Неферментирующие грамотрицательные бактерии в моче

НЕФЕРМЕНТЙРУЮЩИЕ ГРАМ-ОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ БАКТЕРИИ —

гетерогенная группа бактерий, не вызывающих процессов брожения.

Большинство Н. г. б., исследуемых в бактериол. лабораториях, следует рассматривать как условно-патогенные микроорганизмы (см.). Частота их выделения из клин, материала и объектов окружающей среды составляет ок. 15%. Неферментирующие грамотрицательные бактерии относятся к различным таксономическим подразделениям, они встречаются среди представителей рода Agrobacterium — A. radiobacter, рода Acinetobacter — A. calcoace-ticus (син. Hereljea vaginicola, Bacterium anitratum, Moraxella lwoffi), рода Alcaligenes — A. denitrificans,

A. faecalis (син. A. odorans), A. xylosoxidans (син. Achromobacter xylosoxidans), рода Bordetella —

B. bronchiseptica (син. B. bronchi-canis), рода Flavobacterium — F. me-ningosepticum, F. odoratum, рода Flavobacter — F. breve, F. multvo-rum, F. spiritivorum, рода Kingel-la — K. kingae, K. denitrificans, K. indologenes, рода Moraxella — M. bovis, M. lacunata (син. M. liquefaciens), M. atlantae, M. nonli-quefaciens, var. oxidans, M. osloen-sis, M. phenylpyruvica, M. urethralis, более 20 видов рода Pseudomonas — Ps. aeruginosa, Ps. fluorescens, Ps. mallei, Ps. pseudomallei, Ps. putida и др.

Неферментирующие грамотрицательные бактерии не образуют спор, многие имеют капсулу. Среди них встречаются как подвижные, так и неподвижные бактерии. У моракселл и ацинетобактера описана своеобразная «дергающая» подвижность. Многие Н. г. б. хорошо растут на обычных питательных средах. Колонии флавобактерий и нек-рых псевдомонад пигментированы. Большинство Н. г. б. утилизирует органические соединения путем окисления без образования газообразных продуктов; все Н. г. б. не продуцируют ацетилметилкарбинола. За исключением ацинетобактера и нек-рых видов псевдомонад, эти бактерии оксидазоположительны. Эйке-неллы и кингеллы не образуют ката-лазы. Н. г. б. являются строгими аэробами, хотя нек-рые псевдомонады и ацинетобактер способны к анаэробному росту в присутствии нитратов. Флавобактерии и кингеллы обладают слабой ферментативной активностью. Среди Н. г. б. определяются как высокочувствительные к антимикробным агентам, так и устойчивые к ним штаммы. Устойчивость часто контролируется плазмидными генами (см. Плазмиды). Многие Н. г. б. обладают повышенной чувствительностью к высокой температуре, но радиорезистентны. Содержание гуанин + цитозин в ДНК этих микроорганизмов колеблется в пределах 31—74,5 молъ%.

Главные места обитания Н. г. б.— вода и почва; выделяют их и из пищевых продуктов, подвергнутых замораживанию или воздействию ионизирующего излучения, а также обнаруживают в организме здоровых людей и животных.

В патогенезе заболеваний, вызываемых Н. г. б., основная роль принадлежит эндотоксинам. Эти бактерии часто вызывают лизис эритроцитов, как обусловленный продукцией гемолизинов, так и не связанный с ними. При заболеваниях человека Н. г. б. составляют до 20% от общего числа выделяемых гемокультур, почти в 10% случаев выделяются из желчи и мочи у лиц с поражениями желчевыводящей и мочеполовой систем. Ок. 7% культур, выделяемых при глазных инфекциях, являются Н. г. б. Увеличивается число пневмоний, менингитов, послеране-вых инфекций и других заболеваний, вызываемых этими бактериями. Внутрибольничные инфекции, связанные с Н. г. б., нередко заканчиваются летально.

Для лаб. диагностики заболеваний, вызванных Н. г. б., применяют в основном бактериологический метод (см. Бактериологические методики). Посев материала производят на кровяные среды и таурохолевый агар Мак-Конки (см. Мак-Конки среды) или на среду Эндо (см. Эндо среда) с последующим отбором колоний и пересевом их в трехсахарный агар с железом или в специальную среду OF (oxidative-fermentative) с различными углеводами. Идентификацию Н. г. б. проводят по схемам, к-рые включают определение нигмен-тообразования, роста при /°42°, подвижности, числа и локализации жгутиков, продукции цитохромокси-дазы, каталазы, аргенингидролазы, лизиндеркарбоксилазы, желатиназы, уреазы, нитратредуктазы, дезоксирибонуклеазы, индола и нек-рых других свойств. При необходимости для стимуляции роста Н. г. б. к средам добавляют сыворотку или асцитическую жидкость. Использование полного набора тестов позволяет идентифицировать до 97% неферментирующих грамотрицатель-ных бактерий.

Библиогр.: Л и т о в ч е н к о П. П. и

Забот и на И. В. Морфологические, культуральные и биохимические свойства культур синегнойных бактерий, выделенных от больных людей, животных и из объектов внешней среды, Журн. микр., эпид. и иммун-, № 5, с. 78, 1981; Шен-деров Б. А. и С e р к о в а Г. П. Неферментирующие грамотрицательные бактерии, Сообщ. 2, Moraxella, там же, № 3, с. 14, 1979; они же, Неферментирующие грамотрицательные бактерии, Сообщ. 3, Acinetobacter, там же, № 5, с. 9; они же, Простые схемы идентификации неферментирующих грамотри-цательных бактерий, в кн.: Вопр. биохимии и физиол. микроорганизмов, под ред.

В. В. Игнатова и др., в. 8, с. 60, Саратов, 1980; Holmes В., Owen R. J. a. Hollis D. G. Flavobacterium spi-ritivorum, a new species isolated from human clinical specimens, Int. J. system. Bact., v. 32, p. 157, 1982; Manual of clinical microbiology, ed. by E. H. Lennette a. o., p. 263, 288, Washington, 1980; Owen R. J. a. Jackman P. J. H. The similarities between Pseudomonas pau-cimobilis and allied bacteria derived from analysis of deoxyribonucleic acids and ele^ ctrophoretic protein patterns, J. gen. Micros biol., v. 128, p. 2945, 1982; Y a b u u-chi E., Yamanaka K. a. Ohya-m a A. Evaluation of 36 Minitek tests and a new approach for identification ofnonfer-menters, J. clin. Microbiol., v. 13, p. 572, 1981. Б. А. тендеров.

источник

Неферментирующие грамотрицательные бактерии: морфология, физиологические свойства, лабораторная диагностика. Опасные инфекции, вызываемые псевдомонадами. Биологические свойства и применение бактерий рода Alcaligenes. Сущность и цели теста Хью-Лейфсона.

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Размещено на http://www.allbest.ru/

1. Морфология, физиологические свойства и лабораторная диагностика

Группу аэробных неферментирующих грамотрицательных палочек составляют неприхотливые бактерии, не требовательные к составу культуральных сред, что отличает их от других грамотрицательных бактерий. (НГОБ) — разнородная группа палочковидных, овоидных или кокковидных аспорогенных подвижных или неподвижных хемоорганотрофных аэробных бактерий.

Из организма человека при различных поражениях выделяют представителей родов Pseudomonas, Alcaligenes и Flavobacterium. Среди инфекционных заболеваний у человека доминируют поражения, вызванные Pseudomonas aeruginosa (синегнойной палочкой). Физиологические свойства неферментирующих палочек более точно определяет термин неферментирующие бактерии, так как они разлагают углеводы, не используя их в качестве источника энергии, а окисляют их, что легко установить при помощи теста Хью-Лейфсона.

Тест Хью-Лейфсона. Свойства неферментирующих палочек. Тест Хью-Лейфсона позволяет выявить способность различных бактерий окислять и/или ферментировать глюкозу. Для этого исследуемый материал засевают в две пробирки со средой, содержащей глюкозу. Первую инкубируют в аэробных условиях для выявления способности к окислению (для окисления необходим кислород), вторую — в анаэробных для выявления ферментации. Тест используют для дифференцировки псевдомонад, окисляющих глюкозу, от ферментирующих её бактерий (например, энтеробахтерий).

В мазках располагаются одиночно, парами или короткими цепочками. НГОБ не изменяет стандартных углеводных сред из-за слабой ферментативной активности или нейтрализации кислых соединений щелочными продуктами распада пептона, могут утилизировать сахара и спирты путем окисления, реже — щелочения. Для выявления сахаролитических св-в у НГОБ необходимо использовать высокие концентрации сахара, небольшой объем сред с углеводами и большую посевную дозу бактерий. НГОБ обитают в воде и почве, выделяются из пищевых продуктов, в т ч. замороженных и стерилизованных радиацией. Обнаруживаются в испражнениях, моче, содержимом дыхательных путей, на коже. Условно-патогенны для человека, вызывая у него заболевания мочеполовых путей и кишечника; инфицирование ожоговых, операционных и травматических ран; пневмонии, менингит, отиты и др. Заболевания, как правило, возникают у лиц со сниженным местным и общим иммунитетом в результате активации местной флоры или заноса бактерий с катетерами, бронхоскопами, ингаляционной или дыхательной аппаратурой, хирургическим инструментарием, растворами для парентерального введения, аэрозолями. Микробиологическая диагностикака НГОБ-инфекций состоит в выделении культуры. Материал высевают на кровяные среды и таврохолевый агар Мак-Конки. Инкубируют среды в аэробных условиях при 22-25°С и 37°С. На 2-й день из подозрительных колоний делают мазки и пересев уколом в столбик трехсахарного агара с железом или лучше в 2 столбика среды Лейфзона одну из которых заливают стерильным вазелиновым маслом. В случае выделения подозрительных на НГОБ культур проводят их родовую, видовую и типовую идентификацию, включающую определение морфологии, числа и локализации жгутиков, характера роста культуры на питательных средах, продукции оксидазы, ДНК-азы, лецитиназы, желатиназы, уреазы, индола, сероводорода, аммиака, редукции нитратов, образования кислоты на средах с углеводами, чувствительности к бензилпенициллину и другим антибиотикам. Заключение об этиологической роли НГОБ должно опираться на критерии для условно-патогенных микробов.

неферментирующий грамотрицательный бактерия аэробный

2. Псевдомонады (род Pseudomonas)

Виды : Содержит более 20 видов, среди них более патогенным для человека является вид Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка).

ь прямая или слегка изогнутая палочка с закругленными концами, размером 0,5—0,7 х 1— 3 мкм

ь хорошо окрашивается всеми анилиновыми красителями

ь в мазках располагается одиночно, парами или короткими цепочками.

ь обычно подвижна (монотрих или лофотрих).

ь спор не образует, капсулы не имеет, но продуцирует слизь, которая тонким слоем окружает микробную клетку

ь Тип дыхания — аэробный . Обладает необходимым для дыхания набором ферментов (дегидразы, цитохромы, цитохромоксидаза).

Культуральные свойства: Оптимальная температура роста 37 °С,, но так же хорошо растет и при температуре 42 °С, рН 7,2-7,5.

К питательным средам нетребовательна, хорошо растет на МПА и МПБ. При выращивании в бульоне в течение суток синегнойная палочка образует равномерное помутнение с сероватой пленкой на поверхности и осадком на дне. На МПА через сутки образуются довольно крупные (3—5 мм) полупрозрачные колонии сероватого цвета с перламутровым оттенком.

Центр колонии более темный, чем периферия, края ровные, четкие. На скошенном агаре культура синегнойной палочки дает тонкий блестящий налет. Культура часто имеет специфический запах жасмина. Характерным свойством ее является появление уже к концу первых суток сине-зеленого окрашивания культуры с последующим проникновением пигмента (пиоцианина) в питательную среду. Псевдомонады других видов могут образовывать пигменты иного цвета, например: P. fluorescein и P. putida (впрочем, как и сама синегнойная палочка) образуют желтый пигмент, который флуоресцирует с зеленоватым оттенком; некоторые штаммы образуют красный (пиорубин) или коричнево-черный (пиомеланин) пигмент.

Лабораторная диагностика бактерий рода Pseudomonas

Единственным эффективным методом диагностики является бактериологический. Материал для посева может быть различным, но чаще всего это гной, экссудат, пунктаты из органов, моча. Большую роль в идентификации культуры играет обнаружение пигмента пиоцианина, присутствие которого в жидкой культуре определяют добавлением в среду нескольких капель хлороформа: наблюдается сине-зеленое окрашивание. Видовая идентификация в пределах рода Pseudomonas ведется по биохимическим и культуральным свойствам.

Лечение и специфическая профилактика. Лечение антибиотиками должно назначаться только после изучения чувствительности штамма-возбудителя к хи­миопрепаратам. При пищевых токсикоинфекциях и дисбактериозах кишечника, вызванных синегнойной палочкой, весьма эффективен комплексный интести-бактериофаг, в состав которого входит псевдомонадный фаг. При хронических вялотекущих процессах, вызванных синегнойной палочкой, особенно в случае безуспешности проводимого лечения, весьма эффективным может оказаться использование аутовакцины.

Плановая специфическая профилактика не проводится. Общая профилактика сводится к недопущению попадания возбудителя в раны, на ожоговую поверхность, т. е. к правильной организации работы в отделениях и строжайшему соблюдению санитарно-гигиенических норм.

3. Алкалигенес (Alcaligenes)

Морфология и культуральные свойства

ь Род эубактерий, относящийся к группе грамотрицательных неферментирующих бактерий.

ь палочки, овоиды или кокки размерами 0,5 — 1,2×0,5 -2,5 мкм

ь перитрихи, спор и капсул не образуют

ь Тип дыхания: строгие аэробы

ь Оптимальная температура роста 20-37 °С, рН 7

ь Углеводы не ферментируют , индол не образуют

Выделяют оксидазу и каталазу . Хемоорганотрофы . На среде Лейфзона вызывают сдвиг рН в щелочную сторону. Чувствительны к гентамицину и полимиксину Устойчивы к бензилпенициллину

Образует непигментированные либо серовато-белые, прозрачные до мутных, плоские или слегка выпуклые круглые, гладкие (изредка шероховатые) колонии с неправильным краем на питательном агаре. Не способны использовать углеводы как единственный источник углерода, способны утилизировать ацетат, пропионат, бутират, цитрат, аланин и некоторые другие аминокислоты.

Alcaligenes faecalis является условно-патогенным микроорганизмом, способна вызывать септицемию и менингит у новорождённых, интраабдоминальные инфекции у взрослых. Также вызывает заболевания у домашней птицы — в частности респираторные заболевания у цыплят, инфекции у индюков, показано цитотоксическое действие Alcaligenes faecalis на культуру клеток трахеи индеек.

Обитают в кишечнике позвоночных, включая человека Встречаются в воде, пищевых продуктах, почве Имеются данные об их роли в развитии заболеваний мочеполовых путей Основной фактор патогенности — эндотоксин.

Применение. Alcaligenes faecalis используется человеком как продуцент нестандартных аминокислот, также интерес представляет фермент пенициллинацилаза Alcaligenes faecalis, использующаяся для производства полусинтетических антибиотиков, также Alcaligenes faecalis является продуцентом 6-гидроксипиколиновой кислоты, а также биополимера глюкозы курдлана (пищевая добавка E424, en:Curdlan), образующего термически необратимые гели, используется в том числе для производства мембран для ультрафильтрации.

