Определение уксусной кислоты в моче

Встречается в воздухе силосных башен и ям.

Применяется как растворитель и реагент в химической, текстильной и пищевой промышленности; при производстве линолеума, ацетилцеллюлозы, алкилацетатов.

Получается при сухой перегонке дерева (древесный уксус, содержащий 5— 7% уксусной кислоты, а также метиловый спирт, фенолы, нафталин и др.); при уксуснокислом брожении спиртовых жидкостей; каталитическим окислением ацетальдегида, этилового спирта; гидратацией кетена (может содержаться примесь дикетена); взаимодействием метанола с СО в присутствии катализаторов.

Физические свойства. Жидкость. Т. плавл. 16,7°, т. кип. 118,1°, плотн. 1,04 (20°/4°). Смешивается с водой.

Токсическое действие. Обладает сильным раздражающим действием. К парам наблюдается привыкание — по-видимому, лишь кажущееся. Высокие концентрации уксусной кислоты повышают содержание лимонной кислоты в тканях (Линючева).

Животные. Концентрация 2,5 мг/л (экспозиция 60 мин) вызывает у морских свинок раздражение верхних дыхательных путей и конъюнктивы; при 14 мг/л и той же экспозиции 50% животных погибает. На вскрытии — очаговый перибронхит, участки эмфиземы, мутное набухание клеток внутренних органов, в особенности печени (Ghiringelli, Di Fabio). При непрерывном вдыхании в течение 95 суток 0,005 и 0,0002 мг/л у белых крыс повышена активность холинэстеразы, изменяется белковый спектр крови, нарушаются соотношение хронаксии мышц-антагонистов, синтетическая функция печени, снижается гемолитическая устойчивость эритроцитов, содержание витамина С в печени, почках и надпочечниках (Тахиров; Тахиров, Халидов).

Человек. 2—3 мг/л переносимы не более 3 мин. Порог ощущения запаха — 0,0006 мг/л; порог рефлекторного изменения световой чувствительности глаза — на уровне 0,00048 мг/л, образования электрокортикального условного рефлекса — 0,00029 мг/л (Тахиров). Хроническое воздействие паров вызывает у рабочих сначала острые, а затем хронические риниты — как гипертрофические, так и атрофические, фарингиты, ларингиты, а также конъюнктивиты и бронхиты (Куприн). Концентрации, при которых наблюдались эти явления, близки к 0,1 мг/л. Хронический трахеобронхит и конъюнктивит были выявлены в производстве ацетилцеллюлозы при средней концентрации уксусной кислоты в воздухе 0,125 мг/л, а иногда до 0,38—0,44 мг/л (Ghiringelli, Di Fabio).

Сильнее действует древесный уксус — вследствие примесей, особенно метилового спирта, а также уксусная кислота, полученная через кетен, вследствие примеси дикетена. При приеме внутрь вызывает ожоги (язвы) пищевода, желудка.

Действие на кожу выражается в появлении ожогов, вызываемых уже 30% растворами кислоты. Древесный уксус может вызывать экземы. Заживление идет быстро. Для глаз опасны растворы уксусной кислоты, начиная с 2% концентрации (Каплан).

Всасывание уксусной кислоты из желудка весьма активно. Частично она превращается в организме в муравьиную кислоту.

Неотложная терапия. Обильное промывание водой пораженных мест, в том числе глаз (эффективнее, чем промывание питьевой содой).

Предельно допустимая концентрация 5 мг/м 3 [51].

Индивидуальная защита. Меры предупреждения. Фильтрующий промышленный противогаз марок А и В. Защита глаз и кожи. Устранение непосредственного контакта с уксусная кислота

Определение в воздухе. Используют иодометрический метод. Чувствительность 3 мг/м 3 [40].

Определение в моче и крови. Уксусную кислоту из мочи выделяют и определяют в виде метилацетата. Определение в крови — см. у Петрунькиной, в крови и тканях — [4].

источник

В состав рабочего места по определению белка в моче входят следующие элементы:

Пробирки химические, агглютинационные.
Набор градуированных пипеток.
Пипетки с узким оттянутым концом.
Спиртовки или газовая горелка.
Черная бумага.
Ледяная уксусная кислота.
Сульфосалициловая кислота.
Концентрированная азотная кислота.
Дистиллированная вода.

Все методики, применяющиеся для качественного определения белка в моче, основаны на свертывании белка. Свертывание белка проявляется выраженным в разной степени помутнением (от опалесценции до большой мутности) или выпадением хлопьев.

Качественное определение белка в моче может быть проведено одним из следующих способов:

кипячением с 10% раствором уксусной кислоты;
реакцией с 20% раствором сульфосалициловой кислоты;
реакцией с 50% раствором азотной кислоты (проба Геллера);
реакцией с 1% раствором азотной кислоты в насыщенном растворе поваренной соли (видоизмененная проба Геллера по Ларионовой).

Перед качественным определением белка в моче проводят следующую подготовительную работу:
1. Мутную мочу фильтруют через бумажный фильтр. Если получить прозрачный фильтрат не удается, производят повторное фильтрование через тот же фильтр или же смешивают мочу с небольшим количеством инфузорной земли или талька, после чего ее фильтруют.
2. Если моча имеет щелочную реакцию, ее подкисляют 10% раствором уксусной кислоты до слабокислой реакции под контролем лакмусовой или универсальной индикаторной бумажки.
3. При малом содержании солей (светло-желтая или бледно-желтая моча с малым удельным весом) к каждой
пробе добавляют несколько капель насыщенного раствора поваренной соли, так как недостаток солей обусловливает свертывание белка.
4. Степень помутнения наблюдают с помощью черного фона. В качестве фона используют черный картон или черную бумагу, применяемую в фотографии. Учет реакции на черном фоне позволяет выявить малейшую степень помутнения.

В отдельном штативе располагают пронумерованные пробирки. В них производят одну из описанных ниже реакций.

1. Проба кипячением с 10% раствором уксусной кислоты. Для постановки этой пробы необходим 10% раствор уксусной кислоты, который готовят следующим образом: 10 мл ледяной уксусной кислоты помещают в цилиндр и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл.

Техника определения белка. В химическую пробирку помещают 10—12 мл отфильтрованной мочи слабокислой реакции. Затем верхнюю часть пробирки с мочой осторожно нагревают до кипения и добавляют в нее 8—10 капель 10% раствора уксусной кислоты. Пробирку с мочой рассматривают на черном фоне в проходящем свете. При наличии белка в моче появляется мутность разной степени (от опалесценции до большой мутности) или выпадают хлопья. Контролем служит нижняя часть пробирки, не подвергавшаяся нагреванию. Этой пробой обнаруживают количество белка, начиная с 0,015%о (%о — promille).

2. Реакция с 20% раствором сульфосалициловой кислоты. 20 % раствор сульфосалициловой кислоты готовят следующим образом: 20 г сульфосалициловой кислоты растворяют в 70-80 мл дистиллированной воды, переводят в цилиндр емкостью 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки. Приготовленный реактив хранят в посуде из темного стекла.

Техника определения белка. В две пробирки одинакового диаметра помещают по 2—3 мл отфильтрованной мочи слабокислой реакции, в одну из пробирок к моче прибавляют 3—4 капли 20% раствора сульфосалициловой кислоты, другая пробирка служит контролем. При наличии белка в пробирке с реактивом появляется мутность или выпадают хлопья свернувшегося белка. В контрольной пробирке жидкость остается прозрачной. Сульфосалициловая кислота наряду с белком сыворотки осаждает альбумозы (пептиды), представляющие собой продукт распада белка. С целью уточнения причины помутнения мочи пробирку с мочой подогревают. Мутность, причиной образования которой оказались сывороточные белки, усиливается, мутность же, обусловленная присутствием альбумоз, исчезает. Эта проба имеет ту же чувствительность, что и предыдущая.

3. Реакция с 50 % раствором азотной кислоты (проба Геллера). 50% раствор азотной кислоты готовят следующим образом: к 50 мл азотной кислоты удельного веса 1,2-1,4 приливают 50 мл дистиллированной воды (разведение 1:1).

