Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам моча

Решедько Галина Константиновна,
к.м.н., ассистент кафедры клинической фармакологии
Смоленской государственной медицинской академии
214019, г.Смоленск, ул.Крупской, 28, а/я № 5.
Тел.: +7(0812) 61 13 01, 61 13 27, Факс: (0812) 61 12 94,
E-Mail: galina@antibiotic.ru

В лекции рассмотрены основные методы определения чувствительности in vitro микроорганизмов к антимикробным препаратам (диско-диффузионный, Е-тестов, методы разведения). Отражены подходы к эмпирическому и этиотропному назначению антибиотиков в клинической практике. Обсуждены вопросы интерпретации результатов определения чувствительности с клинической и микробиологической точек зрения.

В настоящее время в клинической практике существуют два принципа назначения антибактериальных препаратов: эмпирическое и этиотропное. Эмпирическое назначение антибиотиков основано на знаниях о природной чувствительности бактерий, эпидемиологических данных о резистентности микроорганизмов в регионе или стационаре, а также результатах контролируемых клинических исследований. Несомненным преимуществом эмпирического назначения химиопрепаратов является возможность быстрого начала терапии. Кроме того, при таком подходе исключаются затраты на проведение дополнительных исследований.

Эмпирическое назначение антибиотиков основано на знаниях о природной чувствительности бактерий, эпидемиологических данных о резистентности микроорганизмов в регионе или стационаре и результатах контролируемых клинических исследований

Однако при неэффективности проводимой антибактериальной терапии, при нозокомиальных инфекциях, когда затруднительно предположить возбудителя и его чувствительность к антибиотикам стремятся проводить этиотропную терапию. Этиотропное назначение антибиотиков предполагает не только выделение возбудителя инфекции из клинического материала, но и определение его чувствительности к антибиотикам. Получение корректных данных возможно только при грамотном выполнении всех звеньев бактериологического исследования: от взятия клинического материала, транспортировки его в бактериологическую лабораторию, идентификации возбудителя до определения его чувствительности к антибиотикам и интерпретации полученных результатов.

Этиотропное назначение антибиотиков основано на выделении возбудителя инфекции из очага инфекции и определении его чувствительности к антибиотикам

Вторая причина, обусловливающая необходимость определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам — это получение эпидемиологических данных о структуре резистентности возбудителей внебольничных и нозокомиальных инфекций. В практике эти данные используют при эмпирическом назначении антибиотиков, а также для формирования больничных формуляров.

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам делятся на 2 группы: диффузионные и методы разведения.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам: диффузионные методы с использованием дисков с антибиотиками с помощью Е-тестов методы разведения разведение в жидкой питательной среде (бульоне) разведение в агаре

При определении чувствительности диско-диффузионным методом на поверхность агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию определенной плотности (обычно эквивалентную стандарту мутности 0,5 по McFarland) и затем помещают диски, содержащие определенное количество антибиотика. Диффузия антибиотика в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 35 о -37 о С в течение ночи учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в миллиметрах (рис. 1).

Рисунок 1. Определение чувствительности микроорганизмов диско-диффузионным методом.

Определение чувствительности микроорганизма с помощью Е-теста проводится аналогично тестированию диско-диффузионным методом. Отличие состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (рис. 2). В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).

Рисунок 2. Определение чувствительности микроорганизмов с помощью Е-тестов.

Несомненным достоинством диффузионных методов является простота тестирования и доступность выполнения в любой бактериологической лаборатории. Однако с учетом высокой стоимости Е-тестов для рутинной работы обычно используют диско-диффузионный метод.

Методы разведения основаны на использовании двойных последовательных разведений концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (например от 128 мкг/мл, 64 мкг/мл, и т.д. до 0,5 мкг/мл, 0,25 мкг/мл и 0,125 мкг/мл). При этом антибиотик в различных концентрациях вносят в жидкую питательную среду (бульон) или в агар. Затем бактериальную суспензию определенной плотности, соответствующую стандарту мутности 0,5 по MсFarland, помещают в бульон с антибиотиком или на поверхность агара в чашке. После инкубации в течение ночи при температуре 35 о -37 о С проводят учет полученных результатов. Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) или на поверхности агара свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной подавляющей концентрацией (МПК). Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл (рис. 3).

Минимальная подавляющая концентрация (МПК) — наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий

Рисунок 3. Определение значения МПК методом разведения в жидкой питательной среде.

На основании получаемых количественных данных (диаметра зоны подавления роста антибиотика или значения МПК) микроорганизмы подразделяют на чувствительные, умеренно резистентные и резистентные (рис. 4). Для разграничения этих трех категорий чувствительности (или резистентности) между собой используют так называемые пограничные концентрации (breakpoint) антибиотика (или пограничные значения диаметра зоны подавления роста микроорганизма).

Рисунок 4. Интерпретация результатов определения чувствительности бактерий в соответствии со значениями МПК.

Пограничные концентрации не являются неизменными величинами. Они могут пересматриваться, в зависимости от изменения чувствительности популяции микроорганизмов. Разработкой и пересмотром критериев интерпретации занимаются ведущие специалисты (химиотерапевты и микробиологи), входящие в специальные комитеты. Одним из них является Национальный комитет по клиническим лабораторным стандартам США (National Committee for Clinical Laboratory Standards — NCCLS). В настоящее время стандарты NCCLS признаны в мире и используются как международные для оценки результатов определения чувствительности бактерий при многоцентровых микробиологических и клинических исследованиях.

Существуют два подхода к интерпретации результатов определения чувствительности: микробиологический и клинический. Микробиологическая интерпретация основана на анализе распределения значений концентраций антибиотика, подавляющих жизнеспособность бактерий. Клиническая интерпретация основана на оценке эффективности антибактериальной терапии.

Клинически к чувствительным относят бактерии (с учетом параметров, полученных in vitro), если при лечении стандартными дозами антибиотика инфекций, вызываемых этими микроорганизмами, наблюдают хороший терапевтический эффект.

При отсутствии достоверной клинической информации подразделение на категории чувствительности базируется на совместном учете данных, полученных in vitro, и фармакокинетики, т.е. на концентрациях антибиотика, достижимых в месте инфекции (или в сыворотке крови).

К резистентным (устойчивым) относят бактерии, когда при лечении инфекции, вызванной этими микроорганизмами, нет эффекта от терапии даже при использовании максимальных доз антибиотика. Такие микроорганизмы имеют механизмы резистентности.

Клинически промежуточную резистентность у бактерий подразумевают в случае, если инфекция, вызванные такими штаммами, может иметь различный терапевтический исход. Однако лечение может быть успешным, если антибиотик используется в дозировке, превышающей стандартную, или инфекция локализуется в месте, где антибактериальный препарат накапливается в высоких концентрациях.

С микробиологической точки зрения к бактериям с промежуточной резистентностью относят субпопуляцию, находящуюся в соответствии со значениями МПК или диаметра зон, между чувствительными и резистентными микроорганизмами. Иногда штаммы с промежуточной резистентностью и резистентные бактерии объединяют в одну категорию резистентных микроорганизмов.

