Проба мочи с азотной кислотой

Схема качественного определения белка в моче с помощью проб с сульфасалициловой кислотой (а) и азотной кислотой (б).

На рис. 1, б стрелкой показано белое кольцо преципитации белка

Метод разведения Брандберга-Робертса-Стольникова

Метод основан на количественной оценке результатов пробы с азотной кислотой (кольцевой пробы Геллера — см. выше).

Ход определения белка такой же, как и при этой качественной реакции.

Считается, что появление тонкого белого кольца на границе азотной кислоты и мочи (рис. 1, б) на 2–3-й минуте указывает на наличие белка в моче в концентрации 0,033 г/л.

Если кольцо появляется раньше 2 мин, мочу разводят в 2 раза и снова повторяют исследование.

Если и на этот раз кольцо появляется раньше 2 мин, мочу снова разводят в 2, 4, 8 и т. д. раз, пока тонкое белое кольцо не появится на 2–3-й минуте.

Искомую концентрацию белка в моче вычисяют, умножая 0,033 г/л на степень разведения.

Метод основан на возникновении помутнения мочи при коагуляции белка сульфосалициловой кислотой.

Интенсивность помутнения пропорциональна концентрации белка.

В градуированную пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, добавляют до 5 мл 3% раствор сульфосалициловой кислоты и перемешивают.

Через 5 минут измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 590–650 нм против контроля в кювете с толщиной слоя 0,5 см.

Метод основан на свойстве белка давать с сернокислой медью и едкой щелочью так называемый биуретовый комплекс фиолетового цвета.

Интенсивность окраски, количественно определяемая на фотоэлектроколориметре, пропорциональна концентрации белка.

Определение суточной протеинурии.

При заболеваниях почек, сопровождающихся протеинурией, уровень выделения белка с мочой в течение суток колеблется в широких пределах.

Поэтому в клинической практике выраженность протеинурии принято оценивать по суточной потере белка с мочой (суточной протеинурии).

В 8 ч утра пациент мочится в унитаз, после чего всю выделенную в течение суток (до 8 ч следующего дня) мочу собирают в отдельную емкость объемом 3 литра.

Затем измеряют общее количество мочи, тщательно размешивают ее и наливают в отдельную банку емкостью 150–200 мл.

В этой порции мочи определяют концентрацию белка по одному из методов, описанных выше.

Суточную протеинурию (в граммах) рассчитывают по формуле:

где Р_с— суточная протеинурия (в граммах); Р — концентрация белка в суточной моче (г/л); V — суточный диурез.

У здорового человека в разовой порции мочи при использовании перечисленных выше методов белок не определяется.

Выделение белка с мочой (протеинурия) имеет важное диагностическое значение.

Даже следы белка (0,033 г/л), обнаруженные в разовой порции мочи, требуют уточнения причин протеинурии.

1. преренальную протеинурию, обусловленную усилением распада белка тканей (опухоли, ожоги, массивный гемолиз эритроцитов и т. п.);

2. ренальную протеинурию, связанную с патологией почек;

3. постренальную протеинурию, вызванную патологией мочевыводящих путей, и чаще всего связанную с воспалительной экссудацией (заболевания мочевого пузыря, мочеиспускательного канала, половых органов).

В практическом отношении важно отличать ренальную и постренальную формы протеинурии.

Постренальная форма протеинурии сопровождается появлением в моче большого количества лейкоцитов или эритроцитов.

При ренальной форме протеинурии в моче обычно присутствуют цилиндры.

Почечная (ренальная) протеинурия обусловлена повышением проницаемости клубочкового фильтра и уменьшением реабсорбции профильтровавшегося белка в почечных канальцах.

Различают функциональную (физиологическую, доброкачественную) и патологическую (органическую) почечную протеинурию.

Функциональная почечная протеинурия

Функциональная почечная протеинурия обусловлена временным преходящим увеличением фильтрации белков сыворотки крови в ответ на сильные внешние раздражения (необычные статические и динамические нагрузки, повышенная мышечная работа, лихорадка, интоксикация) и не связана с поражением почек и мочевыводящих путей.

Функциональная протеинурия вызвана замедлением почечного кровообращения или преходящим нарушением проницаемости клубочковых капилляров в результате вторичного токсико-инфекционного поражения (О. Шюк).

Следует помнить о нескольких наиболее распространенных вариантах функциональной почечной протеинурии:

1. Ортостатическая (юношеская) протеинурия выявляется у здоровых молодых лиц астенического телосложения с лордозом поясничного отдела позвоночника.