Техника определения белка. В узкую небольшую пробирку (тина агглютинационной) наливают 1 мл 50% азотной кислоты. В пипетку с узким оттянутым концом набирают 1 мл отфильтрованной исследуемой мочи, наслаивают на реактив и пробирку переводят в вертикальное положение. При наличии белка на границе жидкостей появляется белое кольцо. Время появления кольца, его свойства зависят от количества белка: если белка мало, то кольцо появляется не сразу, поэтому за его появлением следят в течение 2,5-3 минут. Минимальное количество белка, определяемое этим методом, 0,033°/оо. При меньшем содержании белка в моче кольцо не образуется. Учет результатов реакции производят на черном фоне в проходящем свете.

4. Реакция с 1% раствором азотной кислоты на насыщенном растворе поваренной соли — видоизмененная проба Геллера (по Ларионовой). Для проведения пробы используют 1 % раствор азотной кислоты, приготовленный на насыщенном растворе поваренной соли (реактив Ларионовой). 35 г поваренной соли растворяют в 100 мл дистиллированной поды, раствор фильтруют, к 1 мл концентрированной азотной кислоты удельного веса 1,2-1,4 приливают 99 мл приготовленного насыщенного раствора поваренной соли.

Техника определения белка такая же, как и при реакции с 50% раствором азотной кислоты (проба Геллера), но вместо 1 мл 50% раствора азотной кислоты в пробирку наливают 1 мл реактива Ларионовой и на него наслаивают 1 мл мочи. Появление белого кольца на границе жидкостей указывает на наличие белка в исследуемой моче. Проба по Ларионовой так же чувствительна, как и проба Геллера.

5. Колориметрическая (сухая) проба качественного определения белка. Колориметрическая (сухая) проба качественного определения белка в моче основана на воздействии, которое оказывает белок на цвет индикатора в буферном растворе.

Техника определения белка. Кусочек индикаторной бумаги, предназначенный для определения белка погружают в мочу на короткое время. Пробу считают положительной, если бумажка окрашивается в сине-зеленый цвет.

Количественное определение белка в моче основано на том, что при наслаивании мочи, содержащей белок, на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой на границе двух жидкостей образуется белое кольцо, причем если четкое белое кольцо появляется к 3 минутам, то содержание белка равно 0,033%о или 33 мг в 1000 мл мочи. Появление кольца ранее 3 минут свидетельствует о большем содержании белка в моче.
При количественном определении белка в моче выполняют следующие правила:

Количественное определение белка производят только в тех порциях мочи, где он был обнаружен качественно.
Определение производят с тщательно отфильтрованной мочой.
Точно соблюдают технику наслаивания исследуемой мочи на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой в соотношении реактива с мочой (1:1).
Время появления кольца определяют по секундомеру: при окончательном расчете количества белка учитывают время наслаивания мочи на азотную кислоту, которое равно 15 секундам.
Разведение мочи производят исходя из свойства кольца. При этом каждое последующее разведение мочи готовят из предыдущего.
Определение колец производят на черном фоне.

Наиболее распространены два метода количественно¬го определения белка в моче: метод Робертса — Стольникова — Брандберга и метод С. Л. Эрлиха и А. Я. Альтгаузена.

Метод Робертса-Стольникова-Брандберга. По этому способу количество белка в моче определяют путем разведения ее до тех пор, пока при очередном наслаивании мочи на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой кольцо появится точно к 3 минутам. Расчет количества белка производят, умножая 0,033%о на степень разведения мочи. Полученный результат выражает количество белка в миллиграммах на 1000 мл мочи, т. е. в promille (%о).
Метод С. Л. Эрлиха и А. Я. Альтгаузена. В штатив помещают ряд агглютинационных пробирок, в которые предварительно наливают по 1 мл 50% раствора азотной кислоты или реактива Ларионовой. Исследуемую мочу берут отдельной чистой, сухой пипеткой с узким оттянутым концом и наслаивают на реактив, после чего включают секундомер. За временем появления кольца следят, располагая пробирку на черном фоне. При появлении кольца секундомер выключают.

При наслаивании мочи в зависимости от количества белка может появиться компактное, широкое или нитевидное кольцо. Компактное, широкое кольцо появляется тотчас же после наслаивания мочи на реактив. Нитевидное кольцо может появиться сразу, до истечения одной минуты, или в промежутке от одной до 4 минут.

При появлении нитевидного кольца в пределах от одной до 4 минут производить разведение мочи не нужно!
Для вычисления количества белка в этом случае достачно использовать предложенную авторами таблицу-план (табл. 1).

Пример 1. При наслаивании мочи на реактив нитевидное кольцо образовалось через 2 минуты. Если бы кольцо образовалось к 3 минутам, то количество белка было было бы равно 0,033%о.

В данном же случае кольцо образовалось раньше. Соответственная поправка, согласно таблице-плану, для времени в 2 минуты равна 1+1/8. Это значит, что белка в данной порции мочи будет в 1+1/8 раза больше, чем 0,033°/оо, т. е. 0,033%о X(1+1/8) = 0,037°/оо.

При появлении нитевидного кольца до 1 минуты, т. е. через 40-60 секунд, производят одно разведение мочи в 1,5 раза (2 части мочи + 1 часть воды), а затем вновь наслаивают разведенную мочу на реактив и регистрируют появление кольца. При расчете результатов учитывают, что моча была разведена в 1,5 раза.

Пример 2. После наслаивания разведенной в 1,5 раза мочи нитевидное кольцо появилось к 2 минутам. Если бы кольцо появилось к 3 минутам, то белка было бы 0,033%. Соответственная поправка согласно таблице-плану, для времени в 2 минуты равна 1+1/8. Белка в моче содержится 0,033%оX1,5X(1+1/8) = 0,056%о.

Если нитевидное кольцо появляется сразу, мочу разводят в 2 раза (1 часть мочи + 1 часть воды). Разведенную мочу вновь наслаивают на реактив и отмечают появление кольца по истечении 1 минуты.

Пример 3. При наслаивании разведенной в 2 раза мочи на реактив нитевидное кольцо появилось через 1 минуту 15 секунд. Тогда количество белка в исследуемой моче по аналогии с прежними расчетами будет равно
0,033%оХ2Х(1+3/8) = 0,091%.
В случае появления широкого кольца мочу разводят в 4 раза (1 часть мочи + 3 части воды).
При последующем наслаивании разведенной мочи нитевидное кольцо может образоваться как до, так и по истечении одной минуты. В таких случаях расчет количества белка производят по аналогии с предыдущими примерами, т. е. 0,033% о умножают на степень разведения и на соответственную поправку.

Пример 1. Кольцо после разведения мочи в 4 раза появилось сразу же. Мочу разводят в 2 раза. После наслаивания мочи, разведенной в 8 раз (4X2), нитевидное кольцо образовалось через 1,5 минуты. В таком случае количество белка равно 0,033%оХ8X1,25 = 0,33%о и т. д.
При появлении компактного кольца мочу разводят в 8 раз (1 часть мочи+ 7 частей воды). При последующем наслаивании разведенной мочи на реактив может образоваться либо компактное, либо широкое, либо нитевидное кольцо.

Пример 2. При наслаивании мочи на азотную кислоту тотчас же образовалось компактное кольцо. Мочу разводят в 8 раз (1 часть мочи + 7 частей воды) и вновь производят ее наслаивание. При этом опять получилось компактное кольцо. Тогда мочу разводят еще в 8 раз (для этого в цилиндр или в пробирку берут 1 часть разведенной мочи и прибавляют к ней 7 частей воды). После очередного наслаивания разведенной мочи нитевидное кольцо образовалось сразу. Мочу разводят в 2 раза (1 часть мочи + 1 часть воды). После очередного наслаивания разведенной мочи нитевидное кольцо образовалось к 2 минутам. Расчет количества белка данной порции мочи производят так: 0,033,%оX8X8X2X(1+1/8) = 4,8%о.