Необходимо отметить, что клиническая интерпретация чувствительности бактерий к антибиотикам является условной, поскольку исход терапии не всегда зависит только от активности антибактериального препарата против возбудителя. Клиницистам известны случаи, когда при резистентности микроорганизмов, по данным исследования in vitro, получали хороший клинический эффект. И наоборот, при чувствительности возбудителя может наблюдаться неэффективность терапии.

В определенных клинических ситуациях, когда недостаточно результатов исследования чувствительности обычными методами, определяют минимальную бактерицидную концентрацию.

Минимальная бактерицидная концентрация (МБК) — наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая при исследовании in vitro вызывает гибель 99,9% микроорганизмов от исходного уровня в течение определенного периода времени.

Минимальная бактерицидная концентрация (МБК) — это наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая при исследовании in vitro вызывает гибель 99,9% микроорганизмов от исходного уровня в течение определенного периода времени

Значение МБК используют при терапии антибиотиками, обладающими бактериостатическим действием, или при отсутствии эффекта от антибактериальной терапии у особой категории больных. Частными случаями для определения МБК могут быть, например, бактериальный эндокардит, остеомиелит или генерализованные инфекции у пациентов с иммунодефицитными состояниями.

В заключение хотелось бы отметить, что на сегодняшний день не существует методов, которые позволили бы с абсолютной достоверностью прогнозировать клинический эффект антибиотиков при лечении инфекционных болезней. Однако, данные результатов определения чувствительности могут служить хорошим ориентиром клиницистам для выбора и коррекции антибактериальной терапии.

Таблица 1. Критерии интерпретации чувствительности бактерий

источник

Если у лечащего врача возникнут подозрения о наличии бактериальной природы заболевания пациента, то он обязательно попросит сдать анализ на чувствительность к антибиотикам. Данная процедура помогает представителям медицины назначать правильные лекарственные препараты, поскольку микроорганизмы могут мутировать и развить к ним резистентность.

Это исследование представляет собой лабораторный метод определения лекарственного средства, оказывающего наибольшее воздействие на болезнетворные микроорганизмы, вызвавшие развитие данного конкретного заболевания.

Фармацевтический рынок предлагает огромный выбор лекарственных средств, как в плане эффективного воздействия, так и в плане стоимости. Поэтому, чтобы выбрать наиболее эффективное антибактериальное средство, назначают бактериологический посев.

В целях подбора правильной терапии врач рекомендует пациенту пройти обследование. Анализ на чувствительность к антибиотикам назначают для определения самого эффективного и уместного лекарства в данном случае. Наиболее часто это необходимо для лечения инфекций, передающихся половым путём. Также определение самого эффективного антибиотика является обязательным условием при терапии заболеваний у детей.

Помимо этого, определение чувствительности необходимо во избежание развития устойчивости микроорганизмов к антибиотикам. Если пациент перед этим уже принимал антибиотики, а теперь нужно провести повторный курс лечения, то препарат необходимо заменить на другой. Подобный образ действия позволяет применить меньшую дозировку лекарства и предотвратить мутацию возбудителя. В отделениях гнойной хирургии антибиотики заменяют раз в несколько месяцев.

Тест на чувствительность бактерий необходим при возникновении у пациента аллергических реакций на определенную группу препаратов.

Анализ мочи на чувствительность к антибиотикам также проводится очень часто.

На сегодняшний день существует несколько основных методов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотику. Самым распространенным и простейшим является диско-диффузионный способ, или метод дисков.

Для определения чувствительности диско-диффузионным способом по поверхности застывшего агара в чашке Петри распределяют исследуемый материал (бактериальную суспензию). После этого туда помещают картонные диски, пропитанные определенными антибиотиками. Затем бакпосев закрывают и размещают в термостате при температуре 35-37°С на 12-18 часов. Диффузия антибиотика влечет за собой формирование зоны подавления роста бактерий вокруг бумажных дисков. По истечении указанного времени результат проверяют путём замера диаметра этой зоны.

Второй анализ на чувствительность к антибиотикам – это Е-тест. Он проводится аналогично предыдущему способу, только вместо картонных дисков применяют полоску Е-теста, которая содержит градиент степени пропитки антибиотиком от минимальной к максимальной. После двенадцатичасовой инкубации в термостате специалист достает чашку и оценивает эффективность каждого вида антибиотика, просматривая конкретное место соприкосновения зоны подавления роста бактерий и шкалу полоски. Такова будет самая минимальная концентрация лекарства, необходимого для лечения заболевания.

Преимуществом диффузионных методов является доступность для любой бактериологической лаборатории и простота тестирования. Однако стоимость Е-тестов высока, поэтому наиболее часто используют диско-диффузионный способ.

Как именно осуществляются анализ — посев на чувствительность к антибиотикам?

Данные методы основываются на применении последовательных двойных разведений антибактериального препарата от максимальной до минимальной концентрации. При этом различную концентрацию антибиотика распределяют по жидкой питательной среде (бульону) или агару. После этого бактериальную суспензию помещают на поверхность агара в чашке или в бульон с антибиотиками. По истечении двенадцатичасовой инкубации в термостате при температуре 35-37°С, специалисты анализируют полученные результаты.

Помутнение бульона (рост бактерий) или поверхности агара говорят о том, что данной концентрации антибиотика недостаточно для подавления жизнеспособности микроорганизмов. Увеличение концентрации антибиотика влечет за собой ухудшение роста бактерий. После серии последовательных разведений антибиотика, первая наименьшая концентрация, где не наблюдается рост бактерий, считается минимальной подавляющей концентрацией (МПК), то есть достаточной для лечения.

На основании полученных данных (значения МПК или диаметра зоны подавления роста) бактерии разделяют на чувствительные, с промежуточной резистентностью и резистентные. Для разделения данных категорий резистентности (или чувствительности) применяют пограничные концентрации антибиотика.

Эти величины не являются постоянными и пересматриваются в зависимости от изменений чувствительности бактерий. Пересмотром критериев и их разработкой занимаются микробиологи и химиотерапевты, которые входят в специальные комитеты.

Всего существует два метода интерпретации полученных результатов анализа чувствительности: клинический и микробиологический. Последний основывается на тестировании значений распределения концентрации антибиотика, подавляющего жизнедеятельность микроорганизмов. Клинический метод интерпретации основывается на оценивании эффективного действия антибактериальной терапии.

Как сдавать анализ на чувствительность к антибиотикам?

Что же означает это интересное понятие?

Клинически к чувствительным относят микроорганизмы, если во время лечения стандартной дозировкой антибиотика инфекции, вызванной данными бактериями, наблюдается хорошее терапевтическое действие.

Если достоверная клиническая информация отсутствует, то разделение на категории резистентности основывается на совокупности результатов, полученных in vitro, а также на концентрации антибиотика в сыворотке крови.

Какие из них являются резистентными?

Микроорганизмы относят к устойчивым, когда во время лечения заболеваний, вызванного данными бактериями, от терапии не наблюдается никакого положительного эффекта, даже при применении максимальной дозировки антибиотика. Данные бактерии обладают механизмом резистентности.

Сдать анализ мочи на чувствительность к антибиотикам довольно просто.