Она появляется при длительном нахождении в вертикальном положении и исчезает в горизонтальном положении.

2. Рабочая (маршевая) протеинурия, появляющаяся после тяжелой физической нагрузки.

3. Лихорадочная протеинурия, возникающая при различных заболеваниях, сопровождающихся повышением температуры тела.

Такая протеинурия исчезает после нормализации температуры.

4. Алиментарная протеинурия (после обильной белковой пищи).

5. Пальпаторная протеинурия (после продолжительной пальпации почек).

6. Эмоциональная протеинурия — при значительном психоэмоциональном напряжении.

Функциональная почечная протеинурия, как правило, не превышает 1,0 г/л и исчезает после устранения причин, ее вызвавших.

Во всех случаях обнаружения белка в моче необходимо тщательное обследование больного для исключения органических заболеваний почек, сопровождающихся патологической протеинурией.

Патологическая почечная протеинурия является одним из наиболее важных признаков органического поражения клубочкового аппарата и почечных канальцев.

Наиболее частыми причинами патологической почечной протеинурии являются:

1. острый и хронический гломерулонефрит;

2. острый и хронический пиелонефрит;

4. застойная недостаточность крвообращения;

7. гипертоническая болезнь;

8. системные заболевания соединительной ткани с поражением почек;

9. геморрагический васкулит;

11. анафилактический шок и другие причины.

Особенно значительной протеинурия бывает при нефротическом синдроме.

При нефротическом синдроме концентрация белка в моче достигает 3–10 г/л.

У больных с заболеваниями почек протеинурия усиливается при:

1) выполнении физической нагрузки;

2) длительном нахождении в вертикальном положении;

Селективность протеинурии — это способность клубочкового фильтра пропускать молекулы белка плазмы в зависимости от его молекулярной массы.

При умеренном повреждении фильтрующей мембраны в моче преобладают низкомолекулярные белки (альбумины), тогда как белки с большой молекулярной массой (глобулины и др.) составляют небольшое количество. В этих случаях говорят о высокой селективности (избирательности) протеинурии.

Наоборот, при тяжелых поражениях почек селективность протеинурии снижается, и в моче появляются крупномолекулярные белки (например g-глобулины. В этих случаях качественный состав белков мочи приближается к белковому составу плазмы.

Таким образом, низкая селективность протеинурии свидетельствует о более тяжелом поражении клубочковых капилляров.

В моче здорового человека глюкоза отсутствует, за исключением тех редких случаев, когда преходящая, кратковременная и незначительная глюкозурия вызвана избыточным употреблением в пищу простых углеводов или внутривенным введением концентрированного раствора глюкозы.

Во всех остальных случаях глюкозурию следует расценивать как явление патологическое.

Патологическая глюкозурия может быть обусловлена:

1. превышением определенного критического уровня глюкозы в крови (примерно 8,8–9,9 ммоль/л) в связи с ограниченной способностью канальцев почек реабсорбировать глюкозу;

2. увеличением фильтрации глюкозы в клубочках почек вследствие их повреждения;

3. снижением реабсорбции глюкозы в проксимальных отделах почечных канальцев за счет первичного или вторичного их повреждения.

Глюкозурия может выявляться как при повышенном, так и при нормальном уровне глюкозы в крови.

Существуют качественные и количественные способы выявления (определения) глюкозы в моче.

Проба Гайнеса основана на способности глюкозы при нагревании в щелочной среде восстанавливать гидрат окиси меди (синего цвета) в гидрат закиси меди (желтого цвета) и закись меди (красного цвета).

Для проведения реакции в пробирку наливают 4 мл реактива Гайнеса (смесь растворов сернокислой меди, едкого натра и глицерина), добавляют к нему 8–12 капель мочи и нагревают верхнюю часть пробирки на пламени горелки до кипения (нижняя часть пробирки служит своеобразным контролем) (рис. 2).

При наличии в моче глюкозы в верхней части пробирки появляется желтая или красная окраска жидкости, а в нижней части — осадок коричнево-зеленоватого цвета.

Рисунок 2. Схема качественного определения глюкозы в моче (проба Гайнеса)

Определение глюкозы с помощью индикаторных полосок.

Метод основан на окислении глюкозы специфическим ферментом глюкозооксидазой с образованием перекиси водорода, которая в присутствии пероксидазы разлагается и окисляет специальный краситель.

Бумажные полоски, пропитанные глюкозооксидазой, пероксидазой и красителем опускают в пробирку с мочой, сразу вынимают и оставляют на 2 минуты на пластмассовой пластинке.

