Меню Рубрики

Определение антигена легионеллы в моче

Лабораторные методы диагностики болезни легионеров представлены в табл. 153.2 . Для исследования обычно используют мокроту, а если ее нет — проводят бронхоскопию или бронхоальвеолярный лаваж. Чувствительность исследования мокроты и смывов, полученных путем бронхоскопии, примерно одинакова; чувствительность исследования жидкости, полученной при бронхоальвеолярном лаваже, еще выше. При наличии плеврального выпота показана плевральная пункция. Проводят иммунофлюоресцентное окрашивание и посев выпота, а также определяют в нем антиген Legionella pneumophila .

Микроскопия. Обнаружение возбудителя в биологических жидкостях, в норме стерильных (например, в плевральной жидкости), а также в ткани легких позволяет предположить диагноз. В окрашенных по Граму мазках мокроты обычно видны только лейкоциты, а возбудитель не обнаруживается. Если же легионеллы в них различимы, это — мелкие, полиморфные, слабо окрашенные грамотрицательные бактерии. Legionella micdadei частично кислотоустойчива. Из-за этого больным по ошибке могут назначить противотуберкулезную терапию. Модифицированная окраска по Цилю-Нильсену, при которой для обесцвечивания вместо 3% соляной кислоты используют 1% серную, увеличивает частоту обнаружения Legionella micdadei .

Посев. Посев мокроты и других биологических материалов позволяет поставить окончательный диагноз легионеллеза. Наибольшую чувствительность обеспечивает угольно-дрожжевой агар, в который добавляют антибиотики и красители. Колонии легионелл растут медленно; невооруженным глазом их можно различить только через 3-5 сут. Чтобы предотвратить зарастание агара другими видами бактерий, образец предварительно прогревают или обрабатывают кислотой. Legionella pneumophila часто обнаруживается в мокроте, в которой нет нейтрофилов. Ее удается выделить даже из образцов, в которых содержится более 25 эпителиальных клеток в поле зрения при сильном увеличении (признак загрязнения мокроты микрофлорой полости рта).

Иммунофлюоресцентное окрашивание. Метод прямой иммунофлюореспенции быстр и высокоспецифичен, но менее чувствителен, чем посев, так как для положительного результата нужна значительная концентрация бактерий в материале. В начале заболевания этот метод менее результативен.

Серодиагностика. Серологические исследования желательно проводить в острой стадии и в стадии выздоровления. Диагностическим считается четырехкратное повышение титра антител. Сероконверсия обычно выявляется через 4-12 нед. У некоторых больных она так и не происходит. Если серологическое исследование было однократным, титр антител 1:128 и выше у больного пневмонией позволяет поставить предположительный (но не окончательный) диагноз. Серодиагностика используется в основном в эпидемиологических исследованиях. Ее специфичность в отношении видов, отличных от Legionella pneumophila , неизвестна. Описаны перекрестные реакции с антителами к некоторым грамотрицательным палочкам.

Определение антигена Legionella pneumophila в моче. Определение свободного антигена Legionella pneumophila в моче — быстрый, легкий, относительно дешевый и высокоспецифичный метод диагностики. По чувствительности он уступает только посеву ( табл. 153.2 ). Этот метод позволяет выявить только штаммы Legionella pneumophila серогруппы 1, но 80% случаев легионеллеза вызываются именно ими. Антиген появляется в моче через 3 сут после начала заболевания (даже на фоне антимикробной терапии) и держится в ней на протяжении нескольких недель. Метод следует освоить каждой клинической лаборатории.

ПЦР. Использование олигонуклеотидных зондов в сочетании с ПЦР по специфичности превосходит другие методы. Метод с успехом применяют для идентификации легионелл в пробах воды. Проводится оценка его чувствительности при исследовании клинического материала.

источник

Исследование клинического образца позволяет подтвердить/опровергнуть наличие в нем бактерии (подвижная грамотрицательная) Legionella pneumophila (LPn) — возбудитель легионеллеза. Обследованию подлежат: моча, биологические отделения, плазма (сыворотка) крови. Тест позволяет с высокой точностью показать количественные (полуколичественные) параметры антител к антигенам LPn в исследуемом биологическом материале.

Legionella pneumophila — возбудитель тяжелых и острых пневмоний (летальный исход фиксируется в 6-11% случаев), а также респираторных болезней. Опасность LPn заключается в способности бактерии обитать повсеместно и паразитировать в любых простейших организмах. Бактерия обладает крайне высокой способностью адаптироваться к среде и условиям обитания, что эффективно используют специалисты при определении наличия возбудителя в биологическом образце.

Суть латексного анализа заключается не в колонизации легионелл в искусственно созданной среде, а в выявлении (качественно и количественном) специфического класса антител, синтезируемого иммунной системой организма в период заболевания, или ревматоидного фактора. Эти антитела работают против собственных иммуноглобулинов и отлично выявляются лабораторными методами, основанными на способности ревматоидного фактора вступать в реакцию с антителом — агглютинировать.

В лаборатории используют специальный полистирольный латекс, на поверхность которого нанесены искусственные (кроличьи в большинстве случаев) носители антигенов/антител. Соприкосновение латекса с исследуемым образцом провоцирует острую иммунохимическую реакцию, в ходе которой наблюдается «склеивание» и выпадение в осадок частиц бактерий. В чаше можно наблюдать невооруженным глазом «комочки» клеток. Латексный анализ позволяет выявить в течение нескольких часов свыше 10 видов легионелл.

Сдают биологический материал на анализ те, у кого специалисты подозревают развитие пневмонии. Тест также назначается при:

  • Сложно излечимых и затяжных респираторных недугах.
  • Диагнозе пневмония для выявления конкретного возбудителя и степени заболевания.
  • Дифференциальной диагностике болезней схожих симптоматикой с респираторными заболеваниями и пневмонией.
  • Необходимости осуществить контроль курса лечения.
  • Исключении/подтверждении пневмонии и ОРЗ в качестве сопутствующих недугов.
  • Комплексном обследовании пациента перед/после операцией, во время планирования беременности и так далее.

Анализ назначает и беременным женщинам при подозрениях на пневмонию и острые простудные заболевания. Тест проводится в течение нескольких часов, забор материала выполняется в лабораторных условиях при помощи стерильных медицинских инструментов.

При исследовании мочи забор образца можно выполнять в домашних условиях. Образец для исследования собирается в чистый контейнер. Допускается хранение образцов при комнатной температуре с учетом доставки в течении 24 часов в лабораторию для исследования. В иных случаях образцы могут храниться при температуре 2-8 0С в течении 14 дней с момента забора материала, при -200С более длительное время. Это не повлияет на результат. Использовать консервант (борная кислота) для хранения категорически запрещается.

Присутствие реакции агглютинации говорит о наличие в материале бактерий. Этот результат позволяет диагностировать у пациента легионеллез. Отсутствие «склеивания» антиген-антитело (выпадение комочков) говорит о том, что в клиническом образце нет ревматоидного фактора. Значит, заражения организма легионеллами не было.

источник

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

В настоящее время известно более 50 видов легионелл, в патологии человека пока показана роль 22 видов. 95% случаев заболеваний связано с видом L. pneumophila, который является типовым. Его название связано с первыми жертвами вызванного им заболевания среди участников конгресса «Американский легион», проходившего в Филадельфии летом 1976 г. В 1977 г. возбудитель был выделен из легких погибших Д. Мак-Дейдом и С. Шапардом.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11]

Аэробы. Размножаются эти бактерии только на сложных питательных средах (буфер-угольный дрожжевой агар) с обязательным добавлением цистеина, пирофосфата железа и кетоглутаровой кислоты в связи с потребностями в этих веществах. Культивирование проводят при 35 °С в атмосфере 2,5-3% СО; в течение 3-6 сут. Выросшие на питательной среде колонии имеют вросший центр с образованием коричневого пигмента, за исключением вида L. micdadei. Могут быть культивированы в желточном мешке куриного эмбриона и культурах клеток, в организме морской свинки.

Каталазоположительны. Не ферментируют углеводы, не продуцируют уреазу, не восстанавливают нитраты. Некоторые виды разжижают желатин. L. pneumophila от других видов легионелл отличается способностью гидролизовать гиппурат натрия.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19]

Сложная. Вид L. pneumophila подразделяется на 16 серогрупп, специфичность которых опосредована липополисахаридным антигеном.

[20], [21], [22], [23], [24], [25], [26], [27]

Как и другие споронеобразующие бактерии, чувствительны к УФ-лучам, этиловому спирту, фенолу, 3% раствору хлорамина.

