Принцип определения амилазы в крови и моче

Амилаза – это органическое белковое вещество (фермент) поджелудочной и слюнных желез. В процессе ферментации пищи амилаза исполняет функцию расщепления полисахаридов (крахмала и гликогена) до простых углеводов, содержащих моносахаридные остатки, иначе олигосахаридов.

При лабораторной микроскопии крови и мочи оценивается диастаза (панкреатическая α-амилаза, прошедшая фильтрацию в почечном аппарате). Амилаза в моче не определяется в рамках общего анализа. Исследование фермента назначается отдельно, для оценки состояния здоровья и работоспособности поджелудочной железы.

Показатель диастазы в биохимическом составе крови менее информативен для диагностики, поскольку в системный кровоток попадает незначительное количество вещества. В организме животных и человека активной является α-амилаза. Другие разновидности вещества β-амилаза и γ-амилаза содержатся в растениях.

Анализ мочи на амилазу назначается при наличии симптомов, сопровождающих воспалительные процессы в органах пищеварительного тракта:

• функциональное расстройство кишечника с характерным газообразованием и болевым синдромом;
• затруднительное и болезненное пищеварение (диспепсия);
• беспричинная тошнота и рефлекторный выброс содержимого желудка (рвота);
• боли в левой области живота на фоне субфебрильной температуры тела (37-38 °С);
• учащенное мочеиспускание (поллакиурия) с незначительным выделением мочи.

Микроскопия альфа-амилазы регулярно проводится пациентам с хроническим панкреатитом, диабетикам, людям, страдающим заболеваниями почек, и онкобольным. Данные анализа используются при диагностике функциональных нарушений поджелудочной железы, сахарного диабета и преддиабетического состояния.

Лабораторная оценка содержания амилазы в моче проводится у взрослых пациентов и у детей (независимо от возраста). Высокая концентрация диастазы фиксируется в период острого проявления симптоматики (временной интервал составляет от 12 до 72 часов). Максимальной отметки показатели достигают через 24 часа после начала приступа.

Альфа-амилаза не имеет гендерной принадлежности, поэтому существенных различий в анализах мужчин и пробах, взятых у женщин, нет. Исключение составляет перинатальный период в жизни женщины. Вследствие смены гормонального статуса в женском организме происходит кардинальная перестройка, что отражается на количественном содержании гормонов и ферментов в биожидкостях (крови и урине).

Плановое определение концентрации амилазы производится в рамках первого и последнего скрининга. Незначительное превышение уровня диастазы во время беременности патологией не является. Очень высокие показатели указывают на воспалительный процесс. В этом случае женщине необходима госпитализация и подробное обследование.

По возрастной принадлежности низкий уровень панкреатического фермента является нормой для младенцев. У пожилых людей при условии отсутствия хронических патологий эндокринной системы диастаза в моче может снижаться вследствие возрастных особенностей организма. К анормальным изменениям это не относится.

Анализ имеет две разновидности:

• Разовый сбор мочи. Пациенту необходимо собрать урину однократно, утром, и сдать ее в лабораторию.
• Суточный диурез. Моча собирается на протяжении суток при каждом мочеиспускании в специальную емкость. Далее перемешивается, и часть биожидкости отправляется на исследование.

Второй вариант обеспечивает более высокую информативность результатов, поскольку содержание фермента в урине в течение дня нестабильно. Выбор разновидности исследования зависит от решения лечащего врача.

В ходе экспертизы исследуемый биоматериал вступает в реакцию с йодом и нагретым крахмалом. Индикатором концентрации фермента служит цветовой оттенок жидкости. Ознакомиться с результатами можно на следующий день после сдачи анализа.

Для получения объективных данных о содержании альфа-амилазы в моче необходимо придерживаться врачебных рекомендаций по сбору анализа и предварительной подготовке. В противном случае исследование покажет неверные значение, что отразится на дальнейшем лечении пациента.

Одинаковыми условиями для разового анализа и суточного диуреза являются:

• приобретение в аптеке специального стерильного контейнера для мочи;
• устранение из рациона соленых продуктов, острых маринадов, приправ и специй (минимум за 12 часов до сбора урины);
• временное исключение из меню свеклы, спаржи, моркови, ревеня, ежевики из-за их особенности окрашивать мочу, спиртосодержащих напитков (за 24 часа);
• отказ от диуретических лекарств, кортикостероидов, анаболических препаратов, оральных контрацептивов за (2-3 дня);
• ограничение физической активности накануне сбора урины при разовом анализе, при суточном диурезе – на протяжении всех 24 часов;
• проведение процедуры гигиены наружных половых органов непосредственно перед мочеиспусканием.

При разовом анализе сдавать на экспертизу необходимо среднюю порцию утренней мочи. Для этого вначале следует помочиться в унитаз, далее в специальную емкость, и затем – снова в унитаз. Контейнер плотно закрыть и доставить в лабораторию в течение 2-х часов. Суточный анализ начинается в 6 часов утра.

Первую порцию урины (после пробуждения) собирать не нужно, поскольку она содержит компоненты слизи. При всех последующих мочеиспусканиях урину необходимо собирать в одну большую тару. Собранный биоматериал должен храниться в холодильнике, в герметично закрытом виде. Спустя сутки вся собранная урина перемешивается.

Аптечный контейнер наполняется биожидкостью (для оценки достаточно 30 мл), закрывается крышкой и сдается в лабораторию. Гигиена половых органов является необходимой процедурой перед каждым мочеиспусканием на протяжении 24 часов. По рекомендации врача, пациент записывает общее количество урины, выделившееся за сутки, и основные съеденные за это время продукты.

У грудных детей правильно собрать мочу помогает специальный педиатрический мочеприемник, который прикрепляется между ножек малыша. После того, как младенец помочится, урину необходимо перелить в стерильный аптечный контейнер и герметично закрыть.

Для женщин обязательным условием является введение во влагалище тампона перед процедурой (альтернативой может служить спонджик), во избежание попадания в контейнер секрета влагалищных желез. Нельзя сдавать мочу во время фолликулярной фазы менструального цикла (период кровяных выделений).

Лабораторной величиной измерения концентрации диастазы в моче является Ед/л или Ед/ч. Норма амилазы в моче, собранной однократно, отличается от нормы суточного диуреза. Референсные значения для взрослых составляют:

• разовый анализ – от 10 Ед/л до 490 Ед/л;
• суточный диурез – от 10 Ед/л до 600 Ед/л.

Для ребенка грудного возраста нормативными показателями считаются от 5 Ед/л до 65 Ед/л. Увеличение активности фермента – это клинический признак острого состояния или рецидива хронических заболеваний органов пищеварения, слюнных желез, мочевыделительной и эндокринной систем.

Для установления точной причины повышения диастазы пациента направляют на общий и биохимический анализ крови и ряд процедур дополнительной диагностики. В зависимости от предполагаемого диагноза, назначается:

• УЗИ органов брюшной полости;
• расширенный анализ крови на определение толерантности к глюкозе и уровня гликированного гемоглобина, на уровень гормонов и ферментов.
• ФГДС (фиброгастродуоденоскопия);
• общий клинический и развернутый биохимический анализ мочи;
• копрограмма (анализ кала);
• обследование на томографе (МРТ, КТ).