При наличии в моче глюкозы полоски окрашиваются в синий цвет, интенсивность которого соответствует концентрации глюкозы.

Сравнивая окраску с прилагаемой к набору стандартной цветовой шкалой можно ориентировочно определить содержание глюкозы в моче.

Глюкозооксидазный метод, принцип которого описан выше, дает более точные результаты определения концентрации глюкозы в моче.

В результате реакции образуется окрашенное вещество, интенсивность окраски колориметрируют и по калибровочной кривой, построенной на основании определений стандартных растворов глюкозы, рассчитывают ее содержание в моче.

Кетоновые тела (ацетон, ацетоуксусная и b-оксимасляная кислоты) являются промежуточными продуктами углеводного и жирового обмена. В норме, образуясь в небольшом количестве из ацетил-КоА, они почти полностью утилизируются в цикле трикарбоновых кислот (цикле Кребса).

При сахарном диабете и голодании усиливается утилизация жиров с образованием большого количества ацетил-КоА, который вследствие нарушений углеводного обмена не утилизируется и не используется в цикле трикарбоновых кислот.

В результате увеличивается содержание кетоновых тел, которые выделяются с мочой.

Кетоновые тела обладают выраженным токсическим действием на ЦНС .

Поэтому определение кетоновых тел в моче имеет важное диагностическое значение.

Проба основана на свойстве натрия нитропруссида реагировать в щелочной среде с кетоновыми телами с образованием комплексных соединений, окрашенных в красно-фиолетовый цвет.

В пробирку с 3–5 мл мочи добавляют 5–10 капель свежеприготовленного 10% раствора натрия нитропруссида и 0,5 мл концентрированной уксусной кислоты и смешивают их.

После этого осторожно по стенке пробирки наслаивают 2–3 мл 25% раствора аммиака.

Если в течение 3 минут на границе двух жидкостей получается красно-фиолетовое кольцо, пробу считают положительной (рис. 3).

Рисунок 3. Схема качественного определения кетоновых тел в моче (проба Ланге). Красной стрелкой показано красно-фиолетовое кольцо, появляющееся на границе мочи и раствора аммиака

Проба основана на том же принципе образования окрашенных соединений, что и проба Ланге.

В пробирке смешивают 200 мг сухого аммония сульфата, 5 капель мочи и 2 капли раствора натрия нитропруссида.

На эту смесь осторожно наслаивают 10–15 капель водного раствора аммиака.

Фиолетово-красное кольцо на границе двух сред свидетельствует о наличии в моче кетоновых тел.

Причем интенсивность окраски кольца пропорциональна концентрации кетоновых тел в моче.

В клинической практике получили распространение также различные модификации экспресс-анализа кетоновых тел в моче, например с помощью таблеток или полосок бумаги, содержащих все необходимые для реакции компоненты.

На таблетку наносят 2 капли мочи и через определенное время, указанное в инструкции, сравнивают интенсивность фиолетового окрашивания с цветной шкалой, соответствующей различной концентрации кетоновых тел в моче.

В норме методами, описанными выше, кетоновые тела не обнаруживаются.

Наиболее частыми причинами кетонурии являются:

1. диабетический кетоацидоз;

2. длительное голодание (так называемая кетонемическая гипогликемия);

4. несбалансированное безуглеводное питание (строгое ограничение углеводов при нормальном потреблении жиров);

5. состояния, связанные с повышенным метаболизмом (высокая лихорадка, тяжелый тиреотоксикоз и др.).

У здорового человека методами, используемыми в клинике, билирубин в моче не обнаруживается.

Появление билирубина в моче (билирубинурия) — всегда явление патологическое.

Оно связано с проникновением через почечный барьер связанного (прямого) билирубина (билирубин-глюкуронида).

Несвязанный (непрямой) билирубин не проходит через неповрежденный почечный фильтр, так как адсорбирован белком (альбумином).

В клинической практике широко применяются качественные пробы на билирубин.

Большинство из них основаны на его окислении йодом или азотной кислотой с образованием биливердина, окрашенного в зеленый цвет.

Йодная проба (проба Розина).

В качестве окислителя используется раствор Люголя или 1% спиртовой раствор йода. В пробирку с 3–4 мл мочи осторожно по стенке наслаивают 1–2 мл 1% спиртового раствора йода или раствора Люголя.

При наличии билирубина в моче на границе между двумя жидкостями образуется зеленое кольцо.

Билирубинурия выявляется при двух видах желтух (паренхиматозной и обтурационной).

Определение уробилина в моче

Уробилиновые тела (уробилиноиды) являются промежуточными продуктами пигментного обмена.