Легионеллы — факультативные внутриклеточные паразиты. В организме человека они размножаются преимущественно в альвеолярных макрофагах, в которые они попадают вследствие ингаляция микробного аэрозоля, а также в полиморфно-ядерных и моноцитах крови. Легионеллы активно размножаются в макрофагах, что приводит к разрушению последних и выходу большого количества бактерий в легочную ткань. Этот процесс обеспечивается следующими факторами патогенности: цитотоксином и супероксиддисмутазой, подавляющими респираторный взрыв фагоцита; цитолизином, являющимся ферментом металлопротеазой предотвращающим образование фаголизосомы, а также вызывающим геморрагический эффект: при гибели бактерий освобождается эндотоксин, обусловливающий интоксикацию.

Многократно повторяемый цикл взаимодействия легионелл с макрофагами легких приводит к накоплению возбудителя в высокой концентрации и развитию острого воспалительного процесса.

Иммунитет клеточный. Антитела протективной активностью не обладают.

В природных условиях легионеллы обитают в пресноводных водоемах, где они являются симбионтами водорослей, водных и почвенных амеб и других простейших. Высокие адаптационные способности легионелл позволяют им успешно колонизировать искусственные водоемы, системы водоснабжения и кондиционирования воздуха, медицинскую аппаратуру. На синтетических и резиновых поверхностях водопроводного, промышленного и медицинского оборудования легионеллы образуют биопленку, в составе которой они становятся более устойчивыми к действию дезинфицирующих веществ.

Механизм передачи легионеллезной инфекции аспирационный. Основной фактор передачи — мелкодисперсный аэрозоль, содержащий легионеллы, образуемый бытовыми, медицинскими или промышленными водными системами. От человека к человеку заболевание не передастся. Болезнь распространена повсеместно. В том числе и в России. Пик заболеваемости приходится на летние месяцы. Предрасполагающим фактором является иммунодефицитное состояние.

[28], [29], [30], [31], [32], [33], [34], [35]

Известны три клинические формы легионеллеза: болезнь легионеров (филадельфийская лихорадка) и лихорадка Понтиак, лихорадка Форт-Брагт.

Инкубационный период болезни легионеров 2-10 суток. Заболевание сопровождается лихорадкой, ознобом, болями в груди, одышкой. В 20-30% случаев развивается острая дыхательная недостаточность. Могут развиться инфекционно-токсический шок, почечная недостаточность, поражение центральной нервной системы. Летальность 8-25%, у больных с иммунодефицитом 60%.

Лихорадка Понтиак представляет собой острое респираторное заболевание без пневмонии. Инкубационный период 36-48 ч. Заболевание характеризуется 1-2-дневной лихорадкой, катаральными явлениями в носоглотке, сухим кашлем. Летальные исходы не регистрируются. Болезнь поражает 95-100% лиц, находящихся в зоне распространения аэрозоля.

Лихорадка Форт-Браг — острое лихорадочное заболевание с экзантемой. Риск возникновения внутрибольничного легионеллеза связан с возможностью контаминации легионеллам.: систем водоснабжения, кондиционирования воздуха и медицинского оборудования, а также наличием лиц, чувствительных к инфекции, с нарушением клеточного иммунитета. Помимо L. pneumophila, внутрибольничную инфекцию нижних дыхательных путей вызывает L. micdadei.

Лабораторная диагностика легионеллеза проводится бактериологическим, серологическим и экспресс-методами.

Материалом для выделения легионелл служат мокрота, материал бронхоскопии, плевральный экссудат, биопсийный материал легких, который хранят не более 1 сут при 4 С.

Серологическое исследование проводят определением 4-кратного нарастания титра антител в парных сыворотках методом ИФА ИЛИ непрямой РИФ.

Также проводят определение на 2-10-е сутки растворимого антигена в моче с помощью ИФА или иммунохроматографического метода.

Прямую РИФ и ПЦР используют в качестве экспресс-диагностики. Однако специфический достоверный результат получается только в том случае, если материалом для исследовании являются материалы бронхоскопии и биопсии, а не мокрота.

[36], [37], [38], [39], [40], [41], [42], [43]

Лечение легионеллеза заключается в назначении антибиотиков, способные к внутриклеточной пенетрации: макролиды (эритромицин, кларитромицин, азитромицин) и фторлинолоны.

Легионеллез невозможно предотвратить с помощью методов специфической профилактики. Неспецифическая профилактика легионеллеза сводится к периодической очистке водных систем, выявлению водного резервуара возбудителя и его оздоровлению.

источник

Специальной подготовки не требуется. Питьевой режим — обычный (1,5-2 л. в сутки).

Возбудители легионеллеза относятся к роду Legionella. Выделяют две клинические формы легионеллеза – лихорадка Понтиак, протекающая как острая респираторная вирусная инфекция, и пневмония (болезнь легионеров). В 90% групповых и спорадических случаев болезни легионеров выделяют вид Legionella pneumophila, причем более 80% связаны с L.pneumophila серогруппы 1, остальные могут быть вызваны L.pneumophila других серогрупп. Подозрение на заболевание возникает при наличии факторов риска: теплое время года, путешествие, совпадающее со сроком инкубационного периода (от 2 до 10 дней до начала заболевания), возраст старше 40 лет, мужской пол, курение, интенсивная системная гормональная или иммуносупрессивная терапия, внутрибольничная пневмония после проведения искусственной вентиляции легких. Определение Ag Legionella pneumophila в моче — основной метод своевременной диагностики и мониторинга легионеллезной инфекции. Растворимый антиген выявляется в моче больных начиная с 3-го дня болезни и может быть обнаружен в течение нескольких последующих месяцев (до 1 года) (может указывать на перенесенную инфекцию).

  • Обследование при подозрении на легионеллезную инфекцию

Референсные значения: не обнаружено

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом ФЗ № 323 «Об основах защиты здоровья граждан в Российской Федерации», должны производиться врачом соответствующей специализации.

Выявление антигена L. pneumophilla серогруппы 1 свидетельствует о наличии текущей или перенесенной инфекции. Отрицательный результат может быть в случае заболеваний, вызванных другими серотипами L. pneumophilla.

» [«serv_cost»]=> string(4) «1990» [«cito_price»]=> NULL [«parent»]=> string(2) «25» [10]=> string(1) «1» [«limit»]=> NULL [«bmats»]=> array(1) array(3) string(1) «N» [«own_bmat»]=> string(2) «12» [«name»]=> string(8) «Моча» > > >

Специальной подготовки не требуется. Питьевой режим — обычный (1,5-2 л. в сутки).

Возбудители легионеллеза относятся к роду Legionella. Выделяют две клинические формы легионеллеза – лихорадка Понтиак, протекающая как острая респираторная вирусная инфекция, и пневмония (болезнь легионеров). В 90% групповых и спорадических случаев болезни легионеров выделяют вид Legionella pneumophila, причем более 80% связаны с L.pneumophila серогруппы 1, остальные могут быть вызваны L.pneumophila других серогрупп. Подозрение на заболевание возникает при наличии факторов риска: теплое время года, путешествие, совпадающее со сроком инкубационного периода (от 2 до 10 дней до начала заболевания), возраст старше 40 лет, мужской пол, курение, интенсивная системная гормональная или иммуносупрессивная терапия, внутрибольничная пневмония после проведения искусственной вентиляции легких. Определение Ag Legionella pneumophila в моче — основной метод своевременной диагностики и мониторинга легионеллезной инфекции. Растворимый антиген выявляется в моче больных начиная с 3-го дня болезни и может быть обнаружен в течение нескольких последующих месяцев (до 1 года) (может указывать на перенесенную инфекцию).

  • Обследование при подозрении на легионеллезную инфекцию

Референсные значения: не обнаружено

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом ФЗ № 323 «Об основах защиты здоровья граждан в Российской Федерации», должны производиться врачом соответствующей специализации.

Выявление антигена L. pneumophilla серогруппы 1 свидетельствует о наличии текущей или перенесенной инфекции. Отрицательный результат может быть в случае заболеваний, вызванных другими серотипами L. pneumophilla.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 — 2019

Центральный офис: 111123, Россия, Москва, ул. Новогиреевская, д.3а, метро «Шоссе Энтузиастов», «Перово»
+7 (495) 788-000-1, info@cmd-online.ru

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Читайте также:  Слизь в моче повышен у женщин

источник

Артикул: 852-000
Производитель: Alere Inc., США
Экспресс-тест для определения антигена L.pneumophila (возбудителя Легионеллёза) в моче иммунохроматографическим методом.
Регистрационное удостоверение

ИХА тест «Binax NOW® Legionella» входит в стандарт оказания медицинской помощи, приказ МЗ РФ №741н от 9.11.2012 «Об утверждении стандарта специализированной медицинской помощи при пневмонии тяжелой степени тяжести с осложнениями»: А26.28.010 Определение антигена возбудителя легионеллеза (Legionella pneumophila) в моче.