Повышенная концентрация амилазы в урине может сигнализировать о развитии:

• острого воспаления поджелудочной железы (панкреатита);
• рецидива хронического панкреатита (возможного прогрессирования тяжелого осложнения болезни – панкреонекроза);
• синдрома нарушения продвижения пищи по пищеварительному тракту (кишечной непроходимости);
• сахарного диабета или сопутствующего заболеванию острого осложнения – диабетического кетоацидоза;
• воспаления серозного покрова брюшины (перитонита);
• язвенного или эрозивного поражения двенадцатиперстной кишки и желудка;
• внематочной беременности;
• злокачественных или доброкачественных опухолей в поджелудочной железе;
• холелитиаза (желчнокаменной болезни) и уролитиаза (наличие конкрементов в мочевом пузыре и протоках);
• ХПН (хронической почечной недостаточности);
• алкогольной интоксикации;
• паразитарных инвазий;
• острого контагиозного поражения слюнных желез, поджелудочной железы, семенников (эпидемический паротит, иначе свинка);
• острого и хронического аппендицита.

У женщин высокая диастаза фиксируется на фоне хронических гинекологических заболеваний. При подтверждении возможного диагноза устанавливается долгосрочный контроль над уровнем диастазы и других биохимических показателей. Если анализ показывает значительно сниженный уровень альфа-амилазы, значит, изменения связаны с дефицитом пищеварительного фермента.

В этом случае рассматриваются заболевания печени (гепатит, цирроз, рак), врожденная патология поджелудочной железы (муковисцидоз), ферментная недостаточность врожденного или приобретенного характера (ферментопатия). При сниженном содержании фермента бывает повышена активность щитовидной железы по производству гормонов. В этом случае диагностируется гипертиреоз.

Низкая концентрация α-амилазы наблюдается у пациентов в постоперационном периоде после хирургического вмешательства в органы брюшной полости. В особенности влияет частичная или полная панкреатэктомия (резекция поджелудочной железы). Сниженный показатель фермента не позволяет органам пищеварения полноценно перерабатывать и усваивать углеводы. Нарушается процесс метаболизма, развиваются хронические заболевания ЖКТ (желудочно-кишечного тракта).

Панкреатическая альфа-амилаза (диастаза) представляет собой пищеварительный фермент, под действием которого происходит переработка сложных углеводов (крахмала и гликогена). В анализе мочи амилаза является индикатором ферментативной функции поджелудочной железы и слюнных желез. Сбор урины для исследования α-амилазы производится двумя способами, каждому из которых соответствует норма содержания фермента.

Повышение диастазы в моче свидетельствует о наличии острых или хронических болезней эндокринной системы, органов системы пищеварения, почечного аппарата или слюнных желез. Заболевание может быть диагностировано по результатам лабораторного анализа либо пациента направляют на расширенное обследование, по итогам которого доктор определяет дальнейшую тактику лечения.

Сниженный показатель фермента указывает на нарушения метаболизма, заболевания печени и врожденные патологии. Не представляет опасности низкий уровень только для детей до года (нормативным показателем является от 5 Ед/л до 65 Ед/л). Уровень амилазы в моче – важнейший диагностический критерий, поэтому при самостоятельном сборе урины необходимо строго соблюдать врачебные рекомендации.

источник

Принцип метода: В качестве субстрата для a-амилазы используется мальтотриозид, связанный с хромогеном 2-хлор-п-нитрофенолом. Под действием a-амилазы субстрат гидролизуется с выделением окрашенного 2-хлор-п-нитрофенола, мальтотриозы и глюкозы. Реакция протекает быстро и не требует присутствия в реакционной смеси коферментов. Скорость гидролиза субстрата прямо пропорциональна активности a-амилазы в пробе и изеряется спектрофотометрически при длине волны 405 нм.

Субстрат-ХНФ ————> ХНФ + глюкоза + Мальтотриоза

Линейность метода: до 1500 Е/л.

a-Амилаза в негемолизированной сыворотке сохраняет стабильность при комнатной температуре (18-25°С) в течение 7 дней, при температуре хранения 2-8°С в течение 2 месяцев.

1) Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 405 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37°С;

3) Автоматические пипетки на 25 мкл и 1000 мкл;

В качестве источника фермента можно использовать и слюнную жидкость (слюну предварительно разбавить дистиллированной водой в 100 раз), но диапазон нормы при этом варьирует в значительной степени.

6) Рабочий реагент (субстрат – 1,8 ммоль/л в МЕS-буфере (рН 6,0±0,1)).

Рабочий реагент годен для применения, если его оптическая плотность не выше 0,6 ед.опт.плотн. при длине волны 405 нм и нет мутности.

Перед проведением анализа реагенты следует прогреть до температуры измерения (37°С).

Перемешать содержимое пробирки и включить секундомер. Измерить оптическую плотность пробы против дистиллированной воды при длине 405 нм ровно через 1 мин. Повторить измерение 3 раза с интервалом 1 мин. Рассчитать изменение оптической плотности за каждую минуту, а затем вычислить среднее измерение оптической плотности в минуту (Dо.п./мин).

Расчет активности a-амилазы по фактору проводят по формуле:

где Dо.п./мин – среднее изменение оптической плотности в минуту;

1,025 – общий объем раствора в кювете;

1000 – коэффициент перевода мл в л;

12,9 – коэффициент миллимолярного поглощения 2-хлор-п-нитрофенола;

0,025 – объем сыворотки в мл;

1,0 – длина оптического пути.

При внесении каких-либо изменений в перечисленные параметры фактор следует пересчитать. Если активность a-амилазы превышает 1500 Е/л (точка вне зоны линейности калибровочного графика), анализируемую сыворотку следует развести 1:1 физиологическим раствором и повторить измерение, а полученный результат расчета умножить на 2.

Клинико-диагностическое значение: a-Амилаза – это эндогидролаза и в организме человека представлена несколькими изоферментами: фермент секретируется слюнными железами (S-тип), поджелудочной железой (Р-тип); небольшая активность фермента обнаружена в печени, скелетных мышцах, слезной жидкости, секрете молочных желез и различных опухолях.

Активность a-амилазы в сыворотке значительно возрастает за счет Р-изофермента при различных заболеваниях поджелудочной железы (панкреатит, абсцесс, травма, рак).

При повреждениях слюнных желез (рак слюнных желез, эндемический паротит, макроамилаземия) активность a-амилазы в сыворотке также увеличивается, но за счет S-изофермента.

Оба изофермента a-амилазы имеют небольшую молекулярную массу (45 000), поэтому фильтруются в почках и экскретируются с мочой. Повышение активности амилазы мочи (диастаза) при остром панкреатите наступает на 6-10 часов позднее, чем в сыворотке крови.

источник

Активность α-амилазы крови и мочи в течение суток (а также от одного дня к другому) значительно меняется. Кроме того, отмечены существенные индивидуальные различия этих показателей у обследуемых без патологии органов пищеварения. Учитывая колебания экскреции α-амилазы с мочой, рекомендуется исследовать активность фермента в моче, собранной за сутки.

