы почки, что приводит к развитию почечной недостаточности — наиболее частой причиной летального исхода при миеломной болезни. При обнаружении белка Бенс-Джонса необходимо его типирование: нефротоксическое действие белка типа лямда значительно выше, чем белка типа к.

Выделение белка Бенс-Джонса с мочой, как правило, свидетельствует о наличии опухолевого процесса, поскольку при реактивных парапроте-инемиях он не образуется. Поэтому раннее выявление белка Бенс-Джонса в моче даже в следовых количествах необходимо для ранней диагностики множественной миеломы. Следует помнить, что выделение белка Бенс-Джонса с мочой наблюдают почти в 50% случаев хронического лейкоза.

источник

Почечная (истинная) протеинурия бывает функциональной и органической. Среди функциональной почечной протеинурии наиболее часто наблюдаются следующие ее виды:

— физиологическая протеинурия новорожденных, которая исчезает на 4— 10-й день после рождения, а у недоношенных несколько позже;
— ортостатическая альбуминурия, которая характерна для детей в возрасте 7—18 лет и появляется только в вертикальном положении тела;
— транзиторная (инсультная) альбуминурия, причиной которой могут быть различные заболевания органов пищеварения, тяжелая анемия, ожоги, травмы или физиологические факторы: тяжелая физическая нагрузка, переохлаждение, сильные эмоции, обильная, богатая белком пища и др.

Органическая (почечная) протеинурия наблюдается вследствие прохождения белка из крови через поврежденные участки эндотелия почечных клубочков при заболеваниях почек (гломерулонефрит, нефроз, нефросклероз, амилоидоз, нефропатия беременных), расстройствах почечной гемодинамики (почечная венная гипертензия, гипоксия), трофических и токсических (в том числе лекарственных) воздействиях на стенки капилляров клубочков.

Большинство качественных и количественных методов определения белка в моче основаны на его коагуляции в объеме мочи или на границе сред (мочи и кислоты).

Среди качественных методов определения бедка в моче наибольшее распространение получили унифицированная проба с сульфосалициловой кислотой и кольцевая проба Геллера.

Унифицированная проба с сульфасалициловой кислотой проводится следующим образом. В 2 пробирки наливают по 3 мл профильтрованной мочи. В одну из них прибавляют 6—8 капель 20 % раствора сульфасалициловой кислоты. На темном фоне сравнивают обе пробирки. Помутнение мочи в пробирке с сульфасалициловой кислотой указывает на наличие белка. Перед исследованием необходимо определить реакцию мочи, и если она щелочная, то подкислить 2—3 каплями 10 % раствора уксусной кислоты.

Проба Геллера основана на том, что при наличии белка в моче на границе азотной кислоты и мочи происходит его коагуляция и появляется белое кольцо. В пробирку наливают 1—2 мл 30 % раствора азотной кислоты и осторожно по стенке пробирки наслаивают точно такое же количество профильтрованной мочи. Появление белого кольца на границе двух жидкостей указывает на наличие белка в моче. Следует помнить, что иногда белое кольцо образуется при наличии большого количества уратов, но в отличие от белкового кольца оно появляется несколько выше границы между двумя жидкостями и растворяется при нагревании [Плетнева Н.Г., 1987].

Из количественных методов наиболее часто применяются:

1) унифицированный метод Брандберга—Робертса—Стольникова, в основу которого положена кольцевая проба Геллера;
2) фотоэлектроколориметрический метод количественного определения белка в моче по помутнению, образующемуся при добавлении сульфасалициловой кислоты;
3) биуретовый метод.

Выявление белка в моче упрощенным ускоренным методом проводят колориметрическим методом с помощью индикаторной бумаги, которую выпускают фирмы «Lachema» (Словакия), «Albuphan», «Ames» (Англия), «Albustix», «Boehringer» (Германия), «Comburtest» и др. Метод заключается в погружении в мочу специальной бумажной полоски, пропитанной тетрабромфеноловым синим и цитратным буфером, которая меняет свой цвет от желтого до синего в зависимости от содержания белка в моче. Ориентировочно концентрацию белка в исследуемой моче определяют с помощью стандартной шкалы. Для получения правильных результатов необходимо соблюдать следующие условия. рН мочи должна быть в пределах 3,0—3,5; при слишком щелочной моче (рН 6,5) будет получен ложноположительный результат, а при слишком кислой моче (рН 3,0) — ложноотрицательный.