ИХА тест «Binax NOW® Legionella» входит в стандарты диагностики пневмонии, утвержденные в России:

  • Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1.2.2626 -10 «Профилактика легионеллеза» В разделе 5 указано «5.5 Основным методом стандартов, позволяющим осуществлять в настоящее время своевременную диагностику и мониторинг легионеллезной инфекции, является определение легионеллезного антигена в моче иммунохроматографическим или иммуноферементным методом. Метод позволяет окончательно подтвердить диагноз в течении 1-3 часов.»
  • СП 3.1.2.3116-13 «Профилактика внебольничных пневмоний». В разделе 5 указано: При тяжелых пневмониях в первую очередь необходимо провести бактериологическое исследование на пневмококк и другие бактериальные этиологические агенты с учетом спектра их чувствительности к антибиотикам, а также исключить легионеллезную этиологию с помощью экспресс-теста на определение антигена легионелл в моче пациентов.
  • Методические указания МУК 4.2.3115—13 «Лабораторная диагностика внебольничных пневмоний.», утверждены и введены в действие 21.10.2013 Роспотребнадзором: «Основным методом стандартов, позволяющим осуществлять в настоящее время своевременную диагностику и мониторинг легионеллезной инфекции, является определение легионеллезного антигена в моче иммунохроматографическим или иммуноферементным методом. Метод позволяет окончательно подтвердить диагноз в течении 1—2 ч. Превосходство данного метода над другими, включенными в стандарт, методами состоит прежде всего в сроках исследования и доступности клинического материала.» (стр. 20)

В связи со сходством клинических проявлений и симптоматики легионеллезной и пневмококковой пневмонии быстрая и эффективная лабораторная диагностика приобретает решающее значение для выбора тактики этиотропной терапии больных.
В 1999 г. ВОЗ и в 2002 г. Европейской рабочей группой по легионеллезу в качестве диагностических критериев приняты стандарты, в соответствии с которыми диагноз легионеллеза в случае острой инфекции нижних дыхательных путей (клинически и рентгенологически подтвержденной) считается установленным:
1) при выделении культуры легионелл из отделяемого респираторного тракта или легочной ткани;
2) при 4-кратном или более нарастании титра специфических антител к Legionella pneumophila серогруппа 1 в реакции непрямой иммунофлюоресценции;
3) при определении растворимого антигена Legionella pneumophila серогруппа 1 в моче иммуноферментным (ИФА) или иммунохроматографическим методом (ИХА)

ИХА тест рекомендован Роспотребнадзором для установления диагноза легионеллёза с 2008 года:
«Выявление антигена бактерий Legionella pneumophila серогруппы 1 в клиническом материале иммунохроматографическим методом» Методические рекомендации, утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко 09 декабря 2008 N 01/14633-8-34 и введены в действие.

Методические рекомендации «Выявление антигена бактерий Legionella pneumophila серогруппы 1 в клиническом материале иммунохроматографическим методом»
Разработаны Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Г.Ф. Лазиковой, Ю.В.Деминой), ФГУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора (И.В. Брагиной, М.В. Зароченцевым, Э.Ф. Опочинским, И.В. Новокшоновой), ГУ «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» РАМН (И.С. Тартаковским, Т.И. Карповой, Ю.Е. Дрониной, В.Г. Нестеренко, А.Н. Ловенецким, О.В. Садретдиновой), ФГУН ГНЦ прикладной микробиологии и биотехнологии (М.В.Храмовым, С.Ф.Бекетовым), ГНЦ биологического приборостроения (В.Н.Злобиным, С.П. Ярковым). Рекомендованы к утверждению Лабораторным Советом Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Протокол от 23.09.2008 г.).
Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко 09 декабря 2008 N 01/14633-8-34 и введены в действие. Текст методических рекомендаций можно посмотреть выше.

Тесты Бинакс одобрены FDA (Администрация по пищевым продуктам и лекарственным средствам США), и в настоящее время в более чем 90% случаев окончательного диагноза внебольничной пневмонии в мире устанавливается данным методом.

Выявление возбудителя пневмоний в моче ИХА методом включено в руководства по пневмонии Америки, Британии, Бразилии, Франции, Европы, Швеции, Испании, Канады:
Общество инфекционных болезней Америки/Руководства американского торакального общества по управлению внебольничной пневмонией у взрослых
Руководства британского торакального общества по управлению внебольничной пневмонией у взрослых:
Бразильские руководства по внебольничной пневмонии у имуннокомпетентных взрослых
Французские Руководства Лечение инфекций нижних дыхательных путей у иммунокомпетентных взрослы х
Европейские Руководства по управлению инфекциями нижних дыхательных путей у взрослых
Шведкие руководства по управлению внебольничной пневмонией у имуннокомпетентных взрослых
Руководства Испанского общество пульмонологии и торакальной хирургии
Канадские руководства по начальному управлению внебольничной пневмонии.

Предназначение:
Тест для определения возбудителя легионеллёза Binax NOW® Legionella – быстрый in vitro иммунохроматографический анализ для качественного определения антигена Legionella pneumophila серогруппы 1 в образцах мочи у пациентов с симптомами пневмонии. Он предназначен для помощи в постановке предположительного диагноза легионеллезной инфекции (болезнь легионеров), вызванной L. pneumophila серогруппы 1, в сочетании с культуральным и другими методами.
Аналогов данного теста нет ни Российского, ни Зарубежного производства.

В дополнение к быстрому тесту выпускается ИФА тест на легионеллу Binax® Legionella Urinary Antigen EIA для классического иммуноферментного анализа. ИФА тест-система на легионеллёз Binax® Legionella Urinary Antigen EIA предназначена для качественного определения Legionella pneumophila серогруппы 1 в образцах мочи, как дополнение к культуральному методу для постановки предположительного диагноза прошедшей или текущей болезни легионеров.

Binax NOW® Legionella – один из наиболее широко известных быстрых иммунохроматографических тестов для определения антигена возбудителя легионеллеза (Legionella pneumophila) в моче, благодаря его чувствительности, специфичности и простоте использования.

Зарегистрирован как медицинское изделие Росздравнадзором и разрешен для использования в медицинских учреждениях РУ ФСЗ№ 2008/02110 от 16.10.12
Разрешен к продаже FDA (США), сертифицирован CE (ЕС). В настоящее время в более чем 90% случаев окончательного диагноза внебольничной пневмонии в мире устанавливается данным методом.

Время постановки: 15 минут
Чувствительность: 95%
Специфичность: 95%
Исследуемый образец: Моча
Количество тестов: 22
Индивидуальный анализ: Есть

Еще в начале 80-х годов прошлого века было показано, что в самом начале болезни (2-3-е сутки) антиген возбудителя можно обнаружить в моче больного легионеллезом, причем сам возбудитель в моче отсутствует. Антиген термастабилен и может быть выявлен в течение примерно 30 дней после начала заболевания. В 1989 г. метод был стандартизован компаниями Binax (США) и Biotest (Германия), испытан 14 лабораториями Европейских стран (включая лабораторию легионеллеза ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН) и был рекомендован в качестве высокоспецифичного и чувствительного метода, позволяющего поставить окончательный диагноз на первой неделе заболевания.

Если непосредственно после введения стандарта определения антигена L. pneumophila в моче данный метод использовали для диагностики менее чем в 5% случаев, то в настоящее время метод применяют для постановки окончательного диагноза более чем в 90% подтвержденных случаев легионеллезной инфекии. Превосходство данного метода над традиционными, включенными в стандарт бактериологическим и серологическим методами состоит, прежде всего, в сроках исследования. Бактериологический метод занимает не менее 4-5 суток, причем требуются инвазивные процедуры для получения материала (бронхоскопия, биопсия), так как из мокроты, особенно после начала элютропной терапии, возбудитель удается выделить далеко не всегда. Выявление диагностического нарастания титров антител в реакции непрямой иммунофлюоресценции возможно лишь на третьей неделе заболевания, когда проведен курс антибиотикотерапии и исход заболевания обычно уже ясен. Необходимость, исследования парных сывороток определяет ретроснективный характер диагностики легионеллеза данным методом.

источник

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

В настоящее время известно более 50 видов легионелл, в патологии человека пока показана роль 22 видов. 95% случаев заболеваний связано с видом L. pneumophila, который является типовым. Его название связано с первыми жертвами вызванного им заболевания среди участников конгресса «Американский легион», проходившего в Филадельфии летом 1976 г. В 1977 г. возбудитель был выделен из легких погибших Д. Мак-Дейдом и С. Шапардом.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11]

Аэробы. Размножаются эти бактерии только на сложных питательных средах (буфер-угольный дрожжевой агар) с обязательным добавлением цистеина, пирофосфата железа и кетоглутаровой кислоты в связи с потребностями в этих веществах. Культивирование проводят при 35 °С в атмосфере 2,5-3% СО; в течение 3-6 сут. Выросшие на питательной среде колонии имеют вросший центр с образованием коричневого пигмента, за исключением вида L. micdadei. Могут быть культивированы в желточном мешке куриного эмбриона и культурах клеток, в организме морской свинки.