4. Хризеобактерии — Chrysobacterium (ранее Flavobacterium)

Виды : F. Meningosepticum, F. Indologenes и др.

Морфология и культуральные свойства:

ь Грамотрицательные аэробы,

ь Длинные, тонкие и немного изогнутые палочки.

ь Каталазо- и оксидазоположительные

ь Все штаммы Chrysobacterium гидролизуют желатин и эскулин.

ь Хорошо растут на простых питательных средах, кровяном и шоколадном агаре, образуя колонии уже через 24 часа

ь Оптимальная температура роста 35° — 37°

ь При росте на питательных средах образуют жёлтый или оранжевый пигмент различной интенсивности.

Колонии F. Meningosepticum крупные( диаметром 1-2 мм) с гладкой поверхностью, чаще имеют бледно- жёлтую окраску, что обусловлено слабым пигментообразованием. Колонии F. Indologenes ,напротив, насыщенный тёмно- жёлтого цвета то,что связано с синтезом водонерастворимого пигмента флексирубина.

Чувствительность к антимикробным препаратам. Выбор антибактериальной терапии для лечения инфекций, вызванных Chrysobacterium представляют значительные трудности. В то же время назначение неадекватной этиотропной терапии приводит к увеличению летальности. Микроорганизмы рода Chrysobacterium обладают природной устойчивостью ко многим антимикробным препаратам к таким как аминогликозидам, пенициллинам, цефалоспоринам, карбопенемам, тетрациклинам, хлорамфениколу. Многие представители продуцируют хромосомные в- лактамазы,которые обеспечивают резистентность к подавляющему большинству в-лактамных антибиотиков.

В то же время Chrysobacterium чувствительны к антибиотикам, традиционно используемых для лечения инфекций, вызванных грамположительными микроорганизмами: рифамипицину, ванкомицину, клиндомицину.

Учитывая изложенное можно сделать вывод, что пока не разработано оптимальное режим антибактериальной терапии инфекций, вызванных С. Meningosepticum . Выбор антибиотика должен основываться на результатах исследования чувствительности выделенного в каждом конкретном случае штамма возбудителя. В качестве наиболее надёжного диагностического метода должны использоваться методы разведений на среде Мюллера — Хинтон.

На основании имеющихся в литературе данных, стартовыми режимами терапии инфекций, вызванных микроорганизмами рода Chrysobacterium, следует считать комбинации рифампицина с ванкомицином или триметопримом и монотерапию фтохинолонами (ципрофлоксацин, левофлоксацин)

Клиническое значение. Микроорганизмы рода Chrysobacterium широко распространены в окружающей среде, обнаруживается почве, воде, различных пищевых продуктах ( сырое мясо, молоко). Хризеобактерии иогут обитать в городской системе водоснабжение, стационарах лечебно — профилактических учреждений. Chrysobacterium как и большинство других НГОБ ( неферментирующих грамотрицательных бактерий) обладают низкой вирулентностью.

Наибольшее клиническое значение имеет С. Meningosepticum , которое может вызывать чаще инфекции нозокомиальных, преимущественно у иммунопрометированных пациентов. Основные клинические формы инфекции С. Meningosepticum — менингит и бактериемия у новорожденных, особенно недоношенных детей, находящихся в отделение реанимации и интенсивной терапии, а также нозокомиальная пневмония. У взрослых наиболее частой формой инфекции является пневмония,как правило, связанная с проведением искусственной вентиляции лёгких. Заболевания у новорожденных протекает тяжёло и более чем в половине (до 57%) случаев заканчивается летальным исходом. У 60-70% больных отмечается связь менингита с гидроцефалией. У детей, перенесших менингит, в последующем наблюдается выраженные остаточные изменения функции нервной системыи задержка нервно-психического развития. С. Meningosepticum также может вызывать у новорожденных сепсис и пневмонию.

Резервуарами микроорганизмов в стационаре могут быть флаконы для растворов, водопроводные фильтры, препараты для зондового питания, лекарственные растворы аэрозоли, сосудистые катетеры и растворы для их промывания, датчики измерения давления и т.д.

Список использованной литературы

1) Боронина Л.Г, . Мамамев И.Л. , Кукушкина М.П. и др. Антибиотикорезистентность бактерий, вызывающих инфекции новорожденных в реанимационных отделениях. Сборник «Интенсивная терапия в педиатрии» Екатеринбург, 1999. С.7-9

2) Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология.

3) Лебедева М.Н. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии.

4) Коротяев А.И, Бабичев С.Л. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. — СПб.: Спец. лит, 2000.

5) Поздеев О.К. Медицинская микробиология: Учебное пособие/ под ред. В.И. Покровского. — 4-е изд.испр.-М.:ГЭОТАР-МЕДИА. 2007.

6) Алешукина А.В. Медицинская микробиология. Учебное пособие. Ростов-на-Дону. «Феникс», 2003.

7) Тец В.В. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии — М.:Медицина, 2002.

Грамположительные и грамотрицательные кокки. Факторы вирулентности Staphylococcus aureus и Neisseria gonorrhoeae. Клинические проявления стафилококковых болезней, их лабораторная и микробиологическая диагностика. Бактерии рода Streptococcus, вейлонеллы.

презентация [671,5 K], добавлен 23.02.2014

Морфология и культурально-биохимические свойства пневмококков. Факторы патогенности, антигенная структура и классификация. Пути передачи, инкубационный период болезни. Лабораторная диагностика пневмококковой инфекции. Лечение, профилактика и меры борьбы.

реферат [817,3 K], добавлен 14.03.2015

Изучение морфологии и физиологии листерий как рода грамположительных палочковидных бактерий, выступающих возбудителями заболеваний человека. Экология листерий, антигены, иммунитет. Роль в детской патологии: лабораторная диагностика, профилактика, лечение.

презентация [421,9 K], добавлен 25.04.2011

История изучения столбняковой инфекции. Морфология возбудителя столбняка, его культуральные, антигенные, биохимические свойства. Патогенез, клиническая картина, лабораторная диагностика болезни. Препараты, применяемые для лечения и профилактики столбняка.

реферат [2,7 M], добавлен 24.12.2010

Пищевое отравление и интоксикация. Ээкзотоксины и эндотоксины. Бактерии рода сальмонелла. Причины большинства вспышек сальмонеллеза. Основные симптомы сальмонеллезной инфекции. Симптомы заболевания бруцеллезом. Заражение туберкулезом и сибирской язвой.

презентация [554,2 K], добавлен 01.03.2016

Морфология и культуральные свойства легионелл, их биохимические свойства. Факторы патогенности и патогенез. Клинические проявления заболевания. Факторы выработки иммунитета, лабораторная диагностика. Профилактика и лечение. Распространенность заболевания.

контрольная работа [250,4 K], добавлен 23.03.2017

Таксономия, морфологические, культуральные и биохимические свойства хеликобактерий, антигены. Характеристика заболевания: источники хеликобактериоза, пути передачи инфекции, клинические проявления. Лабораторная диагностика, лечение и профилактика.

реферат [18,6 K], добавлен 10.12.2010

Анаэробные бактерии (микрофлора в бескислородной среде) как причина возникновения анаэробной инфекции. Классификация анаэробных инфекций по этиологии, характеру микрофлоры и источнику инфекции. Характеристика симптомов и клинической картины заболевания.

презентация [9,6 M], добавлен 02.07.2013

Дифтерия — острое инфекционное заболевание. Биологические свойства возбудителя: морфология, культуральные свойства, геном, факторы патогенности. Эпидемиология дифтерии, источник и путь передачи. Диагностика, симптомы и лечение заболевания, профилактика.

презентация [925,8 K], добавлен 29.04.2014

Определение и эпидемиология токсоплазмоза, пероральная и трансплацентарная передача инфекции. Этиология, патогенез токсоплазмоза, патологические изменения и клинические проявления. Диагностика заболевания, выделение возбудителя, серологические тесты.

реферат [35,6 K], добавлен 09.10.2010

Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.

источник

У здорового человека не должно быть в анализе мочи бактерий. Если же бактериологическое исследование мочи обнаруживает их, это состояние называется бактериурией и требует лечения у специалиста – уролога.

Наиболее распространенная в посеве мочи Escherichia coli. Бактериурия в моче определяется лишь в том случае, если органы мочевыделительной системе (почки, мочевой пузырь, мочеточники) инфицированы, а иммунная система не смогла самостоятельно справиться с болезнетворными бактериями.

Почему у человека в общем анализе мочи обнаруживаются бактерии, и что это значит мы рассмотрим в этой статье.

Выделяют несколько путей попадания возбудителя в мочевые пути:

1. Восходящий – инфекционный агент проникает в мочевые пути через мочеиспускательный канал. Данный вариант инфицирования больше характерен для женщин, по причине анатомических особенностей (короткая и широкая уретра). Кроме того, данный механизм проникновения бактерий в мочу весьма вероятен при таких инструментальных манипуляциях как катетеризация мочевого пузыря, уретроскопия, цистоскопия, бужирование уретры, трансуретральные оперативные вмешательства.
2. Нисходящий – при инфекционном поражении почек.
3. Лимфогенный – инфицирование происходит по лимфатическим путям из инфекционных очагов, расположенных вблизи органов мочеполовой системы.
4. Гематогенный – возбудитель заноситься в мочевые пути с кровью из отдаленных очагов инфекции.

Как правило, при патологических изменениях в мочевыводящей системе помимо бактерий выявляется повышение концентрации других показателей воспаления – лейкоцитов и слизи.

• Истинная бактериурия – это бактерии, которые не просто попадают в мочевые пути, но и размножаются там, провоцируя сильное воспаление.
• Ложная бактериурия – бактерии проникают в мочевой пузырь, мочевыводящие пути, но распространиться и размножиться не успевают в силу того, что у человека либо активен иммунитет, либо он принимает антибактериальную терапию по поводу воспалительного заболевания.
• Скрытая бактериурия чаще всего определяется при плановой диспансеризации у людей, которых не беспокоит ни мочевой пузырь, ни почки, ни нарушенное мочеиспускание. Особенно часто в том смысле выявляется бессимптомная бактериурия у беременных.
• О том, что у пациента выявлена асимптомная бактериурия , можно говорить после положительного двухэтапного исследования урины. Сбор материала должен происходить с интервалом в сутки, а бактериальный показатель должен быть дважды подтвержденным в границах 100000 на один миллилитр урины.

Если в моче обнаружены бактерии в большом количестве – это называется бактериурией, и говорит о вероятности того, что в мочевыделительной системе развивается инфекция. Но перед тем, как предпринимать какие-либо шаги, нужно убедиться, что анализ был сдан правильно. Возможно, вы воспользовались нестерильной баночкой, и повторная диагностика выявит, что все показатели в норме. Иногда пересдавать анализы приходится 2-3 раза.

Какие же заболевания могут проявляться на начальных этапах только изменением вышеуказанного показателя?

1. Уретрит. Если условно-патогенные микроорганизмы, находящиеся в мочевыделительном канале начинают активно размножаться (в результате различных причин), возникает воспаление уретры.
2. Пиелонефрит. Вторая из наиболее частых причин появлений бактерий в моче. Воспаление почек также может быть первичным или вторичным.
3. Цистит. Одна из двух наиболее вероятных патологий, сопровождающихся повышенным выделением микроорганизмов.

При обнаружении бактерий в анализе мочи необходимо определить, какие именно это бактерии, чтобы подобрать правильное лечение. Для этого проводится бактериологический посев мочи – бактерии помещаются в питательную среду и выращиваются в благоприятных для них условиях. С помощью такого исследования определяется вид бактерий, а также их чувствительность к антибиотикам.

Результат оценивается в колониеобразующих единицах, содержащиеся в 1 мл исследуемой жидкости. Если получены показатели, которые будут меньше 1000 КОЕ/мл, то в лечении, как правило, нет необходимости. Когда результаты исследования показали, что количество микроорганизмов от 1000 до 100 000 КОЕ/мл, то этот анализ может вызвать сомнения, будет необходима пересдача мочи.

Если количество микроорганизмов равно или превышает 100 000 КОЕ/мл, то можно говорить о связи воспаления именно с инфекцией. Необходимо провести обязательное лечение.

Лейкоциты и патогенные бактерии в моче свидетельствуют о возможном развитии таких заболеваний:

Эпителиальные клетки иногда присутствуют в материале для анализов, но в минимальном количестве.

Если в моче есть слизь и бактерии в концентрации, превышающей норму, причины обычно следующие:

Также микробы, эпителий и лейкоциты часто обнаруживаются вследствие неправильного сбора биологической жидкости. Наружные половые органы необходимо непосредственно перед мочеиспусканием тщательно вымыть, а емкость для транспортировки мочи лучше приобрести в аптеке, полностью стерильную.

Данный вид бактерий обитает в нижних отделах пищеварительной системы. Это грамотрицательные бактерии, которые выделяются во время акта дефекации. Попадая на половые органы, они размножаются в уретре, затем достигают мочевого пузыря.

Размножение микроорганизмов происходит очень быстро в любом из отделов мочевыделительной системы. При развитии данных бактерий в почках, появляется пиелонефрит, в уретре – уретрит, в мочевом пузыре – цистит. Escherichia coli чаще всего встречается при инфекционных заболеваниях мочевых путей.

Следующая после E. coli по встречаемости является Enterococcus faecalis. Являясь грамм положительной бактерией, она в норме присутствует в гастроинтестинальном тракте у здоровых людей, участвуя в пищеварении. Попадание в мочевой тракт происходит посредством каловых масс. После чего происходит бесконтрольных рост данной бактерии. Так же возможно инфицирование крови, раны и области таза.Инфекция вызванная Enterococcus faecalis трудно поддается лечению. Данная бактерия очень устойчива к большинству антибиотиков.

Очень много причин их появления, потому что это очень тяжелый период для женщины, создаются разные условия, когда застаивается моча и в ней начинают развиваться бактерии. Также во время беременности постоянно растет матка, которая давит на почки и не дает им полноценно работать.

Часто причиной бактериурии является гормональная перестройка. Нужно учитывать и физиологические особенности мочеполовой системы беременной женщины, мочеиспускательный канал размещен возле прямой кишки, при этом уретра слишком коротка. Кроме того, мочевой пузырь может оказаться приближенным к прямой кишке.

Изменение гормонального фона также может повлиять на появление бактерий в моче при беременности. Бактериурия возникает и при кариесе или из-за снижения иммунитета. У женщин, страдающих сахарным диабетом, также могут оказаться в моче бактерии.

Особенно рискуют заполучить бактерии беременные женщины, ведущие неупорядоченную сексуальную жизнь, то есть, часто меняющие половых партнеров. Такая же опасность подстерегает женщин, не соблюдающих надлежащим образом правила личной гигиены. Определенную угрозу беременности несут такие заболевания мочеполовой системы, как цистит и пиелонефрит.