Когда говорят о промежуточной резистентности бактерий, то подразумевают случай, когда заболевание, вызванное этими штаммами, имеет различный терапевтический исход. Терапия может оказаться успешной при применении повышенной дозировки антибиотика, или если инфекция локализуется в месте, где накапливается самая высокая концентрация антибактериального препарата.

Иногда резистентные микроорганизмы и штаммы с промежуточной устойчивостью объединяются в одну категорию устойчивых бактерий.

В определенных ситуациях при недостатке результатов тестирования чувствительности распространенными способами, применяют определение минимальной бактерицидной концентрации.

Расшифровка анализа мочи на чувствительность к антибиотикам интересует многих.

Говоря о минимальной бактерицидной концентрации (МБК), имеют в виду наименьшую концентрацию антибиотика, вызывающую при исследовании in vitro уничтожение 99,9% бактерий от изначального показателя на протяжении определенного временного промежутка.

Показатель МБК применяют во время лечения антибиотиками, способными оказывать бактериостатическое действие, или если у особой категории пациентов отсутствует эффект от антибактериальной терапии. К частным случаям применения МБК относят остеомиелит, бактериальный эндокардит или генерализованные инфекции у больных с ослабленным иммунитетом.

Тестирование бактерий на чувствительность к антибиотику проводят с применением следующих биологических жидкостей:

Помимо этого, для того чтобы узнать местную чувствительность, проводят забор материала из уретры, верхних дыхательных путей или цервикального канала.

В заключении хотелось бы сказать, что в нынешнее время не существует способов, которые с абсолютной достоверностью позволили бы предсказать потенциальный клинический эффект антибиотиков при терапии заболеваний, вызванных проникновением в организм болезнетворных микроорганизмов. Однако результаты определения чувствительности, могут стать отличным ориентиром врача для подбора и корректировки антибактериального лечения.

Мы рассмотрели то, как проводится анализ на чувствительность к антибиотикам.

источник

Анализ на чувствительность к антибиотикам является обязательным при возникновении у врача подозрений, что заболевание пациента имеет бактериальную природу. Это связано с тем, что медики пытаются контролировать назначение данных препаратов, чтобы не стимулировать мутации и не вызывать резистентность у микроорганизмов.

Анализ на чувствительность к антибиотикам – это лабораторный способ выявления препарата, который будет оказывать наибольшее действие на патогенную флору в данном конкретном случае болезни.

На данный момент антибактериальная терапия применяется достаточно широко там, где она нужна, а также в тех случаях, когда это совсем не обязательно, для перестраховки от возможных осложнений. Например, после кесарева сечения, лапароскопических операций, удаления конкрементов из почек или мочеточников и т. д.

Фармацевтическая промышленность может предложить широкий выбор препаратов как в плане цены, так и в плане действенности. Для того чтобы не «тыкать пальцем в небо» и назначить эффективный антибиотик, нужно провести посевы на чувствительность.

Перед тем как врач подберет терапию, пациенту необходимо сдать некоторые анализы. Посев на чувствительность к антибиотикам назначается, если необходимо определить лекарство, которое в данном случае будет наиболее уместно. Чаще всего это исследование назначается для лечения заболеваний, передающихся половым путем, или ЗППП. Для детей же необходимость в определении антибиотика – это обязательное условие.

Кроме того, определение чувствительности нужно, чтобы избежать устойчивости бактерий к лечению. Если пациента недавно лечили антибиотиками, и теперь вновь необходим повторный курс, то требуется замена препарата. Это позволит использовать меньшие дозы лекарства и не вызывать мутации у возбудителя. В гнойных хирургических отделениях антибиотики меняют каждые два-три месяца.

Данный анализ необходим еще в том случае, если на основную группу антибиотиков у больного возникает аллергическая реакция.

Анализ мочи на чувствительность к антибиотикам, и не только ее, можно провести несколькими способами. Первый из них – это метод дисков. Проводят его следующим образом. В чашку Петри заливают агар, а когда он застынет, специальным инструментом наносят исследуемый материал. Затем по поверхности агара раскладывают бумажные диски, пропитанные антибиотиками. После чашку закрывают и ставят в термостат. Постепенно диск погружается в желатин, а антибиотик диффундирует в окружающее пространство. Вокруг бумаги образуется зона «подавления роста». Чашки проводят в термостате двенадцать часов, затем их вынимают и измеряют диаметр вышеуказанной зоны.

Второй способ – это метод Е-теста. Он похож на предыдущий, но вместо бумажных дисков используют полоску, которая на своем протяжении в разной степени пропитана антибиотиком. После двенадцати часов экспозиции в термостате чашку Петри достают и смотрят, в каком месте зона подавления роста соприкасается с полоской бумаги. Это будет наименьшая концентрация препарата, которая необходима для лечения заболевания.

Достоинством этих тестов является быстрота и простота их проведения.

Анализ на флору и чувствительность к антибиотикам можно провести и другим способом. Этот метод основан на последовательном уменьшении концентрации антибиотика (от максимальной до минимальной) с целью определить, в какой из пробирок прекратится сдерживание роста бактерий.

Сначала подготавливают растворы препарата. Затем их вносят в жидкую среду с бактериями (бульон или агар). Все пробирки на ночь (то есть 12 часов) помещаются в термостат при температуре 37 градусов, а утром проводят анализ получившихся результатов. Если содержимое пробирки или чашки Петри мутное, это свидетельствует о росте бактерий и, следовательно, неэффективности антибиотика в данной концентрации. Первая пробирка, в которой визуально не будет определяться рост колоний микроорганизмов, будет считаться достаточной концентрацией для лечения.

Это разведение препарата принято называть минимальной подавляющей концентрацией (МПК). Она измеряется в миллиграммах на литр или микрограммах на миллилитр.

Анализ на чувствительность к антибиотикам нужно уметь не только правильно сделать, но и грамотно расшифровать. Основываясь на получаемых результатах, все микроорганизмы делят на чувствительные, умеренно резистентные и резистентные. Для того чтобы различать их между собой, используются условные пограничные концентрации препаратов.

Эти значения не являются постоянными и могут изменяться в зависимости от приспосабливаемости микроорганизмов. Разработкой и пересмотром этих критериев поручено заниматься химиотерапевтам и микробиологам. Одной из официальных структур такого рода является Национальный комитет по клиническим лабораторным стандартам США. Разработанные ими стандарты признаны во всем мире для использования в оценке активности антибиотиков, в том числе для рандоминизированных многоцентровых исследований.

Различают два подхода к оценке результатов анализа на чувствительность к антибиотикам: клинический и микробиологический. Микробиологическая оценка ориентируется на распределение эффективных концентраций антибиотика, а клиническая — на качество антибактериальной терапии.

Анализ — определение чувствительности антибиотикам — назначается с целью выявить чувствительные и устойчивые микроорганизмы.

Чувствительными называются возбудители, которые поддаются лечению антибиотиками в средней терапевтической концентрации. Если достоверная информация о категории чувствительности микроорганизма отсутствует, то учитываются данные, полученные в условиях лаборатории. Они совмещаются со знаниями о фармакокинетике используемого препарата, и после синтеза данной информации делается вывод о восприимчивости бактерий к лекарству.