Они представлены, главным образом, уробилиногеном (мезобилиногеном) и стеркобилиногеном.

В норме уробилиноиды в моче представлены следами стеркобилиногена (около 4 -6 мг/с) и не обнаруживаются обычными качественными пробами.

Проба с сульфатом меди (проба Богомолова)

Проба основана на взаимодействии уробилина с сульфатом меди, что приводит к образованию соединений, окрашенных в красновато-розовый цвет.

К 10–15 мл мочи приливают 2–3 мл насыщенного раствора сульфата меди.

При помутнении раствора в него добавляют несколько капель концентрированной соляной кислоты, через 5 мин добавляют 2–3 мл хлороформа, закрывают пробирку и встряхивают ее.

Если хлороформ окрашивается в розовый цвет, то концентрация уробилина в моче превышает норму.

Чувствительная проба для выявления уробилиноидов.

При взаимодействии уробилина и соляной кислоты образуется соединение, окрашенное в красновато-розовый цвет.

К 10 мл мочи добавляют 3–4 капли концентрированной серной кислоты, смешивают, приливают 2–3 мл эфира и, плотно закрыв пробирку пробкой, осторожно смешивают, не взбалтывая.

В другую пробирку наливают 2 мл концентрированной соляной кислоты.

Пипеткой отсасывают из первой пробирки эфирную вытяжку и наслаивают ее на соляную кислоту.

На границе двух жидкостей при наличии уробилина образуется розовое кольцо, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации уробилина.

В норме описанными выше способами уробилин в моче не определяется, хотя иногда при проведении достаточно чувствительной пробы Флоренса на границе между двумя жидкостями можно заметить легкое розовое окрашивание.

Выделение уробилиноидов с мочой обнаруживают при следующих патологических заболеваниях и синдромах:

1. при паренхиматозной желтухе (преимущественно за счет мезобилиногена, не разрушающегося в печени);

2. при гемолитической желтухе (преимущественно за счет стеркобилиногена, в существенно большем количестве образующегося при усиленном распаде эритроцитов);

3. при заболеваниях кишечника, сопровождающихся усиленной реабсорбцией стеркобилиногена в кишечнике (энтероколиты, запоры, кишечная непроходимость).

источник

Основные процессы мочеобразования: клубочковая фильтрация и диффузия, канальцевая реабсорбция и секреция.

Функциональная деятельность почек обусловливает поддержание кислотно-основного состояния и регуляцию электролитного и водного баланса организма, регуляцию осмотического состояния крови и тканей, способствует сохранению гомеостаза.

Состав мочи: вода, продукты обмена, электролиты, микроэлементы, гормоны, витамины, спущенные клетки канальцев и слизистой мочевыводящих путей, лейкоциты, соли, слизь.

Справа описание: на прохождение молекул через клубочковый фильтр оказывают влияние размер пор мембраны, величина молекул веществ, находящихся в плазме, электрический заряд молекул и клеток тканей, скорость кровотока и др.

Состав первичной мочи: все небелковые низкомолекулярные части плазмы крови, той же концентрации, что и плазма, белки ММ менее 70 кD (≈50 мг в сутки). Относительная плотность первичной мочи 1,010, рН 7,4.

Функции почечных канальцев

Реабсорбция и секреция → формирование конечной мочи.

Реабсорбция — активный транспорт веществ через мембрану почечного эпителия с помощью переносчиков (ферменты, фосфолипиды, белки). Активность ферментов и их локализация определяют «порог» (возможности клетки) реабсорбции веществ и участок канальца, где происходит реабсорбция. В проксимальных канальцах реабсорбируются белок, аминокислоты, глюкоза, витамины, электролиты и около 80% воды.

Дистальные канальцы и собирательные трубки обеспечивают поддержание КОС (секреция Н + и аммиака в обмен на Nа), водно-электролитного баланса, (концентрация ионов К+, Nа+, Са2+, Мg2+, С1-, НРО₄ 2 — в крови).

Через обе почки в 1 мин проходит 1000-1300 мл крови.

У новорожденных — низкая фильтрационная способность (20-40% взрослого) и неполноценность функции канальцев → повышенная концентрация мочи. После 40 лет функции почек подвергаются инволюции.

Ø с преимущественным поражением клубочков (острый и хронический гломерулонефрит, нефроангиосклероз, нефроз)

Ø с преимущественным поражением почечных канальцев (острый и хронические пиелонефрит, острая и хроническая почечная недостаточность любой этиологии)

Могут быть бессимптомными в течение длительного времени или проявляться атипично (сокращение массы нефронов более чем на 60% дает клинические проявления).