В зависимости от количества выявленных в моче ребенка бактерий, могут возникнуть следующие заболевания:

1. Для цистита и уретрита чаще характерны дизурические расстройства (задержка или недержание мочи, учащение мочеиспусканий в ночное время, мочеиспускание небольшими порциями), боли и жжение при мочеиспускании, слабость, вялость, повышение температуры до 37–38 градусов, боль внизу живота с иррадиацией в промежность и/или поясницу.
2. Пиелонефрит, при котором возникают боли в поясничном отделе и животе, понос, озноб, повышенная температура, рвота. У новорожденных детей и младенцев при заболевании наблюдается полный отказ от приема пищи и общее беспокойство.
3. Асимптомная бактериурия – состояние, при котором отсутствуют всякие признаки болезни. Это явление доброкачественное и не требующее лечения, так как повреждений почечной ткани при нем не возникает.
4. Бактерии в моче у ребенка могут быть обнаружены при инфекционно-воспалительных заболеваниях мочевыделительной системы, которые развиваются на фоне врожденных пороков почек, мочеточников и мочевого пузыря, а также половой сферы (семявыводящих протоков, яичка) или при сложных врожденных пахово-мошоночных грыжах.

Соответственно, лечение бактерий в моче у ребенка происходит на основании данных исследования анализа и назначений врача, индивидуально в каждом конкретном случае. Лечить следует причину, то есть заболевание, которое предоставило возможность бактериям проникновения в мочу.

Обычно бактериурии сопутствуют какие-либо клинические проявления, но в некоторых случаях это явления протекает бессимптомно.

К наиболее характерным признакам бактериурии относят:

• частое мочеиспускание;
• боли и жжение при мочеиспускании;
• покраснение наружных половых органов, сопровождающееся зудом;
• недержание мочи;
• боли внизу живота;
• моча идет с резким, противным запахом, возможны примеси крови или слизи;
• цвет мочи очень мутный или имеет белесый оттенок.

Если инфекция поражает мочевой пузырь или уретру, температура тела не повышается, но при распространении инфекционного заражения на почки, возможно повышение температуры, тупая боль в поясничной области, тошнота и рвота.

Прежде всего, необходимо пройти детальное обследование для обнаружения характера и причины возникновения бактериурии. Также экспериментальным путем выявляется стойкость бактерий к тому или иному антибиотику.

Лечение направлено на устранение очага заболевания и на улучшение процесса мочеиспускания. Обычно назначаются антибиотики, нитрофураны и сульфаниламидные препараты.

Что бы предотвратить возникновение бактериурии необходимо обязательно соблюдать личную гигиену, а при любых подозрениях немедленно обращаться к специалисту. Сдача анализов не просто прихоть врачей, а способ оградить вас от опасных заболеваний. Если при обследовании обнаружены сомнительные микроорганизмы, повторите анализ.

источник

Другие представители грамотрицательных

Помимо P.aeruginosa, клинически значимыми возбудителямя госпитальных инфекций являются грамотрицательные бактерии родов Acinetobacter, Stenotrophomonas, Burkholderia.

Как и псевдомонады, они весьма устойчивы к действию большинства современных антимикробных средств.

11.2.1. Род Acinetobacter

Представители относятся к семейству Moraxellaceae. Современная классификация рода Acinetobacter включает не менее 18 видов, количество их продолжает уточняться. Наиболее часто оппортунистические инфекции вызывают A. baumannii, иногда A. baylyi.

Бактерии представляют собой неподвижные неферментирующие мелкие коккобактерии. Обычно расположены попарно. Спор не образуют. Часть бактерий окружена экзополисахаридом. По Граму могут окрашиваться вариабельно. Растут на простых питательных средах, образуют гладкие или мукоидные полупрозрачные колонии среднего размера.

Строгие аэробы. Каталазоположительны. Оксидазоотрицательны, что отличает их от псевдомонад.

Повсеместно распространены в окружающей среде (убиквитарные микроорганизмы), регулярно обнаруживаются в пробах воды и почвы. Являются частью нормальной микрофлоры кожи человека.

С учетом вышеизложенного, ацинетобактерии вызывают только оппортунистические инфекции у лиц со сниженным иммунитетом.

Факторы патогенности идентифицированы недостаточно. Полный анализ генома A. baumannii выявил наличие нескольких генетических островков патогенности. Возбудители обладают генетической вариабельностью и выраженной способностью к рекомбинации с другими микробными видами.

Бактерии имеют набор адгезинов, легко создают биопленку с участием экзополисахаридов. Экзополисахариды также угнетают фагоцитоз.

ЛПС клеточной стенки обладает свойствами эндотоксина, стимулирует продукцию провоспалительных цитокинов клетками макроорганизма. Белки-сидерофоры обеспечивают бактерии ионами железа. Протеины наружной мембраны могут вызывать апоптоз пораженных клеток.

Наибольшее клиническое значение имеет выраженная устойчивость госпитальных штаммов A. baumannii к большинству антибиотиков.

Обладают всеми механизмами, определяющими резистентность к антибиотикам:

продуцируют высокоактивные ферменты, разрушающие антибиотики; обладают мощными системами их обратного транспорта (эффлюкса); изменяют структуру клеточной стенки и рибосом (нарушение связывания антибиотиков).

Госпитальные штаммы могут быть полирезистентными. Они проявляют устойчивость к β-лактамам, аминогликозидам, фторхинолонам и тетрациклинам, ко-тримоксазолу. В отношении β-лактамов возбудители продуцируют многочисленные β-лактамазы, в том числе расширенного спектра действия и металло-β-лактамазы, которые могут разрушатье карбапенемы.

Гены, определяющие устойчивость, находятся в составе генетических островков резистентности. Они включают мобильные генетические элементы – интегроны, IS-последовательности, транспозоны, которые легко передаются между бактериями

Источники госпитальной инфекции – пациенты и носители возбудителей, включая медперсонал.

В группе НГОБ A. baumannii – второй по частоте выделения возбудитель после псевдомонад.

Основные механизмы передачи – аэрогенный и контактный.

Наиболее часто являются причиной госпитальных пневмоний, включая ВАП, после интубации трахеи или искусственной вентиляции легких. Могут вызывать нозокомиальные эндокардиты, менингиты, перитониты, инфекции мочевыводящих путей, сепсис.

Во внебольничных условиях инфекций практически не вызывают.

Микробиологическая диагностика включат посев материала на питательные среды в аэробных условиях, микроскопию материала с окраской по Граму. Для диффереренциации с псевдомонадами проводят оксидазный тест (у ацинетобактеров отрицателен). После выделения проводят оценку чувствительности культуры к антибиотикам.

Определение вида возбудителей представляет трудности в условиях клинической лаборатории. Могут использоваться тест-системы автоматизированной биохимической идентификации бактерий.

Решающими методами, которые позволяют идентифицировать госпитальные штаммы возбудителей, являются методы генетического анализа. Они включают молекулярную гибридизацию и различные варианты ПЦР, с помощью которых выявляют генетические детерминанты устойчивости.

Основными препаратами для лечения ацинетобактерной инфекции являются карбапенемы (имипенем и меропенем, пока резистентно не более 3-4% штаммов). Возможно использование цефалоспоринов в комбинации с ингибиторами β-лактамаз.

11.2.2. Род Stenotrophomonas

Данные микроорганизмы относятся к семейству Xanthomonadaceae. Среди 5 видов бактерий, принадлежащих к роду Stenotrophomonas, клинически важным возбудителем госпитальных инфекций является S. maltophilia.

Они представляют собой мелкие грамотрицательные палочки. Обладают одним или несколькими полярными жгутиками. Спор не образуют. Микробные клетки окружены слоем наружного полисахарида.

Растут на стандартных питательных средах и кровяном агаре. Госпитальные эковары возбудителей для роста требуют присутствия в среде цистеина или метионина. Образуют гладкие колонии с зеленовато-коричневым пигментом.

Строгие аэробы. Тип метаболизма окислительный. Каталазоположительны, оксидазоотрицательны.

Продуцируют ферменты патогенности: эластазу, фибринолизин, ДНКазу, гиалуронидазу, липазу. ЛПС клеточной стенки обладает свойствами эндотоксина.

Наряду с псевдомонадами и ацинетобактерами повсеместно распространены в окружающей среде. Места обитания – вода, почва, растения, бактерии обнаруживаются на пищевых продуктах. Отмечено носительство S. maltophilia у человека (носоглотка, кишечник).

Бактерии активно образуют биопленку, в том числе на поверхности дренажей, катетеров и систем для внутривенного введения. Могут находиться в растворах для инъекций и гемодиализа.

Обладают множественной природной устойчивостью к антибиотикам и антисептикам. Характерна устойчивость ко многим β-лактамам, включая карбапенемы, а также аминогликозидам, фторхинолонам, тетрациклинам, левомицетину.

Резистентность к карбапенемам определяется продукцией хромосомных металло-бета-лактамаз. Устойчивость к другим группам антибиотиков обеспечивается снижением проницаемости наружной мембраны и активным обратным транспортом (эффлюксом) антибиотиков.

Возбудители обладают выраженной генетической вариабельностью, что обеспечивает их быстрое приспособление к условиям окружающей среды.

S. maltophilia вызывает преимущественно оппортунистические инфекции у лиц со сниженным иммунитетом. Группы риска – пациенты отделений интенсивной терапии, недоношенные дети, больные онкозаболеваниями, ВИЧ-инфекцией, муковисцидозом. Фактором риска является длительная предшествующая антибиотикотерапия, особенно карбапенемами.

В группе НГОБ S. maltophilia – третий по частоте выделения возбудитель.

Источники госпитальной инфекции – пациенты и бактерионосители, включая медперсонал. В первую очередь возбудители колонизируют верхние дыхательные пути.

Основные механизмы передачи – аэрогенный и контактный.

Вызывают госпитальные пневмонии, бактериемию и сепсис с высокой летальностью (до 30% и более). Также могут быть причиной эндокардитов, инфекций глаз, катетер-ассоциированных и раневых инфекций, перитонитов и др.

В последнее время увеличилось количество внебольничных инфекций, вызванных данным возбудителем.

Микробиологическая диагностика S. maltophilia включает микроскопию материала с окраской по Граму, посев в аэробных условиях на питательные среды с лактозой и цистеином, кровяной агар. Выявляют рост лактозоотрицательных колоний, при этом госпитальные штаммы возбудителей растут только в присутствии цистеина. Для диффереренциации с псевдомонадами проводят оксидазный тест.

Также применяются методы автоматизированной биохимической идентификации возбудителя с помощью тест-систем. Возможно использование ПЦР и метода молекулярной гибридизации для выявления ДНК возбудителя.

После выделения культуры проводят оценку чувствительности к антибиотикам методом серийных разведений в бульоне или агаре. Диско-диффузионный метод не используется.

Профилактика неспецифическая. Основными средствами для лечения инфекций, вызванных S. maltophilia, являются комбинированные сульфаниламиды (ко-тримоксазол) и бета-лактамы (тикарциллин-клавуланат). Возможно применение фторхинолонов последних поколений (левофлоксацин, моксифлоксацин и др.)

11.2.3 Род Burkholderia

Род Burkholderia входит в одноименное семейство Burkholderiaceae, содержащее не менее 10 родов. По результатам геносистематики данное семейство было отделено от псевдомонад в начале 90-х годов. Возбудители названы в честь американского исследователя Уолтера Буркхолдера. В 1949 г. он впервые описал микроорганизм Pseudomonas cepacea, отнесенный впоследствии к новому семейству и роду.

Основными возбудителями болезней человека из данного семейства являются B. cepacea, B. pseudomallei и B. mallei.

Комплекс бактерий B. cepacea включает в себя не менее 17 сходных условно-патогенных видов, вызывающих оппортунистические инфекции у человека. B. mallei и B. pseudomallei вызывают специфические заболевания животных и человека – сап и мелиоидоз.

11.2.3.1 Burkholderia cepacea

B. cepacea и другие близкородственные виды бактерий, входящих в этот комплекс, представляют собой грамотрицательные палочки. Они подвижны, обладают одним или несколькими полярными жгутиками. Спор не образуют.

Могут расти на стандартных лактозосодержащих питательных средах для грамотрицательных бактерий. Рост медленный, начинается на 2-3 день. Колонии лактозоположительны.

С учетом устойчивости возбудителей к антибиотикам, для культивирования применяют селективные среды, содержащие полимиксин В и бацитрацин. При этом полимиксин В подавляет рост сопутствующих псевдомонад.

Облигатные аэробы. Каталазоположительны, оксидазоположительны.

Геном представлен множественными репликонами. Возбудители проявляют активную способность к рекомбинации с другими микробными видами.

Повсеместно обитают в окружающей среде – в воде, почве, ризосфере растений и т.д. Биохимически активны. В естественных условиях вызывают биодеградацию хлорорганических пестицидов.

Бактерии способны выживать в растворах антисептиков и дезинфектантов, включая хлоргексидин. Устойчивы к полимиксину В, аминогликозидам и другим антибиотикам.

У человека в редких случаях приводят к оппортунистическим инфекциям. Возбудители активируются у лиц с подавленным иммунитетом – при муковисцидозе, хронической гранулематозной болезни и др. Обычно поражают респираторный тракт.

Механизмы передачи инфекций – контактный, реже аэрогенный. Вызывают тяжелые пневмонии и сепсис.

Видовая идентификация возбудителя, равно как и оценка антибиотикочувствительности фенотипическими методами представляет трудности. Применяют методы автоматизированной биохимической идентификации возбудителя с помощью тест-систем. В специализированных лабораториях определяют гены антибиотикоустойчивости методами молекулярной генетики.

Для лечения применяют цефалоспорины III-IV поколений, карбапенемы, доксициклин, ко-тримоксазол (триметоприм-сульфометоксазол).

11.2.3.2 Burkholderia pseudomallei

B. pseudomallei представляют собой аэробные грамотрицательные подвижные палочки. Они окрашиваются биполярно при обработке анилиновыми красителями. Имеют полисахаридную капсулу.

Хорошо растут на большинстве питательных сред (кровяном агаре, средах с лактозой и других). Образуют как S- так и R-формы колоний. Для их селективного выращивания используют среды с антибиотиками.

Бактерии окисляют многие углеводы до кислоты, включая глюкозу и лактозу. Каталазоположительны, оксидазоположительны.

Антигенами являются ЛПС клеточной стенки, капсульный полисахарид и флагеллин жгутиков.

Возбудители продуцируют разнообразные факторы патогенности, включая ферменты агрессии: протеазы, липазы, лецитиназу, гемолизины, пероксидазу, железосвязывающие белки-сидерофоры. ЛПС наружной мембраны выступает в роли эндотоксина.

Бактерии могут персистировать внутри многих клеток, включая нейтрофилы и макрофаги. Устойчивость к фагоцитозу обусловлена наличием капсулы. Они могут размножаться внутри вакуолей фагоцитов.

B. pseudomallei имеют природную резистентность ко многим группам антибиотиков – аминогликозидам, большинству β-лактамов (пенициллинам и цефалоспоринам), колистину и др. Снижена чувствительность к фторхинолонам и макролидам.

Устойчивость обусловлена продукцией β-лактамаз и развитыми системами обратного транспорта (для аминогликозидов).

Преимущественное место обитания данных бактерий – вода и почва. Из организма человека в норме возбудителя не выделяют.

У человека, а также различных видов животных (лошадей, овец, коз и др.) B. pseudomallei вызывает тяжелое инфекционное заболевание – мелиоидоз.