К резистентным, то есть устойчивым, микроорганизмам относятся те бактерии, которые продолжают вызывать заболевания даже при использовании максимальных концентраций лекарственных веществ.

Промежуточную резистентность устанавливают в том случае, если заболевание в процессе лечения может иметь несколько исходов. Выздоровление пациента возможно в случае использования высоких доз антибиотиков либо в случае прицельного накапливания лекарства в месте инфекции.

Анализ на микрофлору и чувствительность к антибиотикам определяет такой показатель, как минимальная бактерицидная концентрация, или МБК. Это самая низкая концентрация препарата, которая в лабораторных условиях вызывает элиминацию практически всех микроорганизмов в течение двенадцати часов.

Знание этого показателя врачи используют, когда назначают терапию не бактерицидными, а бактериостатическими лекарственными средствами. Или в случаях, когда стандартная антибактериальная терапия оказывается неэффективной. Чаще всего этот анализ заказывают для больных с бактериальным эндокардитом, остеомиелитом, а также при оппортунистических инфекциях.

Анализ на чувствительность к антибиотикам может проводиться с использованием биологических жидкостей:

Кроме того, для определения местной чувствительности производят забор мазков из уретры, цервикального канала и верхних дыхательных путей.

Бак. анализ на чувствительность к антибиотикам не требует от пациентов существенной подготовки, но некоторые ограничения все-таки есть.

1. Для исследования используется средняя порция утренней мочи, которая собирается в стерильную посуду. Перед этим пациент обязательно должен осуществить туалет наружных половых органов и рук.
2. Грудное молоко собирается перед кормлением ребенка. Первая порция сливается, а затем в стерильный контейнер сцеживается несколько миллилитров с каждой груди.
3. Перед сдачей мазка из носоглотки стоит воздержаться от приема пищи в течение пяти-шести часов.
4. В случае взятия мазка из половых путей, рекомендуют воздерживаться от половых контактов в течение пары дней.

На сегодняшний день не существует клинических или лабораторных методов, которые бы со стопроцентной вероятностью могли предсказать эффект от антибактериальной терапии. Но в то же время определение чувствительности бактерий к лекарственным веществам может быть ориентиром для врачей в вопросах выбора и коррекции лечения.

источник

(Согласно Приказу Министерства здравоохранения СССР № 250 от 13.03.75 г. «Об унификации методов определения чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам».)

В клинической практике чувствительными к антибиотикам считают те микроорганизмы, на которые антибиотики оказывают бактериостатическое или бактерицидное действие.

При любом лабораторном исследовании критерием чувствительности микроорганизмов к антибиотикам является минимальная концентрация антибиотика, ингибирующая (задерживающая) рост возбудителя заболевания при стандартных условиях постановки опыта.

Для определения лекарственной чувствительности оптимальным является использование чистой культуры возбудителя. Выделять культуры микробов из организма для исследования на чувствительность следует до начала лечения антибиотиками, так как под их воздействием рост возбудителя заболевания может быть полностью угнетен. Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам определяют методом диффузии в агар с применением стандартных дисков или методом серийных разведений в жидких и плотных питательных средах.

Методы определения

Метод дисков. Взвесь изучаемой культуры засевают «газоном» (см. главу 7). В качестве посевного материала можно использовать суточную бульонную культуру или 1 миллиардную микробную взвесь, приготовленную по оптическому стандарту мутности № 10 (см. ниже). Засеянные чашки подсушивают 30-40 мин при комнатной температуре. Затем на поверхность засеянного агара пинцетом накладывают бумажные диски, пропитанные растворами различных антибиотиков. Каждый диск слегка прижимают браншами пинцета, чтобы он плотно прилегал к поверхности агара. Диски накладывают на равном расстоянии друг от друга и на расстоянии 2 см от края чашки. Одну чашку можно использовать для изучения чувствительности одного штамма к 4-5 антибиотикам.

Засеянные чашки с нанесенными на них дисками помещают в термостат при 37° С на 18-24 ч. Чашки ставят вверх дном, чтобы избежать попадания конденсационной воды на поверхность посевов.

Учет результатов. Действие антибиотиков оценивают по феномену задержки роста вокруг диска (рис. 25). Диаметр зон задержки роста микробов вокруг дисков определяют с помощью линейки, включая диаметр самого диска. Между степенью чувствительности микроба к антибиотикам и величиной зоны отсутствия роста имеются следующие соотношения (табл. 10).

Рис. 25. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам (метод дисков)

Таблица 10. Определение степени чувствительности микроорганизмов к антибиотикам по величине зоны отсутствия роста

В ответе указывают, какой чувствительностью обладает исследуемый штамм, а не размер зоны задержки роста.

В ряде случаев определяют чувствительность микроорганизмов к антибиотикам в нативном материале (гной, раневое отделяемое и др.). При этом материал наносят на поверхность питательного агара и равномерно растирают по поверхности стерильным стеклянным шпателем * , а потом накладывают диски. Метод дисков для определения чувствительности микроорганизмов вследствие простоты и доступности широко применяют в практических лабораториях и расценивают как качественный метод.

* (Для тех видов микроорганизмов, которые не растут на мясопептонном агаре, как, например, стрептококки, пневмококки и другие, применяют агар с кровью или сывороткой.)

Метод серийных разведений в жидкой питательной среде. Этот метод является точным количественным методом, его применяют в научной работе и в особо важных случаях в лабораториях больниц и профилактических учреждений.

Для постановки опыта необходимо иметь чистую культуру испытуемого микроорганизма, основной раствор антибиотика, мясопептонный бульон на переваре Хоттингера, содержащий 1,2-1,4 г/л аминного азота.

Активность антибиотиков выражают в ЕД/мл или мкг/мл. Для приготовления основного раствора антибиотика используют антибиотики, имеющиеся в продаже с указанием количества их во флаконе.

Если на этикетке вместо количества единиц во флаконе дозировка указана в единицах массы, то следует иметь в виду, что 1 г активности для большей части антибиотиков соответствует 1 млн. ЕД. Из этого раствора и должны быть приготовлены требуемые разведения антибиотиков. Указания для приготовления основного раствора антибиотиков на примере пенициллина приведены в табл. 11.

Таблица 11. Получение основного раствора пенициллина

Готовят взвесь культуры микроорганизмов, выросшей на плотной питательной среде. Полученную взвесь сравнивают с оптическим стандартом мутности № 10 (см. ниже), а затем разводят стерильным изотоническим раствором натрия хлорида до 10 6 микробных тел в 1 мл. Для получения соответствующего разведения микробной взвеси готовят ряд последовательных десятикратных разведений (см. ниже).