Проводится в течение 2-х минут по следующим параметрам: рН, относительная плотность, белок, глюкоза, кетоны, билирубин, уробилин, нитриты, лейкоциты,эритроциты (лизированные) с помощью тест-полосок на специальных анализаторах.

При наличии патологических отклонений – расширение спектра исследований (микроскопия, бактериологический посев и т.д.).

v первичная информация о состоянии почек

v наблюдение за течением заболеваний и мониторинг терапии

Материал для анализа: вся утренняя порция мочи в чистую, сухую посуду. Консервация клеточных элементов — к 100-150 мл мочи можно добавить кристаллик тимола.

Количество мочи (диурез) определяют с помощью градуированного цилиндра. Норма в сутки у здорового взрослого человека 1000 — 2000 мл. Зависит от количества принятой жидкости, выделительной функции почек и водного обмена.

Полиурия: Повышение суточного диуреза более 2 литров.

у здоровых лиц при употреблении большого количества жидкости, арбузов, фруктов

экстраренальные факторы (схождение отеков, сахарный и несахарный диабете).

В норме дневной диурез больше ночного (соотношение 4:1 или 3:1).

Никтурия — увеличение выделения мочи ночью (нарушение функции почек, начальные стадии декомпенсации сердечной деятельности)

Редкое мочеиспускание (олакизурия) — физиологическое явление в первые дни после рождения. Частое мочеиспускание (физиологическая полакизурия) — при приеме больших количеств жидкости.

Количество выделяемой мочи

Олигурия — суточный диурез менее 500 мл.

Ø У здоровых при недостаточном приеме жидкостей, обильном потоотделении

Ø задержка жидкости в тканях при нарушении сердечной деятельности

Ø острая недостаточность выделительной функции почек (острый гломерулонефрит).

Анурия — полное прекращение выделения мочи.

Ø Почечные — нарушение образования мочи в клубочках с развитием ОПН (истинная анурия)

Ø Внепочечные -закупорка мочевыводящих путей камнем, сдавление опухолью и др. (неистинная анурия).

Цвет мочи: норма соломенно-желтый.

Зависит от содержания урохромов и др. веществ.

v в зависимости от количества выделившейся мочи, употребление в пищу красящих продуктов, некоторых медикаментов.

Изменение цвета мочи при патологии:

острый гломерулонефрит — цвет «мясных помоев» (примесь крови и белка)

желтуха — цвет пива (желчные пигменты)

внутрипочечный гемолиз – черный (гемоглобинурия)

пиурия, липурия — молочно-белый.

Прозрачность — в норме полная.

При стоянии мочи в сосуде в ней образуется легкая мутность (облачко).

высокое содержание солей (исчезновение помутнения при нагревании свидетельствует о наличии уратов, увеличение — фосфатов, исчезновение при добавлении соляной кислоты — оксалатов, щелочи — кристаллов мочевой кислоты),

наличие большого количества клеток -лейкоциты, бактерии

Запах мочи в норме нерезкий специфический (зависит от минимальных количеств летучих жирных кислот).

При бактериальном разложении на воздухе или внутри мочевого пузыря (цистит, рак мочевого пузыря) моча приобретает аммиачный запах (аналогично при стоянии нормальной мочи).

В результате гниения мочи, содержащей белок, кровь или гной, при раке мочевого пузыря моча приобретает запах тухлого мяса.

При тяжелом сахарном диабете моча имеет фруктовый запах, обусловленный присутствием кетоновых тел.

РН мочи в норме при смешанной пище 4,5-8,4, в среднем 6.

Ø ориентировочно лакмусовой бумажкой (при стоянии меняется)

в зависимости от пищевого рациона: (при овощной диете преимущественно щелочная, при мясной диете – кислая).

кислая при лихорадочных состояниях, сахарном диабете, почечной недостаточности

щелочная реакция при хронических инфекциях мочевыводящих путей, после неукротимой рвоты и поносов.

Относительная плотность мочи (удельный вес) определяет концентрационную функцию почек и зависит от диуреза, концентрации растворенных в ней веществ: мочевины, мочевой кислоты, креатина, солей, электролитов.

v Осмоляльность мочи методом криоскопии

(по точке замерзания) – сложно для КЛД

v относительная плотность мочи (напрямую связана с осмоляльностью)

В норме колебания относительной плотности 1,005-1,028. Утренняя порция мочи 1,020—1,024.