Болезнь эндемична для юго-восточной Азии и северной Австралии, хотя отдельные случаи отмечались и в других регионах.

Мелиоидоз передается контактным путем при попадании контаминированной воды или почвы на поврежденную кожу и слизистые. Возможен аэрозольный путь передачи, а также водный. Прямая передача заболевания от пациента к пациенту наблюдается весьма редко. Фактором риска развития мелиоидоза у людей является сахарный диабет.

Различают острую, хроническую и латентную форму болезни. Заболевание проявляется тяжелейшей пневмонией с множественными абсцессами в легких. Часто возникает генерализованная инфекция, развивается сепсис и септикопиемия с абсцессами в органах и тканях.

Латентный мелиоидоз может активироваться через десятки лет после заражения.

Даже при адекватном лечении для болезни характерна высокая летальность (10-50% в зависимости от развития осложнений), при септической форме – до 80%. С учетом устойчивости возбудителя в окружающей среде и высокой летальности заболеваия B. pseudomallei представляет угрозу как потенциальный фактор биотерроризма.

При установлении диагноза важное значение имеет пребывание пациента в регионах, эндемичных по мелиоидозу.

Микробиологический диагноз болезни включает выделение возбудителя от больного с последующей идентификацией B. pseudomallei. Все работы необходимо проводить в условиях биобезопасности, соответствующих возбудителям особо опасных инфекций.

Материал засевают на кровяной агар и селективные среды с антибиотиками (гентамицином и др.) Проводят микроскопию возбудителей с выявлением характерного биполярного окрашивания. Оценивают ферментативную активность при помощи панели биохимических тестов.

В качестве экспресс-метода для обнаружения B. pseudomallei в материале применяют иммунофлюоресценцию с моноклональными АТ.

Серологическая диагностика включает определение специфических АТ при помощи ИФА или РПГА.

Лечение заболевания представляет собой сложную задачу. Обычно назначают цефалоспорин цефтазидим или карбапенемы, реже – комбинацию амоксициллин-клавуланат.

Для предупреждения латентной инфекции и рецидива необходимо длительная (в течение нескольких месяцев) поддерживающая антибиотикотерапия комбинацией доксициклина с ко-тримоксазолом.

Специфическая профилактика пока не разработана.

При контакте с возбудителем при его выделении в лаборатории проводят антибиотикопрофилактику доксициклином и ко-тримоксазолом для предотвращения развития заболевания.

11.2.3.3 Burkholderia mallei

B. mallei вызывает сап – специфическое зоонозное инфекционное заболевание. В первую очередь болезнь поражает лошадей, ослов, гораздо реже – животных других видов (коз, овец, кошек и др.) Иногда данная инфекция может возникать у человека, страдают лица, профессионально контактирующие с больными животными.

В настоящее время в развитых странах проведена повсеместная эрадикация возбудителя. Тем не менее, болезнь регистрируется у животных в Африке, Азии, Центральной и Южной Америке.

Бактерии схожи по морфологии с B. pseudomallei, однако палочки B. mallei неподвижны. На питательных средах они растут быстрее, в течение 18-24 ч.

Другой важной отличительной особенностью возбудителя сапа является его более высокая чувствительность к антибиотикам и дезинфектантам. В отличие от B. pseudomallei геном данной бактерии утратил часть генов антибиотикорезистентности. Однако возбудитель сохраняет устойчивость к некоторым аминогликозидам и β-лактамам.

Кроме того, B. mallei не способны выживать в почве. Обычно они паразитируют внутриклеточно в организме животного-хозяина (лошади).

Основные пути передачи инфекции от больного животного –контактный (через поврежденные кожу и слизистые) и аэрогенный.

Бактерии выживают и размножаются внутри клеток. Могут долгое время находиться в фагоцитах, капсула защищает от фагоцитоза. Способны к перемещению в соседние клетки, это приводит к слиянию мембран и образованию гигантских многоядерных клеток.

У животных B. mallei чаще всего поражает респираторный тракт, вызывая пнемонии. При этом может происходить быстрая генерализация инфекции.

У человека заболевание протекает как в острой, так и хронической форме.

При заражении обычно появляется папула, а затем пустула в месте контакта (на слизистой глаз, носоглотки, рта, поврежденной коже). Возникает регионарный лимфаденит, далее инфекция может активно распространяется по организму с развитием тяжелой пневмонии или септического процесса. Особенно опасен аэрогенный механизм заражения. Кожные формы протекают более благоприятно.

Несмотря на лечение антибиотиками, летальность достигает 50%. После выздоровления может сохраняться бактерионосительство.

Отсюда B. mallei также рассматривается как потенциальный агент для биотерроризма. Соответственно, исследование возбудителя должно выполняться в условиях для работы с особо опасными инфекциями.

Лабораторная диагностика проводится бактериологическим методом с идентификацией выделенной культуры. Культуру дифференцируют от псевдомонад и B. pseudomallei по соответствующим отличительным признакам. Дополнительно проводят биологическую пробу на морских свинках.

Для обнаружения специфических АТ у больных используют серологические методы (ИФА, РСК, РПГА). Также выполняют кожно-аллергическую пробу с аллергеном маллеином.

Лечение заболевания антибиотиками проводят как при мелиоидозе (цефтазидим, карбапенемы, доксициклин). Контактные лица помещаются в карантин. У них определяют титр АТ в серологических реакциях и ставят кожно-аллергические тесты.

Специфическая профилактика отсутствует. Вакцина не разработана.

Меры санитарного контроля являются основными для предупреждения заноса и распространения данного заболевания.

Дата добавления: 2015-04-24 ; Просмотров: 1310 ; Нарушение авторских прав? ;

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

источник

В Методических рекомендациях представлены современные методы определения грамотрицательных потенциально патогенных микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae и группы неферментирующих бактерий — возбудителей внутрибольничных инфекций. Описаны способы отбора проб, выделения и идентификации этих микроорганизмов из объектов окружающей среды и патологического материала при текущем санитарно-бактериологическом контроле и целенаправленных исследованиях в лечебных стационарах.

Методические рекомендации предназначены для бактериологических лабораторий санитарно-эпидемиологических станций и лечебно-профилактических учреждений.

Внутрибольничные гнойно-септические заболевания представляют собой актуальную проблему современного здравоохранения. Они снижают эффективность лечения в стационарах, увеличивают сроки госпитализации, повышают летальность, наносят значительный экономический ущерб. Наиболее восприимчивыми к внутрибольничным инфекциям являются больные хирургических и урологических стационаров, а также родовспомогательных учреждений.

Проведенными исследованиями была выявлена широкая циркуляция грамотрицательных бактерий в окружающей среде лечебных учреждений и их роль в формировании эпидемического процесса при внутрибольничных инфекциях. В настоящее время наиболее часто выделяются микроорганизмы родов Pseudomonas и Acinetobacter, а в родовспомогательных учреждениях — Klebsiella. Помимо этого, определенное значение имеют и другие потенциально патогенные бактерии — Proteus, Serratia, Enterobacter, Citrobacter и др. Указанные микроорганизмы обусловливают как спорадические случаи заболевания, так и вспышки внутрибольничных инфекций. В связи с этим выделение и идентификация грамотрицательных потенциально патогенных бактерий в объектах окружающей среды стационаров и в патологическом материале приобретают все большую значимость и являются необходимыми для правильной этиологической расшифровки внутрибольничных инфекций, назначения больным адекватной антибактериальной терапии и своевременного проведения профилактических мероприятий в лечебных стационарах.

Бактериологический контроль за объектами окружающей среды в лечебных стационарах осуществляется санитарно-эпидемиологическими станциями при плановых обследованиях в порядке текущего санитарного надзора. Кратность бактериологического контроля со стороны СЭС — не реже 1 раза в квартал. Бактериологические лаборатории лечебных учреждений контролируют соблюдение противоэпидемического режима не реже 1 раза в месяц. Забор проб патологического материала у больного проводят по указанию лечащего врача. По эпидемическим показаниям — при возникновении гнойно-септических заболеваний (внутрибольничных инфекций) — бактериологический контроль проводят внепланово.

Объектами исследования являются:

— кожа рук обслуживающего персонала;

Бактериологическому контролю подлежит воздух следующих объектов: операционных, перевязочных, палат, отделений реанимации и интенсивной терапии.

Пробы воздуха отбирают аспирационным методом с помощью прибора ПАБ-1 (пробоотборник аэрозольный бактериологический), выпускаемого Ленинградским заводом «Красногвардеец». Принцип действия этого прибора основывается на зарядке частиц бактериального аэрозоля при помощи коронного разряда и последующего осаждения их методом электропреципитации на специальные пластины — поддоны с плотной или жидкой питательной средой. Поддоны предварительно следует стерилизовать в сухожаровом шкафу при температуре 180 °С в течение 2 часов. Плотную питательную среду разливают по 20 — 25 мм на поддоны асептично и равномерно, не касаясь их верхней кромки. В случае неиспользования поддонов с питательной средой они должны храниться не более 7 — 10 дней при +4 °С и перед посевом подсушиваться.

При отборе проб в жидкие питательные среды следует строго соблюдать горизонтальное положение прибора. Объем исследуемого воздуха должен составлять от 500 до 1000 л при скорости отбора проб 125 л в минуту. Отбор воздуха в помещениях стационара производят на уровне дыхания лежащего больного.

При отсутствии прибора ПАБ-1 исследования воздуха на грамотрицательную микрофлору проводят методом седиментации. Чашки Петри с элективными средами без крышек помещают на горизонтальные поверхности (стол, подоконник, тумбочка и др.) и выдерживают 2 — 4 часа. В месте забора используют не менее 2 чашек с одной и той же питательной средой.

Не рекомендуется для выделения из воздуха грамотрицательных потенциально патогенных бактерий использовать щелевой прибор Кротова из-за его недостаточной эффективности в этих случаях. В порядке исключения при отборе проб прибором Кротова количество исследуемого воздуха должно составлять не менее 250 — 500 л при скорости протягивания воздуха 25 л в минуту.

Посев воздуха проводится на модифицированную среду Эндо или в жидкие среды накопления: мясопептонный бульон, 1-процентную пептонную воду с последующим подращиванием в термостате в течение 16 — 18 часов при 37 °С. Далее осуществляется пересев из жидких питательных сред накопления на модифицированную среду Эндо, которую выдерживают в термостате 18 — 24 часа при 37 °С. Выросшие на среде Эндо колонии различают по их внешнему виду (размер, окраска, характер поверхности и краев). Для дальнейшего исследования выделенных микроорганизмов отбирают не менее двух колоний одного вида.

Питательные среды, тест-реактивы, растворы индикаторов указаны в Приложении 2.

Бактериологическому контролю подлежат следующие объекты:

— в операционных и перевязочных: операционный, перевязочный стол, стол медицинской сестры, щетки для мытья рук (чистые), поверхность раковин, таз для мытья рук, кран раковины, перчатки, кожа рук персонала;

— наркозная аппаратура: внутренняя поверхность наркозной маски, внутренняя поверхность тройника наркозного аппарата, наружная поверхность ларингоскопа, внутренняя поверхность гофрированных шлангов, внутренняя поверхность деталей клапанов вдоха и выдоха, поверхность адсорбирующего вещества (адсорбент), внутренняя поверхность увлажнителя, внутренняя поверхность воздуховодов, внутренняя поверхность интубационной трубки, наружная поверхность интубационной трубки;

— в палатах для больных: кровати, прикроватные тумбочки, дверные ручки.

Кроме вышеперечисленных предметов, подлежащих бактериологическому контролю, в случае необходимости могут быть подвергнуты исследованию выборочно и другие объекты. По эпидпоказаниям дополнительно проводят отбор проб с предметов, находящихся в употреблении («грязных»).

Отбор проб осуществляется методом смывов.

Смывы с поверхностей предметов обихода, аппаратуры, кожи рук обслуживающего персонала при качественной оценке результатов производят стерильным ватным тампоном на стеклянных или деревянных стержнях, вмонтированных в пробирки с 5 мл стерильной 1-процентной пептонной водой (накопительная среда) выше ее уровня. Тампон увлажняют питательной средой, делают смыв с объекта и снова помещают в пробирку, погружая его в пептонную воду. После отбора пробы с наркозной аппаратуры тампон помещают в пробирку с 5 мл стерильного мясопептонного бульона.

Посевы с объектов в среде накопления инкубируют при 37 °С в течение 16 — 18 часов (для наркозной аппаратуры — 10 — 12 суток) и осуществляют пересев на модифицированную среду Эндо.

При количественной оценке результатов смывы производят тем же способом, что и при качественном методе исследования, применяя 0,1-процентную пептонную воду. Смывы отбирают с поверхности площадью 100 кв. см, при контроле более мелких предметов — с поверхности всего предмета. После отбора проб смывы в пробирках встряхивают на шуттель-аппарате в течение 10 — 15 мин. или ручным способом. Затем осуществляют посев шпателем 0,3 — 0,5 мл смыва на модифицированную среду Эндо, которую выдерживают в термостате 24 часа при 37 °С. Выросшие на среде Эндо колонии различают по их внешнему виду (размер, окраска, характер поверхности и краев). Для дальнейшего исследования выделенных микроорганизмов отбирают не менее двух колоний одного вида.

Бактериологические исследования проводят не позднее чем через 2 — 4 часа с момента отбора проб. До исследования пробы хранят при температуре +4 — +8 °С. Каждая проба, отобранная с объекта окружающей среды стационара, должна иметь направление, включающее следующие пункты: 1) название отделения; 2) место взятия; 3) дата и время взятия; 4) вид материала, направляемого на исследование; 5) фамилия и должность отбирающего.

Материалом для бактериологического исследования являются гной, экссудаты, пунктаты, выпот, биоптаты, ткани, мазки из ран, фекалии, моча, рвотные массы и т.д.

Наиболее правильный способ взятия жидких материалов — объемно с помощью шприца. Отбор материала тампоном производят только при невозможности осуществления объемного метода; при этом параллельно готовят мазок-отпечаток для бактериоскопического исследования. При аспирации закрытых полостей кожу в месте прокола дезинфицируют антисептиками в течение 1 — 2 мин. Свищи и фистулы первоначально очищают от отделяемого, и забор материала производят из глубины. Жидкий материал из открытых ран при хирургическом вмешательстве отбирают объемно шприцем. Отделяемое из дренажей также берут шприцем или используют концы удаленных дренажных трубок.

Биоптаты ран получают путем иссечения участка ткани (весом 0,2 — 1 г) из глубоких слоев раны после тщательной ее обработки физиологическим раствором и 70-градусным этиловым спиртом для удаления поверхностно вегетирующей микрофлоры, а также антисептических и антибактериальных препаратов.

При бактериологическом анализе испражнений исследованию подлежат только утренние фекалии. Предварительное применение очистительных клизм и прием слабительных средств противопоказаны. Во избежание искажения истинного содержания микробов материал должен быть доставлен в лабораторию возможно быстрее после дефекации. Фекалии отбирают в специальную стерильную посуду (бактериологические чашки, флаконы с широким горлом). Первые порции кала (из ампула ректи), содержащие, как правило, более высокое, чем в других отделах кишечника, количество микроорганизмов, исследованию не подлежат.