Бумага должна находиться в контакте с исследуемой мочой не дольше, чем указано в инструкции, в противном случае тест даст ложноположительную реакцию. Последнюю также наблюдают и при содержании в моче большого количества слизи. Чувствительность различных видов и серий бумаги может быть различной, поэтому к количественной оценке белка в моче этим методом следует относиться осторожно. Определение его количества в суточной моче при помощи индикаторной бумаги невозможно [Плетнева Н.Г., 1987]

Существует несколько способов определения количества белка, выделившегося с мочой за сутки. Наиболее простым является метод Брандберга —Робертса—Стольникова.

Методика. 5-10 мл тщательно перемешанной суточной мочи наливают в пробирку и осторожно по стенкам ее добавляют 30 % раствор азотной кислоты. При наличии белка в моче в количестве 0,033 % (т.е. 33 мг на 1 л мочи) через 2-3 мин появляется тонкое, но четко видимое белое кольцо. При меньшей его концентрации проба отрицательная. При большем содержании белка в моче его количество определяют путем многократных разведений мочи дистиллированной водой до тех пор, пока не перестанет образовываться кольцо. В последней пробирке, в которой еще видно кольцо, концентрация белка будет составлять 0,033 %. Умножив 0,033 на степень разведения мочи, определяют содержание белка в 1 л неразведенной мочи в граммах. Затем рассчитывают содержание белка в суточной моче по формуле:

где К — количество белка в суточной моче (г); х — количество белка в 1 л мочи (г); V — количество мочи, выделенное за сутки (мл).

В норме в течение суток с мочой выделяется от 27 до 150 мг (в среднем 40—80 мг) белка.

Указанная проба позволяет определить в моче только мелкодисперсные белки (альбумины). Более точные количественные методы (колориметрический метод Кьельдаля и др.) довольно сложны и требуют специальной аппаратуры.

При почечной протеинурии с мочой выделяются не только альбумины, но и другие виды белка. Нормальная протеинограмма (по Зейцу и соавт., 1953) имеет следующее процентное содержание: альбуминов — 20 %, α₁-глобулинов — 12 %, α₂-глобулинов — 17 %, γ-глобулинов — 43 % и β-глобулинов — 8 %. Отношение альбуминов к глобулинам изменяется при различных заболеваниях почек, т.е. нарушается количественное соотношение между белковыми фракциями.

Наиболее распространенными методами фракционирования уропротеинов являются следующие: высаливание нейтральными солями, электрофоретическое фракционирование, иммунологические методы (реакция радиальной иммунодиффузии по Манчини, иммуноэлектрофоретический анализ, преципитационный иммуноэлектрофорез), хроматография, гель-фильтрация, а также ультрацентрифугирование.

В связи с внедрением методов фракционирования уропротеинов, основанных на изучении электрофоретической подвижности, вариабильности молекулярной массы, размеров и формы молекул уропротеинов, появилась возможность выделять характерные для того или иного заболевания типы протеинурии, изучать клиренсы индивидуальных плазменных белков. К настоящему времени в моче идентифицировано свыше 40 плазменных белков, В том числе в нормальной моче 31 плазменный белок [Berggard, 1970].

В последние годы появилось понятие селективности протеинурии. В 1955 г. Hardwicke и Squire сформулировали понятие «селективная» и «неселективная» протеинурия, определив, что фильтрация плазменных белков в мочу подчиняется определенной закономерности: чем больше молекулярная масса белка, экскретируемого в мочу, тем меньше его клиренс и тем ниже концентрация его в окончательной моче. Протеинурия, соответствующая этой закономерности, является селективной в отличие от неселективной, для которой характерным является извращение выведенной закономерности.

Обнаружение в моче белков с относительно большой молекулярной массой свидетельствует об отсутствии избирательности почечного фильтра и выраженном его поражении. В этих случаях говорят о низкой селективности протеинурии. Поэтому в настоящее время широкое распространение получило определение белковых фракций мочи с использованием методов электрофореза в крахмальном и полиакриламидном геле. По результатам этих методов исследования можно судить о селективности протеинурии.

По данным В.С.Махлиной (1975), наиболее оправданным является определение селективности протеинурии путем сравнения клиренсов 6—7 индивидуальных белков плазмы крови (альбумина, транеферрина, α₂ — макроглобулина, IgA, IgG, IgM) с использованием точных и специфичных количественных иммунологических методов реакции радиальной иммунодиффузии по Манчини, иммуноэлектрофоретического анализа и преципитального иммуноэлектрофореза. Степень селективности протеинурии определяют по индексу селективности, представляющего собой отношение сравниваемого и эталонного белков (альбумина).