Помимо таблицы-плана, имеется таблица с рассчитанными цифрами белка (табл. 2). Если моча не разведена, то количество белка отыскивают в графе «Цельная неразведенная моча». При разведении мочи в целое число раз (8,4,2) используют табл. 1. При разведении мочи в 1,5 раза используют табл. 2.

В соответствующих графах таблицы наводят время появления кольца и степень разведения мочи.
Цифра, находящаяся в точке пересечения горизонтальной и вертикальной линий, проведенных от этих двух показателей, указывает на количество белка в исследуемой моче (%о).

Возможно, что при положительной качественной пробе на белок кольцо при наслаивании на 50% раствор азотной кислоты не образуется. Это значит, что в моче белка меньше 0,033%о. В таких случаях количество белка в бланке анализа обозначают термином «следы».

Если белок определен количественно, в бланке анализа мочи отмечают содержание белка в promille, например «белок — 0,66%о».

Помимо количественного определения белка в отдельной порции мочи, рассчитывают суточное его количество в граммах. С этой целью собирают суточную мочу, измеряют ее количество и определяют содержание белка в promille. Затем производят расчет. Например, суточное количество мочи равно 1800 мл, белок — 7°/оо. Значит, белка в суточном количестве мочи содержится: 1,8X7 = 12,6 г.

источник

Западно-Казахстанский Высший медицинский колледж. Сайт преподавателя МКЛИ Байбулатовой Светланы Андреевны

Химическое исследование мочи включает в себя определение белка, глюкозы, ацетона и ацетоуксусной кислоты, желчных пигментов и уробилиноидов и некоторых других ингредиентов.

Важным условием химического исследования мочи, особенно определения белка, является ее прозрачность.

Прежде чем приступить к исследованию, необходимо провести центрифугирование мочи: 10,0 мл. мочи вносят в центрифужную пробирку. Пробирку ставят в центрифугу. Включают прибор на 10 минут соблюдая все необходимые правила безопасной работы с центрифугой. Необходимо помнить, что центрифуга включается тогда, когда в приборе находится только чётное количество центрифужных пробирок.

В моче здорового человека белок не выявляется, поскольку те методы, которые используются обычно в клинике (проба с сульфосалициловой кислотой и биуретовая реакция) не позволяют обнаружить небольшие количества низкомолекулярных сывороточных протеинов (около 10–50 мг в сутки), которые и в норме проникают через неповрежденный почечный барьер.

Для обнаружения белка в моче (протеинурии) используют качественные и количественные методы, большинство из которых основаны на его свертывании или осаждении специальными реактивами.

Проба с сульфосалициловой кислотой.

В 2 пробирки наливают по 3–4 мл профильтрованной мочи.

В опытную пробирку добавляют 6–8 капель 20% раствора сульфосалициловой кислоты.

На темном фоне в проходящем свете сравнивают обе пробирки.

При наличии белка в зависимости от его количества образуется помутнение или выпадают хлопья свернувшегося белка (рис. 1, а).

Результаты обозначают следующим образом: реакция слабоположительная (+), положительная (++), резко положительная (+++).

Проба с азотной кислотой (кольцевая проба Геллера).

В пробирку наливают 1–2 мл 30% азотной кислоты или реактива Ларионовой (1% раствор азотной кислоты в насыщенном растворе натрия хлорида) и осторожно по стенке наслаивают сверху такое же количество мочи.

При наличии белка через 2–3 мин (или раньше) на границе двух сред (кислоты и мочи) образуется тонкое белое кольцо свернувшегося белка (рис. 1, б).

Проба становится положительной даже при минимальной концентрации белка в моче — 0,033 г/л (0,033 о /_оо).

Следует, правда, помнить, что беловатое или красновато-фиолетовое кольцо при проведении этой пробы, располагающееся несколько выше границы между двумя жидкостями, может образовываться при наличии в моче большого количества уратов.

Однако уратное кольцо в отличие от белкового при легком нагревании растворяется.

Схема качественного определения белка в моче с помощью проб с сульфасалициловой кислотой (а) и азотной кислотой (б).

На рис. 1, б стрелкой показано белое кольцо преципитации белка

Метод разведения Брандберга-Робертса-Стольникова

Метод основан на количественной оценке результатов пробы с азотной кислотой (кольцевой пробы Геллера — см. выше).

Ход определения белка такой же, как и при этой качественной реакции.

Считается, что появление тонкого белого кольца на границе азотной кислоты и мочи (рис. 1, б) на 2–3-й минуте указывает на наличие белка в моче в концентрации 0,033 г/л.

Если кольцо появляется раньше 2 мин, мочу разводят в 2 раза и снова повторяют исследование.

Если и на этот раз кольцо появляется раньше 2 мин, мочу снова разводят в 2, 4, 8 и т. д. раз, пока тонкое белое кольцо не появится на 2–3-й минуте.

Искомую концентрацию белка в моче вычисяют, умножая 0,033 г/л на степень разведения.

Метод основан на возникновении помутнения мочи при коагуляции белка сульфосалициловой кислотой.

Интенсивность помутнения пропорциональна концентрации белка.

В градуированную пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, добавляют до 5 мл 3% раствор сульфосалициловой кислоты и перемешивают.

Через 5 минут измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 590–650 нм против контроля в кювете с толщиной слоя 0,5 см.

Метод основан на свойстве белка давать с сернокислой медью и едкой щелочью так называемый биуретовый комплекс фиолетового цвета.

Интенсивность окраски, количественно определяемая на фотоэлектроколориметре, пропорциональна концентрации белка.

Определение суточной протеинурии.

При заболеваниях почек, сопровождающихся протеинурией, уровень выделения белка с мочой в течение суток колеблется в широких пределах.

Поэтому в клинической практике выраженность протеинурии принято оценивать по суточной потере белка с мочой (суточной протеинурии).

В 8 ч утра пациент мочится в унитаз, после чего всю выделенную в течение суток (до 8 ч следующего дня) мочу собирают в отдельную емкость объемом 3 литра.

Затем измеряют общее количество мочи, тщательно размешивают ее и наливают в отдельную банку емкостью 150–200 мл.

В этой порции мочи определяют концентрацию белка по одному из методов, описанных выше.

Суточную протеинурию (в граммах) рассчитывают по формуле:

где Р_с— суточная протеинурия (в граммах); Р — концентрация белка в суточной моче (г/л); V — суточный диурез.

У здорового человека в разовой порции мочи при использовании перечисленных выше методов белок не определяется.

Выделение белка с мочой (протеинурия) имеет важное диагностическое значение.

Даже следы белка (0,033 г/л), обнаруженные в разовой порции мочи, требуют уточнения причин протеинурии.

1. преренальную протеинурию, обусловленную усилением распада белка тканей (опухоли, ожоги, массивный гемолиз эритроцитов и т. п.);

2. ренальную протеинурию, связанную с патологией почек;

3. постренальную протеинурию, вызванную патологией мочевыводящих путей, и чаще всего связанную с воспалительной экссудацией (заболевания мочевого пузыря, мочеиспускательного канала, половых органов).

В практическом отношении важно отличать ренальную и постренальную формы протеинурии.

Постренальная форма протеинурии сопровождается появлением в моче большого количества лейкоцитов или эритроцитов.

При ренальной форме протеинурии в моче обычно присутствуют цилиндры.

Почечная (ренальная) протеинурия обусловлена повышением проницаемости клубочкового фильтра и уменьшением реабсорбции профильтровавшегося белка в почечных канальцах.

Различают функциональную (физиологическую, доброкачественную) и патологическую (органическую) почечную протеинурию.

Функциональная почечная протеинурия

Функциональная почечная протеинурия обусловлена временным преходящим увеличением фильтрации белков сыворотки крови в ответ на сильные внешние раздражения (необычные статические и динамические нагрузки, повышенная мышечная работа, лихорадка, интоксикация) и не связана с поражением почек и мочевыводящих путей.

Функциональная протеинурия вызвана замедлением почечного кровообращения или преходящим нарушением проницаемости клубочковых капилляров в результате вторичного токсико-инфекционного поражения (О. Шюк).