Для исследования мочи следует брать среднюю порцию утренней мочи после тщательного туалета наружных мочеполовых органов. Мочу собирают в стерильную пробирку в количестве 3 — 5 мл и немедленно доставляют в лабораторию.

Отбор проб рвотных масс производится в соответствии с существующими инструкциями по исследованию пищевых токсикоинфекций и интоксикаций. Патологический материал доставляют в лабораторию не позднее чем через 1 — 1,5 часа с момента взятия. Если немедленная доставка невозможна, образцы хранят в холодильнике при температуре +4 — +6 °С. Каждый образец патологического материала должен быть снабжен этикеткой, на которой указывается: 1) отделение, в котором находится больной; 2) фамилия, имя, отчество больного; 3) возраст больного; 4) номер истории болезни; 5) основной диагноз и диагноз осложнения; 6) проводимая химио- и антибиотикотерапия; 7) место взятия материалов; 8) вид материала; 9) дата и время взятия пробы; 10) фамилия лечащего врача.

Посев патологического материала производят на любую из трех плотных питательных сред: модифицированную среду Эндо, 5-процентный кровяной агар, питательный агар Дагестанского НИИ питательных сред. Посевы выдерживают в термостате при 37 °С в течение 18 — 24 часов. Выросшие на этих средах колонии различают по их внешнему виду (размер, окраска, характер поверхности и краев). Для дальнейшего исследования выделенных микроорганизмов отбирают не менее трех колоний одного вида.

Грамотрицательная потенциально патогенная микрофлора, являющаяся причиной внутрибольничных инфекций, разделяется на две большие группы. Первая группа микроорганизмов ферментирует углеводы и относится к семейству Enterobacteriaceae, вторая — лишена этой способности и принадлежит к группе неферментирующих бактерий. Из семейства Enterobacteriaceae существенное значение в этиологии гнойно-септических заболеваний имеют бактерии родов Klebsiella, Citrobacter, Serratia, Escherichia, Proteus, Providencia. Они являются грамотрицательными мелкими палочками, обладающими подвижностью, или неподвижными, капсульными или бескапсульными, неспорообразующими аэробами или факультативными анаэробами, оксидазанегативными, образующими кислоту при ферментации глюкозы, восстанавливающими нитраты и нитриты.

Группу неферментирующих бактерий при госпитальных инфекциях обычно представляют микроорганизмы родов: Pseudomonas, Acinetobacter, Moraxella, Flavobacterium. Это грамотрицательные мелкие палочки или коккобациллы, обладающие подвижностью, или неподвижные, неспорообразующие аэробы, цитохромоксидазанегативные или цитохромоксидазаположительные, не ферментирующие глюкозу, имеющие нередко пигмент.

Идентификация указанных микроорганизмов начинается с изучения их морфологии в мазках, приготовленных из колоний на плотных питательных средах и окрашенных по Граму. При обнаружении грамотрицательных мелких палочек, а также коккобактерий их отсевают на скошенный мясопептонный агар с целью накопления посевного материала и одновременно в среду OF (среда Хью — Лейфсона). Посевы выдерживают в термостате в течение 18 — 24 часов при 37 °С. Затем учитывают результаты посева на среде OF (рис. 1).

¦ Среды Эндо, кровяной ¦ —————+ Среды накопления: ¦

¦ агар, МПА ¦ ¦ 0,1-, 1-процентная пептонная ¦

¦ Микроскопия мазков из колоний ¦

¦ Грам — палочки или ¦ ¦ Грам + бактерии ¦

¦ ¦ Исключить из исследования

¦ Среда OF ¦ ¦ Скошенный агар (накопление ¦

¦ ¦ ¦ культуры для идентификации) ¦

Семейство Enterobacteriaceae Группа неферментирующих бактерий

Грамотрицательные бактерии, оксидирующие и ферментирующие глюкозу, изменяют первоначальный зеленый цвет среды OF на желтый. В таком случае результат учитывают как +/+, и данные микроорганизмы относят к семейству Enterobacteriaceae с последующей идентификацией.

Грамотрицательные микроорганизмы, оксидирующие, но не ферментирующие глюкозу (+/-) или не оксидирующие и не ферментирующие ее (-/-), относят к группе неферментирующих бактерий с последующей идентификацией.

Идентификацию грамотрицательных потенциально патогенных микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae проводят в два этапа. Первым этапом определяют родовую принадлежность бактерий по минимальному набору тестов. Культуру с поверхности скошенного агара исследуют на наличие цитохромоксидазы. Далее цитохромоксидазаотрицательные колонии засевают в короткий пестрый ряд из 7 тестов. Определяют подвижность, утилизацию цитрата, продукцию индола, реакцию с метиловым красным, ферментацию рамнозы, дезаминирование фенилаланина и декарбоксилирование орнитина.

Дифференциация энтеробактерий с помощью этих тестов проводится по табл. 1. Ключевыми признаками являются: для рода Escherichia — подвижность (+/-), цитратный признак (-), метиловый красный (+); для рода Klebsiella — подвижность (-), цитратный признак (+), орнитиндекарбоксилаза (-), метиловый красный (-); для рода Enterobacter — подвижность (+), цитратный признак (+), орнитиндекарбоксилаза (+), метиловый красный (-); для рода Citrobacter — подвижность (+), цитратный признак (+), метиловый красный (+); для родов Proteus — Providencia — подвижность (+), фенилаланиндезаминаза (+); для рода Serratia — подвижность (+), цитратный признак (+), ферментация рамнозы (-).

Фенилала-
нин (или
триптофан)
дезаминаза

Второй этап идентификации потенциально патогенных энтеробактерий

(проводится по эпидемическим показаниям) — определение их видовой

принадлежности по 11 тестам (табл. 2). Ключевыми признаками в таких случаях

являются: для Citrobacter freundii — индол (-); для Citrobacter diversus —

орнитиндекарбоксилаза (+), H S (-), индол (+); для Klebsiella pneumonia —

ацетоин (-); для Enterobacter aerogenes — орнитиндекарбоксилаза (+),

лизиндекарбоксилаза (+), аргининдегидролаза (-), ферментация инозита (+);

для Enterobacter cloacae — орнитиндекарбоксилаза (+), аргининдегидролаза

(+); для Enterobacter agglomerans — орнитиндекарбоксилаза (-),

аргининдегидролаза (-); для Serratia liquefaciens — орнитиндекарбоксилаза

(+), ферментация сорбита (+), арабинозы (+); для Serratia marcescens —

орнитиндекарбоксилаза (+), ферментация сорбита (-), арабинозы (-),

желатиназная активность (+); для Serratia rubidaea — орнитиндекарбоксилаза

(-); для Proteus mirabilis — уреаза (+), H S (+), индол (-), мальтоза (+);

для Proteus vulgaris — уреаза (+); H S (+), индол (+), мальтоза (+); для

Morganella morganii — уреаза (+), H S (-), индол (+); для Providencia

alcalifaciens — уреаза (-), адонит (+), инозит (-); для Providencia

stuartii — уреаза (-), адонит (-), инозит (+). Определение этих признаков

осуществляется с помощью дифференциально-диагностических питательных сред,

представленных в Приложении 2.

¦ Микроорганизмы ¦ Орни- ¦ Лизин- ¦ Арги- ¦ Фермен- ¦ Фермен- ¦ Фермен- ¦ H S ¦ Ин- ¦ Уре- ¦ Желати- ¦ Ацетоин ¦ Фермен- ¦ Адо- ¦

¦ ¦ тинде- ¦ декар- ¦ нинде- ¦ тация ¦ тация ¦ тация ¦ 2 ¦ дол ¦ аза ¦ назная ¦ ¦ тация ¦ нит ¦

¦ ¦ карбок- ¦ бокси- ¦ гидро- ¦ сорбита ¦ араби- ¦ инозита ¦ ¦ ¦ ¦ актив- ¦ ¦ маль- ¦ ¦

¦ ¦ силаза ¦ лаза ¦ лаза ¦ ¦ нозы ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ность ¦ ¦ тозы ¦ ¦

¦ agglomerans ¦ — ¦ — ¦ — ¦ -/+ ¦ + ¦ — ¦ — ¦ -/+ ¦ — ¦ — ¦ + ¦ в ¦ в ¦

¦ Hafnia alvei ¦ + ¦ + ¦ — ¦ + ¦ + ¦ — ¦ — ¦ — ¦ — ¦ — ¦ + (22°) ¦ + ¦ — ¦

¦ liquefaciens ¦ + ¦ + ¦ — ¦ + ¦ + ¦ +/- ¦ — ¦ — ¦ — ¦ — ¦ -/+ ¦ + без ¦ + без ¦

Примечание: +/- — преобладание положительного результата;

-/+ — преобладание отрицательного результата;

(+) — малая вероятность положительного результата;

в — вариабельность признака.

Идентификация НГОБ проводится по двухэтапной схеме (рис. 2).

¦ ¦ Одновременная постановка тестов: ¦

I этап ¦ ¦ — окисление глюкозы на среде OF; ¦

¦ ¦ ТЕСТ: ¦¦ ТЕСТ: ¦¦ ТЕСТ: ¦ ¦¦ ТЕСТ: ¦¦ ТЕСТЫ: ¦¦ ТЕСТЫ: ¦

¦ ¦ — с 10- ¦¦ — чувстви- ¦¦ — ин- ¦ ¦¦ — ДНК- ¦¦ — OF с фруктозой; ¦¦ — аргининдегидролаза или ¦

¦ ¦ процентной ¦¦ тельность ¦¦ дол ¦ ¦¦ аза ¦¦ — фенилаланин- ¦¦ флюоресценция (FN); ¦

¦ ¦ лактозой ¦¦ к пеницил- ¦¦ ¦ ¦¦ ¦¦ дезаминаза; ¦¦ — желатиназа; ¦

¦ ¦ ¦¦ лину ¦¦ ¦ ¦¦ ¦¦ — ДНКаза; ¦¦ — амилаза; ¦

¦ ¦ ¦¦ ¦¦ ¦ ¦¦ ¦¦ — H S ¦¦ — дизендекарбоксилаза; ¦

¦¦ процентной ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ 2 ¦ ¦ ¦ ¦ или FN ¦

¦ ¦ ¦ процентной ¦ ¦ ¦ ¦ L——- \/ ¦ ¦ ¦ L-T— ¦ рост +——¬

¦ ¦ ¦ лактозой ¦ ¦ ¦ ¦ + ———-¬ ++ ¦ L—+— > ¦ + ¦ при 42° ¦ ¦

¦ Acinetobacter ¦¦¦ Moraxella ¦¦ Flavobacte- ¦¦¦ Ps. ¦¦¦ Alcaligenes ¦¦¦ Ps. ¦¦¦ Ps. ¦¦¦ Ps. ¦¦

¦ calcoaceticus ¦¦¦ spp. ¦¦ rium menin- ¦¦¦ pseudoalca- ¦¦¦ spp. ¦¦¦ cepacia ¦¦¦ putre- ¦¦¦ fluorescens ¦¦

¦ var. lwoffi ¦¦¦ ¦¦ gosepticum ¦¦¦ ligenes ¦¦¦ ¦¦¦ ¦¦¦ faciens ¦¦¦ ¦¦

¦ Acinetobacter ¦ ¦ Ps. ¦ ¦ Ps. ¦ ¦ Ps. ¦ ¦ Ps. ¦¦ Ps. ¦ ¦ Ps. ¦

¦ calcoaceticus ¦ ¦ maltophilia ¦ ¦ alcaligenes ¦ ¦ diminuta ¦ ¦ stutzeri ¦¦ putida ¦ ¦ aeruginosa ¦

Первый этап — определение родовой принадлежности НГОБ (табл. 3) — включает три теста: определение подвижности, окисление 1-процентной глюкозы в среде Хью — Лейфсона (OF) и наличие фермента оксидазы. По результатам этих трех тестов проводят ориентировочную идентификацию следующих НГОБ: Pseudomonas, Acinetobacter, Moraxella, Alcaligenes, Flavobacterium meningosepticum.

¦ Микроорганизмы ¦ Подвижность ¦ Оксидаза ¦ Окисление-ферментация ¦

Примечание: 1) в числителе — окисление; в знаменателе — ферментация.

2) «*» — подщелачивание среды OF в аэробных условиях.

3) «(-)» — редко встречаемый признак.

Причем разделение родов Pseudomonas и Alcaligenes возможно в том случае, если исследуемый штамм окисляет глюкоза на среде OF (см. табл. 3).

Второй этап — определение видовой, а в отдельных случаях подтверждение родовой принадлежности НГОБ (табл. 4). Выбор тестов, которые необходимо поставить на втором этапе, зависит от результатов трех тестов первого этапа.

¦ Микроор- / ¦ Подвиж- ¦ Окси- ¦ OF с ¦ Флюорес- ¦ Жела- ¦ Рост ¦ H S ¦ Ами- ¦ ДНК- ¦ Лизин- ¦ Фенил- ¦ OF с ¦ Окисле- ¦ Чувст- ¦ Ин- ¦

¦ ганизмы / ¦ ность ¦ даза ¦ глюко- ¦ ценция в ¦ тина- ¦ при ¦ 2 ¦ лаза ¦ аза ¦ декар- ¦ аланин- ¦ фрук- ¦ ние ¦ витель- ¦ дол ¦

¦ / ¦ ¦ ¦ зой ¦ УФ-свете ¦ за ¦ 42 ¦ ¦ ¦ ¦ бокси- ¦ дезами- ¦ тозой ¦ 10-про- ¦ ность к ¦ ¦

¦ / ¦ ¦ ¦ (окис- ¦ либо ар- ¦ ¦ °С ¦ ¦ ¦ ¦ лаза ¦ наза ¦ ¦ центной ¦ пени- ¦ ¦

¦ / ¦ ¦ ¦ ление) ¦ гининде- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ лактозы ¦ циллину ¦ ¦

Примечание: «*» — подщелачивание среды OF.

Оценку результатов первого этапа проводят в следующем порядке: определение подвижности, наличия фермента оксидазы, окисления 1-процентной глюкозы на среде Хью — Лейфсона (среда OF). Как видно из рис. 2, возможны семь вариантов исходов этих трех тестов.

1. Неподвижные микроорганизмы, не обладающие оксидазной активностью и не окисляющие глюкозу на среде OF (на схеме: подвижность -, оксидаза -, OF -), относят к Acinetobacter calcoaceticus v. lwoffi. В качестве подтверждающего используют тест с 10-процентной лактозой. A. lwoffi не окисляют 10-процентной лактозу.

2. Неподвижные НГОБ, не обладающие оксидазной активностью, но окисляющие глюкозу на среде OF (на схеме: подвижность -, оксидаза -, OF +), принадлежат к Acinetobacter calcoaceticus v. anitratus.

Для подтверждения используют тест окисления 10-процентной лактозы, который у этих микроорганизмов положительный. Для идентификации Acinetobacter большое значение имеет микроскопия мазка, поскольку среди неферментирующих грамотрицательных бактерий только Acinetobacter могут иметь клетки в виде кокков или коккобацилл.

3. Штаммы, обладающие следующими свойствами: подвижность (-), оксидаза (+), OF (-), относят к роду Moraxella. Подтверждающим тестом для этих микроорганизмов служит чувствительность к пенициллину (+).