Каталазоположительны. Не ферментируют углеводы, не продуцируют уреазу, не восстанавливают нитраты. Некоторые виды разжижают желатин. L. pneumophila от других видов легионелл отличается способностью гидролизовать гиппурат натрия.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19]

Сложная. Вид L. pneumophila подразделяется на 16 серогрупп, специфичность которых опосредована липополисахаридным антигеном.

[20], [21], [22], [23], [24], [25], [26], [27]

Как и другие споронеобразующие бактерии, чувствительны к УФ-лучам, этиловому спирту, фенолу, 3% раствору хлорамина.

Легионеллы — факультативные внутриклеточные паразиты. В организме человека они размножаются преимущественно в альвеолярных макрофагах, в которые они попадают вследствие ингаляция микробного аэрозоля, а также в полиморфно-ядерных и моноцитах крови. Легионеллы активно размножаются в макрофагах, что приводит к разрушению последних и выходу большого количества бактерий в легочную ткань. Этот процесс обеспечивается следующими факторами патогенности: цитотоксином и супероксиддисмутазой, подавляющими респираторный взрыв фагоцита; цитолизином, являющимся ферментом металлопротеазой предотвращающим образование фаголизосомы, а также вызывающим геморрагический эффект: при гибели бактерий освобождается эндотоксин, обусловливающий интоксикацию.

Многократно повторяемый цикл взаимодействия легионелл с макрофагами легких приводит к накоплению возбудителя в высокой концентрации и развитию острого воспалительного процесса.

Иммунитет клеточный. Антитела протективной активностью не обладают.

В природных условиях легионеллы обитают в пресноводных водоемах, где они являются симбионтами водорослей, водных и почвенных амеб и других простейших. Высокие адаптационные способности легионелл позволяют им успешно колонизировать искусственные водоемы, системы водоснабжения и кондиционирования воздуха, медицинскую аппаратуру. На синтетических и резиновых поверхностях водопроводного, промышленного и медицинского оборудования легионеллы образуют биопленку, в составе которой они становятся более устойчивыми к действию дезинфицирующих веществ.

Механизм передачи легионеллезной инфекции аспирационный. Основной фактор передачи — мелкодисперсный аэрозоль, содержащий легионеллы, образуемый бытовыми, медицинскими или промышленными водными системами. От человека к человеку заболевание не передастся. Болезнь распространена повсеместно. В том числе и в России. Пик заболеваемости приходится на летние месяцы. Предрасполагающим фактором является иммунодефицитное состояние.

[28], [29], [30], [31], [32], [33], [34], [35]

Известны три клинические формы легионеллеза: болезнь легионеров (филадельфийская лихорадка) и лихорадка Понтиак, лихорадка Форт-Брагт.

Инкубационный период болезни легионеров 2-10 суток. Заболевание сопровождается лихорадкой, ознобом, болями в груди, одышкой. В 20-30% случаев развивается острая дыхательная недостаточность. Могут развиться инфекционно-токсический шок, почечная недостаточность, поражение центральной нервной системы. Летальность 8-25%, у больных с иммунодефицитом 60%.

Лихорадка Понтиак представляет собой острое респираторное заболевание без пневмонии. Инкубационный период 36-48 ч. Заболевание характеризуется 1-2-дневной лихорадкой, катаральными явлениями в носоглотке, сухим кашлем. Летальные исходы не регистрируются. Болезнь поражает 95-100% лиц, находящихся в зоне распространения аэрозоля.

Лихорадка Форт-Браг — острое лихорадочное заболевание с экзантемой. Риск возникновения внутрибольничного легионеллеза связан с возможностью контаминации легионеллам.: систем водоснабжения, кондиционирования воздуха и медицинского оборудования, а также наличием лиц, чувствительных к инфекции, с нарушением клеточного иммунитета. Помимо L. pneumophila, внутрибольничную инфекцию нижних дыхательных путей вызывает L. micdadei.

Лабораторная диагностика легионеллеза проводится бактериологическим, серологическим и экспресс-методами.

Материалом для выделения легионелл служат мокрота, материал бронхоскопии, плевральный экссудат, биопсийный материал легких, который хранят не более 1 сут при 4 С.

Серологическое исследование проводят определением 4-кратного нарастания титра антител в парных сыворотках методом ИФА ИЛИ непрямой РИФ.

Также проводят определение на 2-10-е сутки растворимого антигена в моче с помощью ИФА или иммунохроматографического метода.

Прямую РИФ и ПЦР используют в качестве экспресс-диагностики. Однако специфический достоверный результат получается только в том случае, если материалом для исследовании являются материалы бронхоскопии и биопсии, а не мокрота.

[36], [37], [38], [39], [40], [41], [42], [43]

Лечение легионеллеза заключается в назначении антибиотиков, способные к внутриклеточной пенетрации: макролиды (эритромицин, кларитромицин, азитромицин) и фторлинолоны.

Легионеллез невозможно предотвратить с помощью методов специфической профилактики. Неспецифическая профилактика легионеллеза сводится к периодической очистке водных систем, выявлению водного резервуара возбудителя и его оздоровлению.

источник

Legionella spp.

Питательные среды

Название (русское/английское)

Расход среды

Селективные добавки

Агар для легионелл (основа) /LEGIONELLA CYE AGAR BASE

Агар BCYE (ростовая среда для изоляции Legionellaceae)

Селективная добавка BCYE для легионелл, 10 флаконов: SR0110 — флакон на 100 мл среды R0110C- флакон на 500 мл среды

Агар для легионелл (основа)/LEGIONELLA CYE AGAR BASE

Агар BCYE без L-Цистеина (используется совместно с Агаром BCYE для подтверждения Legionella sp.)

SR0175A Селективная добавка для легионелл без цистина, 10 флаконов (1 флакон на 100 мл среды)

Агар для легионелл (основа)/LEGIONELLA CYE AGAR BASE

Cелективная среда BMBA-a для легионелл (полуселективная среда для изоляции Legionella pneumophila из клинических образцов и образцов окружающей среды )

Селективная добавка BMPA для легионелл, 10 флаконов: SR0111E- флакон на 100 мл среды SR0111B- флакон на 500 мл среды Селективная добавка BCY для легионелл, 10 флаконов: SR0110A- флакон на 100 мл среды SR0110C- флакон на 500 мл среды

Агар для легионелл (основа)/LEGIONELLA CYE AGAR BASE

Cелективная среда GVPC для легионелл (селективная среда для изоляции Legionella sp. из образцов окружающей среды)

SR0152E Селективная добавка для легионелл (GVPC), 10 флаконов (1 флакон на 100 мл среды). Селективная добавка BCYE для легионелл, 10 флаконов: SR0110A- флакон на 100 мл среды SR0110C- флакон на 500 мл среды

Агар для легионелл (основа)/LEGIONELLA CYE AGAR BASE

Cелективная среда GVPN для легионелл (альтернативная GVPC среда для изоляции Legionella sp., содержащая натамицин вместо циклогексимида)

SR0215E Селективная добавка GVPN для легионелл, 10 флаконов (1 флакон на 100 мл среды). Селективная добавка BCYE для легионелл, 10 флаконов: SR0110A- флакон на 100 млc реды SR0110C- флакон на 500 мл среды

Агар для легионелл (основа)/LEGIONELLA CYE AGAR BASE

Cелективная среда MWY для легионеллт (селективная среда для выделения Legionella Pneumophila из питьевой воды)

Селективная добавка MWY для легионелл, 10 флаконов: SR0118E- флакон на 100 мл среды SR0118B- флакон на 500 мл среды Селективная добавка BCYE для легионелл, 10 флаконов: SR0110A- флакон на 100 мл среды SR0110C- флакон на 500 мл среды

Диагностические тесты

Набор DrySpot для определения Legionella pneumophilla серогруппа 1/Dryspot Legionella Pneumophila Serogroup 1 Kit

Сухиой латексный агглютинационный набор для дифференциации серогруппы 1 Legionella из чистой культуры

Набор DrySpot для определения Legionella pneumophilla серогрупп 2-14/Dryspot Legionella Pneumophila Serogroups 2-14

Читайте также:  Что уменьшает белок в моче

Сухиой латексный агглютинационный набор для дифференциации преобладающих серогрупп 2-14 Legionella из чистой культуры

Набор DrySpot на разные виды легионелл/Dryspot Legionella Species Kit

Сухиой латексный агглютинационный набор на разные виды легионелл Legionella из чистой культуры

Oxoid Legionella Latex Test/Набор для дифференцировки серогрупп легионел

Для дифференциации преобладающих серогрупп Legionella, выращенных на селективной среде

Набор для определения Legionella /Xpect Legionella Test

Для прямого определения антигенов Legionella pneumophila в моче

источник

В статье представлена современная стратегия лабораторной диагностики легионеллезной инфекции. Диагностика легионеллеза является необходимым и обязательным компонентом микробиологической диагностики тяжелых пневмоний как внебольничных, так и нозокомиальных

За последние годы в Российской Федерации была разработана современная методическая база для выявления легионелл (Legionella spp.) в окружающей среде и диагностики легионеллеза у больных тяжелыми пневмониями. Методология мониторинга присутствия легионелл в потенциально опасных водных системах, основанная на сочетании культуральных исследований (микробиологическая диагностика) и определения ДНК микроорганизма методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени, внедряется в практику эпидемиологического надзора, в организациях (ЛПО) [2, 7, 8]. Вместе с тем собственно микробиологическая диагностика легионеллезной инфекции у больных пневмониями (несмотря на наличие национальных стандартов лабораторной диагностики легионеллеза, рекомендованных целым рядом документов, и успешный опыт применения этих стандартов во время крупной эпидемической вспышки легионеллезной инфекции в г. Верхняя Пышма Свердловской области) остается «падчерицей» для бактериологических лабораторий ЛПО [4]. Во многом такое отношение объясняется объективным фактором необходимости определенных затрат на внедрение новых методов исследования и субъективным фактором недооценки реальной роли возбудителя в этиологии пневмоний в Российской Федерации.