Следует помнить о нескольких наиболее распространенных вариантах функциональной почечной протеинурии:

1. Ортостатическая (юношеская) протеинурия выявляется у здоровых молодых лиц астенического телосложения с лордозом поясничного отдела позвоночника.

Она появляется при длительном нахождении в вертикальном положении и исчезает в горизонтальном положении.

2. Рабочая (маршевая) протеинурия, появляющаяся после тяжелой физической нагрузки.

3. Лихорадочная протеинурия, возникающая при различных заболеваниях, сопровождающихся повышением температуры тела.

Такая протеинурия исчезает после нормализации температуры.

4. Алиментарная протеинурия (после обильной белковой пищи).

5. Пальпаторная протеинурия (после продолжительной пальпации почек).

6. Эмоциональная протеинурия — при значительном психоэмоциональном напряжении.

Функциональная почечная протеинурия, как правило, не превышает 1,0 г/л и исчезает после устранения причин, ее вызвавших.

Во всех случаях обнаружения белка в моче необходимо тщательное обследование больного для исключения органических заболеваний почек, сопровождающихся патологической протеинурией.

Патологическая почечная протеинурия является одним из наиболее важных признаков органического поражения клубочкового аппарата и почечных канальцев.

Наиболее частыми причинами патологической почечной протеинурии являются:

1. острый и хронический гломерулонефрит;

2. острый и хронический пиелонефрит;

4. застойная недостаточность крвообращения;

7. гипертоническая болезнь;

8. системные заболевания соединительной ткани с поражением почек;

9. геморрагический васкулит;

11. анафилактический шок и другие причины.

Особенно значительной протеинурия бывает при нефротическом синдроме.

При нефротическом синдроме концентрация белка в моче достигает 3–10 г/л.

У больных с заболеваниями почек протеинурия усиливается при:

1) выполнении физической нагрузки;

2) длительном нахождении в вертикальном положении;

Селективность протеинурии — это способность клубочкового фильтра пропускать молекулы белка плазмы в зависимости от его молекулярной массы.

При умеренном повреждении фильтрующей мембраны в моче преобладают низкомолекулярные белки (альбумины), тогда как белки с большой молекулярной массой (глобулины и др.) составляют небольшое количество. В этих случаях говорят о высокой селективности (избирательности) протеинурии.

Наоборот, при тяжелых поражениях почек селективность протеинурии снижается, и в моче появляются крупномолекулярные белки (например g-глобулины. В этих случаях качественный состав белков мочи приближается к белковому составу плазмы.

Таким образом, низкая селективность протеинурии свидетельствует о более тяжелом поражении клубочковых капилляров.

В моче здорового человека глюкоза отсутствует, за исключением тех редких случаев, когда преходящая, кратковременная и незначительная глюкозурия вызвана избыточным употреблением в пищу простых углеводов или внутривенным введением концентрированного раствора глюкозы.

Во всех остальных случаях глюкозурию следует расценивать как явление патологическое.

Патологическая глюкозурия может быть обусловлена:

1. превышением определенного критического уровня глюкозы в крови (примерно 8,8–9,9 ммоль/л) в связи с ограниченной способностью канальцев почек реабсорбировать глюкозу;

2. увеличением фильтрации глюкозы в клубочках почек вследствие их повреждения;

3. снижением реабсорбции глюкозы в проксимальных отделах почечных канальцев за счет первичного или вторичного их повреждения.

Глюкозурия может выявляться как при повышенном, так и при нормальном уровне глюкозы в крови.

Существуют качественные и количественные способы выявления (определения) глюкозы в моче.

Проба Гайнеса основана на способности глюкозы при нагревании в щелочной среде восстанавливать гидрат окиси меди (синего цвета) в гидрат закиси меди (желтого цвета) и закись меди (красного цвета).

Для проведения реакции в пробирку наливают 4 мл реактива Гайнеса (смесь растворов сернокислой меди, едкого натра и глицерина), добавляют к нему 8–12 капель мочи и нагревают верхнюю часть пробирки на пламени горелки до кипения (нижняя часть пробирки служит своеобразным контролем) (рис. 2).

При наличии в моче глюкозы в верхней части пробирки появляется желтая или красная окраска жидкости, а в нижней части — осадок коричнево-зеленоватого цвета.

Рисунок 2. Схема качественного определения глюкозы в моче (проба Гайнеса)

Определение глюкозы с помощью индикаторных полосок.

Метод основан на окислении глюкозы специфическим ферментом глюкозооксидазой с образованием перекиси водорода, которая в присутствии пероксидазы разлагается и окисляет специальный краситель.

Бумажные полоски, пропитанные глюкозооксидазой, пероксидазой и красителем опускают в пробирку с мочой, сразу вынимают и оставляют на 2 минуты на пластмассовой пластинке.

При наличии в моче глюкозы полоски окрашиваются в синий цвет, интенсивность которого соответствует концентрации глюкозы.

Сравнивая окраску с прилагаемой к набору стандартной цветовой шкалой можно ориентировочно определить содержание глюкозы в моче.

Глюкозооксидазный метод, принцип которого описан выше, дает более точные результаты определения концентрации глюкозы в моче.

В результате реакции образуется окрашенное вещество, интенсивность окраски колориметрируют и по калибровочной кривой, построенной на основании определений стандартных растворов глюкозы, рассчитывают ее содержание в моче.

Кетоновые тела (ацетон, ацетоуксусная и b-оксимасляная кислоты) являются промежуточными продуктами углеводного и жирового обмена. В норме, образуясь в небольшом количестве из ацетил-КоА, они почти полностью утилизируются в цикле трикарбоновых кислот (цикле Кребса).

При сахарном диабете и голодании усиливается утилизация жиров с образованием большого количества ацетил-КоА, который вследствие нарушений углеводного обмена не утилизируется и не используется в цикле трикарбоновых кислот.

В результате увеличивается содержание кетоновых тел, которые выделяются с мочой.

Кетоновые тела обладают выраженным токсическим действием на ЦНС .

Поэтому определение кетоновых тел в моче имеет важное диагностическое значение.

Проба основана на свойстве натрия нитропруссида реагировать в щелочной среде с кетоновыми телами с образованием комплексных соединений, окрашенных в красно-фиолетовый цвет.

В пробирку с 3–5 мл мочи добавляют 5–10 капель свежеприготовленного 10% раствора натрия нитропруссида и 0,5 мл концентрированной уксусной кислоты и смешивают их.

После этого осторожно по стенке пробирки наслаивают 2–3 мл 25% раствора аммиака.

Если в течение 3 минут на границе двух жидкостей получается красно-фиолетовое кольцо, пробу считают положительной (рис. 3).

Рисунок 3. Схема качественного определения кетоновых тел в моче (проба Ланге). Красной стрелкой показано красно-фиолетовое кольцо, появляющееся на границе мочи и раствора аммиака

Проба основана на том же принципе образования окрашенных соединений, что и проба Ланге.

В пробирке смешивают 200 мг сухого аммония сульфата, 5 капель мочи и 2 капли раствора натрия нитропруссида.

На эту смесь осторожно наслаивают 10–15 капель водного раствора аммиака.

Фиолетово-красное кольцо на границе двух сред свидетельствует о наличии в моче кетоновых тел.

Причем интенсивность окраски кольца пропорциональна концентрации кетоновых тел в моче.

В клинической практике получили распространение также различные модификации экспресс-анализа кетоновых тел в моче, например с помощью таблеток или полосок бумаги, содержащих все необходимые для реакции компоненты.

На таблетку наносят 2 капли мочи и через определенное время, указанное в инструкции, сравнивают интенсивность фиолетового окрашивания с цветной шкалой, соответствующей различной концентрации кетоновых тел в моче.

В норме методами, описанными выше, кетоновые тела не обнаруживаются.

Наиболее частыми причинами кетонурии являются:

1. диабетический кетоацидоз;

2. длительное голодание (так называемая кетонемическая гипогликемия);

4. несбалансированное безуглеводное питание (строгое ограничение углеводов при нормальном потреблении жиров);

5. состояния, связанные с повышенным метаболизмом (высокая лихорадка, тяжелый тиреотоксикоз и др.).