4. Неподвижные оксидазоположительные штаммы, окисляющие глюкозу на среде OF, относят к Flavobacterium meningosepticum. В качестве подтверждающего теста служит положительная реакция на индол и наличие желтого пигмента.

5. Подвижные оксидазоположительные микроорганизмы, окисляющие глюкозу

на среде OF (+), могут принадлежать к одному из шести видов рода

Pseudomonas: P. aeruginosa, P. fluorescens, P. putida, P. cepacia, P.

slutzeri, P. putrifaciens. Для их дифференциации одновременно ставят шесть

тестов: флюоресценция в УФ-свете либо определение наличия

аргининдегидролазы, определение наличия желатиназы, амилазы,

лизиндекарбоксилазы, рост при 42 °С, образование H S. Учет результатов

начинают с определения аргининдегидролазы либо флюоресценции в УФ-свете.

Штаммы, обладающие аргининдегидролазой либо флюоресцирующие в УФ-свете и

дающие рост при 42 °С, относят к P. aeruginosa. Если исследуемый штамм при

наличии аргининдегидролазы или флюоресценции в УФ-свете не растет при 42

°С, проводят дифференциацию между P. putida и P. fluorescens по

желатиназной активности. Не разжижающие желатину штаммы относят к P.

putida, а разжижающие — к P. fluorescens. Если у исследуемого штамма

отсутствует аргининдегидролаза либо флюоресценция в УФ-свете, оценивают

способность образовывать сероводород, амилазу и лизиндекарбоксилазу. Если

аргининдегидролаза или флюоресценция (-), а H S (+), штамм относят к P.

putrefaciens; штамм, обладающий ферментом амилазой — к P. stutzeri; штамм,

декарбоксилирующий лизин, расценивают как P. cepacia Среди культур P.

putrefaciens встречаются штаммы, окисляющие глюкозу и не окисляющие ее, а

среди культур P. cepacia — оксидазоположительные и оксидазоотрицательные.

6. Подвижные, оксидазоположительные, не окисляющие глюкозу на среде OF, не ферментирующие грамотрицательные бактерии могут принадлежать к роду Alcaligenes или к одному из видов рода Preudomonas: P. alcaligenes, P. putrefaciens, P. pseudoalcaligenes, P. diminuta. Обычно эти микроорганизмы подщелачивают среду OF в аэробных условиях. Для их дифференциации одновременно ставят четыре теста и определяют окисление фруктозы на среде OF, наличие ДНКазы, фенилаланиндезаминазы и образование сероводорода. Окисление фруктозы указывает на P. pseudoalcaligenes, образование сероводорода является четким дифференциальным признаком для P. putrefaciens. Наличие фермента ДНКазы определяет вид P. diminuta. Проведение точной дифференциации между родом Alcaligenes и видом P. alcaligenes возможно лишь по окраске жгутиков, что неприемлемо для практических лабораторий. Поэтому для ориентировочной дифференциации используют тест, определяющий фенилаланиндезаминазу. Этот фермент присутствует в 72% случаев у P. alcaligenes и отсутствует у бактерий рода Alcaligenes.

7. Подвижные оксидазоотрицательные штаммы, окисляющие глюкозу на среде OF, принадлежат либо к P. maltofilia, либо к виду P. cepacia. Для дифференциации этих двух видов используют тест, выявляющий наличие фермента ДНКазы: P. maltofilia обладает ферментом ДНКазой, а P. cepatia — нет. Среди штаммов P. maltofilia встречаются штаммы как окисляющие, так и не окисляющие глюкозу.

Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам методом дисков определяется в соответствии с «Методическими указаниями по определению антибиотикочувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом их диффузии в агар с использованием дисков», утв. МЗ СССР.

Чистые культуры идентифицированных микроорганизмов засевают короткими штрихами на секторы чашки с мясопептонным агаром (из расчета 12 штрихов на 1/6 чашки), подращивают 5 — 6 часов и перепечатывают бархатным или металлическим репликатором на среды с антибиотиками: ампициллином, карбенициллином, рифампицином, кефзолом, цефализином (100 мкг/мл среды), левомицетином, канамицином, налидиксовой кислотой (50 мкг/мл среды), стрептомицином (20 мкг/мл среды), тетрациклином (30 мкг/мл среды), гентамицином (5 мкг/мл среды), а также с одним из сульфаниламидов на минимальном солевом агаре (50 — 100 мкг/мл среды). Учет результатов проводится через сутки инкубации при 37 °С и позволяет определить антибиотикограмму, служащую одновременно маркером штамма. При этом устойчивость к налидиксовой кислоте служит важной генетической меткой при сравнении идентифицированных культур, а к гентамицину может считаться достаточно надежным признаком, характерным для госпитальных штаммов.

Исследуемый материал от контактных лиц по эпидпоказаниям отбирается по усмотрению эпидемиолога.

Отбор проб производят согласно разделу 2. Выделение E. coli осуществляется в соответствии с Приказом N 720 МЗ СССР, 31.07.78.

Отбор проб производят согласно разделу 2. Посев исследуемого материала осуществляют на плотную питательную среду К-2 и инкубируют ее при 37 °С 18 — 24 часа. Колонии клебсиелл в этой среде крупные, блестящие, как правило, слизистые. Окраска их различна — от желтой или зелено-желтой до голубой. Для идентификации со среды снимают по 1 — 2 колонии и высевают их в полужидкий агар для определения подвижности, а также в среду для определения орнитиндекарбоксилазной активности. Признаками, характерными для рода Klebsiella, являются неподвижность культуры и неспособность декарбоксилировать орнитин.

Отбор проб производят согласно разделу 2. Посев материалов осуществляют

на среду П-2, инкубируют при 37 °С в течение 18 — 24 часов. Обязательным

условием посева на среде П-2 является получение по возможности разреженного

роста и изолированных колоний для обеспечения точности видовой

идентификации культуры. На этой среде колонии P. mirabilis — малиновые с

черным центром, P. vulgaris — желтые с черным или темно-коричневым центром,

M. morganii, Providencia — малиновые без центра, P. rettgeri — желтые без

центра. Определение P. mirabilis и P. vulgaris в 96 — 98% случаев совпадает

с последующей идентификацией и в дальнейшем в подтверждении не нуждается.

Колонии без черного центра или сомнительные должны быть идентифицированы.

Для их дифференциации используются среды «ПП» и «ИнАд». Посев в среду «ПП»

проводят штрихом по скошенной поверхности и уколом до дна пробирки,

инкубируют 18 — 20 часов при 37 °С. Уреазную активность учитывают по

нижнему слою среды: положительный результат — оранжево-желтая окраска, что

четко разграничивает род Proteus от рода Providencia. Продукция газа в

нижнем слое — признак, отличающий P. alcalifaciens от P. stuartii. Наличие

индола, определяемого полоской реактивной бумаги, позволяет

идентифицировать P. mirabilis от P. vulgaris и других видов протеев и

провиденций. Триптофандеаминаза, выявляемая с помощью реактива с хлорным

железом, подтверждает принадлежность выделенной культуры к родам Proteus,

Providencia, Morganella. В последнем случае положительной реакцией является

окрашивание реактива и подлежащего слоя среды в вишнево-красный,

оранжево-красный или оранжевый цвета (наступает в течение первых минут),

отрицательной — окрашивание реактивов в желтый цвет и подлежащего слоя

среды — в светло-бурый. H S на среде «ПП» образуется в виде черных точек в

толще столбика, через 2 — 3 часа после добавления реактива увеличивающихся

до сплошной черной полосы, что отличает P. mirabilis и P. vulgaris от

других представителей этой группы микроорганизмов.

Посевы в среду «ИнАд» инкубируют при 37 °С в течение 18 — 20 часов. Среда «ИнАд» позволяет определять ферментацию инозита и адонита. При положительном результате цвет среды с темно-зеленого меняется на желтый, что позволяет дифференцировать P. alcalifaciens (адонитположительная) от P. stuartii (инозитположительные), а P. rettgeri (инозит- и адонитположительные колонии) от других видов протеев (см. табл. 2).

Определение синегнойной палочки схематически приведено на рис. 3. Отбор проб производят согласно разделу 2. Посев исследуемого материала осуществляют на одну из плотных селективных сред: ацетамидный агар, аргининную среду, среду с бриллиантовым зеленым, цетилпиридиний хлоридом (ЦПХ), цетримидную. Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 — 48 часов и затем учитывают морфологические особенности колоний P. aeruginosa. На среде ЦПХ колонии P. aeruginosa средних размеров, отдельные колонии крупные, плоские, с матовой поверхностью. Пигментные штаммы и среда вокруг них окрашены в зелено-желтый, синевато-красный цвет.

¦ 0,1-процентная пептонная вода ¦ ¦ 1-процентная пептонная вода, ¦

¦ Плотные питательные среды: ¦

¦ Среда O/H ¦¦ Нитратная среда ¦¦ Рост при +42 °С ¦

На цетримидной среде колонии средних размеров, с неровными краями, шероховатые, с зелено-бурым, диффундирующим в среду пигментом, апигментные штаммы образуют матовые колонии.

На аргининной среде колонии P. aeruginosa плоские, среднего размера, красного цвета за счет образования формазана в присутствии ТТХ.

На ацетамидном агаре колонии мелкие, с ровным краем, матовые, чаще с ярким серебряным блеском. Пигментные штаммы образуют зеленовато-синеватый пигмент, диффундирующий в толщу среды.

На среде с бриллиантовым зеленым колонии средних размеров с ровным краем, иногда фестончатые; пигментные штаммы растут в виде зеленоватых колоний, апигментные — бесцветные.

Культуры P. aeruginosa обладают специфическим ароматическим запахом земляничного мыла, жасмина, фиалки, цветов липы и др. Для идентификации P. aeruginosa с плотных селективных питательных сред снимают 1 — 2 пигментных и 3 — 4 апигментных колонии на среду Кинг А. Посев на эту среду производят бляшками и выдерживают в термостате при 37 °С 20 — 24 часа. При отсутствии пигмента посевы оставляют при комнатной температуре еще на 24 часа. Учитывают типичной формы колонии: уплощенные, с шероховатой поверхностью, неровными краями и кружевным венчиком, образующимся в результате ограниченного роения культуры. При косом освещении улавливается серебристый блеск. Пигмент чаще всего имеет буроватую окраску с варьированием оттенков, в зависимости от преобладания того или иного пигмента — от сине-зеленого до коричнево-красного. Пигмент образуется вокруг колоний и диффундирует в толщу среды. При наличии пигмента и характерной морфологии на среде Кинг А идентификация P. aeruginosa на этом заканчивается. Апигментные штаммы подвергают дальнейшим исследованиям: колонии микроскопируют, определяют цитохромоксидазу, делают посев в среду OF и нитратную среду. Для этой цели со среды Кинг А снимают 2 — 3 колонии и окрашивают по Граму. P. aeruginosa — грамотрицательные палочки, подвижные, не образуют спор. Одновременно на среде Кинг А проверяют цитохромоксидазную активность колоний путем нанесения раствора каплями на макроколонии, при этом колонии P. aeruginosa в течение 15 — 30 секунд становятся темно-синими. Учет производят не позднее чем через 3 мин., по истечении которых все колонии с нанесенным реактивом синеют. Цитохромоксидазную активность можно проверить путем нанесения культуры на фильтровальную бумагу, пропитанную свежеприготовленным раствором, или при помощи СИБов.

Посев культур в нитратную среду производят уколом до дна пробирки, выдерживают при 42 °С в течение 20 — 24 часов, при положительном ответе отмечают рост культуры в виде помутнения среды и образования на поверхности среды пузырьков газа. При применении нитратного бульона газ учитывается в поплавках.

Отличие P. aeruginosa от других видов псевдомонад — возбудителей внутрибольничных инфекций осуществляют дифференциально-диагностическими тестами, приведенными в табл. 4.

Отбор проб патологического материала для качественной оценки результатов производят в 10 мл стерильной жидкой накопительной среды ЭАС-1. Смывы с предметов, аппаратуры, рук персонала осуществляют непосредственно средой ЭАС-1 (10 мл). Затем посевы на среде ЭАС-1 выдерживают при 30 °С в течение 48 часов. При положительном результате на поверхности среды образуется бесцветная пленка. С поверхности пленки материал пересевают на 2 — 4 сектора среды ЭАС-2 и инкубируют при 30 °С в течение 24 часов. Отбор проб при количественной оценке результатов проводят согласно разделу 2.

Посев осуществляют на среду ЭАС-2 и также выдерживают при 30 °С в течение 24 часов, при отсутствии роста посевы оставляют еще на 24 часа при этой же температуре. На среде ЭАС-2 колонии A. calcoaceticus v. anitratus оранжевые, иногда желтые, средних размеров, выпуклые, с ровными краями. Колонии A. lwoffi, как правило, бледно-зеленые, мелкие, выпуклые, с ровными краями. Для идентификации снимают 2 — 3 колонии и проводят по тестам в соответствии с идентификацией неферментирующих грамотрицательных бактерий.

Определение сероваров возможно у C. frenndii при помощи специфических O- и H-сывороток в реакции агглютинации на стекле в соответствии с антигено-диагностической схемой этих бактерий.

Первоначально эту культуру испытывают поливалентными O-сыворотками, CiOB, CiOF, CiOD, CiOG, каждая из которых включает антитела к ряду O-групп («Наставление по применению O-сывороток для идентификации бактерий Цитробактер»).

При работе с поливалентными сыворотками целесообразно начинать с сывороток CiOA, CiOB, CiOF в связи с большей частотой распространения в стране представителей соответствующих групп. При положительном результате реакции агглютинации с одной из поливалентных сывороток продолжают серологическую идентификацию культур с сыворотками к O-антигенам, входящим в состав поливалентной смеси. При наличии положительной реакции агглютинации с одной из указанных сывороток устанавливают серологическую группу O-штамма. При агглютинации культуры одновременно с двумя или тремя поливалентными O-сыворотками, содержащими общие антитела, культуру дополнительно испытывают с соответствующими факторными сыворотками и на основании полученных данных определяют антигенное строение штамма. После установления O-группы определяют H-антиген с использованием поливалентных и моновалентных H-сывороток. Для определения O- и H-антигена в реакции агглютинации на стекле используют 18 — 20-часовую культуру на СПА; реакцию проводят общепринятым способом.

Определение сероваров P. vulgaris и P. mirabilis возможно при помощи специфических O- и H-сывороток в реакции агглютинации на стекле в соответствии с антигено-диагностической схемой этих бактерий в соответствии с «Наставлениями по применению агглютинирующих диагностических протейных O- и H-сывороток». Для реакции агглютинации применяют суточную культуру на СПА, которую испытывают в начале с поливалентными, а затем при положительной реакции агглютинации, с моновалентными O-сыворотками, входящими в поливалентную. После установления O-группы определяют H-антиген, применяя вначале поливалентную, а затем моновалентные H-сыворотки.