Успеете скачать всё, что нужно, по демодоступу за 3 дня?

Известно, что легионеллез не является заболеванием, частота заболеваемости зависит от уровня контаминации легионеллами потенциально опасных водных систем (прежде всего систем горячего водоснабжения и водных систем охлаждения общественных зданий и промышленных предприятий), с которыми соприкасается пациент из группы риска. Полученные нами в данные свидетельствуют о высоком уровне контаминации легионеллами потенциально опасных водных систем на территории России, в зданиях учреждений [3].

Число выявленных случаев легионеллеза при соответствующем уровне контаминации объектов окружающей среды зависит от широты применения современных стандартов лабораторной диагностики легионеллеза для обследования больных тяжелыми пневмониями как внебольничными, так и нозокомиальными. Так, требование об обязательном применении метода определения антигена Legionella pneumophila в моче у пациентов из групп риска привело к трехкратному увеличению числа выявленных случаев легионеллезной пневмонии в США с 2001 по 2009 г. (с 1000 до 3500 случаев в год). Количество ежегодно выявляемых случаев легионеллеза в США в настоящее время сравнимо с числом случаев острой формы гепатита В и значительно превосходит частоту выявления острой формы гепатита С, не уступая этим социально значимым заболеваниям по проценту летальных исходов [9, 10].

В качестве диагностических критериев легионеллезной пневмонии действуют международные, а с 2010 г. — и национальные стандарты, в соответствии с которыми диагноз легионеллеза в случае острой инфекции нижних дыхательных путей (клинически и рентгенологически подтвержденной) считается установленным:

при выделении культуры легионелл из отделяемого респираторного тракта или легочной ткани; и более нарастании титра специфических антител к Legionella pneumophila серогруппы 1, определяемого в реакции непрямой иммунофлуоресценции; выявлении растворимого антигена Legionella pneumophila серогруппы 1 в моче методом иммуноферментного или иммунохроматографического анализа.

При отсутствии сыворотки крови, взятой в ранние сроки болезни, выявление достоверно высокого уровня антител к Legionella pneumophila серогруппы 1 (1: 128 и выше) в одиночной пробе сыворотки крови методом непрямой иммунофлуоресценции позволяет считать диагноз легионеллеза предположительно установленным. Аналогичным образом интерпретируются результаты, полученные путем выявления возбудителя или его ДНК в респираторном секрете или легочной ткани с помощью методов прямой иммунофлуоресценции или ПЦР.

С годов в отечественной практике диагностики легионеллеза основным методом лабораторной диагностики заболевания являлся метод непрямой иммунофлуоресценции, позволяющий определять наличие специфических антител к микроорганизму в сыворотке крови. Как правило, на исследование направлялась одиночная проба сыворотки крови, что позволяло установить только предполагаемый диагноз. Даже при наличии парных образцов сыворотки крови, взятых с определенным интервалом времени, диагноз носил запоздалый ретроспективный характер ( нарастание титра антител происходит в течение трех недель) и не позволял скорректировать схему антибиотикотерапии тяжелой пневмонии легионеллезной этиологии. Техника взятия биологического материала для бактериологического исследования (бронхоальвеолярный лаваж, биопсия) и сейчас далеко не всегда доступна при обследовании больных тяжелыми пневмониями. В силу этих причин до начала настоящих исследований культуру легионелл удавалось выделить только из секционного материала.

В качестве базового метода диагностики легионеллеза в нашей стране выбрано определение антигена легионелл в моче иммунохроматографическим методом.

По данным Всемирной организации здравоохранения, почти в 90% случаев легионеллеза первичный диагноз внебольничной легионеллезной пневмонии устанавливается по результатам определения антигена легионелл в моче методом иммунохроматографии. В случае острой тяжелой пневмонии диагностику легионеллеза при использовании названного теста можно осуществить непосредственно в отделении реанимации и интенсивной терапии в течение 40–50 мин, методика не требует наличия специального оборудования. Вместе с тем применяемые в настоящее время наборы реагентов для иммунохроматографического и иммуноферментного методов позволяют выявить в моче лишь антиген L. pneumophila серогруппы 1, что значительно сужает возможности лабораторной диагностики. У пациентов, находящихся на лечении в отделении реанимации и интенсивной терапии в гематологических, онкологических центрах, центрах трансплантации органов, на фоне иммуносупрессивной терапии инфекцию часто вызывают штаммы других серогрупп и видов Legionella spp [5].

Проведенные совместно с Гематологическим научным центром Минздрава России исследования в позволили осуществить диагностику легионеллеза у 76 пациентов центра с заболеваниями системы крови, у которых пневмония привела к развитию острой дыхательной недостаточности. Проводилось бактериологическое исследование бронхоальвеолярного смыва, полученного способом бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ), определяли антиген легионелл в моче. Образцы воды из системы горячего водоснабжения ЛПО исследовали на наличие легионелл стандартным бактериологическим методом. Для сравнительной характеристики штаммов легионелл, выявленных у пациентов, и штаммов, циркулирующих в системе водоснабжения ЛПО, использовали дрезденскую панель моноклональных антител и мультилокусное секвенирование в соответствии с STB протоколом ELDSNet [1, 6].

Диагноз легионеллезной инфекции был подтвержден у восьми (10, 5%) из 76 больных. У семи больных диагноз подтвержден выделением культуры Legionella pneumophila из бронхоальвеолярного смыва, в одном случае — выявлением антигена легионелл в моче. В трех случаях выделены культуры серогруппы 1, в четырех — культуры серогруппы 3. Бактериологический анализ образцов воды из системы горячего водоснабжения ЛПО показал наличие в ней штаммов L. pneumophila серогрупп 2 и 3. Штаммы L. pneumophila серогруппы 1 в воде отсутствовали. Мультилокусное секвенирование подтвердило идентичность штамма L. pneumophila серогруппы 3, циркулирующего в системе водоснабжения, и штаммов L. pneumophila серогруппы 3, выделенных от трех больных. Штаммы относятся к ST 87.

В данном исследовании впервые в России для больных пневмонией из группы риска, находящихся в стационаре, был применен современный алгоритм исследования для диагностики легионеллеза, включающий бактериологический анализ бронхоальвеолярного смыва и определение антигена легионелл в моче.

Ранее столь значительный контингент в России обследовали лишь во время эпидемической вспышки внебольничного легионеллеза в г. Верхняя Пышма.

Важно, что диагноз легионеллеза, установленный с помощью использованных в работе тестов, является окончательным, не требует подтверждения с использованием других лабораторных исследований и служит основанием для немедленного проведения этиотропной терапии. Легионеллы не относятся к эндогенной микрофлоре, им не присущи такие важные для современной инфекционной патологии человека феномены, как персистенция или носительство, характерные для многих других возбудителей пневмоний у пациентов групп риска. В отличие от большинства оппортунистических инфекций, и прежде всего пневмоцистной инфекции, при которой выявление возбудителя в бронхоальвеолярном смыве не является доказательством соответствующей этиологии, выделение легионелл из разрушенных альвеолярных макрофагов в бронхоальвеолярном смыве, как и выявление антигена легионелл в моче пациента, свидетельствует об активном развитии легионеллезной инфекции. Не должна вызывать сомнений и сама возможность заражения легионеллами в результате аспирации водопроводной воды или распространения мелкодисперсного водного аэрозоля циркулирующими водными системами (градирни, централизованные водные системы охлаждения и увлажнения воздуха, джакузи). Исследования последних лет свидетельствуют о высоком уровне контаминации легионеллами потенциально опасных водных систем, в ЛПО в Российской Федерации.

Процент выявленных случаев легионеллеза в данном исследовании (10, 5%) не противоречит данным о частоте выявления легионеллезных пневмоний (5–30%), представленным в аналогичных зарубежных исследованиях, посвященных анализу этиологии пневмоний у пациентов из групп риска [11, 12].