Постановка опыта. В 12 стерильных пробирок разливают по 1 мл жидкой питательной среды. В 1-ю пробирку вносят 1 мл основного раствора антибиотика, содержащего, например, 32 ЕД в 1 мл. Содержимое 1-й пробирки перемешивают и 1 мл переносят во 2-ю пробирку, из 2-й — в 3-ю, из 3-й — в 4-ю и так до 10-й, из которой 1 мл удаляют. Таким образом, 1-я пробирка будет содержать 16 ЕД, 2-я — 8 ЕД, 3-я — 4 ЕД и т. д. Для приготовления каждого разведения используют отдельную пипетку. Содержимое 11-й пробирки служит контролем роста бактерий, а 12-й — контролем стерильности питательной среды. Во все пробирки, кроме 12-й, вносят 0,1 мл испытуемой культуры определенной густоты. Посев инкубируют в термостате в течение 18-24 ч и регистрируют результаты опыта.

Учет результатов проводят при наличии роста в контроле культуры и отсутствии роста в контроле среды. Затем отмечают последнюю пробирку с полной видимой задержкой роста микробов. Количество антибиотика в этой пробирке является минимальной ингибирующей концентрацией для испытуемого штамма и определяет степень его чувствительности к данному антибиотику. В ответе, выдаваемом лабораторией, указывают минимальную ингибирующую концентрацию.

Метод серийных разведений на плотной питательной среде. Готовят двукратные разведения антибиотика, как и при методе серийных разведений в жидкой питательной среде. Затем берут 1 часть каждого разведения антибиотика и 9 частей питательного агара, расплавленного и охлажденного до 42° С (из расчета 1 мл антибиотика + 9 мл МПА), хорошо перемешивают и наливают в чашки Петри.

Густоту (концентрацию) культуры определяют по оптическому стандарту мутности № 10 и разводят стерильным изотоническим раствором до 10 7 микробных тел в 1 мл. Бактериальной петлей наносят испытуемые культуры на поверхность питательного агара с антибиотиком. На одну чашку делают посев 20-25 штаммов. Засеянные чашки ставят в термостат при 37° С на 16-20 ч для большинства видов микроорганизмов. Чашка с питательным агаром без антибиотика, на которую наносят испытуемые культуры, является контрольной.

Учет результатов проводят при наличии роста в контрольной чашке, а минимальную ингибирующую концентрацию антибиотика определяют по последней чашке Петри, где отмечают полную задержку роста бактерий.

Метод дорожки по Флемингу. Метод применяют для определения спектра действия антибиотика. В чашке Петри с МПА стерильным скальпелем вырезают дорожку шириной 1 см и удаляют ее. Затем в пробирку с растопленным и охлажденным до 42-45° С мясопептонным агаром вносят определенную концентрацию раствора антибиотика. Содержимое пробирки перемешивают и выливают в дорожку так, чтобы жидкость не выходила за ее пределы. После застывания агара перпендикулярно к дорожке засевают петлей культуры нескольких исследуемых микроорганизмов. Посевы помещают в термостат на 18-24 ч.

Учет результатов. Чувствительные к препарату культуры начинают расти лишь на некотором расстоянии от дорожки, нечувствительные растут до самого края.

Дата добавления: 2016-11-22 ; просмотров: 3170 | Нарушение авторских прав

источник

Для определения чувствительности бак­терий к антибиотикам (антибиотикограммы)обычно применяют:

• Метод диффузии в агар. На агаризованную питательную среду засевают исследуемый микроб, а затем вносят антибиотики. Обычно препараты вносят или в специальные лунки в агаре, или на поверхности посева раскла­дывают диски с антибиотиками («метод дис­ков»). Учет результатов проводят через сутки по наличию или отсутствию роста микробов вокруг лунок (дисков). Метод дисков — качес­твенныйи позволяет оценить, чувствителен или устойчив микроб к препарату.

• Методы определенияминимальных ингибирующих и бактерицидных концентраций, т. е. минимального уровня антибиотика, кото­рый позволяет in vitro предотвратить видимый рост микробов в питательной среде или пол­ностью ее стерилизует. Это количественныеметоды, которые позволяют рассчитать дозу препарата, так как концентрация антибиоти­ка в крови должна быть значительно выше ми­нимальной ингибирующей концентрации для возбудителя инфекции. Введение адекватных доз препарата необходимо для эффективного лечения и профилактики формирования ус­тойчивых микробов.

Есть ускоренные способы, с применением автоматических анализаторов.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков.Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар или среду АГВ в чашке Петри.

Среда АГВ: сухой питательный рыбный бульон, агар-агар, натрий фосфат двузамещенный. Среду готовят из сухого порошка в соответствии с ин­струкцией.

На засеянную поверхность пинцетом помещают на одинако­вом расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста исследуемой культуры бактерий судят о ее чув­ствительности к антибиотикам.

Для получения достоверных результатов необходимо приме­нять стандартные диски и питательные среды, для контроля которых используются эталонные штаммы соответствующих микроорганизмов. Метод дисков не дает надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к плохо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам (например, полимиксин, ристомицин). Если эти антибиотики предполагается использовать для лечения, рекомендуется определять чувстви­тельность микроорганизмов методом серийных разведений.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений.Данным методом определяют минимальную концентрацию антибиотика, ингибирующую рост исследуемой культуры бактерий. Вначале готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл или ЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Из него готовят все последующие разведения в буль­оне (в объеме 1 мл), после чего к каждому разведению добав­ляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 10 6 —10 7 бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнению питатель­ной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя про­бирка с прозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий под влиянием содержа­щейся в ней минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антибиотика.

Оценку результатов определения чувствительности микро­организмов к антибиотикам проводят по специальной готовой таблице, которая содержит пограничные значения диаметров зон задержки роста для устойчивых, умеренно устойчивых и чувствительных штам­мов, а также значения МИК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов.

К чувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаружи­ваемых в сыворотке крови больного при использовании обычных доз антибиотиков. К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации, созда­ющиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата. Устойчивыми являются микроорганизмы, рост кото­рых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз.

Определение антибиотика в крови, моче и других жидкостях организма человека.В штатив устанавливают два ряда проби­рок. В одном из них готовят разведения эталонного антибиотика, в другом — исследуемой жидкости. Затем в каждую пробирку вносят взвесь тест-бактерий, приготовленную в среде Гисса с глюкозой. При определении в исследуемой жидкости пеницил­лина, тетрациклинов, эритромицина в качестве тест-бактерий используют стандартный штамм S. aureus, а при определении стрептомицина — Е. coli. После инкубирования посевов при 37 °С в течение 18—20 ч отмечают результаты опыта по помутнению среды и ее окрашиванию индикатором вследствие расщепления глюкозы тест-бактериями. Концентрация антибиотика опреде­ляется умножением наибольшего разведения исследуемой жид­кости, задерживающей рост тест-бактерий, на минимальную концентрацию эталонного антибиотика, задерживающего рост тех же тест-бактерий. Например, если максимальное разведение исследуемой жидкости, задерживающее рост тест-бактерий, рав­но 1:1024, а минимальная концентрация эталонного антибио­тика, задерживающего рост тех же тест-бактерий, 0,313 мкг/мл, то произведение 1024- 0,313=320 мкг/мл составляет концен­трацию антибиотика в 1 мл.