Установление сероваров клебсиелл проводят путем определения капсульного антигена в реакции агглютинации на стекле при помощи капсульных K-сывороток. Для получения культуры в капсульной форме исследуемый штамм пассируют через углеводосодержащие среды (0,2-процентный глюкозный бульон и агаровая среда Ворфеля — Фергюсона). Культуру засевают в 0,2-процентный глюкозный бульон и инкубируют в течение 4 часов при 37 °С, после чего пересевают на среду Ворфеля — Фергюсона и инкубируют при той же температуре 18 — 20 часов.

Для реакции агглютинации петлю агаровой культуры со среды Ворфеля — Фергюсона растирают на предметном стекле рядом с каплей соответствующей клебенеллезной сыворотки, после чего их тщательно смешивают. Капсульная агглютинация наступает обычно очень быстро и имеет вид крупных хлопьев, тяжей или с трудом разделяемого диска. В сомнительных случаях реакция может наблюдаться в нескольких сыворотках при нахождении культуры в OK- или PK-формах; результат подтверждают в развернутой (пробирочной) реакции агглютинации в разведениях сыворотки 1:2, 1:4. (Проведение реакции агглютинации и отбор культур в K-форме осуществляют в соответствии с «Наставлением по применению клебенеллезных диагностических агглютинирующих сывороток».)

Для оценки эпидемической ситуации необходимо использовать следующие показатели.

1) Широкий набор маркеров устойчивости у штаммов, колонизующих больных и вызывающих гнойно-септические заболевания: наличие устойчивости к гентамицину, цефалоспоринам.

2) Широкое распространение среди больных в палате, отделении одного и того же штамма грамотрицательных бактерий с множественной лекарственной устойчивостью; обнаружение того же штамма в окружающей среде стационара.

3) Спорадическая заболеваемость в стационаре, связанная с обнаруженными штаммами.

Таким образом, обнаружение у 6 — 10 исследованных пациентов одного и того же штамма грамотрицательных бактерий, определение у штамма 6 — 8 маркеров устойчивости, широкое распространение этого штамма в объектах окружающей среды стационара, этиологически обусловленная спорадическая заболеваемость в стационаре свидетельствуют о необходимости проведения санитарно-гигиенических и дезинфекционных мероприятий в лечебном стационаре.

Аппарат для бактериологического исследования воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова).

Аппарат для встряхивания жидкостей в пробирках и колбах (шуттель-аппарат).

Пробоотборник аэрозольный бактериологический (ПАБ-1).

Облучатель ультрафиолетовый для обнаружения витаминов в растворе, модель 833.

Стерилизатор паровой по ГОСТ 17726-81 или другого типа с режимами стерилизации от 100 °С до 126 °С.

Термостат электрический с терморегуляцией до 60 °С, снабженный термометром с ценой деления 0,2 °С.

Шкаф сушильный, стерилизационный, обеспечивающий температуру 180 °С в течение 1 — 2 часов.

Аквадистиллятор Д-4-2 или другого типа.

Холодильник бытовой электрический с температурой в камере +4 °С — +6 °С.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104-80 4-го класса точности.

Микроскоп биологический по ГОСТ 8284-78 или другого типа, обеспечивающий увеличение 630, с осветителем.

Штамп-репликатор металлический для определения антибиотикочувствительности бактерий.

Шприцы емкостью 5 — 10 мл, иглы к ним.

Поддоны для аппарата ПАБ-1.

Лабораторная стеклянная посуда (чашки Петри, пробирки, колбы, пипетки, предметные стекла, флаконы).

Аммоний фосфорнокислый однозамещенный, МРТУ 6-09-1378-64.

Диметил-пара-фенилендиамин, ТУ 6-09-18-28-72.

Калий йодистый, ГОСТ 4232-65.

Карбонат кальция, ГОСТ 4530-76.

Натрий аммоний фосфорнокислый, ГОСТ 4170-68.

Натрий лимоннокислый трехзамещенный, ГОСТ 22-80-76.

Нитрит натрия, ГОСТ 4197-74.

Пара-диметиламинобензальдегид, ТУ 6-09-3272-77.

Соляная кислота, ГОСТ 3118-67.

Сульфат калия, ГОСТ 4523-77.

Сульфат магния, ГОСТ 4523-77.

Тиосульфат натрия (натрий серноватистокислый), ГОСТ 4215-66.

2-3-5-трифенил-тетразолий хлорид (ТТХ), ТУ 6-09-3838-78.

Фосфат калия однозамещенный, ГОСТ 4198-75.

Фосфат калия двузамещенный, ГОСТ 2493-75.

Фосфат натрий аммоний, ГОСТ 4170-68.

Хлорное железо (FeCl ), ГОСТ 4147-74.

Хлорид магния, ГОСТ 4209-77.

Хлорид натрия, ГОСТ 4233-77.

Цитрат натрия трехзамещенный, ГОСТ 51314-72.

Цетилпиридиний хлорид, МРТУ 6-09-4122-67.

Крахмал растворимый, ГОСТ 10163-76.

Раффиноза (ЧССР), МРТУ 6-09-4026-67.

Этиловый спирт, ТМРТУ 6-09-5531-68.

Изоамиловый спирт, ГОСТ 5830-51.

L-аргинин гидрохлорид, МРТУ 6-09-124-63.

L-лизин моногидрохлорид, МРТУ 6-09-124-63.

L-триптофан, МРТУ 6-09-6042-69.

L-бета-финил-альфа-аланин, МРТУ 6-09-5702-68.

Бриллиантовый зеленый, ВТУ 1100-53.

Бромтимоловый синий, ТУ 6-09-2045-77.

Кристаллический фиолетовый, ТУ 6-09-4119-75.

Феноловый красный, ГОСТ 4599-73.

Агар порошковый питательный сухой Дагестанского НИИ питательных сред.

Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-72.

Дрожжи прессованные хлебопекарные, ГОСТ 171-81.

Желатина пищевая, ТУ 10П-317-69.

Пептон сухой для бактериологических целей.

Агглютинирующие диагностические протейные O- и H-сыворотки.

Агглютинирующие диагностические сыворотки цитробактер.

Агглютинирующие диагностические клебсиеллезные сыворотки.

1. Пептонная вода. К 1000 мл дистиллированной воды добавить 10 г пептона и 5 г хлорида натрия. Подогреть до растворения пептона, профильтровать, установить pH 7,2 — 7,4 и стерилизовать при 120 °С 20 минут.

2. Мясопептонный бульон. К 1000 мл мясной воды добавить 10 г пептона, 5 г хлорида натрия. После растворения ингредиентов установить pH 7,2 — 7,4 и стерилизовать при 120 °С 20 минут.

3. Мясопептонный агар. К 1000 мл мясопептонного бульона добавить 15 г мелко нарезанного агара в волокнах или порошке. После 10 — 15-минутного набухания агар-агара смесь кипятить при постоянном помешивании до полного его растворения. Полученную среду после установления pH 7,2 — 7,4 профильтровать в горячем виде через ватно-марлевый фильтр, предварительно смоченный кипятком, разлить во флаконы и пробирки и стерилизовать при 120 °С 20 минут.

4. Кровяной агар (5-процентный). К 1000 мл питательного агара (pH 7,2 — 7,4), расплавленного и охлажденного до 50 — 55 °С, прибавить 50 мл дефибринированной или цитратной крови животного (барана, кролика, крупного рогатого скота) или человека. Агар с кровью тщательно перемешать, избегая образования пены, и стерильно разлить в чашки.

5. Среда Эндо модифицированная. Среду готовят из сухого препарата по прописи на этикетке. В готовую охлажденную до 60 — 70 °С среду добавить 1,25 мл 0,01-процентного водного раствора кристаллического фиолетового из расчета на 100 мл среды для ингибиции грамположительных микроорганизмов. Разлить в чашки по 15 — 18 мл.

6. Дифференциально-диагностическая среда П-2 для выделения протеев. В 100 мл растопленного 2-процентного питательного агара добавить 3 мл дрожжевого экстракта, 1 г маннита, 1 г мальтозы, 0,8 г желчных солей по Олькеницкому, 0,2 г цитрата аммоний-железа, 0,05 г тиосульфата натрия, 2,5 мл 0,01-процентного раствора кристаллического фиолетового, 0,5 мл 1,6-процентного щелочного раствора фенолового красного, pH 7,4 — 7,7. Стерилизовать при 0,5 атм. 15 мин., прибавить 10 — 12 тыс. ЕД полимиксина М, разлить в чашки. Среда должна иметь красно-коричневый цвет.

7. Дифференциально-элективная среда К-2 для выделения клебсиелл. К 100 мл дистиллированной воды добавить агар-агара 2 г, хлорида натрия 0,5 г, сульфата магния 0,02 г, сульфата калия 0,02 г, двузамещенного фосфата калия 0,2 г, однозамещенного фосфата калия 0,08 г, раффинозы 0,5 г (возможна замена 5 г сахарозы), pH 7,0 — 7,2. Стерилизовать при 0,5 атм. 15 мин. После стерилизации прибавить 0,5 мл 1,6-процентного щелочного раствора бромтимолового синего, 2 мл 0,01-процентного водного раствора кристаллического фиолетового, 0,2 мл 50-процентного водного самостерилизующегося раствора мочевины, смешать. Смесь разлить в чашки Петри слоем 3 — 5 мм.

Раствор мочевины самостерилизующийся (50-процентной) готовить следующим образом: 50 г мочевины растворить в 100 мл стерильной дистиллированной воды (в стерильной посуде), выдержать при комнатной температуре 2 — 3 суток для «самостерилизации». Последующее хранение при +4° — +6 °С.

8. Ацетамидный агар для выделения псевдомонад. К 100 мл дистиллированной воды прибавить хлорида натрия 0,5 г, сульфата магния 0,02 г, фосфата аммония однозамещенного 0,1 г, фосфата калия двузамещенного 0,1 г, ацетамида 2 г, агара 2,0 г, pH 6,7. Стерилизовать при 0,5 атм. 15 минут.

9. Аргининная среда для выделения псевдомонад. К 0,3 г аргинина монохлорида добавить хлорида магния 0,02 г, однозамещенного фосфата калия 0,08 г, тиосульфата натрия 0,1 г, агара 2 г, воды до 100 мл, pH 7,2 — 7,4. Стерилизовать при 0,5 атм. 15 мин., разлить в 6 чашек. После застывания поверхность среды залить тонким слоем другой среды: агара 2 г, трифенилтетразолий хлорида (ТТХ) 0,8 г (или 8,0 мл 10-процентного водного раствора ТТХ), воды до 100 мл. Инкубация 42 — 44 часа при 37 °С.

10. Среда с бриллиантовым зеленым для выделения псевдомонад. К 100 мл расплавленного стерильного питательного агара прибавить 1 мл аптечного раствора бриллиантового зеленого, предварительно разведенного физиологическим раствором 1:10. Среду разлить в чашки.

11. Среда с цетилпиридиний хлоридом для выделения P. aeruginosa. К 100 мл дистиллированной воды прибавить пептона 2 г, калия сернокислого 0,7 г, магния хлористого 0,15 г, магния сернокислого 0,15 г, N-цетилпиридиния хлорида 0,2 г, агар-агара 1 г, pH 6,8 — 7,0, стерилизовать при 0,5 атм. 15 мин.

12. Среды для выделения бактерий рода Acinetobacter.

А. Этанол-аммонийная среда жидкая (ЭАС-1). К 100 мл дистиллированной воды добавить фосфата натрий-аммония 0,15 г, фосфата калия однозамещенного 0,04 г, сульфата калия 0,02 г, хлорида магния 0,02 г. После стерилизации при 0,5 атм. в течение 15 мин. прибавить 1,2 мл этилового 96-градусного спирта и разлить асептично по 10 мл в пробирки.

Б. Этанол-аммонийная среда плотная (ЭАС-2). Основной состав среды тот же, но до стерилизации добавить 1,5 г агара (порошкового 1,8 г) и 0,5 мл 1,6-процентного щелочного раствора бромтимолового синего.

13. Среды для теста на окисление-ферментацию (OF).

А. Среда Хью — Лейфсона. К 100 мл дистиллированной воды добавить 0,2 г

пептона, 0,5 г хлорида натрия, 0,03 г K HPO , 0,3 г агар-агара, 1 г

углевода (глюкоза, фруктоза), 0,3 мл 1-процентного водного раствора

бромтимолового синего. Среду кипятить до полного растворения ингредиентов,

установить pH 7,1 — 7,2, разлить по 3 — 4 мл в пробирки, стерилизовать при

Б. Среда Хью — Лейфсона модифицированная. К 100 мл дистиллированной

воды добавить 0,2 г пептона, 0,5 г хлорида натрия, 0,3 г K HPO , 0,4 — 0,6

г агар-агара, 1 г углевода (глюкоза, фруктоза), 0,5 мл 1,6-процентного

щелочного раствора бромтимолового синего. После растворения ингредиентов в

водяной бане установить pH 7,1 — 7,2, разлить в пробирки высотой 6 — 8 см.

Стерилизовать при 0,5 атм. 15 мин., остудить столбиком. Учет теста на

окисление-ферментацию см. в разделе 3.

14. Агар Симмонса для определения цитратного признака. К 100 мл дистиллированной воды прибавить 2 г агара, натрия аммония фосфорнокислого 0,15 г, калия фосфорнокислого одноосновного 0,1 г, магния сернокислого 0,02 г, натрия лимоннокислого 0,3 г, 0,5-процентного спиртового раствора бромтимолового синего 1 мл. Стерилизовать при 0,5 атм. 15 мин., разлить в стерильные пробирки по 5 — 7 мл, остудить в скошенном состоянии, оставляя столбик 2 — 2,5 см. Коммерческая сухая среда готовится согласно указаниям на этикетке препарата. Цитратположительные бактерии изменяют зеленый цвет среды на синий.

15. Среда для определения продукции индола. Выявляют индол при росте

культуры на агаре Симмонса. К 100 г дистиллированной воды добавить

триптофана 0,05 г, пептона 0,1 г, K HPO 0,5 г. Стерилизовать при 0,5 атм.

12 — 15 мин. После инкубации посева на агаре Симмонса при 37 °С в течение

18 — 20 час., в случае щелочения поверхности среды, сверху налить 1 мл

среды для определения продукции индола, тщательно встряхнуть пробирку и

инкубировать ее 2 — 4 часа при 37 °С. Затем на поверхность среды наслоить

0,1 — 0,2 мл реактива Ковача. Учет реакции в течение первых 5 мин.

Индолположительные микроорганизмы дают малиновое окрашивание кольца.

Тест-реактив Ковача для определения индола: к 75 мл амилового или изоамилового спирта добавить пара-диметиламидобензальдегида 5 г, концентрированной соляной кислоты 25 мл.

16. Среда с мочевиной Кристенсена для определения уреазной активности.

К 100 мл дистиллированной воды добавить пептона 0,1 г, натрия хлорида 0,5

г, калия дигидрофосфата (KH PO ) 0,2 г, агара 2 г, глюкозы 0,1 г,

фенолового красного (0,2-процентный раствор) 0,6 мл, мочевины (20-

процентный раствор водный) 10 мл.

Пептон, соли и агар растворить при нагревании, установить pH 6,8 — 6,9, профильтровать, простерилизовать при 115 °С 20 мин., добавить глюкозу и индикатор. Затем стерилизовать текучим паром 1 час и охладить до 50 — 55 °С. Раствор мочевины асептично добавить к основе. Готовую среду разлить в стерильные пробирки и охладить в скошенном положении. При положительном результате среда из желтоватой становится красной в сроки от нескольких часов до 4 суток.