На величине показателей активности этого энзима сказывается характер питания: при увеличении утилизации глюкозы содержание амилазы в крови снижается. Эмоциональные, стрессовые состояния, напротив, приводят к гиперамилаземии.

Изменение активности α-амилазы в крови и моче происходит при беременности.

Гиперамилаземия. Активность α-амилазы значительно возрастает при заболеваниях поджелудочной железы. При остром панкреатите активность фермента в крови и моче увеличивается в 10-40 раз. Гиперамилаземия наступает в начале заболевания, достигает максимума через 12-24 ч после развития, затем быстро снижается и приходит к норме на 2-6-е сут. Обычно гиперамилозурия длится дольше, чем гиперамилаземия. Возможно развитие острого панкреатита и без повышения активности фермента (в частности, при тотальном панкреонекрозе).

Следует иметь в виду, что уровень активности сывороточной α-амилазы не всегда соответствует тяжести панкреатита. Например, умеренно выраженный отёчный панкреатит может сопровождаться весьма высокой активностью α-амилазы, тогда как геморрагический панкреатит и тотальный панкреонекроз – минимальным её увеличением, а в некоторых случаях даже снижением.

Активность фермента может быть повышена при ряде заболеваний, имеющих сходную клиническую картину с острым панкреатитом, а именно: остром аппендиците, перитоните, перфоративной язве желудка и двенадцатиперстной кишки. У больных с перитонитом увеличение амилазной активности является следствием развития образующих амилазу бактерий. Обычно активность фермента при указанных патологических состояниях повышается в 3-5 раз.

К заболеваниям, вызывающим сравнительно незначительную гиперамилаземию непанкреатического происхождения (то есть без непосредственного поражения самой поджелудочной железы), относят холецистит, холелитиаз, состояние, связанное с разрывом желчного пузыря, заболевания почек, почечную недостаточность, метастазирование раковой опухоли в лёгкие, поражение слюнных желез с обтурацией их протоков (ясная клиническая картина паротита позволяет легко объяснить гиперамилаземию), простатит, черепно-мозговую травму, травматический шок, ожоги, пневмонии, диабетический кетоацидоз, прерывание беременности, послеоперационный период.

Активность α-амилазы в сыворотке крови повышается также при перфорации пищевода, язве желудка, гастрите, острой кишечной непроходимости, ишемии и инфаркте тонкой кишки, перитоните, разрыве трубы при внематочной беременности, сальпингите, аневризме аорты. Гиперамилаземия при ишемии, некрозе и перфорации органов брюшной полости обусловлена всасыванием из неё фермента α-амилазы. О перечисленных заболеваниях важно помнить потому, что все они протекают с болями в животе. Это иногда является поводом для проведения хирургического вмешательства, подчас экстренного, поскольку данные заболевания могут быть ошибочно приняты за панкреатит. Активность фермента в крови увеличивается и при злокачественных опухолях лёгких (продуцирующих S-изоамилазу), поджелудочной железы, поперечно-ободочной кишки (продуцирующих P- и S-изоамилазу).

При макроамилаземии активность фермента повышается в сыворотке крови и снижается в моче. В этом случае молекулы фермента из-за большой величины не выделяются почками.

Следовательно, резко выраженная гиперамилаземия позволяет дифференцировать острый панкреатит не только с хроническими заболеваниями поджелудочной железы, но и с другими патологическими состояниями, в том числе и с острыми приступами желчнокаменной болезни.

Основными причинами гиперамилаземии являются: нарушение оттока секретов из желез (продуцентов α-амилазы), повышение проницаемости гистогематического барьера в железах, некрозы ткани, нарушение выделения фермента через почечный фильтр.

Исследование активности α-амилазы в суточной моче – более надёжный биохимический тест выявления заболевания поджелудочной железы, чем исследование, базирующееся на анализировании разовой её порции. После того, как активность α-амилазы крови после приступа панкреатита возвратится к норме, она может оставаться повышенной в моче до 7 сут.

С большим постоянством гиперамилазурия выявляется при остром панкреатите, обострении хронического панкреатита, обструктивном хроническом панкреатите, паротите.

Повышение активности α-амилазы в сыворотке крови у больных с хроническими заболеваниями почек и острой уремией можно объяснить уменьшением или прекращением выделения фермента через почки. Определение активности α-амилазы в крови и моче может дать некоторые указания о функциональном состоянии почечного фильтра. У больных, страдающих нефротическим синдромом, гломерулонефритами и др., активность α-амилазы увеличена, в то время как в моче она резко снижена. Коэффициент «активность α-амилазы крови / активность α-амилазы мочи» служит показателем функциональной полноценности почечного фильтра.

Гипоамилаземия в клинической практике встречается редко. Она отмечается у больных с заболеваниями печени (гепатитами, циррозами), злокачественными опухолями (особенно при наличии метастазов в печень), обширными ожогами кожи, сахарным диабетом, гипотиреозом, общим расстройством питания, падением массы тела, кахексией, а также под влиянием интоксикации (например, при токсикозе беременных). Снижение активности α-амилазы чаще всего свидетельствует о недостаточности экзокринной функции поджелудочной железы. К уменьшению активности фермента приводит введение в организм цитратов и оксалатов.

Дата добавления: 2018-03-01 ; просмотров: 465 ; ЗАКАЗАТЬ НАПИСАНИЕ РАБОТЫ

источник

Количественное определение активности амилазы мочи по Вольгемуту

ПРИНЦИП МЕТОДА: Определение активности амилазы в биологических жидкостях (моча, ликвор, слюна, сыворотка крови) основано на определении минимальной активности (количества) фермента, катализирующего в стандартных условиях гидролиз добавленного крахмала. Амилазная активность мочи выражается количеством мл крахмала, которое расщепляется ферментом, содержащимся в 1 мл неразведенной мочи, при температуре 45ºC за 15 минут.

Расчет: Предположим, что полный гидролиз крахмала произошел в первых 4-х пробирках. В четвертой пробирке (где разведение мочи 1:16), 1/16 мл мочи гидролизует 2 мл 0,1% крахмала, значит 1 мл неразведенной мочи расщепит 32 мл 0,1% крахмала. Следовательно, активность амилазы мочи равна 32 единицы. В норме активность амилазы мочи равна 16-64 единицы.

Клинико-диагностическое значение.

Определение активности амилазы мочи и сыворотки крови широко используется в клинической практике для диагностики заболеваний поджелудочной железы. При острых панкреатитах амилазная активность мочи и сыворотки крови увеличивается в десятки раз, особенно в первые сутки заболевания, а затем постепенно возвращается к норме. При почечной недостаточности амилаза в моче отсутствует. В детском возрасте увеличение активности амилазы наблюдается при эндемическом паротите, что указывает на одновременное поражение поджелудочной железы вирусом паротита.