Изучение клиренсов индивидуальных плазменных белков позволяет получить достоверные сведения о состоянии фильтрационных базальных мембран клубочков почки. Связь между характером экскретируемых в мочу белков и изменениями базальных мембран клубочков настолько выражена и постоянна, что по уропротеинограмме можно косвенно судить о патофизиологических изменениях в клубочках почек. В норме средний размер пор гломерулярной базальной мембраны составляет 2,9—4 А° НМ, которые могут пропускать белки, имеющие молекулярную массу до 10 4 (миоглобулин, кислый α₁ — гликопротеин, легкие цепи иммуноглобулинов, Fc и Fab — фрагменты IgG, альбумин и трансферрин).

При гломерулонефрите, нефротическом синдроме размеры пор в базальных мембранах клубочков увеличиваются, в связи с чем базальная мембрана становится проницаемой для белковых молекул большого размера и массы (церулоплазмин, гаптоглобин, IgG, IgA и др.). При крайней степени повреждения клубочков почек в моче появляются гигантские молекулы белков плазмы крови (α₂-макроглобулин, IgM и β₂-липопротеин).

Определяя белковый спектр мочи, можно сделать заключение о преимущественном поражении тех или иных участков нефрона. Для гломерулонефрита с преимущественным поражением гломерулярных базальных мембран характерно наличие в моче крупно- и среднемолекулярных белков. Для пиелонефрита с преимущественным поражением базальных мембран канальцев характерны отсутствие крупномолекулярных и наличие повышенных количеств средне- и низкомолекулярных белков.

Концентрацию этого белка в плазме крови и моче определяют радиоиммунологическим методом с помощью стандартного набора «Phade-bas β₂-mikroiest» (фирма «Pharmaсia», Швеция). В сыворотке крови здоровых людей содержится в среднем 1,7 мг/л (колебания от 0,6 до 3 мг/л), в моче — в среднем 81 мкг/л (максимально 250 мкг/л) β₂-микроглобулина. Превышение его в моче свыше 1000 мкг/л — явление патологическое. Содержание β₂-микроглобулина в крови увеличивается при заболеваниях, сопровождающихся нарушением клубочковой фильтрации, в частности при остром и хроническом гломерулонефрите, поликистозе почек, нефросклерозе, диабетической нефропатии, острой почечной недостаточности.

Концентрация β₂-микроглобулина в моче повышается при заболеваниях, сопровождающихся нарушением реабсорбционной функции канальцев, что приводит к увеличению экскреции его с мочой в 10—50 раз, в частности, при пиелонефрите, ХПН, гнойной интоксикации и др. Характерно, что при цистите в отличие от пиелонефрита не наблюдается увеличения концентрации β₂-микроглобулина в моче, что может быть использовано для дифференциальной диагностики этих заболеваний. Однако при интерпретации результатов исследования надо учитывать, что любое повышение температуры всегда сопровождается увеличением экскреции β₂-микроглобулина с мочой.

Средние молекулы (СМ), иначе называемые белковыми токсинами, представляют собой вещества с молекулярной массой 500—5000 дальтон. Физическая структура их неизвестна. В состав СМ входят по меньшей мере 30 пептидов: окситоцин, вазопрессин, ангиотензин, глюкагон, адренокортикотропный гормон (АКТГ) и др. Избыточное накопление СМ наблюдается при снижении функции почек и содержании в крови большого количества деформированных белков и их метаболитов. Они обладают разнообразным биологическим действием и нейротоксичны, вызывают вторичную иммунодепрессию, вторичную анемию, угнетают биосинтез белка и эритропоэз, тормозят активность многих ферментов, нарушают течение фаз воспалительного процесса.

Уровень СМ в крови и моче определяют скрининговым тестом, а также путем спектрофотометрии в ультрафиолетовой зоне по длине волны 254 и 280 мм на спектрофотометре ДИ-8Б, а также динамической спектрофотометрии с компьютерной обработкой в диапазоне волн 220—335 нм на том же спектрометре фирмы Beckman. За норму принимают содержание СМ в крови, равное 0,24 ± 0,02 усл. ед., а в моче — 0,312 ± 0,09 усл. ед.
Будучи нормальными продуктами жизнедеятельности организма, они удаляются из него в норме ночками путем гломерулярной фильтрации на 0,5 %; 5 % их утилизируется другим путем. Все фракции СМ подвергаются канальцевой реабсорбции.