Определение способности S. aureus продуцировать бета-лактамазу.В колбу с 0,5 мл суточной бульонной культуры стандарт­ного штамма стафилококка, чувствительного к пенициллину, вносят 20 мл расплавленного и охлажденного до 45 °С питатель­ного агара, перемешивают и выливают в чашку Петри. После застывания агара в центр чашки на поверхность среды поме­щают диск, содержащий пенициллин. По радиусам диска петлей засевают исследуемые культуры. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта. О способности исследуемых бактерий продуцировать бета-лактамазу судят по наличию роста стандартного штамма стафило­кокка вокруг той или другой исследуемой культуры (вокруг диска).

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

Цель занятия. Ознакомить студентов с методами определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

Оборудование и материалы. Стерильные чашки Петри с МПА, пробирки с чистой культурой стафилококка и кишечной палоч­ки, стерильные градуированные «концевые» пипетки на 2 мл, ре­зиновые груши, набор стандартных дисков с разными антибио­тиками, стерильные пинцеты, линейки.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Антибиотики. Эти вещества, образуемые бактериями, грибами, растениями, животными тканями, способны убивать микроорга­низмы или подавлять их рост. Абсолютное большинство извест­ных антибиотиков получают из актиномицетов. Бактерии синте­зируют такие антибиотики, как полимиксины, грамицидины, бацитрацин, гризин. Из грибов выделены пенициллины, цефалоспорины, фумагиллин, гризеофульвин, из животных тка­ней — эритрин, экмолин, из высших растений — аллицин и др. Часть антибиотиков получают химическим синтезом (левомицетин), а большинство — биосинтезом. Активность препаратов оп­ределяют бактериологическими или физико-химическими мето­дами. Биологическую активность антибиотиков выражают в ус­ловных единицах действия — ЕД. За 1 ЕД принимают специфи­ческую активность, содержащуюся в 1 мкг чистого препарата, но для бензил пенициллина 1 ЕД равна 0,5988 мкг химически чистой натриевой соли препарата. Активность товарных антибиотиков чаще всего выражают в мкг активного вещества, содержащегося в 1 мг препарата.

Успех лечения инфекционных заболеваний человека и живот­ных зависит от выбора эффективного лекарственного средства с учетом чувствительности к нему возбудителя болезни. Материал для лабораторного исследования следует брать до лечения антимикробными препаратами. Чувствительность микроорганизма к антибиотикам определяют с чистой культурой возбудителя.

Методы определения чувствительности микроорганизмов к анти­биотикам. К ним относят метод диффузии в агар, метод серий­ных разведений (на жидкой и плотной питательных средах) и ускоренные методы.

Метод диффузии в агар (метод бумажных дисков). Это наибо­лее простой в исполнении метод. В качестве питательной среды применяют МПА, агар на переваре Хоттингера с содержанием 120. 140мг% аминного азота (рН 7,2. 7,4) или агар фирмы «Дифко». Диски с антибиотиками (диаметр 5. 6 мм) готовят из специальных сортов фильтровальной бумаги. Каждый диск со­держит определенное количество антибиотика, которое указано на этикетке флакона. Во флакон насыпают силикагель, который впитывает влагу и служит индикатором: при переувлажнении ме­няет окраску с синей на розовую. При изменении окраски силикагеля во флаконе диски для использования непригодны. Флако­ны с дисками хранят при температуре 4. 20 «С.

Расплавленную питательную среду разливают в чашки Петри по 20 мл (толщина слоя 4. 5 мм). Перед посевом чашки со сре­дой досушивают в термостате. Для посева используют суточную бульонную культуру или смывы суточной агаровой культуры. 1 мл микробной суспензии в физиологическом растворе (кон­центрация клеток 10 9 /мл) наносят на агар и покачиванием чаш­ки распределяют по поверхности питательной среды. Избыток жидкости удаляют стерильной пастеровской пипеткой. Засеян­ные чашки Петри подсушивают при комнатной температуре 30. 40 мин, а затем на поверхность среды стерильным пинцетом накладывают, плотно прижимая, диски с разными антибиоти­ками на расстоянии 2 см друг от друга и от края чашки. Чашки с дисками выдерживают в термостате при 37 °С 18 ч в положении вверх дном.

Антибиотик из диска диффундирует в агар, вызывая гибель чувствительных бактерий, формируя таким образом вокруг диска зону отсутствия роста (рис. 49). Ближе к диску концентрация ан­тибиотика в агаре выше, по мере удаления от диска концентра­ция снижается. Следовательно, чем больше диаметр зоны задер­жки роста вокруг антибиотика, тем более чувствительна к нему исследуемая культура.

Диаметр зоны задержки (отсутствия) роста микроорганизмов измеряют с помощью линейки или миллиметровой бумаги с точ­ностью до 1 мм. Отсутствие зоны задержки роста микроорганиз­мов вокруг диска указывает на устойчивость исследуемой культу­ры к данному антибиотику. При зоне задержки роста до 14 мм говорят о малой чувствительности к антибиотику, от 15 до 25 мм — о достаточной чувствительности, свыше 25 мм — о высо­кой чувствительности.

а — к пенициллину; б— к стрептомицину; в — к неомицину; /—зона задер­жки роста (стерильная зона); 2 — сплошной рост бактерий на поверхности питательной среды; 3 — бумажный диск с антибиотиком

Чтобы получить более точные результаты исследования, необхо­димо соблюдать стандартные условия при постановке опыта. Для проверки точности и стандартности определения чувствительности к антибиотикам Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) реко­мендует контролировать диски на эталонных штаммах микроорга­низмов, которыми служат три культуры из Американской коллекции типовых культур или из Национальной коллекции типовых культур в Англии: S. aureus (АТСС 25923, №СТС 6571), E. coli (АТСС 25922, № СТС 10418), P. aeruginosa (АТСС 27853, № СТС 10662).

Метод серийных разведений. Для проведения опыта готовят ос­новные растворы антибиотиков, используя стандарты антибио­тиков. На этикетке ампулы со стандартом указана концентрация антибиотика в ЕД/мл или мкг/мл. Навески бензил пенициллина калиевой или натриевой соли, ампициллина тригидрата, оксациллина натриевой соли, цефалотина, цефалексина растворяют в 1/15M фосфатном буфере. Основные растворы тетрациклиновых антибиотиков готовят на 0,01 н. растворе соляной кислоты. Для приготовления основных растворов нео-, моно-, канамицина ис­пользуют дистиллированную воду. Концентрация основных ра­створов антибиотиков 1000 мкг/мл.

Метод серийных разведений на жидкой питательной среде: при определении чувствительности к антибиотикам для основной массы микроорганизмов использу­ют МПБ или бульон на переваре Хоттингера, для стрептококков в среду добавляют 1 % глюкозы, для патогенных грибов исполь­зуют среду Сабуро.

Агаровые или бульонные культуры микроорганизмов предва­рительно разводят физиологическим раствором до концентрации клеток 5 • 10 6 /мл.

Схема опыта приведена в таблице 2.

Учет результатов: наименьшее количество антибиотика, даю­щее визуально полную задержку роста (бульон прозрачный), со­ответствует минимальной подавляющей концентрации препара­та (МПК). Минимальную бактерицидную концентрацию (МБцК) определяют высевом на плотные питательные среды из последних прозрачных пробирок, которые предварительно встряхивают. Наименьшее количество антибиотика в пробирке, содержимое которой после инкубирования в течение 24. 72 ч не дало роста бактерий при высеве на питательную среду, принима­ют за МБцК.