Полученные данные, наряду с данными литературы, подтверждают, что легионеллы являются не столько редким, сколько редко диагностируемым возбудителем пневмоний.

Возбудитель относится к группе микроорганизмов, диагностика которых не вписывается в «мейнстрим» современной клинической микробиологии, нацеленной прежде всего на определение антибиотикорезистентности традиционных грамотрицательных и грамположительных бактерий или диагностику инфекций, вызванных эндогенными персистирующими агентами (хламидии, микоплазмы, вирусы, пневмоцисты), с помощью количественных модификаций методов определения ДНК патогена методом ПЦР и путем выявления специфических антител к возбудителю. В качестве близкого по значимости этиологического агента можно отметить листерии (Listeria). Листериозные менингиты у больных гематологическими и онкологическими заболеваниями не редкость, достоверность диагноза при выделении культуры из ликвора не подлежит сомнению. Для листерий, как и для легионелл, до настоящего времени не показано наличие штаммов, резистентных к антибиотикам выбора, поэтому своевременный диагноз позволяет быстро начать этиотропную терапию. С учетом тяжести течения заболеваний, вызываемых данными возбудителями (около 10% летальных исходов при легионеллезной пневмонии, около 20% — при листериозном менингите), актуальность более широкого охвата пациентов из групп риска диагностикой легионеллеза и листериоза при соответствующей клинической симптоматике не вызывает сомнений.

Конечно, применение рекомендованного в данной работе алгоритма исследования требует наличия в ЛПО специалистов, владеющих техникой сбора бронхоальвеолярного смыва или биопсии легкого. Применение иммунохроматографического теста для определения антигена легионелл в моче, напротив, доступно самому широкому кругу лабораторий. Применение такого теста важно при обследовании не только контингентов групп риска в условиях ЛПО, но и для более широкого спектра пневмоний, дифференциальной диагностики тяжелых внебольничных пневмоний, пневмоний путешественников ( legionellosos). Иммунохроматографический тест Binax (США) предназначен также для определения в моче антигена пневмококков (Streptococcus pneumoniae). Именно при тяжелых формах пневмококковой и легионеллезной пневмонии (в отличие от средней тяжести микоплазменной и хламидийной инфекции) антиген возбудителя можно выявить в моче. Поскольку клинически дифференцировать тяжелую пневмококковую и легионеллезную пневмонию практически невозможно, только применение описываемых тестов позволяет в течение 30–40 мин установить окончательный диагноз. Предлагаемая методология представляется перспективной для обязательного включения в протокол обследования больных с пневмониями из групп риска. Простота и доступность иммунохроматографического теста для определения антигена возбудителя инфекции позволяет рекомендовать его для обследования всех больных тяжелыми пневмониями.

источник

Применение стандартов лабораторной диагностики легионеллеза во время эпидемической вспышки пневмоний в городе Верхняя Пышма Свердловской области

За последние годы достигнут качественный прогресс в диагностике и профилактике легионеллеза, основанный на внедрении в практику современных стандартов лабораторной диагностики и количественном мониторинге возбудителя в потенциально опасных объектах окружающей среды. Применение международных стандартов лабораторной диагностики во время эпидемической вспышки пневмоний в городе Верхняя Пышма Свердловекой области позволило в сжатые сроки установить этиологический диагноз. Особое значение имело применение иммунохроматографического метода для выявления антигена легионелл в моче, входящего в стандарты диагностики ВОЗ, что позволило nодтвердить диагноз для больных, находившихся в реанимационном отделении, в течение 30 минут. Анализ потенциально опасных объектов окружающей среды в Верхней Пышме с помощью бактериологических методов и ПЦР в реальном времени позволил установить достаточно широкое распространение Legionella spp. в водных образцах из различных источников, преимущественно в некультивируемом состоянии. Эпидемически значимые изопяты Legionella pneumophila выделяли значительно реже и предварительный скрининг образцов с помощью ПЦР в реальном времени хорошо коррелировал с результатами культуральнога исследования. Применение современных стандартов молекулярного типирования легионелл, разработанных Европейской рабочей группой по легионеллезу, позволил охарактеризовать аллельный профиль выделенных штаммов.

Ключевые слова: легионеллёз, лабораторная диагностика, профилактика, мониторинг, ПЦР в реальном времени, окружающая среда, молекулярное типирование.

Несмотря на то, что легионелленая инфекция известна уже более 30 лет, достаточно хорошо изучены различные аспекты биологии и экологии возбудителя, разработаны методы диагностики и лечение, тем не менее легионеллез часто по традиции продолжают относить к категории недавно открытых и малоизученных инфекций. Во многом эта ситуация объясняется тем, что до недавнего времени легионеллез оставался труднодиагностируемой инфекцией. Даже в США, стране «первооткрывательнице» легионелл в конце 90-х годов прошлого века, техникой бактериологического выделения легионелл из клинического материала владели сотрудники не более 50% клинических микробиологических лабораторий.

Качественные изменения произошли в 1999 г., когда Всемирная Организация Здравоохранения (ВОЗ), проанализировав опыт применения различных методов диагностики в странах с относительно высоким уровнем заболеваемости легионеллезом и при крупных эпидемических вспышках инфекции, подготовила стандарты лабораторной диагностики легионеллза. С 2002 г. эти же стандарты приняты в качестве диагностических критериев Европейской рабочей группой по легионеллезу.

В соответствии с упомянутыми стандартами диагноз легионеллеза в случае острой инфекции нижних дыхательных путей (клинически и рентгенологически подтвержденной) считается установленным:

  • при выделении легионелл из отделяемого респираторного тракта или легочной ткани;
  • при 4-кратном или более нарастании титра специфических антител к Legionella pneumophila в реакции непрямой иммунофлюоресценции;
  • при определении специфического растворимого антигена легионелл в моче иммуноферментным или иммунохроматографическим методом.

При отсутствии сыворотки крови, взятой в ранние сроки болезни, выявление достоверно высокого уровня антител к L. pneumophila (1:128 и выше) в одиночной сыворотке методом непрямой иммунофлюоресценции поэволяет считать диагноз легионеллеза предположительно установленным. Аналогичным образом интерпретируются результаты, полученные на основании выявления возбудителя или его ДНК в респираторном секрете или легочной ткани с помощью прямой иммунофлюресценции или полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Стандарты лабораторной диагностики легионеллеза распространяются лишь на случаи заболеваний, вызванных штаммами L. pneumophila серогруппы 1. В то же время более 80% спорадических и групповых случаев легионеллеза вызваны штаммами данной серогруппы, а при крупных внебольничных вспышках легионеллеза этиологическое значение штаммов 1-й серогруппы показано в 98% случаев.

За менее чем 10-летний период стандартизации диагностики произошел качественный скачок в выявлении легионеллеза в мире. Так, ежегодно регистрируемое Европейской рабочей группой количество случаев легионеллеза выросло с 1160 в 1994 г. до 4588 в 2004 г. Причем основной рост произошел, начиная с 2000 г., т. е. после введения вышеупомянутых стандартов. Резко возросло и число выявляемых ежегодно групповых случаев и эпидемических вспышек инфекции — не менее 100 в год. Наиболее крупные и значимые из них представлены в табл. 1.

Таблица 1. Наиболее значимые эпидемические вспышки леrионеллеза в последние годы

Год Страна Количество заболевших
(умерших)
1999 Голландия 242 (25)
1999 Бельгия 93 (5)
2000 Австралия 98 (8)
2001 Норвегия 28 (9)
2002 Испания 470 (9)
2002 Англия 179 (7)
2003 Морской круиз
«Ocean Monarch»
9 (2)
2003-2004 Франция 86 (17)
2004 Швеция 32 (3)
2005 Норвегия 55 (10)
2006 Испания 122 (6)
2007 Россия,
Верхняя Пышма
190 (5)

Основная роль в повышении эффективности диагностики легионеллеза принадлежит методу определения легионеллезного антигена в моче больных.

Еще в начале 80-х годов прошлого века было показано, что в самом начале болезни (2-3-е сутки) антиген возбудителя можно обнаружить в моче больного легионеллезом, причем сам возбудитель в моче отсутствует. Антиген термастабилен и может быть выявлен в течение примерно 30 дней после начала заболевания. В 1989 г. метод был стандартизован компаниями Binax (США) и Biotest (Германия), испытан 14 лабораториями Европейских стран (включая лабораторию легионеллеза ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН) и был рекомендован в качестве высокоспецифичного и чувствительного метода, позволяющего поставить окончательный диагноз на первой неделе заболевания.