17. Среда с мочевиной Преуса для определения уреазной активности. К 100 мл бульона Хоттингера добавить агара 1,5 г, глюкозы 0,5 г, мочевины (50-процентного самостерилизующегося водного раствора) 2 мл, бромтимолового синего 0,2-процентного водного раствора 1,2 мл. Агар расплавить в бульоне, при подогревании профильтровать, установить pH 6,9 — 7,0. Стерилизовать при 120 °С 20 мин. К стерильному питательному агару добавить глюкозу, мочевину, индикатор. Повторно простерилизовать текучим паром однократно 15 мин., после чего скосить. Цвет среды — оливковый, при положительном результате становится синим.

18. Среда Кларка для реакции с метиловым красным и выявления продукции

ацетоина. К 100 мл дистиллированной воды добавить пептона 0,5 г, глюкозы

0,5 г, K HPO 0,5 г. После растворения ингредиентов среду стерилизовать при

0,5 атм. 12 — 15 мин., хранить в холодильнике. Перед употреблением разлить

асептично в пробирки по 1,0 мл. Посев должен быть массивным. Инкубация 24

часа и более при 37 °С. Далее прибавить 0,1 — 0,2 мл реактива Кларка.

Определение феномена Кларка (реакция с метиловым красным) возможна и на

стекле. На предметное стекло наносят каплю реактива Кларка и каплю среды

Кларка с посевом после инкубации. В обоих случаях покраснение среды

указывает на прекращение микробного метаболизма в результате резко кислой

реакции среды (положительная реакция); желтый цвет свидетельствует о

продолжающемся метаболическом процессе и щелочении среды за счет

расщепления пептона (отрицательная реакция).

После учета результатов феномена Кларка в той же пробирке можно определить и реакцию Фогеса-Проскауэра (наличие ацетоина): прибавить 0,2 — 0,3 мл реактива Баррита и 0,1 мл 40-процентного водного раствора KOH. Появление на поверхности среды кольца окраски разной степени интенсивности — от розового до ярко-красного в течение от 5 — 10 мин. до 2 час указывает на продукцию ацетоина.

А. Для реакции с метиловым красным (реактив Кларка). Растворить 0,1 г метилового красного в 300 мл этилового спирта 96-градусного, затем добавить 200 мл дистиллированной воды.

Б. Для реакции Фогеса-Проскауэра. 1. Реактив Баррита: 5 г альфа-нафтола растворить в 100 мл 96-градусного этилового спирта. 2. 40-процентный водный раствор гидроокиси калия (KOH).

19. Среды для определения декарбоксилаз лизина, аргинина, орцитина. К 40 мл мясной воды добавить 0,5 г пептона, 0,1 г глюкозы, 60 мл дистиллированной воды, 1 мл 1,6-процентного спиртового раствора бромтимолового синего, 1,0 г L-аминокислоты или 2 г DL-аминокислоты, 0,3 г (0,5 мл) дрожжевого экстракта. В воде растворить белковую питательную основу и глюкозу. Установить pH 6,0 — 6,1. Затем разделить на 4 равные части. В каждую из трех порций внести одну из аминокислот, четвертая порция без аминокислоты является контрольной. Среды кипятить 5 — 10 мин., вновь установить pH 6,0 — 6,1, прибавить индикатор и разлить в пробирки по 2 — 3 мл. Стерилизовать при 0,5 атм. в течение 15 мин. При расщеплении аминокислот цвет среды становится из желтого синим. Цвет контрольной среды остается желтым.

20. Среда для определения фенилаланиндезаминазы. К 100 мл

дистиллированной воды добавить 1,2 г агара, 0,9 г дрожжевого экстракта, 0,1

г фенилаланина, 0,1 г Na HPO и 0,5 г хлорида натрия. Ингредиенты смешать,

среду кипятить 5 мин. и разлить в пробирки. Стерилизовать при 0,5 атм. в

течение 30 мин., сразу же после стерилизации скосить. На скошенную

поверхность агара с выросшей культурой наслоить 4 — 5 капель 10-процентного

раствора хлорида железа. В случае образования фенилинрувиновой кислоты

поверхность агара приобретает зеленый цвет.

21. Среды для определения оксидации рамнозы, сорбита, арабинозы. К 100

мл дистиллированной воды добавить пептона 0,5 г, KH PO 0,08 г, хлорида

натрия 0,5 г, агара 1,2 г, 1,6-процентного щелочного раствора

бромтимолового синего 0,5 мл, углеводов: рамнозы 2 г, арабинозы 2 г,

сорбита 3 г. Среды готовить с каждым углеводом отдельно. После стерилизации

при 0,5 атм. в течение 15 мин. разлить в чашки. Посев осуществлять

макроколониями (10 — 12 колоний на чашке), инкубация при 37 °С в течение

18 — 20 часов. Положительный результат (оксидация углевода) определяется

пожелтением среды. Кроме рекомендуемых сред, для определения оксидации

рамнозы, сорбита, арабинозы можно использовать среды Гисса.

22. Среда для определения оксидации мальтозы. К 100 мл дистиллированной воды добавить 0,2 г пептона, хлорида натрия 0,5 г, агара 2 г, мальтозы 2 г, 1,6-процентного щелочного раствора бромтимолового синего 1 мл. Стерилизация при 0,5 атм. 15 мин. Среду разлить в 6 чашек. Посев макроколониями (10 — 12 колоний на чашке). Инкубация при 37 °С 18 — 20 часов. Положительный результат — пожелтение среды.

23. Среда для определения оксидации ксилозы. К 100 мл дистиллированной воды добавить 0,2 г пептона, агара 1,5 — 2 г, хлорида натрия 0,5 г, ксилозы 2 г, 1,6-процентного щелочного раствора бромтимолового синего 1 мл, pH 7,2. Стерилизовать при 0,5 атм. в течение 15 мин.; среду разлить в 6 чашек. Посев макроколониями (12 — 18 колоний на чашке). Положительный результат — пожелтение среды.

24. Среда для определения оксидации 10-процентной лактозы. К 100 мл

дистиллированной воды добавить пептона 0,2 г, хлорида натрия 0,5 г, лактозы

10 г, KH PO 0,03 г, агара 0,4 — 0,6 г, 1,6-процентного щелочного раствора

бромтимолового синего 0,5 мл. Стерилизовать при 0,5 атм. в течение 15 мин.

Разлить асептично в пробирки столбиком высотой 6 см. Посев уколом.

Положительный результат — пожелтение среды.

25. Среда ИнАд для определения оксидации инозита и ферментации адонита. Среда двухслойная. Нижний слой: к 100 мл дистиллированной воды прибавить хлорида натрия 0,5 г, фосфата калия однозамещенного 0,1 г, адонита 0,3 г, агара 1 г, 1,6-процентного щелочного раствора бромтимолового синего 0,2 мл, pH 7,2 — 7,4. Ингредиенты растворить в водяной бане в течение 15 мин., разлить по 3 — 4 мл в пробирки, стерилизовать при 0,5 атм. 15 мин., остудить столбиком. Верхний слой: к 100 мл дистиллированной воды прибавить пептона 0,5 г, фосфата калия двузамещенного 0,03 г, хлорида натрия 0,5 г, инозита 0,5 г, агара 1,5 г, 1,6-процентного щелочного раствора бромтимолового синего 0,5 мл, стерилизовать при 0,5 атм. в течение 15 мин., разлить асептично поверх нижнего слоя в количестве 4 — 5 мл, скосить, оставив столбик высотой 0,5 — 1,0 см. Посев штрихом по скошенной поверхности и уколом в столбик. Положительный результат — пожелтение среды.

26. Среда для определения амилазы. К расплавленному питательному агару Дагестанского НИИ питательных сред, приготовленному по стандартной прописи, добавить от 0,2% до 1% растворенного крахмала. Разлить в пробирки по 4 — 5 мл, стерилизовать при 0,5 атм. в течение 30 мин. и скосить. Испытываемую культуру засеять штрихом на поверхность среды и инкубировать при 37 °С в течение 18 — 24 час., после чего на поверхность косяка налить 2 — 3 мл раствора Люголя. Отсутствие синего окрашивания свидетельствуют о наличии амилазы.

27. Среда для определения желатиназной активности.

А. В 100 мл дистиллированной воды добавить 10 г желатины, оставить на 40 — 60 мин. для набухания. Стерилизовать при 0,5 атм. в течение 15 мин. Асептично разлить в пробирки по 5 — 6 мл. Посев уколом в теплую среду, инкубировать в термостате под углом в 45°. Положительный результат — разжижение желатины.

Б. Среда двухслойная. Нижний слой: 1,5-процентный голодный агар разлить в чашки. Верхний слой: в 100 мл дистиллированной воды (или МПБ) добавить пептона 0,5 г, желатины 15 г, 0,01-процентного водного раствора кристаллического фиолетового 1,5 мл. Стерилизация при 0,5 атм. в течение 15 мин. Верхний слой: разлить после застывания нижнего слоя, чашки оставить на сутки в холодильнике, не переворачивая. Посев макроколониями (10 — 12 колоний на чашке). Посев оставить при комнатной температуре под бумажной и стеклянной крышками. Учет производить через 24 — 48 часов. Положительный результат — разжижение желатины в месте посева в виде кратерообразного углубления.

28. Среда для определения нитрат-нитритредуктазы и выявления способности роста культуры при 42 °С. К 80 мл дистиллированной воды добавить пептона 2 г, хлорида натрия 0,5 г, нитрата калия 0,2 г, агара 0,1 г, дрожжевого экстракта 20 мл. Дрожжевой экстракт и вода могут быть заменены мясопептонным бульоном. В этом случае содержание пептона следует уменьшить до 1 г. После растворения компонентов в водяной бане среду разлить в пробирки по 4 — 5 мл, стерилизовать при 0,5 атм., остудить столбиком. Положительный результат — наличие роста (помутнение) и образование пузырьков газообразного азота на поверхности среды.

29. Среда «ПП» для видовой дифференциации протеев. Среда двухслойная.

Нижний слой: к 100 мл дистиллированной воды прибавить глюкозы 0,2 г, агара

0,6 г, фосфата калия однозамещенного 0,1 г, фосфата калия двузамещенного

0,04 г, хлорида натрия 0,5 г, пептона 0,1 г, 1-процентного водного раствора

нейтрального красного 1 мл. Стерилизовать при 0,5 атм. в течение 15 мин.

После стерилизации прибавить 1 мл 50-процентного самостерилизующегося

раствора мочевины, разлить асептично по 3 — 4 мл в пробирки и остудить

столбиком. Верхний слой: к 200 мл дистиллированной воды прибавить агара

1,2 — 1,4 г (в зависимости от сорта агара минимальное количество, способное

сохранить при застывании скошенное положение), дрожжевого экстракта 30 мл

или ЭКД 1,2 г. Стерилизовать при 0,5 атм. в течение 15 мин., прибавить 0,4

г DL-триптофана, 0,06 г тиосульфата натрия и 0,2 г натрий-аммоний

фосфорнокислого (NaNH HPO ), растворенных в небольшом количестве воды и

подогретых в водяной бане до 100 °С. Разлить асептично поверх нижнего слоя

по 6 мл, скосить столбиком высотой 1 — 1,5 см. Посев штрихом по скошенной

поверхности и уколом до дна пробирки. Далее между стенкой пробирки и

пробкой поместить полоску реактивной на индол бумаги. После культивирования

посевов в течение 18 — 20 часов при 37 °С учесть наличие уреазной

активности, продукцию индола и газа на глюкозе. Далее в пробирку налить

реактив для определения триптофандеаминазы и сероводорода.

Тест-реактив для определения триптофандеаминазы и продукции

сероводорода: к 13 г хлорного железа (FeCl ) добавить HCl 1,3 мл,

дистиллированной воды до 100 мл. Реактив хранить в банке с притертой

30. Среда для определения активности ДНКазы. Среда готовится согласно методу, представленному в Приказе N 720 МЗ СССР от 31.07.1978.

31. Полужидкий агар для определения подвижности. В 1000 мл дистиллированной воды добавить гидролизат Хоттингера до содержания в среде 120 — 150 мг/% аминного азота, 5 г натрий хлорида (NaCl), установить pH 7,2 — 7,4, добавить 3 — 4 г агара, расплавить его при подогревании и постоянном помешивании среды. Затем профильтровать через ватно-марлевый, меткалевый фильтры или через фильтровальное полотно «Бельтинг». Среду разлить в пробирки по 5 мл, стерилизовать при 120 °С в течение 30 мин. и охладить в виде столбика. Определение подвижности бактерий проводить при посеве уколом в столбик агара. Подвижные микробы растут в толще среды по ходу укола.

32. Среда Кинг-А для выявления пиоцианина. К 2 г пептона добавить агар-агара 1,5 г, глицерина 1 мл, сульфата калия 1 г, хлорида магния 0,14 г, воды дистиллированной до 100 мл, pH 7,2. Стерилизовать при 0,5 атм. в течение 15 мин., разлить в чашки. Положительный результат — окрашивание среды вокруг колоний в зеленый, синий, сине-зеленый и бурый цвета.

33. Среда FN для определения флюоресценции. К 100 мл дистиллированной

воды добавить пептона 1 г, K HPO 0,15 г, MgSO 7H O 0,15 г, KNO 0,2 г,

NaNO 0,05 г, агар-агара 1,5 г, фенолового красного 0,002 г, pH — 7,2.

Готовую среду разлить в пробирки по 4 мл, автоклавировать при 0,5 атм. в

течение 30 мин., скосить. Культуру засеять штрихом на поверхность скошенной

среды, инкубировать 18 — 24 часа при 37 °С. Флюоресценцию наблюдать в

УФ-свете с помощью ультрафиолетового облучателя для обнаружения витаминов в

34. Тест-реактивы для определения цитохромоксидазы.

А. 1-процентный спиртовой раствор альфа-нафтола.

Б. 1-процентный водный раствор диметил-парафенилендиамина (пара-аминодиметилфенилендиамина хлорида или оксалата). Растворы хранить в темных флаконах с притертыми пробками в холодильнике, первый — до 1 месяца, второй — до 1 недели. Перед употреблением к трем частям реактива «А» добавить 7 частей реактива «Б». Положительный результат — интенсивное посинение колонии или мазка из нее на фильтровальной бумаге в течение 20 — 40 с после добавления капли реактива. Позднюю реакцию, как и посинение самой агаровой среды, не учитывать. Реактив может быть заменен готовой бумажной индикаторной системой.

35. Реактивы для окраски бактерий по Граму. Использовать реактивы и проводить окраску по Граму следует в соответствии с ГОСТ 18963-73 или «Методическими указаниями по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями», М., 1984.

36. Индикаторы: 1,6-процентные щелочные растворы бромтимолового синего и фенолового красного. В 16 мл 0,2-процентного раствора едкого натра (NaOH) растворить 0,5 г краски и добавить 15 мл дистиллированной воды.

Ассоциация содействует в оказании услуги в продаже лесоматериалов: куплю липа доска по выгодным ценам на постоянной основе. Лесопродукция отличного качества.

источник