Метод серийных разведений на плотной питательной среде: для определения чувствительности к антибиотикам большинства микроорганизмов используют МПА или агар на переваре Хоттингера с содержанием аминного азота 120. 140мг/мл, рН 7,2. 7,4. Приготовленный основной ра­створ антибиотиков разводят в плотной питательной среде. Для этого к расплавленному и охлажденному до 55 ºС агару, разлито­му в широкие пробирки по 18 мл, добавляют по 2 мл соответству­ющего разведения определенного антибиотика, тщательно пере­мешивают и переливают в стерильную чашку Петри. После зас­тывания агара чашки Петри подсушивают в течение 1 ч. Конт­рольные чашки Петри с агаром не содержат антибиотика. Все чашки Петри делят на сектора, каждый из которых засевают ис­следуемой культурой. Посев делают бактериологической петлей из микробной суспензии с концентрацией клеток 10 6 . 10 7 /мл. Чашки помещают в термостат при 37 ºС на 20. 24 ч.

Наименьшую концентрацию антибиотика, при которой на­блюдают полную задержку роста бактерий на агаре или рост еди­ничных колоний, принимают за МПК препарата. В том случае, когда рост культуры отсутствует на всех чашках, кроме конт­рольной, считают, что исследуемые концентрации антибиотиков превышают МПК препарата. Если на всех чашках отмечают рост культуры, это значит, что микроорганизм устойчив ко всем кон­центрациям антибиотика.

ЗАДАНИЕ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

Определить чувствительность культуры стафилококка к анти­биотикам методом бумажных дисков.

2.Как используют антибиотики в ветеринарии?

3.Какими методами определяют чувствительность микроорганизмов к анти­биотикам?

4.Что принимают за минимальную подавляющую концентрацию антибиотика?

источник

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам. Определение концентрации антибиотиков в крови моче.

Биохимические и генетические механизмы лекарственной устойчивости микроорганизмов.

Существует два типа лекарственной устойчивости- естественная (природная) и приобретенная (в результате мутаций, обмена R- плазмидами др.).

Естественная лекарственная устойчивость является видовым признаком, чаще связана с недоступностью антибиотика к его мишени, т.е. невозможностью осуществления его механизма действия. В природных условиях, особенно в почве, микроорганизмы находятся в конкурентной борьбе за субстраты. Антибиотики- один из селективных факторов отбора. Микроорганизмы- продуценты антибиотиков защищены от синтезируемых антибиотиков генетическими механизмами (генетически детерминированная устойчивость, кодируемая в хромосоме или обусловленная наличием R- плазмид). Микроорганизмы в условиях совместного обитания вынуждены вырабатывать устойчивость к антибиотикам.

Резистентность к антибиотикам у микробов может быть связана с негенетическими факторами (низкая метаболическая активность, переход в L- форму).

Основную роль в лекарственной устойчивости принадлежит R- плазмидам, способным передаваться в другие бактерии и формировать своеобразный генофонд лекарственной устойчивости микроорганизмов. Резистентность современных стафилококков к пенициллину доходит до 100%.

На биохимическом уровне в формировании резистентности могут участвовать различные механизмы.

1.Разрушение молекулы антибиотика (пенициллины и другие бета- лактамные антибиотики разрушаются ферментом бета- лактамазой).

2.Модификация структуры молекулы антибиотика, приводящая к утрате биологической активности ( так действуют изоферменты).

3.Изменение структуры мишеней, чувствительных к антибиотику (белков 70S рибомос- устойчивость к тетрациклинам, стрептомицину, макролидам, гираз- к хинолонам, рнк- полимераз- к рифампицину, пенициллинсвязывающих белков- транспептидаз- к бета- лактамам).

4.Образование бактериями “обходного” пути метаболизма.

5.Формирование механизмов активного выведения антибиотика из клетки.

Из-за формирования антибиотикоустойчивых популяций микроорганизмов с целью эффективного лечения необходимо предварительно определять чувствительность данного антибиотика к выделенной культуре возбудителя.

Основными методами определения антибиотикочувствительности бактерий in vitro является метод серийных разведений, диффузии в агар (бумажных дисков), определение способности к продукции бета- лактамазы, in vivo- на модели безмикробных животных, определение концентрации антибиотиков в крови и моче.

Метод диффузии в агар с применением стандартных дисков, пропитанных различными антибиотиками в определенных концентрациях (зависят от терапевтической дозы и соотвествуют рекомендациям ВОЗ). Основан на использовании стандартных питательных сред, дисков и методов. Оценка результатов связана с существованием зависимости между размером зоны подавления роста исследуемых культур вокруг дисков и значениями минимальных подавляющих концентраций (МПК)соответствующих антибиотиков (чувствительностью микроорганизмов). Имеются специальные таблицы для оценки результатов, в соответствии с которыми культуры определяют как чувствительные, умеренно устойчивые и устойчивые (резистентные) к тестируемому антибиотику.

Метод серийных разведений антибиотиков позволяет более точно определить МПК, однако из-за громоздкости применяется реже.

Бета- лактамазный тест (определение способности к образованию бета- лактамаз) чаще определяют методом дисков с нитроцефином — цефалоспорином, изменяющим окраску дисков при гидролизе. Положительный тест свидетельствует о резистентности бактерий ко всем бета- лактамаза- чувствительным пенициллинам.

Существует ряд причин, обусловливающих различную чувствительность микроорганизмов к антибиотикам in vitro и in vivo.

На антимикробную активность in vitro влияют многие факторы, в том числе :

— условия и время культивирования.

На антимикробную активность препаратов in vivo также влияют различные факторы, из которых необходимо отметить:

— фармакодинамику препарата в организме (скорость всасывания, выведения, расщепления и т.д.);

— локализацию микробов в организме (особенно внутриклеточную локализацию).

Рациональная антибиотикотерапия. Побочное действие антибиотиков на организм человека и на микроорганизмы. Формирование антибиотикорезистентных и антибиотикозависимых форм микробов.

Профилактика развития осложнений со­стоит прежде всего в соблюдении принципов рациональной антибиотикотерапии(антимик­робной химиотерапии):

• Микробиологический принцип.До назна­чения препарата следует установить возбу­дителя инфекции и определить его индиви­дуальную чувствительность к антимикроб­ным химиотерапевтическим препаратам. По результатам антибиотикограммы больному назначают препарат узкого спектра дейс­твия, обладающий наиболее выраженной активностью в отношении конкретного воз­будителя, в дозе, в 2—3 раза превышающей минимальную ингибирующую концентра­цию. Если возбудитель пока неизвестен, то обычно назначают препараты более широ­кого спектра, активные в отношении всех возможных микробов, наиболее часто вы­зывающих данную патологию. Коррекцию лечения проводят с учетом результатов бак­териологического исследования и опреде­ления индивидуальной чувствительности конкретного возбудителя (обычно через 2-3 дня). Начинать лечение инфекции нужно как можно раньше (во-первых, в начале за­болевания микробов в организме меньше, во-вторых, препараты активнее действуют на растущих и размножающихся микробов).