У здорового человека методами, используемыми в клинике, билирубин в моче не обнаруживается.

Появление билирубина в моче (билирубинурия) — всегда явление патологическое.

Оно связано с проникновением через почечный барьер связанного (прямого) билирубина (билирубин-глюкуронида).

Несвязанный (непрямой) билирубин не проходит через неповрежденный почечный фильтр, так как адсорбирован белком (альбумином).

В клинической практике широко применяются качественные пробы на билирубин.

Большинство из них основаны на его окислении йодом или азотной кислотой с образованием биливердина, окрашенного в зеленый цвет.

Йодная проба (проба Розина).

В качестве окислителя используется раствор Люголя или 1% спиртовой раствор йода. В пробирку с 3–4 мл мочи осторожно по стенке наслаивают 1–2 мл 1% спиртового раствора йода или раствора Люголя.

При наличии билирубина в моче на границе между двумя жидкостями образуется зеленое кольцо.

Билирубинурия выявляется при двух видах желтух (паренхиматозной и обтурационной).

Определение уробилина в моче

Уробилиновые тела (уробилиноиды) являются промежуточными продуктами пигментного обмена.

Они представлены, главным образом, уробилиногеном (мезобилиногеном) и стеркобилиногеном.

В норме уробилиноиды в моче представлены следами стеркобилиногена (около 4 -6 мг/с) и не обнаруживаются обычными качественными пробами.

Проба с сульфатом меди (проба Богомолова)

Проба основана на взаимодействии уробилина с сульфатом меди, что приводит к образованию соединений, окрашенных в красновато-розовый цвет.

К 10–15 мл мочи приливают 2–3 мл насыщенного раствора сульфата меди.

При помутнении раствора в него добавляют несколько капель концентрированной соляной кислоты, через 5 мин добавляют 2–3 мл хлороформа, закрывают пробирку и встряхивают ее.

Если хлороформ окрашивается в розовый цвет, то концентрация уробилина в моче превышает норму.

Чувствительная проба для выявления уробилиноидов.

При взаимодействии уробилина и соляной кислоты образуется соединение, окрашенное в красновато-розовый цвет.

К 10 мл мочи добавляют 3–4 капли концентрированной серной кислоты, смешивают, приливают 2–3 мл эфира и, плотно закрыв пробирку пробкой, осторожно смешивают, не взбалтывая.

В другую пробирку наливают 2 мл концентрированной соляной кислоты.

Пипеткой отсасывают из первой пробирки эфирную вытяжку и наслаивают ее на соляную кислоту.

На границе двух жидкостей при наличии уробилина образуется розовое кольцо, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации уробилина.

В норме описанными выше способами уробилин в моче не определяется, хотя иногда при проведении достаточно чувствительной пробы Флоренса на границе между двумя жидкостями можно заметить легкое розовое окрашивание.

Выделение уробилиноидов с мочой обнаруживают при следующих патологических заболеваниях и синдромах:

1. при паренхиматозной желтухе (преимущественно за счет мезобилиногена, не разрушающегося в печени);

2. при гемолитической желтухе (преимущественно за счет стеркобилиногена, в существенно большем количестве образующегося при усиленном распаде эритроцитов);

3. при заболеваниях кишечника, сопровождающихся усиленной реабсорбцией стеркобилиногена в кишечнике (энтероколиты, запоры, кишечная непроходимость).

источник

Цель занятия. Освоить методы определения реакции мочи, научиться исследовать мочу на белок, альбумозы, сахар, кетоновые тела, кровь, кровяные пигменты, миоглобин, индикан, желчные пигменты и желчные кислоты.

Объекты исследования и оборудование. Пробы мочи, дающие положительные и отрицательные реакции на белок, альбумозы, сахар, кетоновые тела и т.п.

Индикаторная бумага, pH-метры, фотоэлектроколориметр, реактивы для определения белка, альбумоз, сахара, кетоновых тел, кровяных пигментов, индикана, желчных пигментов и кислот.

Химическое исследование мочи включает установление ее pH, пробы на белок, альбумозы, сахар, кетоновые тела, кровь и кровяные пигменты, миоглобин, индикан, желчные пигменты и желчные кислоты.

Определение pH. Реакцию мочи определяют с помощью рН-мет- ра или индикаторной бумаги («Рифан», «Фан» универсальная), а также полифункциональных полосок-индикаторов, которые позволяют устанавливать также и другие характеристики мочи (наличие белка, глюкозы, кетоновых тел, уробелина, билирубина, аскорбиновой кислоты, следов крови и т.п.).

В норме pH мочи зависит от состава кормов. У травоядных животных реакция щелочная или нейтральная, у плотоядных умеренно кислая. Резко кислую реакцию наблюдают при заболеваниях, сопровождающихся лихорадкой, а также при голодании, почечной недостаточности; резко щелочную — при циститах, рассасывании экссудатов и транссудатов, после рвоты.

Определение белка. Белок в моче выявляют качественными и количественными пробами.

Качественная проба с сульфосалициловой кислотой. Это одна из самых чувствительных проб. В пробирку вносят 2—3 мл мочи с кислой реакцией, затем 5—6 капель 20%-го раствора сульфосалициловой кислоты. При наличии белка в моче в содержимом пробирки появляется помутнение, не исчезающее при подогревании (при наличии альбумоз помутнение исчезает при подогревании).

Качественная проба с азотной кислотой. В пробирку с 1—2 мл 50%-го раствора азотной кислоты осторожно приливают по стенке мочу так, чтобы эти две жидкости не смешивались. В случае присутствия белка в моче на границе между жидкостями появляется белое кольцо (диск), представляющее собой слой белка, свернувшегося под действием азотной кислоты. Кольцо может появиться также при реакции кислоты с другими составными частями мочи: например, моча, богатая уратами, также дает кольцо, состоящее из мочевой кислоты и уратов, но оно появляется не на границе азотной кислоты и мочи, а выше. При легком подогревании уратное кольцо исчезает. Кроме того, кольцо образуется в результате осаждения муцина, но значительно выше границы между мочой и реактивом, и оно не так резко выражено.

Количественная проба Робертса — Стольникова. В пробирку вносят 2 мл 50%-го раствора азотной кислоты и осторожно наслаивают такое же количество исследуемой мочи. Появление серого кольца на границе между кислотой и мочой в течение первых 2 мин указывает, что белка в пробе содержится более 0,033 г/л. В этом случае мочу разводят дистиллированной водой. Количество белка вычисляют, умножая 0,033 на степень разведения мочи. Содержание белка в моче при ее различных разведениях проще вычислять с помощью специальной таблицы (табл. 5.1).

Определение содержания белка в моче, разведенной в различных соотношениях

Моча, разведенная 1: 10 (3 мл мочи + 27 мл дистиллированной воды), мл

Количество добавляемой дистиллированной воды, мл

Количество белка в моче, г/л

Количественная проба с сульфосалициловой кислотой. В пробирку вносят 1,25 мл прозрачной мочи и добавляют 5 мл 3%-го раствора сульфосалициловой кислоты. Через 5 мин определяют оптическую плотность пробы в кюветах с рабочей гранью шириной 5 мм при светофильтре с длиной волны 650—590 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля, который готовят следующим образом.

В центрифужную пробирку вносят 1,25 мл исследуемой прозрачной мочи и добавляют 5 мл 0,9%-го раствора хлорида натрия. Оптическую плотность контрольной пробы измеряют при тех же условиях, что и плотность опытной. Из оптической плотности опытной пробы вычитают оптическую плотность контроля. Показатель рассчитывают по калибровочному графику, который строят на основании разведения стандартного альбумина 0,9%-м раствором хлорида натрия с концентрацией 5, 10, 50 и 100 мг в 100 мл раствора. Из каждого стандартного разведения берут 1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы.

Появление белка в моче называется протеинурией. Последняя по своему происхождению может быть внепочечной (неренальной) и почечной (ренальной).

При внепочечных протеинуриях белок к моче примешивается в мочевых путях, что чаще бывает при циститах, уретритах, пиелонефритах, воспалении половых органов.