Читайте также:  Продукты вызывающие кровь в моче

Если непосредственно после введения стандарта определения антигена L. pneumophila в моче данный метод использовали для диагностики менее чем в 5% случаев, то в настоящее время метод применяют для постановки окончательного диагноза более чем в 90% подтвержденных случаев легионеллезной инфекии. Превосходство данного метода над традиционными, включенными в стандарт бактериологическим и серологическим методами состоит, прежде всего, в сроках исследования. Бактериологический метод занимает не менее 4-5 суток, причем требуются инвазивные процедуры для получения материала (бронхоскопия, биопсия), так как из мокроты, особенно после начала элютропной терапии, возбудитель удается выделить далеко не всегда. Выявление диагностического нарастания титров антител в реакции непрямой иммунофлюоресценции возможно лишь на третьей неделе заболевания, когда проведен курс антибиотикотерапии и исход заболенания обычно уже ясен. Необходимость, исследования парных сывороток определяет ретроснективный характер диагностики легионеллеза данным методом.

Метод определения легионеллезного антигена в моче обычно применяется в двух модификациях: иммуноферментный и иммунохроматографнческий тест. Они сопоставимы по чувствитrлыюстн, специфичности, времени анализа и применяются взависимости от задач исследования. Иммуноферментный метод позволяет количественно оценить наличие антигена и проверить одновременно более 80 образцов мочи, что важно при расследовании крупных эпидемических вспышек легионеллеэа. В то же время срок хранения тест-системы не нревышает 6 мес. Иммунохроматографические разовые тесты в индивидуальной упаковке хранятся не менее 2 лет, не требуют дополнительного оборудовання и используются для быстрой диагностики спорадических и групповых случаев легионеллезной инфекции.

Высокая эффективность стандартов лабораторной диагностики легионеллеза была продемонстрирована при расследовании эпидемической вспышки пневмоний в Верхней Пышме.

Материал и методы исследования

Материал от больных пневмонией (сывортка крови, моча, аутопсийный материал легочной ткани) был собран в городской бoльнице (Верхняя Пышма) и доставлен для исследования в специализиpoвaнныe лаборатории Екатсринбурга и Москвы. Определение ранних IgM-антител к L. pneumophila серогруппы 1 проводили в Екатеринбургском диагностическом центре с помоощыо тест-системы Vircell (Испания). Мочу больных на присутствие растворимого антигена L. pneumophila серогруппы 1 исследовали с помощью 2 иммунохроматографических тecт-систем — Binax SAS (США) и иммуноферментной тест-системы Biotest (Германия) в НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи на среде BMPA (Oxoid, Великобритания).

Образцы окружающей среды (вода и смывы биопленок) в Bepxнeй Пышме были отобраны сотрудниками Центра гигиены в Свердловской области и исследовались в НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи в соответствни с «Методическими yкaзаниями по выявлению бактерий Legionella pneumophila в объектах окружающей среды». Для количественного определения ДНК легионелл в объектах окружающей среды с помощью ПЦР в реальном времени были выбраны следующие праймеры и флуоресцентные зонды: для выянления Legionella spp. — из последовательности гена, кодирующего 16S рРНК, для выявления L. pneumophila — из последовательности гена mip. Выбранные флуоресцентные зонды были линейными по типу TaqMan и содержали различные флуорофоры на 5′ -конце и оответствующие им гасители на 3′ -конце. Молекулярио-генетическое типирование выделенных штаммов легионелл осуществляли в НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи в соответствии с STB протоколом Европейской рабочей группы по легионеллезу.

В середине июля 2007 г. в Верхней Пышме Свердловской области была выявлена эпидемическая вснышка легионеллезной инфекции. которая которая продолжалась около 3 недель. За период вспышки за медицинской помощью обратиличь более 200 человек с подозрением на легионеллезную пневмонию. Окончательный диагноз установлен 190 больным, этиологический диагноз подтвержден для 74 пациентов, в 5 случаях имел место летальный исход. Большая часть случаев заболеваний приходилась на период с 15 по 25 июля. Бактериологическис и вирусолоrические исследования, проводившиеся специалистами Минздравсоцразвития и Роспортебнадзора Свердловской области, познолили к 25 июля исключить из числа возможных этиологических агентов все потенциальные возбудители респираторных инфекций и пневмоний, за исключением легионелл. В пользу легионеллезной этиологии вспышки свидетельствовали и предварительные результаты эпидемиологического расследования, показавшие, что начало вспышки, с учетом инкубационного периода заболевания, составлявшего от 2 до 1О дней, коррелирует с запуском воды в систему горячего водоснабжения города после нескольких недель ремонтно-профилактических работ (ремонт Су ГРЭС, опрессовки).

Предварительный диагноз легионеллеза был поставлен 27 июля по результатам исследования сывороток крови 59 больных пневмонией с помощью иммуноферментной тест-системы для обнаружения иммуноглобулинов класса М к L. pneumophila серогруппы 1 (Vircell, Испания). Ранние IgМ-антитела к L. pneumophila серогруппы 1 были выявлены у 25 больных. Метод определения ранних IgM-антител к возбудителю легионеллеза не входит в стандарты лабораторной диагностики инфекции, так как в первую неделю заболевания возможны как выявление IgМ-антител, так и полное их отсутствие, особенно у пациентов с выраженным иммунодефицитом, а также перекрестные реакции с некоторыми возбудителями респираторных инфекций. Тем не менее, положительные результаты исследований данным методом у 42,4% обследованных позволили с высокой степенью вероятности предположить у них легионеллез.

При последующем применении стандартов лабораторной диагностики легионеллеза в качестве первого шага было выбрано применение иммунохроматографического метода для определения легионеллезного антигена в моче больных. Образцы мочи были взяты у группы наиболее тяжелых больных, находившихся в реанимационном отделении (8 человек). Исследование на выявление легионеллезного антигена в моче каждого больного было проведено 29 июля с помощью двух типов иммунохроматографических тест-систем: Binax Now и SAS Legionella test (США). В течение 30 мин положительные результаты, продублированные обеими тест-системами, были получены для 5 больных. Еще у двух пацентов при использовании тест-системы Binax Now были получены положительные результаты, но при применении SAS Legionella test результаты были сомнительными. У одного больного отрицательные результаты были нолучены при использовании обеих тест-систем. Параллельна 29 июля секционный материал от 2 умерших больных был исследован с помощью количественной модификации ПЦР с видоспецифическими праймерами на mip ген L. pneumophila. ДНК воэбудителя в высокой концентрации была выявлена в образцах легочной ткани пациентов, умерших от легионеллезной пневмонии.

Поскольку иммунохроматографический метод определения антигена в моче рекомендован ВОЗ и Европейской рабочей групной по леmонеллезу для окончательного подтверждения диагноза легионеллезной инфекции и положительные результаты, полученные данным методом, были дополнены с помощью ПЦР материала аутопсии, то 29 июля 2007 г. можно считать датой окончательного подтверждения легионеллезной этнологии вспышки инфекции (табл. 2).

Таблица 2. Методы лабораторной диагностики применявшиеся для установления диагноза легионеллезнои инфекции во время эпидемической вспышки пневмоний в Верхней Пышме 27 — 29 июля 2007 г.

Метод Используемые материалы Обследуемый контингент больных Количество образцов Позитивные образцы (%) Время,
затраченно на исследование
Место проведения исследований
Определение антигена иммунохроматографическим методом Моча Пациенты реанимации 8 7 (88%) 30 мин НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи (Москва)
Выделение культуры легионелл Секционный материал (легочная ткань) Умершие 2 1 (50%) 5 сут НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи (Москва)
ПЦР Секционный материал (легочная ткань) Умершие 2 2 (100%) 4 ч ЦНИИ эпидемиологии (Москва)
Определение lgM антигена Сыворотка крови Все госпитализированные с диагнозом пневмония 59 25 (42,4%) 4 ч Клинико-диагностический центр (Екатеринбург)

Следующим шагом прнменення стандартов стало использование бактериологического метода для исследования секционного материала (легочная ткань) от трех пациентов, умерших от пневмонин, и исследование 67 образцов мочи на наличие антигена с помощью количественного иммуноферментного метода (Biotest. Германия), взятых у больных 30 июля.

Применение иммуноферментного метода позволило в течение 4 ч количественно выявить легионеллезный антиген в 33 образцах мочи. Причем в образцах мочи, исследованных ранее иммунохроматографическим методом, от 7 тяжелых больных легионеллезом, находившихся в реанимационном отделении, кончентрация антигена была особенно велика, превосходя уровень рекомендованного положительного контроля в 8-10 раз.

Культура L. pneumophila серогруппы 1 была выделена из легочной ткани 1 из 3 умерших пациентов после 5 дней культивирования на буферном угольно- дрожжевом агаре (BCYE) с селективной добавкой, содержащей цефамандол, полимиксии и анизомицин (модификация данной среды называется также ВМРА). Последующая идентификация культуры с помощью бактериологических тестов, латекс-агглютинации, иммунофлюоресценции и ПЦР заняла 2 суток.