Кроме белков плазмы крови, в моче могут быть неплазменные (тканевые) протеины. По данным Buxbaum и Franklin (1970), неплазменные белки составляют приблизительно 2/3 всех биоколлоидов мочи и значительную часть уропротеинов при патологической протеинурии. Тканевые белки попадают в мочу непосредственно из почек или органов, анатомически связанных с мочевыми путями, или попадают из других органов и тканей в кровь, а из нее через базальные мембраны клубочков почки — в мочу. В последнем случае экскреция в мочу тканевых протеинов происходит аналогично выведению плазменных белков различной молекулярной массы. Состав неплазменных уропротеинов чрезвычайно разнообразен. Среди них гликопротеины, гормоны, антигены, ферменты (энзимы).

Тканевые протеины в моче выявляют с помощью обычных методов белковой химии (ультрацентрифугирование, гель-хроматография, различные варианты электрофореза), специфических реакций на ферменты и гормоны и иммунологических методов. Последние позволяют также определить концентрацию неплазменного уропротеина в моче и в ряде случаев определить тканевые структуры, ставшие источником его появления. Основным методом выявления в моче неплазменного белка является иммунодиффузионный анализ с антисывороткой, полученной иммунизацией экспериментальных животных мочой человека и истощенной (адсорбированной) в последующем белками плазмы крови.

При патологическом процессе наблюдаются глубокие нарушения жизнедеятельности клеток, сопровождающиеся выходом внутриклеточных ферментов в жидкостные среды организма. Энзимодиагностика базируется на определении ряда ферментов, выделившихся из клеток пораженных органов и не свойственных сыворотке крови.
Исследования нефрона человека и животных показали, что в отдельных его частях имеется высокая ферментативная дифференциация, тесно связанная с функциями, которые выполняет каждый отдел. В клубочках почки содержится относительно небольшое количество различных энзимов.

Клетки почечных канальцев, особенно проксимальных отделов, содержат максимальное количество энзимов. Высокая их активность наблюдается в петле Генле, прямых канальцах и собирательных трубочках. Изменения активности отдельных энзимов при различных заболеваниях почек зависят от характера, остроты и локализации процесса. Они наблюдаются до появления морфологических изменений в почках. Поскольку содержание различных ферментов четко локализовано в нефроне, определение того или иного фермента в моче может способствовать топической диагностике патологического процесса в почках (клубочки, канальцы, корковый или мозговой слой), дифференциальной диагностике почечных заболеваний и определению динамики (затухание и обострение) процесса в почечной паренхиме.

Дли дифференциальной диагностики заболеваний органов мочеполовой системы применяют определение активности в крови и моче следующих ферментов: лактатдегидрогеназы (ЛДГ), лейцинаминопептидазы (ЛАП), кислой фосфатазы (КФ), щелочной фосфатазы (ЩФ), β-глюкуронидазы, глютамино-щавелевоуксусной трансаминазы (ГЩТ), альдолазы, трансамидиназы и др. Активность ферментов в сыворотке крови и в моче определяют с помощью биохимических, спектрофотометрических, хроматографических, флуориметрических и хемилюминесцентных методов.

Энзимурия при заболеваниях почек более выражена и закономерна, чем энзимемия. Она особенно сильно выражена в острой стадии заболевания (острый пиелонефрит, травма, распад опухоли, инфаркт почки и т.д.). При этих заболеваниях обнаруживается высокая активность трансамидиназы, ЛДГ, ЩФ и КФ, гиалуронидазы, ЛАП, а также таких неспецифических энзимов, как ГЩТ, каталаза [Полянцева Л.Р., 1972].

Селективная локализация ферментов в нефроне при обнаружении ЛАП и ЩФ в моче позволяет с уверенностью говорить об острых и хронических заболеваниях почек (острая почечная недостаточность, некроз почечных канальцев, хронический гломерулонефрит) [Шеметов В.Д., 1968]. По данным А.А.Карелина и Л.Р.Полянцевой (1965), трансамидиназа содержится лишь в двух органах — почке и поджелудочной железе. Она является митохондриальным ферментом почек и в норме в крови и моче отсутствует. При различных заболеваниях почек трансамидиназа появляется в крови и в моче, а при поражении поджелудочной железы — только в крови.