При почечных протеинуриях белок в мочу попадает непосредственно из почек. Почечные протеинурии бывают функционального и органического происхождения. Функциональные развиваются вследствие нарушения проницаемости капилляров почек. Их отмечают у коров в день родов, у новорожденных жеребят в течение первых 3 сут жизни. Органические протеинурии — это результат поражения паренхимы почек и увеличения проницаемости капилляров клубочков. Почечную протеинурию наблюдают при гломерулонефритах, нефрозах, застойных явлениях, интоксикациях, часто при инфекционных заболеваниях. Почечная и внепочечная протеинурии нередко комбинируются.

Определение альбумоз. Альбумозы в моче выявляют с помощью биуретовой реакции и пробой с сульфосалициловой кислотой.

Биуретовая реакция. К 3 мл подкисленной мочи добавляют около 1 мл насыщенного раствора хлорида натрия, кипятят, а затем горячую пробу фильтруют. К фильтрату добавляют 1 /₂ объема концентрированного раствора гидроксида натрия и несколько капель сульфата меди. При положительной реакции появляется красно-фиолетовое окрашивание.

Проба с сульфосалициловой кислотой. К 2—3 мл исследуемой мочи прибавляют 5—6 капель 20%-го раствора сульфосалициловой кислоты. Наличие в моче альбумоз подтверждается появившимся помутнением, которое исчезает при подогревании пробирки.

Альбумозы в моче обнаруживают при гнойных, некротических процессах, в послеродовом периоде, при заболеваниях, сопровождающихся усиленным клеточным распадом.

Определение сахара. На сахар нужно исследовать свежую мочу. При ее хранении в теплом месте (не в холодильнике) глюкоза разлагается под действием ферментов, бактерий, грибов.

Проба Бенедикта. Реактив Бенедикта готовят следующим образом. В мерную колбу на 1000 мл наливают 700 мл дистиллированной воды, добавляют 173 г цитрата натрия и 100 г безводного (или 200 г кристаллического) карбоната натрия. Смесь нагревают до растворения всех ее компонентов. Отдельно растворяют 17,3 г сульфата меди в 100 мл дистиллированной воды. Оба раствора смешивают в мерной колбе и после остывания их общий объем доводят дистиллированной водой до 1000 мл.

В пробирку вносят 5 мл реактива и прибавляют 8—10 капель мочи. Пробу нагревают 2 мин над пламенем спиртовки или 5 мин на кипящей водяной бане. Дают остыть в течение 5—7 мин. При окрашивании содержимого пробирки в синий цвет пробу считают отрицательной. При наличии сахара в моче (более 0,5 г в 100 мл) отмечают зеленое, желтое или красное окрашивание жидкости и осадок на дне пробирки. Причем при содержании в 100 мл мочи от 0,05 до 0,5 г глюкозы цвет пробы зеленый, от 0,5 до 1 г — желто-зеленый, от 1 до 2 г — желтый и больше 2 г — красный.

Проба Ниляндера. Реактив Ниляндера (нитрат висмута —2 г, сегнетовая соль — 4 г, 10%-й раствор гидроксида натрия — 100 мл) — бесцветный раствор, хорошо сохраняющийся в склянке из темного стекла. При продолжительном хранении реактива его качество следует проверять перед постановкой опыта. Для этой цели в пробирку наливают реактив Ниляндера, разбавленный в 10 раз водой, и нагревают. Если реактив не испорчен, то при кипении жидкость не должна темнеть.

Проба заключается в следующем: к 3—4 мл реактива Ниляндера добавляют около 2 мл мочи и нагревают смесь в течение 3—4 мин над пламенем спиртовки. При положительной реакции смесь мутнеет и приобретает окраску от коричневой до черной. Чувствительность пробы довольно высокая, она выявляет содержание 0,1 г сахара в 100 мл мочи. Однако при наличии в моче значительного количества мочевой и салициловой кислот, а также гемоглобина проба дает ложноположительную реакцию.

Экспресс-метод. Для экспресс-определения сахара в моче используют специальную индикаторную бумагу «Глюкотест» или по- лифункциональные диагностические полоски. Определить содержание сахара в моче можно с помощью орто-толуидинового метода (см. исследование крови).

В норме моча содержит незначительное количество глюкозы, которое не удается обнаружить обычными качественными реакциями. Если способность почечных канальцев реабсорбировать глюкозу нарушается, то в моче появляется глюкоза — развивается глюкозурия. Последняя может быть физиологической и патологической. Физиологическая глюкозурия возникает при даче животным кормов, богатых углеводами, иногда в результате испуга, а также при беременности. Патологическую глюкозурию наблюдают при сахарном диабете, отравлениях соединениями тяжелых металлов, хлоралгидратом, скипидаром и другими токсичными веществами, при дистрофии печени, воспалительных процессах в головном и спинном мозге.

Определение кетоновых тел. Их обнаруживают с помощью пробы Лестраде. Готовят реактив следующего состава: нитропруссид натрия — 1 г, сульфат аммония — 20 г, карбонат натрия (безводный) — 20 г. Навески тщательно растирают в фарфоровой ступке, смешивают и хранят в хорошо закупоренной стеклянной банке.

На белую кафельную плитку насыпают небольшое количество сухого порошка, который увлажняют двумя-тремя каплями исследуемой мочи. При наличии кетоновых тел в моче реактив приобретает цвет от розового до темно-фиолетового. Окраска может появиться через 2—3 мин.

В норме моча содержит очень мало кетоновых тел, и они не улавливаются пробой Лестраде. Положительная реакция на кетоновые тела в моче — кетонурия — встречается чаще всего при кетозе молочных коров, кетонурии суягных овец, листериозе, продолжительных желудочно-кишечных расстройствах.

Определение крови и кровяных пигментов. Кровь в свежей моче можно легко обнаружить под микроскопом. Кровяные пигменты (гемоглобин и его дериваты — метгемоглобин, сульфгемоглобин, гемосидерин), а также миоглобин выявляют с помощью специальных проб.

Бензидиновая проба. К 2 мл 3%-го раствора пероксида водорода добавляют 10—15 капель свежеприготовленного насыщенного раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте, размешивают и затем по каплям вносят исследуемую мочу. Окрашивание смеси вначале в зеленый, а затем в синий цвет указывает на наличие в моче кровяных пигментов. Моча здоровых животных дает отрицательную реакцию на кровяные пигменты.

Гематурию — появление крови в моче — наблюдают при нефритах, нефрозонефритах, инфарктах почек, мочекаменной болезни, цистите, С-гиповитаминозе, распаде опухолей в мочевой системе. Гемоглобинурию — появление гемоглобина в моче — отмечают при гемоглобинемиях, которые чаще всего развиваются как следствие кровепаразитарных болезней, острых отравлений, ожогов, тяжелых инфекционных заболеваний.

Проба с сульфатом аммония. В 5 мл исследуемой мочи вносят 2,8 г кристаллического сульфата аммония, после чего смесь фильтруют. Красно-коричневый цвет фильтрата свидетельствует о наличии мио- глобина, отсутствие окраски — гемоглобина.

Моча здоровых животных не содержит миоглобина. Его появление в моче — миоглобинурию — наблюдают при механических повреждениях мышц, паралитической миоглобинурии лошадей.

Определение индикана. В моче здоровых животных индикан содержится в незначительном количестве. Повышенное выделение индикана с мочой — индиканурию — наблюдают при интенсивном гниении белковых веществ в кишечнике (непроходимость кишечника, копростазы, перитонит), а также при усиленном распаде белков в организме (абсцессы, опухоли и др.). Индикан в моче выявляют с помощью специальных проб.

Проба Обермайера. В пробирку вносят 6 мл мочи и 6 мл раствора хлорида железа III [0,2-0,4 г хлорида железа 111 растворяют в 100 мл концентрированной хлороводородной (соляная) кислоты]. Через 5 мин добавляют 1—2 мл хлороформа, после чего содержимое пробирки встряхивают. При наличии индикана хлороформ в нижней части пробирки окрашивается в синий цвет. Интенсивность окраски зависит от количества индикана.