Определение концентрации глюкозы в слюне энзиматическим(А) и колориметрическим(Б) методом

окисление глюкозы до глюкуроновой кислоты с помощью фермента глюкозооксидазы и образовании в ходе реакции перекиси водорода.Перекись+субстрат+фер-т пероксидаза= окрашенный продукт.

С(оп.)= Е(оп.)/ Е(ст.) х С (ст.) С(ст.)=5, 55 ммоль/л Е(ст.)=0,156 ммоль/л

Гл +о-толуидин = синезелен.окр-е, интренсивность кот. Прямо пропроц. Конц-ии Гл и определяется в фотоколориметре.

Уменьшение конц-ии Гл-поражениея паренхимы печени, нар-е ферм.акт-ти при распаде гликогена, гипофункция щитовидной, надпочечников, гипофиза, передозировка инсулина у больных сах. Диабетом, нар-я всас-я углеводов, при потерях крови.

Эмульгирование жира

ПРИНЦИП МЕТОДА: Эмульгирование жира различными амфифильными веществами происходит благодаря их адсорбции на границе раздела двух фаз — гидрофобной и гидрофильной.

В эмульсиях может происходить два явления – коагуляция и коалесценция.

Коагуляция – объединение частиц дисперсной фазы в агрегаты вследствие сцепления (адгезия) частиц при их соударении.

Соударения происходят в результате броуновского движения, а также седиментации, перемещения частиц в электрическом поле.

Характерные признаки коагуляции: увеличение мутности, появление хлопьевидных образований – флоккул, расслоение исходно устойчивой к седиментации системы с выделением дисперсной фазы в виде коагулянта.

Коалесценция – слияние капель жидкости внутри другой жидкости. В результате коалесценции происходит уменьшение степени дисперсности эмульсий, пен, аэрозолей вплоть до их расслоения на две фазы (жидкость – жидкость или жидкость – газ). Коалесценция происходит в результате флуктуции порыва пленок подвижной среды, разделяющих жидкие и газообразные частицы, что является причиной широкого разброса в значениях времени пленок, характеризующего устойчивость частиц коалесценции.

В результате коагуляции происходит слипание жировых частиц. При размешивании соединившиеся частицы легко разъединяются дисперсионной средой с восстановлением эмульсии, поэтому коагуляция не вызывает разрушения эмульсий с выделением исходных фаз.

При коалесценции капелек, наступающей при разрушении адсорбционных слоев, эмульсии необратимо разрушаются.

Роль эмульгаторов при образовании эмульсий в основном сводится к следующему: они способствуют снижению межфазной энергии и предохраняют диспергированные капельки при их сближении от слияния.

Анализ желудочного сока

который в сыворотке крови обусловлен в основном количеством, качеством растворенного белка и температурой. Влияние других компонентам сыворотки крови на коэффициент преломления значительно меньше. Определение коэффициента преломления проводят с помощью рефрактометров.

РАСЧЕТ: Определив показатель преломления по таблице, вычисляют процент содержания белка в сыворотке крови, для перехода к единицам системы СИ (г/л), результат следует умножить на 10.

НОРМА: содержание общего белка в плазме (сыворотке) крови здорового человека составляет 6.5-8.5 % или 65-85 г/л.

ПРИНЦИП МЕТОДА

Тест основан на реакции креатинина с пикратом натрия, как описано Яффе. Креатинин реагирует с

щелочным пикратом, формируя красный комплекс. Для измерения выбирается временной интервал с

отсутствием влияния других компонентов сыворотки. Изменение оптической плотности образующегося

комплекса пропорционально концентрации креатинина в пробе.

КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

Креатинин является результатом разрушения креатина, компонента мышц, который может трансформироваться в АТФ, она является источником энергии для клеток. Продукция креатинина зависит

от объема мышечной массы, варьирует незначительно, и уровни обычно очень стабильны.

Креатинин выделяется почками. С развитием почечной недостаточности происходит накопление в

крови мочевины, креатинина и мочевой кислоты. Повышение уровня креатинина может означать почечную

недостаточность. Клинический диагноз не должен ставиться по результатам одного теста,

он должен базироваться на совокупности клинических и других лабораторных данных.

Повышение значений: Физическая нагрузка. Акромегалия, гигантизм.Сахарный диабет. Инфекции.Гипотиреоз. Мясная пища. Увеличенный сердечный выброс. Беременность.Ожоги.Отравление окисью углерода.Белковая диета. Повышенный метаболизм. Анемии.

Снижение значений: Гипертиреоз. Анемии. Паралич, мышечная дистрофия, заболевания с уменьшением мышечной массы (например, нейрогенная атрофия, полимиозит и т.п.). Воспалительные и метаболические заболевания с вовлечением мышц. Развернутая стадия заболеваний почек. Лейкоз.Вегетарианская пища. Креатинин снижается в моче, оттекающей от почки со стороны стеноза почечной артерии.

Количественное определение активности амилазы мочи по Вольгемуту

ПРИНЦИП МЕТОДА: Определение активности амилазы в биологических жидкостях (моча, ликвор, слюна, сыворотка крови) основано на определении минимальной активности (количества) фермента, катализирующего в стандартных условиях гидролиз добавленного крахмала. Амилазная активность мочи выражается количеством мл крахмала, которое расщепляется ферментом, содержащимся в 1 мл неразведенной мочи, при температуре 45ºC за 15 минут.

Расчет: Предположим, что полный гидролиз крахмала произошел в первых 4-х пробирках. В четвертой пробирке (где разведение мочи 1:16), 1/16 мл мочи гидролизует 2 мл 0,1% крахмала, значит 1 мл неразведенной мочи расщепит 32 мл 0,1% крахмала. Следовательно, активность амилазы мочи равна 32 единицы. В норме активность амилазы мочи равна 16-64 единицы.

Последнее изменение этой страницы: 2017-01-24; Нарушение авторского права страницы

источник

Альфа-амилаза (диастаза) – это фермент, осуществляющий гидролитическое расщепление полисахаридов до декстринов, мальтозы и глюкозы. Конечные продукты действия амилазы не дают цветной реакции с йодом. Наиболее богаты амилазой поджелудочная и слюнные железы. Амилаза секретируется в кровь, главным образом, из этих органов.

Плазма крови человека содержит преимущественно амилазу двух типов: панкреатическую и слюнную, третий тип амилазы – крупная или макроамилаза. С мочой выделяется, в основном, панкреатическая амилаза, что является одной из причин, почему определение амилазы в моче более информативно, чем в крови для оценки функционального состояния поджелудочной железы. Считают, что 65% амилазной активности мочи обусловлено панкреатической амилазой, в то время, как 60% амилолитической активности сыворотки обеспечивается амилазой слюнных желез. При остром панкреатите панкреатическая амилаза увеличивается в сыворотке до 89%, а в моче до 92% без изменения показателей амилазы слюнных желез.

Активность амилазы в крови и моче подвергается значительным изменениям в течение дня, а также отмечены индивидуальные различия. Колебания активности амилазы вызывают необходимость ее исследования в суточной моче для оценки функции поджелудочной железы.

Существующие методы определения активности α-амилазы делятся на 2 группы:

1. Метод конечной точки – основан на определении остатка нерасщепленного крахмала по степени интенсивности его реакции с йодом (метод Каравея).