Дифференциальным тестом в диагностике гломерулонефрита и пиелонефрита Krotkiewski (1963) считает активность ЩФ в моче, повышение которой более характерно для пиелонефрита и диабетического гломерулосклероза, чем для острого и хронического нефрита. Нарастающая в динамике амилаземия при одновременном снижении амилазурии может указывать на нефросклероз и сморщивание почки, ЛАП имеет наибольшее значение при патологических изменениях в клубочках и извитых канальцах почки, поскольку содержание ее в этих отделах нефрона более высокое [Шепотиновский В.П. и др., 1980]. Для диагностики волчаночного нефрита рекомендуется определение β-глюкуронидазы и КФ [Приваленко М.Н. и др., 1974].

При оценке роли энзимурии в диагностике заболеваний почек следует учитывать следующие положения. Энзимы, будучи по своей природе белками, при малой молекулярной массе могут проходить через неповрежденные клубочки, определяя так называемую физиологическую энзимурию. Среди этих энзимов постоянно определяются в моче α-амилаза (относительная молекулярная масса 45 ООО) и уропепсин (относительная молекулярная масса 38000).

Наряду с низкомолекулярными энзимами в моче здоровых лиц могут быть обнаружены в небольшой концентрации и другие энзимы: ЛДГ, аспартат- и аланинаминотрансферазы, ЩФ и КФ, мальтаза, альдолаза, липаза, различные протеазы и пептидазы, сульфатаза, каталаза, рибонуклеаза, пероксидаза [King, Воусе, 1963].

Высокомолекулярные энзимы с относительной молекулярной массой больше 70000-100000, по мнению Richterich (1958) и Hess (1962), могут проникать в мочу лишь при нарушении проницаемости клубочкового фильтра. Нормальное содержание ферментов в моче не позволяет исключить патологический процесс в почке при окклюзии мочеточника. При эпзимурии возможен выход энзимов не только из самих почек, но и из других паренхиматозных органов, клеток слизистых оболочек мочевых путей, предстательной железы, а также форменных элементов мочи при гематурии или лейкоцитурии.

Большинство энзимов неспецифично по отношению к почке, поэтому откуда происходят энзимы, обнаруженные в моче здоровых и больных, установить трудно. Однако степень энзимурии даже дли неспецифичных энзимов при поражении почек бывает выше нормы или той, которая наблюдается при заболеваниях других органов. Более ценную информацию может дать комплексное исследование в динамике ряда ферментов, особенно органоспецифичных, таких как трансаминаза.

В решении вопроса о почечном происхождении энзима в моче помогает исследование изоэнзимов с выявлением фракций, типичных для изучаемого органа. Изоэнзимы — это энзимы, изогенные по действию (катализируют одну и ту же реакцию), но гетерогенные по химической структуре и другим свойствам. Каждая ткань имеет характерный для нее изоэнзимный спектр. Ценными методами разделения изоэнзимов являются электрофорез в крахмальном и полиакриламидном геле, а также ионообменная хроматография.

При миеломной болезни и макроглобулинемии Вальденстрема в моче обнаруживают белок Бенс-Джонса. Метод обнаружения названного белка в моче основан на реакции термопреципитации. Применявшиеся ранее методы, с помощью которых оценивают растворение этого белка при температуре 100 °С и повторное осаждение при последующем охлаждении, ненадежны, так как не все белковые тела Бенс-Джонса обладают соответствующими свойствами.

Более достоверно выявление этого парапротеина путем осаждения его при температуре 40 -60 °С. Однако и в этих условиях осаждения может не произойти в слишком кислой (рН 6,5) моче, при низкой ОПМ и низкой концентрации белка Бенс-Джонса. Наиболее благоприятные условия для его осаждения обеспечивает методика, предложенная Patnem: 4 мл профильтрованной мочи смешивают с 1 мл 2 М ацетатного буфера рН 4,9 и согревают 15 мин на водяной бане при температуре 56 °С. При наличии белка Бенс-Джонса в течение первых 2 мин появляется выраженный осадок.

При концентрации белка Бенс-Джонса меньше 3 г/л проба может быть отрицательной, но на практике это встречается крайне редко, поскольку его концентрация в моче, как правило, более значительна. На пробы с кипячением нельзя вполне полагаться. С полной достоверностью он может быть обнаружен в моче иммуно-электрофоретическим методом с использованием специфических сывороток против тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов.

источник