Проба Яффе. В пробирку вносят сначала 2—3 мл профильтрованной мочи, затем равный объем концентрированной соляной кислоты, 2—3 мл хлороформа и 1—2 капли 2%-го раствора перманганата калия. Содержимое пробирки перемешивают. Реакцию оценивают после оседания хлороформа. При наличии индикана хлороформ окрашивается в голубой или розовый цвет.

Определение желчных пигментов и желчных кислот. Из желчных пигментов в моче могут присутствовать билирубин и уробилиноге- новые (уробилиновые) тела, которые обнаруживают соответствующими пробами или с помощью диагностических полосок.

Проба на билирубин (по Розину). В пробирку вносят 3—4 мл исследуемой мочи и наслаивают водный раствор йода (1 г кристаллического йода, 2 г йодида калия и 30 мл дистиллированной воды) или 1%-й спиртовой раствор йода. При положительной реакции на границе между слоями жидкостей появляется зеленое кольцо.

В норме моча содержит билирубин в малых количествах, не выявляемых существующими реакциями. Билирубин в моче — би- лирубинурию — обнаруживают при механической и паренхиматозной желтухе.

Проба на уробилиногеновые (уробилиновые) тела (по Богомолову). В химический стакан вносят 10-15 мл мочи и 2—3 мл насыщенного раствора сульфата меди. В случае помутнения мочи в нее добавляют несколько капель концентрированной соляной кислоты до просветления раствора. Через 5 мин в стакан вносят 2—3 мл хлороформа и содержимое взбалтывают. При наличии уробилиногеновых тел слой хлороформа приобретает цвет от розово-красного до медно- красного.

С мочой здоровых животных выводится незначительное количество уробилиногеновых тел, которые при хранении мочи переходят в уробилиновые тела. Повышенное содержание уробилиногеновых тел — уробилиногенурию (уробилинурию) — наблюдают при гемолизе эритроцитов в кровяном русле, например при кровепаразитарных болезнях, отравлениях гемолитическими ядами, болезнях печени и кишечника. Полное отсутствие уробилиногеновых тел указывает на механическую желтуху.

Проба на желчные кислоты с серным цветом. В колбу вносят 40— 60 мл мочи и выдерживают при комнатной температуре в течение 20—30 мин, после чего на поверхность содержимого колбы насыпают порошок серного цвета. Если порошок не тонет, то проба отрицательная; если тонет — положительная. Проба бывает положительной при содержании желчных кислот и солей в моче выше 0,01%. Более четкие результаты получают, если мочу разводят до относительной плотности 1,015.

Проба на желчные кислоты с метиленовым синим. Пробу выполняют в двух пробирках: в одну — контрольную — вносят 2 мл дистиллированной воды, в другую — 2 мл исследуемой мочи. В обе пробирки добавляют по одной капле 0,2%-го раствора метиленового синего. При положительной реакции в пробирке с исследуемой мочой появляется зеленое окрашивание.

Количество желчных кислот в моче значительно увеличивается при механической и паренхиматозной желтухе.

источник

Количественное определение белка производится по способу Робертс-Стольникова (в видоизменении Брандберга), в основу которого положено приведенное выше наблюдение, что при наслаивании на азотную кислоту мочи, содержащей белок в количестве 0,033%о, белое кольцо получается через 2%-3 минуты. Если же белка больше, кольцо появляется или тотчас после переслаивания, или во всяком случае раньше этого срока. Моча тогда разводится водой и снова наслаивается на азотную кислоту. Разведение продолжают до тех пор, пока кольцо будет появляться только через 2-3 минуты.

Порядок, в котором производятся разведения мочи, можно рекомендовать следующий. Начать с разведения в 10 раз, для чего отмерить точно 1 см3 мочи и долить (в маленьком цилиндре) до 10 см3. Если окажется, что разведение получилось чрезмерным, т. е. кольцо не появляется вовсе,- развести мочу в 5 раз и с этим разведением повторить пробу Геллера. Если и при таком малом разведении кольца не получается, практически можно считать, что белок имеется только в количестве 0,033%о. В тех случаях, когда белка много, разводить мочу приходится в 20, 50, 200, 400 и т. д. раз. В таких случаях удобнее пользоваться не цельной мочой, а мочой, уже предварительно в 10 раз разведенной, например для разведения мочи в 300 раз взять 1 см3 разведенной в 10 раз мочи и довести водой до 30. При переходе от одного разведения к другому следует руководствоваться шириной кольца и временем его появления при предыдущем разведении; если, например, при разведении в 10 раз кольцо появляется сразу же и оказывается очень широким, можно попробовать сразу развести в 40 раз; если и тут повторится то же, — взять разведение раз в 80 и т. д. Если какое-то разведение окажется чересчур высоким — т. е. кольцо не появится в указанный выше срок, тем самым будут определены те пределы, в которых нужно искать соответствующее разведение. Как уже говорилось выше, окончательным будет то разведение, при котором белое кольцо появится только через 2 /2-3 минуты, т. е. в котором белка будет 0,033%.

Для вычисления количества белка в цельной моче нужно, естественно, 0,033 умножить на соответствующее разведение (при 50-кратном разведении, следовательно, белка будет 0,033 X 50 = 1,65%). Количество белка в моче всегда выражают в промилле. Следовательно, 1,65%о белка означает, что в 1000 см3 мочи содержится 1,65 г белка.

Общий план действий при определении белка будет, следовательно, таков. Проделывается проба с сульфосалициловой кислотой. При этом есть следующие возможности: 1) обе пробирки после прибавления реактива одинаково прозрачны, значит белка нет; 2) в пробирке, куда прибавлена сульфосалициловая кислота, появилась муть, которая после нагревания исчезла, — белка нет; 3) муть в пробирке с сульфосалициловой кислотой после нагревания осталась или стала еще интенсивнее — белок есть. В последнем случае для выяснения количества белка переходим к пробе с азотной кислотой. Тут возможны следующие результаты: 1) белковое кольцо не получится вовсе, следовательно белок имеется в количестве меньшем, чем 0,033%о (но большем, чем 0,015%о), — белка следы; 2) после 2 /2-3 минут едва намечается тонкое белковое кольцо — белка 0,033%0; 3) сразу после переслаивания получается заметное кольцо — белка больше 0,033%0, и для дальнейшего определения его количества мочу придется разводить в указанном выше порядке.

Для количественного определения белка применяется также способ Эсбаха. Он состоит в том, что в специальную градуированную пробирку (альбуминометр Эсбаха) наливается до определенной черты, отмеченной буквой U моча, а до следующей, с буквой R — реактив Эсбаха следующего состава: 10 г пикриновой кислоты, 20 г лимонной кислоты, 1 л воды. Прибор закрывается пробкой, содержимое тщательно перемешивается повторным переворачиванием пробирки и оставляется в вертикальном положении на сутки. Белок выпадает из раствора и образует осадок, который через сутки занимает объем, определяемый соответствующими делениями прибора, эмпирически вычисленными. Способ очень прост, но имеет существенные недостатки: 1) точность определения, особенно при малых количествах белка, недостаточна; 2) необходимость ждать результата в течение суток; 3) реактивом Эсбаха осаждаются из мочи алкалоиды, выделяемые с нею после приема внутрь.

Уксусно-белковое тело . Уксусно-белковое тело — вторая разновидность белка, встречающегося в моче. Оно представляет собой соединение альбумина с хондроитинсерной кислотой. Уксусная кислота осаждает его на холоде, причем реакция происходит здесь, видимо, следующим образом: уксусная кислота освобождает хондроитинсерную кислоту из ее солей, а свободная кислота осаждает растворенный в моче сывороточный белок. Это белковое тело может появляться одновременно с обыкновенным белком, но встречается и без него. Существует мнение, что уксусно-белковое тело является самым чувствительным реактивом на поражение почечного эпителия. Исследование состоит в том, что к 5 см3 профильтрованной мочи прибавляется 5-10 капель 30% уксусной кислоты, хорошенько взбалтывается и разбавляется вдвое водой. В присутствии белкового тела, осаждаемого на холоду уксусной кислотой, через несколько минут (или сразу) образуется муть, для обнаружения которой рассматривать пробирку нужно на темном фоне рядом с контрольной пробиркой.