Помимо сбора клинического материала 30 июля были взяты на исследование образцы воды и смывы биопленок в местах наиболее вероятного присутствия легионелл в системе водоснабжения Верхней Пышмы и прилегающих окрестностей. Образцы исследовали бактериологически и с помощью ПЦР в реальном вpeмени (ПЦР-РВ) в соответствии с «Методическими указаниями по выявлению бактерий Legionella pneumophila в объектах окружающей среды». Результаты ПЦР в peaльном времени свидетельствуют о широком pacнpocтpaнeнии Legionella spp. в природных и хозяйственных водных системах Верхней Пыпшы. Вместе с тем, выделение культур Legionella spp лишь из одного образца воды подтверждает низкую концентрацию непатогенных видов легионелл, находящихся в воде преимущественно в некультивируемом состоянии. Присутствие L. pneumophila выявляли значительно реже, но в данном случае корреляция ПЦР и результатов бактериологических исследований была болee выражена (табл. 3). В течение первой недели исследований культура L. pneumophila серогруппы 1 была выделена из биопленки с поверхности дренажного канала теплопункта 1. При повторном исследовании в сентябре-октябре 2007 г. образцов воды и биопленок, хранившихся при 4 С в концентрированном виде, с измененным режимом кислотной обработки, были выделены еще несколько культур L. pneumophila (см. табл. 3, табл. 4). Изолят L. pneumophila серогруппы 1 6ыл выделен из воды дренажного канала теплопункта 1. Еще 2 культуры L. pneumophila серогруппы 3 были выделены, соответственно, из смыва с душевой сетки в квартире больного легионеллезом и из технической воды промышленного предприятия. Три изолята Legionella spp. были выделены из одного из технических колодцев системы канализации Верхней Пышмы.

Таблица 3. Результаты исследования образцов окружающей среды в Верхней Пышме с помощью ПЦР-РВ на наличие Legionella spp. и Legionella pneumophila (образцы воды и смывы биопленок взяты 30.07.2007 г.)

Описание образца Результаты оценки методом ПЦР-РВ Выделенная культура
Legionella spp. Legionella pneumophila
Пробы воды от 30.07.07
Дренажная вода теплопункта 1 + L. pneumophila серогруппа 1
Обводной трубопровод в теплопункте 2 +
Дренажный колодец, промывная вода после фильтра, СУГРЭС +
Сбросный канал теплой воды +
Вода из трубы подающего трубопровода теплопункта 1
Вода из колодца 1 + Legionella spp.
Вода из колодца 2 +
Вода из фонтана № 1 +
Вода из фонтана № 2 +
Вода техническая промышленпого предприятия + + L. pneumophila серогруппа 3
Смывы биопленок от 30.07.07
Смыв с поверхности дренажного канала теплопункта 1 + + L. pneumophila серогруппа 1
Смыв из дренажной трубы нз теплопункта 2
Смыв из дренажного колодца, СУГРЭС +
Смыв из дренажного колодца над кромкой воды, СУГРЭС
Внутренняя поверхность трубы подающего трубопровода теплопункта 1
Смыв с сетки дренажного канала теплопункта 1 +
Смыв с душeвoй сетки в квартире больного 1
Смыв с душeвoй сетки в квартире больного 2 + + L. pneumophila серогруппа 3

Для 5 штаммов L. pneumophila, выделенных в районе вспышки легионеллеза, был определен аллельный профиль по протоколу STB EWGLI. В качестве референтного использовали штамм L. pneumophila Philadelphia-1 (АТСС 33152).

Таблица 4. Изоляты L. pneumophila и Legionella spp., выделенные при расследовании эпидемической вспышки легионеллеза в Верхней Пышме.

Изолят Серогруппа L. pneumophila Исследуемый материал Срок выделения, сутки
Pyshma 1 1 Легочная ткань (секционный материал) 5
Pyshma 2 1 Смыв биопленки с поверхности дренажного канала теплопункта 8
Pyshma 3 3 Смыв с новерхности сетки душа в квартире заболевшего легионеллезом 6
Pyshma 4 1 Дренажная вода 7
Pyshma 5 3 Техническая вода 7
Pyshma 6 Вода из кoлодца 1 системы городского водоснабжения 6
Pyshma 7 6
Pyshma 8 8

Результаты молекулярного тпировання представлены в табл. 5, где отражены номера известных последовательностей базы данных EWGLI, которым в 100% соответствует нуклеотидная последовательность фрагментов генов выделенных штаммов. Из табл. 5 видно, что все 5 штаммов уникальны и отличаются между собой по последовательностям секвенированых фрагментов ДНК. По мишени asd идентичны штаммы Pyshma-2 и Pyshma-5, наибольшие отличия наблюдаются между штаммами Pyshma-3 и Pyshma-4. По мишени flaA идентичны Pyshma-2 и Pyshma-4. Наименьшее сходство имеют референтный штамм и Pyshma-3. По фрагменту pilE сходны 3 штамма: Pyshma-1, Pyshma-2 и Pyshma-3, а штамм Pyshma-5 идентичен референтному Philadelphia-1. Мишень mip продемонстрировала идентичность Pyshma-2 и Pyshma-4, proA — полное совпадение последовательностей штаммов Philadelphia-1, Pyshma-3 и Pyshma-4. Фрагменты гена mompS совнадают по последовательности у штаммов Pyshma-2 и Pyshma-4.

Таблица 5. Аллельный профиль проанализированных штаммов

Штамм Номер аллеля
flaA pilE asd mip momps proA
Philadelphia-1, АТСС 33152 3 4 1 1 14 4
Pyshma-1 2 10 18 10 2 9
Pyshma-2 6 10 3 28 9 1
Pyshma-3 6 10 15 3 19 4
Pyshma-4 6 6 3 28 9 4
Pyshma-5 1 4 3 1 1 5

По полному набору аллелей наибольшее сходство с референтным имеет штамм Pyshma-5, также относящийся к первой серогруппе. Из штаммов, выделенных в районе вспышки заболевания, наибольшее сходство имеют штаммы Pyshma-2 и Pyshma-4.

Полученные результаты свидетельствуют о достаточно широком распространении L. pneumophila и Legionella spp. в водопроводной и хозяйственной воде в Верхней Пышме. Гетерогенность популяции возбудителя в водных системах характерна для легионелл, находящихся в своей естественной среде обитания. Селекция наиболее эпидемически значимых клонов возбудителя, по-видимому, может происходить как в составе биопленок, так и при непосредственном контакте с альвеолярными макрофагами человека, приводя к наиболее тяжелым случаям пневмоний.

Применение различных методов лабораторной диагностики легионеллеза при расследовании эпидемической вспышки пневмоний в городе Верхняя Пышма подтвердило ключевую роль и высокую эффективность метода определения антигена легионелл в моче больных. Возможность получения достоверного реэультата, позволяющего поставить окончательный днагноз легионеллезной инфекции в течение 1-3 ч, открывает принципиально новые возможности для быстрой корректировки антибиотикотерапии больных с использованием макролидов, для организации эффективного эпидемиологического расследования и профилактических мероприятий.

Выделение культуры из клинического материала остается «золотым стандартом» диагностики, но требует не менее 6-7 дней. Кроме того, возможности этого метода, как и ПЦР, ограничены необходимостью инвазивных процедур, связанных с получением материала бронхоскопии и биопсии. При исследовании секционного материала от пациентов данные ограничения отсутствовали, но специальные требования к взятию и транспортировке материала на легионеллез могли оказать влияние на результаты бактериологического исследования. Культура выделена лишь из материала от одного пациента. Метод определения IgM -антител в сыворотке крови, так же как и различные модификации ПЦР, не входят в стандарты лабораторной диагностики, но их применение сыграло положительную роль для постановки предполагаемого диагноза или в качестве дополнительного подтверждающего теста. Быстрый анализ эпидемиологической ситуации с учетом возможных путей передачи возбудителя в сочетании с грамотным применением современных алгоритмов лабораторной диагностики легионеллеза позволил в течение 3 дней (27-29 июля) установить окончательный этиологический диагноз эпидемической вспышки.

Анализ распространения возбудителя в потенциально опасных водных системах Верхней Пышмы показал достаточно высокую эффективность сочетания бактериологических методов и ПЦР-РВ. Культуры легионелл были выделены в 5 образцах окружающей среды, а с помощью ПЦР-РВ присутетвие легионелл показано в 13 из 18 образцов. Результаты подтверждают необходимость организации количественного профилактического мониторинга легионелл в потенциально опасных водных объектах с особым акцентом на выявление наиболее эпидемически значимых штаммов L. pneumophila серогруппы 1.

Внедрение стандартов лабораторной диагностики легионеллеза с особым акцентом на выявление антигена легионелл в моче больных в первые дни заболевания, наряду с организацией мониторинга возбудителя в потенциально опасных водных системах в Российской Федерации, позволит не только быстро и достоверно выявлять спорадические случаи и эпидемические вспышки легионеллезной этиологии, осуществлять своевременное и эффективное лечение больных, но и обеспечит своевременное выявление потенциальных очагов легионеллезной инфекции и проведение необходимых противоэпидемических мероприятий.

источник