α-амилаза сыворотки крови – 16-30 г/ч*л

1. Сыворотка крови не должна быть гемолизирована.

2. Условия проведения опыта имеют большое значение, в частности точное время инкубации 5 минут, поэтому не рекомендуется проводить одновременное исследование более 5 сывороток.

3. Определение активности α-амилазы в моче проводится аналогично определению в крови, однако при гиперамилазурии рекомендуется разводить мочу с последующим пересчетом.

4. На активность α-амилазы влияют лекарственные препараты – антибиотики, обезболивающие, а также алкоголь.

Повышение активности амилазы, главным образом, встречается при заболеваниях поджелудочной железы.

При остром панкреатите активности фермента в крови и моче увеличивается более чем в 10 раз. Гиперамилаземия наступает непосредственно после начала заболевания, достигает максимума к 12-24 часам, после чего активность фермента быстро снижается и приходит к норме на 2-6 день. Обычно, гипрамилазурия длится дольше, чем увеличение активности фермента в сыворотке, поэтому на 2-3 день после болевого приступа более информативно определять активность α-амилазы в моче.

При хроническом панкреатите, раке поджелудочной железы повышение активности фермента не столь значительное. Кроме того, может быть незначительное увеличение активности фермента при заболеваниях, сопровождающихся сходной клинической картиной с острым панкреатитом: остром аппендиците, перитоните, прободной язве желудка и т.д.

Следовательно, резко выраженная амилаземия позволяет отдифференцировать острый панкреатит от хронических заболеваний поджелудочной железы, а также от других острых заболеваний брюшной полости.

Почти всегда амилаземия сопровождается амилазурией. Но определение активности амилазы мочи является менее точным показателем диагностики, т.к. выход амилазы в мочу связан с функцией почек. Незначительное повышение амилазы в крови при снижении ее уровня в моче можно объяснить нарушением выделительной функции почек.

Снижение амилазной активности наблюдается при некрозе поджелудочной железы, заболеваниях печени (гепатиты, циррозы), обширных ожогах, сахарном диабете, кахексии и т.д.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Только сон приблежает студента к концу лекции. А чужой храп его отдаляет. 8741 — | 7477 — или читать все.

195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник

В крови и моче

Активность альфа-амилазы крови и мочи в течение суток (а также от од­ного дня к другому) значительно меняется. Кроме того, отмечены сущест­венные индивидуальные различия этих показателей у обследуемых без пато­логии органов пищеварения. Учитывая колебания экскреции альфа-амилазы с мочой, рекомендуется исследовать активность фермента в моче, со­бранной за сутки.

Изменение активности альфа-амилазы в крови и моче происходит при бе­ременности. Гиперамилаземия. Активность альфа-амилазы значительно возрастает при заболеваниях поджелудочной железы. При остром панкреатите активность фермента в крови и моче увеличивается в 10—40 раз. Гиперамилаземия наступает при начале заболевания, достигает максимума через 12—24 ч после развития, затем быстро снижается и приходит к норме на 2-6-е сут.

Активность фермента может быть повышена при ряде заболеваний, имею­щих сходную клиническую картину с острым панкреатитом, а именно: остром аппендиците, перитоните, перфоративной язве желудка и двенадцатиперстной кишки. У больных с перитонитом увеличение амилазной активности является следствием развития образующих амилазу бактерий. Обычно активность фермента при указанных патологических состояниях повышается в 3—5 раз.

К заболеваниям, вызывающим сравнительно незначительную гиперамилаземию непанкреатического происхождения (т.е. без непосредственного по­ражения самой поджелудочной железы), относят холецистит, холелитиаз, со­стояние, связанное с разрывом желчного пузыря, заболевания почек, почечную не­достаточность, метастазирование раковой опухоли в легкие, поражение слюн­ных желез с обтурацией их протоков (ясная клиническая картина паротита поз­воляет легко объяснить гиперамилаземию), простатит, черепно-мозговую трав­му, травматический шок, ожоги, пневмонии, диабетический кетоацидоз, преры­вание беременности, послеоперационный период.

Активность альфа-амилазы в сыворотке крови повышается также при пер­форации пищевода, язве желудка, гастрите, острой кишечной непроходимости, ишемии и инфаркте тонкой кишки, перитоните, разрыве трубы при внематоч­ной беременности, сальпингите, аневризме аорты.

Основными причинами гиперамилаземии являются: нарушение оттока се­кретов из желез (продуцентов альфа-амилазы), повышение проницаемости гистогематического барьера в железах, некрозы ткани, нарушение выделения фермента через почечный фильтр.

Гиперамилаземию вызывают некоторые другие гормоны и многие фармако­логические препараты, в основном средства, приводящие к сокращению сфинктера Одди: адреналин, гистамин, секретин, фуросемид, салицилаты, ан­тикоагулянты, морфин, пантопон, опий, кодеин, тетрациклин, а также алко­голь.

Несмотря на то, что гиперамилаземия почти постоянно сопровождаетсяги-перамилазурией, определение активности альфа-амилазы мочи не всегда может служить точным показателем диагностики, так как выход амилазы в мочу связан с функцией почек. К тому же почки выделяют из крови только 24% секретированной пищеварительными железами амилазы.

Исследование активности альфа-амилазы в суточной моче — более надеж­ный биохимический тест выявления заболевания поджелудочной железы, чем исследование, базирующееся на анализировании разовой ее порции. После того как активность альфа-амилазы крови после приступа панкреатита воз­вратится к норме, она может оставаться повышенной в моче до 7 сут.

Коэффици­ент «активность альфа-амилазы крови/активность альфа-амилазы мочи» слу­жит показателем функциональной полноценности почечного фильтра.

Гипоамилаземчя в клинической практике встречается редко. Она отмечает­ся у больных с заболеваниями печени (гепатитами, циррозами), злокачествен­ными опухолями (особенно при наличии метастазов в печень), обширными ожогами, кожи, сахарным диабетом, гипотиреозом, общим расстройством пи­тания, падением массы тела, кахексией, а также под влиянием интоксикации (например, при токсикозе беременных). Снижение активности альфа-амила-зы чаще всего свидетельствует о недостаточности экзокринной функции под-желудочной железы. К уменьшению активности фермента приводит введение в организм цитратов и оксалатов.

Определение общей активности лактатдегидрогеназы

Лактатдегидрогеназа (L-лактат; НАД-оксидоредуктаза,КФ 1.1.1.27) — гликолитический (цитозольный цинксодержащий) фермент (молекулярная масса 135 000 Д), обратимо катализирующий окисление L-лактата в пировиноградную кислоту. Непременный участник данной реакции — окисленный никотинадениндинуклеотид, используемый в качестве кофактора фермента, играю­щего роль акцептора водорода.