Белковое тело Бенс-Джонса . Это своеобразная белковая субстанция, которая встречается при множественных миеломах, остеосаркомах, эндотелиомах, лейкемиях.

Определение производится следующим образом: мочу, освобожденную от белка, ясно кислой реакции, подогревают; при наличии белкового тела Бенс-Джонса при температуре 45-55° появляется молочная муть и клейкий, прилипающий к стенкам осадок, который при дальнейшем нагревании целиком растворяется, а при охлаждении вновь выпадает.

Альбумозы . Альбумозы встречаются при различных заболеваниях, сопровождающихся усиленным распадом ткани, при больших экссудатах, гнойниках, при лихорадочном состоянии. Кроме того, наличие их в моче может быть обусловлено примесью к ней спермы, в которой содержатся альбумозы.

Химически альбумозы, выделяемые мочой, представляют собой смесь дейтеро- и протоальбумозы. Если одновременно с альбумозами в моче имеется и сывороточный белок, для их определения мочу приходится предварительно освободить от последнего. Для этого моча, к которой прибавляют 1-2 капли 30% уксусной кислоты, кипятится, причем белок выпадает в виде хлопьев; моча фильтруется в горячем виде, фильтрат получается свободным от белка, и с ним производятся реакции на присутствие альбумоз. Иногда оказывается, что белок не дает хлопьев, а образует только легкую муть. В таких случаях к моче добавляется каплями осторожно та же уксусная кислота ж одновременно около трети объема насыщенного раствора поваренной соли, снова кипятится, пока не получится крупных хлопьев. На наличие (в фильтрате) альбумоз укажут следующие пробы: 1) фильтрат, в горячем виде прозрачный, при охлаждении мутнеет и даже дает хлопьевидный осадок; 2) при пробе с сульфосалициловой кислотой получается муть, исчезающая при нагревании и вновь образующаяся при охлаждении.

Сахар . Нормальная моча содержит незначительные следы (0,02 % и меньше) виноградного сахара, которые не открываются обычными реакциями, так что принято считать, что в норме сахара в моче нет. Выделение его мочой носит название глюкозурии. Механизм появления глюкозурии может быть различен: 1) алиментарная глюкозурия, обусловленная введением с пищей избыточного количества углеводов (порогом, за которым почки начинают пропускать сахар, является количество его в крови, равное примерно 160-170 мг%); 2) глюкозурия, зависящая от нарушения функции желез внутренней секреции и в первую очередь поджелудочной железы (диабет); 3) почечная глюкозурия, зависящая от нарушения проходимости почек; 4) глюкозурия, связанная с органическими или функциональными поражениями нервной системы.

В моче, кроме виноградного сахара, могут встречаться молочный и фруктовый сахар, пентозы и др. Однако практически наибольшее значение имеет исследование на виноградный сахар.

«Сахарная» моча обычно очень светлая (с чуть зеленоватым оттенком), сравнительно быстро мутнеет (вследствие обильного размножения дрожжей) и обладает иногда огромным удельным весом. В основу исследований мочи на сахар положены следующие свойства его.

1) сахар обладает способностью восстанавливать в щелочных растворах при кипячении соли металлов (окиси переводить в закиси или чистые металлы);

2) в присутствии дрожжей сахар подвергается брожению, разлагаясь на спирт и углекислоту;

3) с фенилгидразином виноградный сахар (альдегидная и спиртовая группы его) образует так называемые озазоны;

4) водные растворы его вращают плоскость поляризации вправо.

Из качественных проб наиболее приняты следующие.

1. Реакция Ниландера. К 2-3 см3 фильтрованной мочи прибавляется приблизительно равное количество реактива и кипятится около 2 минут. При наличии сахара сначала осадок, а затем и вся жидкость окрашиваются в черный цвет (вследствие превращения окиси висмута в закись и металлический висмут). Беловатый хлопьевидный осадок, состоящий из фосфатов, получается с каждой мочой, так что вопрос решает только цвет осадка. Реакция очень чувствительна, но положительный результат получается в некоторых случаях и при отсутствии сахара: 1) белковая моча, в которой белок разлагается с образованием сернистого висмута, иногда дает черно-коричневое окрашивание в пробирке; 2) некоторые лекарственные вещества, как салол, салициловая кислота, ревень, сенна, антипирин, ментол, скипидар, также дают черный осадок, правда — обычно очень объемистый и рыхлый.

2. Реакция Фелинга. Реакция несколько менее чувствительна, чем предыдущая; кроме того, некоторые другие составные части мочи — мочекислые соли, мочевая кислота, креатинин, желчные пигменты, белок и др. -иногда дают пожелтение с фелинговой жидкостью. В сомнительных случаях лучше всего проделывать обе указанные реакции.

3. Реакция с фенилгидразином (по Коварскому). В обыкновенной пробирке смешивают 5 капель фенилгидразина и 10 капель ледяной уксусной кислоты; сюда же прибавляют 15 капель насыщенного раствора хлористого натрия, причем смесь застывает в кашицу. К этой кашице приливают около 10 см3 мочи и медленно нагревают до кипения, которое должно продолжаться 2 минуты. При последующем охлаждении выпадает осадок глюкозазона в виде пучков тонких кристаллических игл, причем, в зависимости от количества сахара, образование кристаллов продолжается от нескольких минут до получаса.

Количественное определение сахара производится поляриметрическим путем, при помощи брожения или титрованием.

1. Способ поляриметрический, наиболее точный и в то же время очень быстро выполнимый, основан на том, что моча, содержащая глюкозу, вращает плоскость поляризации света вправо, и тем сильнее, чем сахара больше.

Поляризационный аппарат внешне представляет собой штатив с горизонтальным желобком, закрывающимся крышкой и имеющим отверстие сзади, за которым устанавливается источник света, и спереди, у которого помещается глаз исследующего (окуляр). Окуляр можно выдвигать на любое расстояние и тем самым, меняя фокусное расстояние, обеспечить себе наибольшую ясность изображения. Тут же спереди помещается шкала с делениями или в виде диска вокруг окуляра, или в виде горизонтальной линейки. Шкала подвижна и приводится в движение винтом, расположенным снизу. Движется шкала мимо неподвижно укрепленного нониуса. Движениями этого же винта поворачивается анализатор (вращающийся николь), помещенный спереди. У заднего отверстия аппарата помещается неподвижный николь — поляризатор. Перед исследованием необходимо убедиться в правильности показаний прибора, т. е. что при нулевом положении шкалы в окуляре обе половины поля зрения, разделенные едва заметной вертикальной чертой, окрашены совершенно одинаково. В противном случае, т. е. если одна из последних будет темнее, поворотом винта нужно сравнять их оттенки и отметить по шкале величину угла, на которую пришлось повернуть анализатор.

Моча наливается в специальную трубку, закрывающуюся на обоих концах круглыми стеклышками, на которые навинчиваются металлические гайки. Таких трубок прибор имеет обычно три — различной длины — в 200, 100 и 50 мм, причем длина трубки в 200 мм рассчитана таким образом, что при наличии в моче 1% сахара прибор дает отклонение поляризованного луча на 1 градус; соответственно при пользовании трубками в 100 и 50 мм результат приходится умножать на 2 или 4, что, конечно, менее выгодно в смысле точности и допускается только в случаях, когда почему-либо имеется мало мочи.

Исследуемая моча должна быть абсолютно прозрачной. Так как обычного фильтрования нередко бывает для этого недостаточно, приходится прибегать к помощи различных адсорбирующих веществ, чаще всего так называемого свинцового сахара (plumbum aceti-cum), который прибавляется приблизительно в количестве % чайной ложки на 50 см3. Моча сразу становится очень мутной; мутными могут оказаться и первые порции фильтрующейся мочи — их надо пропустить повторно через тот же фильтр. После того как поры фильтровальной бумаги пропитаются взвешенными частицами свинцового сахара, последующие порции мочи станут безукоризненно прозрачными.

источник