Определение относительной плотности мочи

Химическое исследование мочи

Белок в норме отсутствует

Принцип методов определение белка: коагуляция при нагревании и добавлении кислот.

Ø абсолютная прозрачность, в противном случае необходимо предварительное фильтрование

Ø кислая реакция (щелочная моча подкисляется 2—3 каплями 5—10% уксусной кислоты под контролем индикаторной бумаги).

Качественные реакции на белок

1. Проба с сульфосалициловой кислотой считается чувствительной:

2-3 мл мочи + 2-3 кп 20% сульфосалициловой кислоты. Наличие белка — помутнение.

1. Проба с кипячением: 3 мл мочи + 2—3 кп уксусной кислоты + 2-3 кп насыщенного раствора поваренной соли, кипятят 30 сек. Наличие белка — помутнение.
2. Проба Геллера: 1 мл 50% раствора азотной кислоты в пробирку + осторожно по стенке наслаивают мочу. Наличие белка — на границе образуется белое кольцо.
3. Индикаторные полоски («Альбуфан»и др.).

Количественное определение белка в моче

1. Метод Робертса—Стольникова—Брандберга. В основе проба Геллера — наслоение мочи на азотную кислоту. Появление тонкого белого кольца на 2-3 мин — наличие 0,033 г/л белка в моче. Если раньше 2 мин. мочу разводят водой, подбирая нужное разведение. Расчет — умножают 0,033 г/л на степень разведения.
2. Метод с сульфосалациловой кислотой. Принцип метода: помутнение с сульфосалициловой кислотой, замер на ФЭК. Расчет по калибровочному графику.
3. Экспресс-метод с помощью тест-полосок. Используют при массовых осмотрах населения.

Ø Органическая – при паренхиматозных заболеваниях почек, когда повышается проницаемость гломерул для белка и нарушается его реабсорбция вследствие поврежденного нефрона.

Ø Функциональная — без органических изменений в почках, вследствие расширения пор почечного фильтра или замедления тока крови в клубочках, возникающих при сильных внешних раздражениях, стрессе, лихорадке, физических нагрузках.

1. Внепочечная — при попадании в мочу белка из мочевыводящих и половых путей.

Количество белка при функциональных и внепочечных протеинуриях обычно бывает меньше 1 г/л.

Определение суточной потери белка. Измеряется количество мочи, выделенной за сутки и определяется концентрация белка.

Слабая или минимальная протеинурия – до 3 г/сут, массивная – свыше 3 г/сут.

Определение глюкозы в моче

Норма – нет (следы сахара, не обнаруживаемые обычными качественными реакциями).

Качественные реакции на глюкозу в моче:

1. Проба Гайнеса: 3 мл реактива Гайнеса (смесь растворов сернокислой меди, едкого натра и глицерина) + 8-12 кп мочи, нагреть верхнюю часть смеси до кипения. Переход голубого цвета в желтый, затем красный→ глюкоза есть
2. Проба Ниландера: 2 мл мочи + 1,5 мл реактива Ниландера (смесь 2 г азотнокислого висмута с 4 г сегнетовой соли, растворенной в 10% растворе едкого натра), кипятят 2-3 мин. Появляется коричневый осадок → глюкоза есть
3. Экспресс-метод (глюкозооксидазная проба). «Глюкотест» ( пропитанная раствором ферментов (глюкозооксидазы и пероксидазы) и ортотолуидином индикаторная полоска). Изменение цвета → глюкоза есть.

Количественное определение глюкозы в моче

1. Поляриметрический метод. Основан на свойстве глюкозы, вращать плоскость поляризованного луча поляриметра вправо, причем угол отклонения луча пропорционален содержанию глюкозы в моче. Требования к материалу: полная прозрачность, кислая реакция, отсутствие белка (мочу подкисляют слабой уксусной кислотой, перемешивают, кипятят и фильтруют).
2. Колориметрический метод Альтгаузена. Основан на появлении цветной реакции при нагревании глюкозы со щелочью: 4 мл мочи смешивают с 1 мл 10% раствора едкого натра и кипятят в пробирке 1 минуту. Через 10 минут после кипячения цвет жидкости сравнивают с цветной шкалой Альтгаузена (каждый цветовой оттенок соответствует содержанию глюкозы).
3. Экспресс-метод тест полосками — Глюкотест, Глюкофан и др. – сравнивают со стандартной шкалой, выражающей содержание сахара в % и ммоль/л.

Глюкозурия — появление сахара. Возникает при повышении концентрации глюкозы в крови выше 9,9 ммоль/л (почечный порог реабсорбции глюкозы).

Ø при употреблении с пищей большого количества углеводов (алиментарная),

после приема кофеина, кортикостероидов, волнения, стресса.

Ø при сахарном диабете, тиреотоксикозе, патологии гипофиза (синдром Иценко—Кушинга), циррозе печени.

Почечная (ренальная) глюкозурия – следствие нарушения реабсорбции глюкозы в канальцах почек (уровень глюкозы в крови может быть даже снижен!). Первичная — при врожденной недостаточности почечного фильтра, вторичная — при ХГН, нефротическом синдроме, ОПН.

Определение кетоновых (ацетоновых) тел в моче.

Кетоновые тела — ацетон, ацетоуксусная и бетаоксимасляная кислоты.

Обнаружение кетоновых тел в моче — кетонурия.

Качественные реакции на кетоновые тела:

1. Проба Ланге. 10 мл профильтрованной мочи + 0,5 мл свежеприготовленного 10% раствора нитропруссида натрия + 0,5-1 мл концентрированной уксусной кислоты, осторожно наслаивают несколько мл 25% раствора аммиака. Положительная реакция — фиолетовое кольцо.

1. Экспресс-анализ — таблетки «Реагент», тест-полоски (принцип тот же).

Кетонурия появляется при сахарном диабете, нарушении обмена веществ, токсикозах, голодании, рвоте, поносах.

Определение желчных пигментов в моче

Билирубин в норме нет. Качественные пробы основаны на превращении билирубина под воздействием окислителей (йода, азотной кислоты) в биливердин зеленого цвета.

1. Проба Розина: 2-3 мл мочи + наслаивают 1% спиртовой раствор йода. Зеленое кольцо — при наличии билирубина.
2. Проба Фуше: 10 мл мочи + 5 мл 15% раствора хлорида бария, фильтруют. На фильтр + 1-2 кп реактива Фуше (100 мл 25% раствора трихлоруксусной кислоты и 10 мл 10% раствора полуторахлористого железа). На фильтре — сине-зеленые пятна (при наличиии билирубина).

Билирубинурия — при печеночной и подпеченочной желтухах, когда в крови повышается содержание билирубин-глюкуронида

Уробилиноиды: уробилиногены (уробилины) и стеркобилиногены (стеркобилины).

Качественные пробы на уробилиноиды:

1. Проба Богомолова: 10—15 мл мочи + 2—3 мл насыщенный раствор сульфата меди, ч/з 5 мин+ 2-3 мл хлороформа, взболать. Розово-красное окрашивание (при наличии).
2. Проба Флоранса: 6-10 мл мочи, подкисленной 8-10 кп HCl, + 2-3 мл диэтилового эфира. Эфирный слой отобрать, наслоить на 2-3 мл конц. HCl. Красное кольцо (при наличии уробилина).

Проба положительна у здоровых! Используется для установления факта полного отсутствия в моче уробилиновых тел.

Уробилинурия — при паренхиматозных поражениях печени гемолитических анемиях, некоторых заболеваниях кишечника (энтериты, запоры, кишечная непроходимость)

Микроскопическое исследование осадка мочи

Организованный осадок: эритроциты, лейкоциты, эпителиальные клетки и цилиндры.

Неорганизованный осадок: состоит из кристаллических и аморфных солей.

Основные методы микроскопического исследования:

Ориентировочный метод исследования организованного осадка мочи

Утреннюю мочу отстаивают 1—2 часа, набирают осадок, центрифугируют в течение 5 минут при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, каплю осадка помещают на предметное стекло и покрывают покровным и микроскопируют, сначала под малым, затем под большим увеличением. Элементы организованного мочевого осадка — эритроциты, лейкоциты, эпителиальные клетки и цилиндры — выражают их количество в поле зрения

Пластиковый слайд-планщет для микроскопии

Обеспечивает монослойное расположение клеток. Объем 9 окружностей

0,1 мкл. Позволяет подсчитать количество клеток в единице объема

В норме — единичные эритроциты в препарате у женщин, у мужчин – отсутствуют.

Выделение эритроцитов с мочой — гематурия. Макрогематурия — примесь крови в моче окрашивает ее в красноватый цвет. Микрогематурия — цвет мочи не изменен, а эритроциты обнаруживаются только под микроскопом.

Эритроциты в моче могут быть:

Ø неизмененные (содержащие гемоглобин). При поражениях мочевыводящих путей ?

Ø измененные (лишенные гемоглобина) — выщелоченные (бесцветные кольца разного размера). При длительном пребывании в кислой моче и при низкой относительной плотности. Имеют почечное происхождение?

Ø дисморфные (эхино-, шизо- и т.д.) – признак повреждения почек

Норма — 1—2 (до 5) лейкоцитов в поле зрения микроскопа.

Обычно Нф округлой формы, бесцветные, с зернистостью. При кислой РН сморщиваются, щелочной РН и низкой плотности мочи – разбухают.

Лейкоцитурия — увеличение числа лейкоцитов больше 5—20 в поле зрения микроскопа. Пиурия — лейкоцитуриия больее 60 лейкоцитов в поле зрения.

Лейкоцитурия (пиурия) свидетельствует о воспалительном процессе в почках (пиелонефрит) или мочевыводящих путях (цистит, уретрит).

Суправитальная окраска осадков мочи

Рекомендована Европейской конфедерацией лабораторной медицины.

Используется краска Штернгеймера (родамин и альциановый синий).

0,5 мл осадка мочи + 1-2 капли реактива → перемешать → выдержать 5 мин →нанести на предметное стекло, накрыть покровным (или слайд-планшет) → микроскопия (10х40).

Возможности: более четкая дифференцировка всех элементов организованного осадка.

Лейкоцитарная формула осадка мочи

К осадку мочи + 1-2 капли сыворотки крови→перемешать→сделать тонкий мазок на предметном стекле (шлифованным стеклом) →зафиксиро- вать, покрасить (как кровь) →микроскопия 7х90. Считают 200 клеток. Пример ответа: Нф-70%, лим. – 20%, эоз. – 10%.

Лимфоциты 20% и более – хр. гломерулонефрит, волчаночный нефрит и др.

Бактериальное воспаление – более 70% Нф.

Клетки плоского эпителия слущиваются со слизистой оболочки наружных половых органов и мочеиспускательного канала диагностического значения не имеют.

Клетки переходного эпителия в большом количестве выявляются при воспалительном процессе мочевого пузыря, мочеточников, почечных лоханок.

Клетки почечного эпителия канальцев появляются при поражениях почек, интоксикациях.

Образуются в канальцах из свернувшегося белка, принимая их форму. Белковая основа — уропротеин, образуемый эпителием почечных канальцев, и агрегированные сывороточные белки.

Норма: при проведении ОАМ не обнаруживаются

Цилиндрурия — появление цилиндров в осадке мочи. Признак поражения почек (гломерулонефриты, нефротический синдром, инфекционные болезни, интоксикации).

Гиалиновые цилиндры — белковые слепки канальцев — наблюдаются в моче при всех заболеваниях почек и у здоровых после физической нагрузки.

Зернистые цилиндры образуются из перерожденных и распавшихся клеток почечного эпителия. Пи дистрофических процессах в канальцах почек.

Восковидные цилиндры — при хронических заболеваниях почек со значительной протеинурией (нефротический синдром).

Количественные методы исследования осадка мочи.

Производится подсчет количества эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров в определенном объеме мочи и за определенное время в счетных камерах. Позволяют с большой точностью определить характер мочевого осадка и выявить скрытые формы заболевания почек, дифференцировать различные почечные поражения.

Количество форменных элементов мочи, выделенной за сутки.

Норма: эритроцитов до 1х10 6 /сут., лейкоцитов до 2 х10 6 /сут., цилиндров до 2 х10 4 /сут.

Недостаток: длительное хранение мочи (сутки), что может привести к лизису клеточных элементов.

Метод Нечипоренко. Подсчет форменных элементов в 1 мл мочи (получают из 10 мл мочи после центрифугирования), взятой в середине акта мочеиспускания из утренней порции. Норма: лейкоцитов до 4000, эритроцитов до 1000, цилиндров до 20.

Преимущество метода:берется малое количество свежевыпущенной мочи, время не регламентировано.

Используется для оценки концентрационной способности почек, позволяет выявить латентную ХПН.

Проведение пробы: Обследуемый собирает мочу каждые 3 часа, начиная с 6 часов утра, в течение суток в отдельные порции с обозначением времени (всего 8 порций). В лаборатории измеряют количество и относительную плотность мочи в каждой порции. Измеряют суточный диурез, отдельно величины дневного и ночного диуреза.

суточный диурез в среднем 1,5 л (80% выпитой жидкости), дневной в 2 раза больше ночного, в 3-часовых порциях колебания 50-250 мл.

Максимальная ОПМ более 1,020, разность между макс.и мин.ОПМ не менее 16.

Изостенурия – моча не имеет значительных колебаний ОПМ в течение суток

Гипостенурия – ОПМ менее 1,010.

Проба Зимницкого у здорового человека