Реакция, катализируемая лактатдегидрогеназой, может быть представлена в следующем виде:

СНзСНОНСОО»+НАД+ Лактатдегидрогеназа СНзСОСОО’+НАД • Н+Н+

Фермент широко распространен в организме человека. По степени убыва­ния активности энзима органы и ткани могут быть расположены в следующем порядке: почки, сердце, скелетные мышцы, поджелудочная железа, селезенка, печень, легкие, сыворотка крови. В последней обнаружено несколько различ­ных белков (изоэнзимов), обладающих каталитическими свойствами этого фермента. Изменения в строении белковой части изоферментов обусловлива­ют их различные физико-химические свойства (в частности, неодинаковую электрофоретическую подвижность в агаровом, крахмальном, полиакриламид-ном и других гелях).

В плазме (сыворотке) крови выявлено пять изоэнзимов лактат-дегидроге-назы – ЛДГ1, ЛДГ2, ЛДГз, ЛДГ4, ЛДГ5, — располагающихся в геле в порядке убывания их электрофоретической подвижности.

Каждый из изоэнзимов представляет собой тетрамер, образованный субъ­единицами Н и М. Установлено, что фракция ЛДГ1 происходит в основном из ткани сердца, ЛДГ5 — из печени. ЛДГ в цитоплазме клеток и сыворотке крови представлена 5 изоферментами.

Субъединица М обнаруживается главным образом в тканях с анаэробным метаболизмом, в то время как субьединица Н присутствует в тканях с преобла­данием аэробных процессов. Методом электрофореза на носителях удается разделить все 5 изоферментов ЛДГ, которые в сыворотке крови здоровых людей представительству­ют в следующем процентном отношении: ЛДГ; (14—26%), ЛДГ^ (29—39%), ЛДГз (20-26%), ЛДГ4 (8-16%), ЛДГз (6-16%) — В.Н.Титов с соавт. (1988).

Лактатдегидрогеназа содержится не только в плазме, но и в значительном количестве в эритроцитах крови, поэтому сыворотка, используемая для анали­за, должна быть свежей, без следов гемолиза.

Методы определения общей активности ЛДГ подразделяются на две ос­новные группы: 1) кинетические, базирующиеся на оптическом тесте Варбур-га (оптическом эффекте, связанном с превращением НАД в НАД • Н, и на­оборот) и 2) методы, в которых определяется количество образовавшегося продукта или потребляемого субстрата после фиксированного инкубационно­го периода (методы конечной точки).

Работа №32 Колориметрический динитрофенилгидразиновый метод определения активности лактатдегидрогеназы в сыворотке крови (по Севелу и Товареку)

Принцип метода. L-лактат в щелочной среде в присутствии ЛДГ сыворот­ки и добавленного НАД окисляется в пируват. По степени его образования и судят об активности фермента.

1. 0,45 моль/л раствора молочнокислого натрия. В мерную колбу емкостью 100 мл вносят 5 мл молочной кислоты концентрации 800 г/л ийи 10 мл молочной кислоты концентрации 400 г/л и нейтрализуют ее 2 н раствором едкого натра до слабощелочной реакции с рН 7,5 (при пользовании фенолфталеином должна развиться слабо-розовая окраска). Объо м дово­дят дистиллированной водой до метки.

2. 0,03 моль/л раствора пирофосфорнокислого натрия, рН 8,8. В мерную колбу емкостью 500 мл вносят 6,69 г Na₂ Р₂O₅ • Н₂О, 50 мл диет» ллиро-ванной воды, смесь тщательно перемешивают и устанавливают) рН раствора 8,8 с помощью 1 н раствора НС1. Объем содержимого колбы дово­дят до метки дистиллированной водой. Реактив стабилен в течение ме­сяца при хранении в холодильнике.

3. Раствор НАД. 3 мг НАД (х. ч.) растворяют в 1 мл дистиллированной во­ды (из расчета 0,6 мг на пробу). Реактив стабилен 4 нед при хранении в холодильнике.

4. Раствор 2,4-динитрофенилгидразина. 19,8 мг 2,4-динитрофенилгидра-зина растворяют в небольшом объеме 1 н раствора соляной кислоты при нагревании смеси на водяной бане. После охлаждения доводят объем 1 н раствором соляной кислоты до 100 мл. На следующий день ре­актив фильтруют. Раствор хранят в посуде из темного стекла, он годен к употреблению в течение года.

5. 0,4 н раствор едкого натра.

6. 1 н раствор соляной кислоты.

7. Стандартный раствор пировинограднокислого натрия. 11 мг кристалличес­кого пировинограднокислого натрия растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, переносят в мерную колбу емкостью 100 мл и доливают объем раствора до метки дистиллированной водой. 1 мл раствор содержит 110 мкг пирувата натрия, что соответствует 88 мкг пировиноградной кислоты. Рабочий стандартный раствор готовят разведением основного в 10 раз дистиллированной водой. В 1 мл рабочего раствора 8,8 мкг пировиноградной кислоты.

Ход определения. 0,1 мл сыворотки, разведенной 1:2, смешивают с 0,3 мл раствора НАД и прогревают 5 мин при 37° С. Затем добавляют 0,8 мл раствора пи фосфорнокислого нагрия и 0,2 мл раствора молочнокислого натрия, предварительно прогретых при 37°С. Смесь инкубируют при 37°С в течение 15 мин час же после инкубации в пробу доливают 0,5 мл раствора 2,4-динитpoфeнилгидразина и выдерживают ее 20 мин при комнатной температуре. Затем вносят 5мл раствора едкого натра, содержимое пробирки перемешивают и через 10 мин

измеряют абсорбцию в области длин волн 500—560 нм, например на ФЭКе с зеле­ным светофильтром в кювете с толщиной слоя 10 мм. Регистрируют показатели оптической плотности исследуемой пробы, учитывая абсорбцию контрольной.

Контрольную пробу ставят так же, как опытную, но разведенную 1:2 сыво­ротку добавляют после инкубации смеси. Рассчитывают активность фермента по калибровочному графику. Активность лактатдегидрогеназы выражают в ммоль пировиноградной кислоты, образовавшейся при инкубации 1 л сыво­ротки в течение 1 ч при 37°С.

Чтобы получить данные для построения калибровочного графика, необхо­димо сделать следующее. Из рабочего стандартного раствора пировиноград­нокислого натрия приготовить ряд разведений (табл.2). Затем в пробирки прилить по 0,5 мл раствора 2,4-динитрофенилгидразина. Далее стандартные пробы обработать так же, как опытные.

При постановке контрольной пробы в пробирку вносят 0,6 мл дистиллиро­ванной воды, 0,8 мл раствора пирофосфата и 0,5 мл раствора 2,4-динитрофе­нилгидразина. Далее пробу обрабатывают аналогично опытной.

Для нахождения показателей активности лактатдегидрогеназы в размерности «ммоль пировиноградной кислоты на 1 л сыворотки за 1 ч инкубации при 37°С» количество мкмоль пировиноградной кислоты в стандартной пробе умножают на коэффициент 120 или количество мкг пировиноградной кислоты — на 1,41.

Для выражения активности фермента в единицах новой размерности мож­но применять и другую формулу:

Активность лактатдегидрогеназы в ммоль/(ч • л) = С • 120: 88,

где С — количество мкг пировиноградной кислоты в пробе, 120 — коэффи­циент пересчета мкг пировиноградной кислоты в мг, 88 — фактор пересчета показателей из «мг» в ммоль.

При построении калибровочного графика на оси абсцисс откладывают значения активности фермента, выраженные в размерности, ммольДч • л) и представленные в последней графе таблице 33. Прямолинейная зависимость между концентрацией пировиноградной кислоты и оптической плотностью сохраняется от 0 до 10 ммоль/(ч • л).

Данные к построению калибровочного графика

Нормальные величины активности общей ЛДГ в сыворотке крови — от 0 8 до

1. Сыворотка крови не должна быть гемолизирована.

2. Для исследования лучше использовать свежую сыворотку.

3. Щавелевоуксусную плазму употреблять не рекомендуется, так как соли щавелевой кислоты ингибируют фермент.

Пользуясь данным методом, можно исследовать имочевина-стабильную фракцию ЛДГ.

Принцип метода основывается на свойстве мочевины почти на 100% инги-бировать активность ЛДГз. При параллельном определении активности общей ЛДГ рассчитывают процент содержания стабильной к мочевине фракции.

Реактивы. Те же, что и в предыдущем методе. Дополнительно используют раствор мочевины, приготовленный на 0,03 моль/л раствора пирофосфорно-кислого натрия (14,4 г мочевины вносят в 100 мл раствора пирофосфорнокис-лого натрия, рН 8,8).

Ход определения активности общей и мочевиностабильной фракции ЛДГ отличается такими особенностями:

1. В методике исследования активности мочевиностабильной фракции ЛДГ применяется раствор пирофосфата натрия, содержащий мочевину

2. При выполнении первого этапа метода 0,1 мл сыворотки, разведенной 1:2, тщательно смешивают с 0,08 мл раствора пирофосфорнокислого на­трия,содержащего мочевину, и с 0,3 мл раствора НАД. Преинкубацию проводят в течение 1 ч при + 25°С, закрыв пробирку крышкой. Затем в пробирку добавляют 0,2 мл раствора молочной кислоты и инкубиру смесь 15 мин при +37°С.

3.В методике определения общей активности ЛДГисключают этап пр варительного прогревания раствора при температуре 37°С и после сливания реактивов комнатной температуры сразу же приступают к инкубации смеси в течение 15 мин при температуре 37°С.

В остальном метод не отличается от описанного выше. Расчет сводите установлению процентного содержания мочевиностабильной ЛДГ по отношению к общей.

В нормемочевиностабильная ЛДГ состава 25-36% от общей ЛДГ.

источник

Для диагностики заболеваний ПЖ применяют следующие методы:
• исследование активности ферментов ПЖ в крови, моче;
• зондовые и беззондовые методы изучения экзокринной функции ПЖ;
• оценка инкреторной функции ПЖ (определение содержания С-пептида в крови, проба Штауба—Трауготта и др.);
• оценка трофической недостаточности.

Кроме того, для лабораторной диагностики заболеваний ПЖ используют иммунологические, генетические, цитологические, гистологические исследования, определение в крови уровня панкреатического полипептида, онкомаркёров СА 19-9, карциноэмбриональный антиген и др.

Первую футтпу диагностических тестов обычно используют для обнаружения феномена выхода (уклонения) ферментов в кровь, который возникает при деструкции паренхимы органа и повышении внутрипротокового давления.

Ферменты поступают в интерстициальную жидкость, лимфу и кровь, а позже — в мочу. Панкреатические ферменты проникают в кровь также из секреторных ходов и протоков ПЖ. Кроме того, происходит всасывание ферментов в проксимальных отделах тонкой кишки.

Плазма крови содержит а-амилазу двух изоэнзимных типов, продуцируемых ПЖ и слюнными железами (преимущественно околоушными):
• панкреатическую (р-тип);
• слюнную (s-тип).

Кроме того, амилолитическая активность обнаружена во многих тканях: тонком кишечнике, печени, почках, мышцах, лёгких, маточных трубах и жировой ткани. Это, однако, не означает, что все они синтезируют и транспортируют в кровь значительное количество амилазы. Доля амилолитической активности панкреатической а-амилазы составляет 30—50%. Р- и s-амилазы различны по физико-химическим свойствам, имеют разные почечные ктиренсы и периоды полураспада в организме (s-амилаза — 18 ч, р-амилаза — 124 ч).

Амилаза в крови находится в свободном (растворённом) и связанном с белками плазмы и форменными элементами состоянии.

Итак, определение активности амилазы в крови и моче — один из первых и наиболее распространённых биохимических методов диагностики панкреатитов. С 1908 г., когда Вольгемут разработал метод определения активности амилазы в биологических жидкостях, было предложено более двухсот методических приёмов проведения этого анализа.

Изоферменты амилазы измеряют во многих обычных лабораториях. Их определяют в сыворотке, моче или других биологических жидкостях при хроматографии, электрофорезе или изоэлектрическом фокусировании. Модификация амилазного теста — определение клиренсного отношения амилаза—креатинин, но этот тест требует сбора мочи в течение 24 ч. Результат выражают в процентах клиренсного отношения:Клиренсное отношение = (активность мочевой амилазы/активность сывороточной амилазы) X (сывороточный креатинин/мочевой креатинин) X 100

При ОП клиренсное отношение повышено, что можно объяснить увеличением активности панкреатического изофермента, имеющего больший клиренс (по сравнению с изоферментом s-тииа), и уменьшением канальцевой реабсорбции белков. Ввиду вариабельности изменений функций почек при ОП, ценность определения отношения клиренсов амилазы и креатинина вызывает серьёзные сомнения, и в практике этот метод широкого распространения не получил.

Существуют противоречивые сведения о стабильности а-амилазы: наряду с утверждением о том, что активность фермента стабильна при комнатной температуре в течение недели, есть данные о снижение её активности уже через несколько часов. Этим можно объяснить низкую восприимчивость метода. Невысокая чувствительность определения активности амилазы в крови и моче связана также с кратковременностью гиперамилаземии и гиперамилазурии при панкреатитах. Так, активность амилазы в крови начинает нарастать через 2— 12 ч от начала обострения заболевания, достигает максимума через 20—30 ч и при благоприятном течении заболевания нормализуется через 2—4сут.

Активность амилазы в моче начинает нарастать через 4—10 ч от начала заболевания, а через 8—10 ч уже может нормализоваться, но, как правило, сохраняется в течение 3 сут после подъёма.

В период обострения ХП активность амилазы в крови и моче может оставаться в пределах нормальных величин, так как у таких больных подъём активности фермента происходит на фоне исходно низкого уровня, связанного с фиброзом паренхимы ПЖ. При тяжёлом, прогрессирующем течении ОП или при обострении ХП активность амилазы может «истощаться» до нормальных и субнормальных величин. У 20% пациентов с ОП отмечают нормальные показатели активности амилазы сыворотки. Таким образом, по сывороточной активности амилазы невозможно определить тяжесть текущего обострения панкреатита и ближайший прогноз.

По данным литературы, определение активности амилазы в моче более информативно, чем в крови, так как гиперамилазурия более стойка, чем гиперамилаземия. Доступность получения мочи позволяет многократно повторять исследование и, следовательно, обнаруживать даже небольшой подъём показателя. Кроме того, вследствие различий в экскреции почками активность панкреатической изоамилазы в моче значительно выше, чем в крови.

Обострение XII сопровождается специфическим повреждением проксимальной части канальца нефрона, которое приводит к снижению реабсорбции и увеличению почечного клиренса, т.е. гиперамилазурия — результат гиперамилаземии и подавления канальцевой реабсорбции. Как уже отмечено, на этом основано определение соотношения клиренсов амилазы и креатинина. Более чувствительным, чем амилазурический тест, считают вычисление дебитовуроамилазы, когда исследуют мочу, собранную через определённые промежутки времени (до и после пищевой нагрузки). Чувствительность этих дебитов при ХП составляет 49-73%.

Для повышения чувствительности исследования активности амилазы в крови и моче необходимо проводить его в первые сутки пребывания больных ХП в стационаре, не менее двух раз после инструментальных исследований, а также в момент усиления болевого абдоминального синдрома. При этом чувствительность теста повышается с 40 до 75-85%.

Интерпретация результатов определения активности амилазы в крови и моче затруднена ещё и тем, что фермент содержат слюнные железы, толстая кишка, скелетные мышцы, почки, лёгкие, яичники, маточные трубы, следовательно, можно определять амилолитическую активность в молоке, слюне, слёзной жидкости и поте. Таким образом, возможно повышение её уровня в биологических жидкостях вследствие внепанкреатических причин (табл. 2-8): при перфорации язвы, кишечной непроходимости, перитоните, тромбозе брыжеечных сосудов, холецистите, холангите, паротите, почечной недостаточности, внематочной беременности, остром аппендиците, раке лёгких, диабетическом ацидозе, феохромоцитоме; после операций по поводу пороков сердца, резекции печени; при употреблении препаратов опия, сульфаниламидов, тиазидных диуретиков, оральных контрацептивов.

Для повышения специфичности гиперамилаземии предложено считать диагностически значимым повышение активности фермента в 3—6 раз. Однако патогномоничной для панкреатита активности фермента в крови не существует. Вследствие значительного запаса фермента в ацинарных клетках любое нарушение их целостности или малейшее затруднение оттока секрета ПЖ приводит к значительному выходу амилазы в кровь даже при легком течении панкреатита.

Для повышения специфичности исследования активности фермента в крови следует определять не суммарное его содержание, а панкреатическую фракцию. У здоровых людей р-амилаза составляет до 40% общей сывороточной амилазы, остальные 60% представлены слюнным изоферментом. При панкреатитах это соотношение изменяется: активность панкреатической изоамилазы составляет 75—80% активности общей амилазы крови. Определение активности р-амилазы особенно важно больных с ХП и нормальной активностью общей амилазы.

Повышение показателя указывает на обострение ХП, а снижение — на экзокринную недостаточность ПЖ, связанную с атрофией ацинарной ткани и фиброзом органа у больных, перенёсших ряд атак. Специфичность определения активности панкреатической амилазы при ХП не превышает 88,6%, чувствительность — 40—96,9%.

источник

α‑Амилаза (диастаза, 1,4‑a‑D‑глюкангидролаза, КФ 3.2.1.1.) катализирует гидролиз α‑1,4‑глюкозидных связей крахмала, гликогена и родственных им полисахаридов до мальтозы, декстринов и других полимеров. Молекулярная масса фермента около 48000 Д. В состав молекулы входит атом кальция, который не только активирует фермент, но и защищает его от действия протеиназ, активность амилазы возрастает при влиянии ионов хлора. В крови она представлена двумя изоферментами: панкреатическим — P‑тип и слюнным — S‑тип, каждый из которых делится на несколько фракций. Изофермент S‑типа составляет в целом 45‑70% (в среднем 57%), остальное приходится на долю P‑типа. Оба изофермента имеют почти идентичные каталитические и иммунологические свойства, незначительно отличаются по электрофоретической подвижности, но хорошо разделяются при гель‑фильтрации на ДЭАЭ‑сефадексе. Существует также макроамилаза, которая не выделяется почками, но может встречаться в сыворотке крови в норме (около 1 % здоровых людей) и патологии (2,5 %).

Высокая активность амилазы наблюдается в околоушной и поджелудочной железах. Вместе с тем, ее активность, хотя и намного ниже, обнаруживается в толстом и тонком кишечнике, скелетных мышцах, печени, почках, легких, фаллопиевых трубах, жировой ткани. В крови фермент связан как с белками плазмы крови, так и с форменными элементами. Активность фермента одинакова у мужчин и у женщин и не зависит от характера принимаемой пищи и времени суток.

Существующие методы изучения активности a‑амилазы в биологических жидкостях делятся на две большие группы:

1. Сахарифицирующие (редуктометрические), основанные на исследовании образующихся из крахмала сахаров по редуцирующему действию глюкозы и мальтозы.

2. Амилокластические , базирующиеся на определении остатка нерасщепленного крахмала:

• по степени интенсивности его реакции с йодом. Эти методы более чувствительны и специфичны, но точность их во многом зависит от качества крахмала и оптимизации условий определения.
• по вязкости суспензии крахмала, не отличаются высокой точностью и сейчас не применяются.

3. Методы с применением хромогенных субстратов –– основаны на использовании комплексов субстрат‑краситель, которые под действием α‑амилазы распадаются с образованием водорастворимого красителя.

4. Методы, основанные на сопряженных ферментативных реакциях :

Крахмал + Н₂О Мальтоза + Мальтотриоза + Декстрин

Мальтоза + Н₂О 2 Глюкоза

Глюкоза + АТФ Глюкозо‑6‑Ф + АТФ

Глюкозо‑6‑Ф+НАДФ Глюконат‑6‑Ф + НАДФН

Активность фермента устанавливается по скорости накопления НАДФН.

В качестве унифицированных утверждены два амилокластических метода: Каравея (со стойким крахмальным субстратом) и Смита‑Роэ.

α‑Амилаза катализирует гидролиз нерастворимого цветного крахмального субстрата с образованием синего, растворимого в воде красителя. Количество освобожденного красителя пропорционально каталитической активности фермента.

Повышение активности фермента происходит главным образом при заболеваниях поджелудочной железы. При остром панкреатите активность в крови и моче возрастает в 10‑30 раз. Гиперамилаземия наступает в начале заболевания, достигает максимума к 12‑24 ч, затем снижается и приходит к норме на 2‑6 день. Однако при тотальном панкреонекрозе может не отмечаться повышение активности амилазы. Возрастание активности фермента выявляется при беременности, почечной недостаточности, кишечной непроходимости, заболеваниях желчных путей, диабетическом кетоацидозе, некоторых опухолях легких и яичников, поражении слюнных желез. Выявление повышенного количества изоферментов P‑ или S‑типа не патогномонично для какого‑либо заболевания.

Низкие уровни фермента в сыворотке крови не имеют существенного значения.

источник