• Фармакологический принцип.Учитывают особенности препарата — его фармакокинетику и фармакодинамику, распределение в организме, кратность введения, возможность сочетания препаратов и т. п. Дозы препаратов должны быть достаточными для того, чтобы обеспечить в биологических жидкостях и тка­нях микробостатические или микробоцидные концентрации. Необходимо представлять оп­тимальную продолжительность лечения, так как клиническое улучшение не является основанием для отмены препарата, потому что в организме могут сохраняться возбудители и может быть рецидив болезни. Учитывают также оптимальные пути введения препарата, так как многие антибиотики плохо всасываются из ЖКТ или не проникают через гематоэнцефалический барьер.

• Клинический принцип.При назначении пре­парата учитывают, насколько безопасным он бу­дет для данного пациента, что зависит от ин­дивидуальных особенностей состояния больного (тяжесть инфекции, иммунный статус, пол, на­личие беременности, возраст, состояние функции печени и почек, сопутствующие заболевания и т.п.) При тяжелых, угрожающих жизни инфек-циях особое значение имеет своевременная ан-тибиотикотерапия. Таким пациентам назначают комбинации из двух-трех препаратов, чтобы обес­печить максимально широкий спектр действия. При назначении комбинации из нескольких пре­паратов следует знать, насколько эффективным против возбудителя и безопасным для пациента будет сочетание данных препаратов, т. е. чтобы не было антагонизма лекарственных средств в отно­шении антибактериальной активности и не было суммирования их токсических эффектов.

• Эпидемиологический принцип.Выбор пре­парата, особенно для стационарного больно­го, должен учитывать состояние резистент­ности микробных штаммов, циркулирующих в данном отделении, стационаре и даже ре­гионе. Следует помнить, что антибиотикоре-зистентность может не только приобретаться, но и теряться, при этом восстанавливается природная чувствительность микроорганизма к препарату. Не изменяется только природная устойчивость.

• Фармацевтический принцип.Необходимо учитывать срок годности и соблюдать правила хранения препарата, так как при нарушении этих правил антибиотик может не только по­терять свою активность, но и стать токсич­ным за счет деградации. Немаловажна также и стоимость препарата

Как и всякие лекарственные средства, практически каждая группа антимикробных химиопрепаратов может оказывать побочное действие, причем и на макроорганизм, и на микробы, и на другие лекарственные средства.

Осложнения со стороны макроорганизма

Наиболее частыми осложнениями анти­микробной химиотерапии являются:

Токсическое действие препаратов. Как правило, развитие этого осложнения зависит от свойств самого препарата, его до­зы, способа введения, состояния больного и проявляется только при длительном и систе­матическом применении антимикробных химиотерапевтических препаратов, когда созда­ются условия для их накопления в организме. Особенно часто такие осложнения бывают, когда мишенью действия препарата являются процессы или структуры, близкие по составу или строению к аналогичным структурам кле­ток макроорганизма. Токсическому действию антимикробных препаратов особенно подвер­жены дети, беременные, а также пациенты с нарушением функций печени, почек.

Побочное токсическое влияние может прояв­ляться как нейротоксическое (например, гликопептиды и аминогликозиды оказывают ототоксическое действие, вплоть до полной потери слуха за счет воздействия на слуховой нерв); нефротоксическое (полиены, полипептиды, аминогликозиды, макролиды, гликопептиды, сульфаниламиды); общетоксическое (противо­грибковые препараты — полиены, имидазолы); угнетение кроветворения (тетрациклины, суль­фаниламиды, левомицетин/хлорамфеникол, который содержит нитробензен — супрессор функции костного мозга); тератогенное [ами­ногликозиды, тетрациклины нарушают развитие костей, хрящей у плода и детей, формирова­ние зубной эмали (коричневая окраска зубов), левомицетин/хлорамфеникол токсичен для но­ворожденных, у которых ферменты печени не полностью сформированы («синдром серого ребенка»), хинолоны — действуют на развива­ющуюся хрящевую и соединительную ткани].

Предупреждение осложнений состоит в от­казе от противопоказанных данному пациенту препаратов, контроле за состоянием функций печени, почек и т. п.

Дисбиоз (дисбактериоз). Антимикробные химиопрепараты, особен­но широкого спектра, могут воздействовать не только на возбудителей инфекций, но и на чувствительные микроорганизмы нормаль­ной микрофлоры. В результате формируется дисбиоз, поэтому нарушаются функции ЖКТ, возникает авитаминоз и может развиться вто­ричная инфекция (в том числе эндогенная, например кандидоз, псевдомембранозный ко­лит). Предупреждение последствий такого рода осложнений состоит в назначении, по возможности, препаратов узкого спектра действия, сочетании лечения основного заболевания с противогрибковой терапией (например, назначением нистатина), витаминотерапей, применением эубиотиков и т. п.

Отрицательное воздействие на иммунную систему.К этой группе осложнений отно­сят прежде всего аллергические реакции. Причинами развития гиперчувствительности может быть сам препарат, продукты его распа­да, а также комплекс препарата с сывороточ­ными белками. Возникновение такого рода осложнений зависит от свойств самого пре­парата, от способа и кратности его введения, индивидуальной чувствительности пациента к препарату. Аллергические реакции разви­ваются примерно в 10 % случаев и проявля­ются в виде сыпи, зуда, крапивницы, отека Квинке. Относительно редко встречается та­кая тяжелая форма проявления аллергии, как анафилактический шок. Такое осложнение чаще дают бета-лактамы (пенициллины), рифамицины. Сульфаниламиды могут вызвать гиперчувствительность замедленного типа. Предупреждение осложнений состоит в тща­тельном сборе аллергоанамнеза и назначении препаратов в соответствии с индивидуальной чувствительностью пациента. Кроме того, антибиотики обладают некоторым иммунодепрессивным действием и могут способство­вать развитию вторичного иммунодефицита и ослаблению напряженности иммунитета.

Эндотоксический шок (терапевтический).Это явление, которое возникает при лече­нии инфекций, вызванных грамотрицательными бактериями. Введение антибиотиков вызывает гибель и разрушение клеток и вы­свобождение больших количеств эндотокси­на. Это закономерное явление, которое со­провождается временным ухудшением кли­нического состояния больного.

Взаимодействие с другими препаратами.Антибиотики могут способствовать потен­цированию действия или инактивации других препаратов (например, эритромицин стиму­лирует выработку ферментов печени, которые начинают ускоренно метаболизировать ле­карственные средства разного назначения).

Побочное воздействие на микроорганизмы.

Применение антимикробных химиопрепа-ратов оказывает на микробы не только прямое угнетающее или губительное воздействие, но также может привести к формированию ати­пичных форм микробов (например, к обра­зованию L-форм бактерий или изменению других свойств микробов, что значительно затрудняет диагностику инфекционных забо­леваний) и персистирующих форм микробов. Широкое использование антимикробных ле­карственных средств ведет также к форми­рованию антибиотикозависимости (редко) и лекарственной устойчивости — антибиотикорезистентности (достаточно часто).

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник