Скрининг на нбо качественные тесты с мочой

Официальный сайт ГБУЗ ПК «КДКБ»

Почтовый адрес: 614066 , г. Пермь , ул. Баумана, 22

Государственное бюджетное учреждение
здравоохранения Пермского края
«Краевая детская клиническая больница»

Приемное отделение №1
Баумана, 17
тел. +7 (342) 221-71-16
График работы: круглосуточно

Приемное отделение №2
Баумана, 22
тел. +7 (342) 221-82-32
График работы: круглосуточно

Реорганизация ГБУЗ ПК «КДКБ»

10 июля завершилась процедура реорганизации в форме слияния ГБУЗ ПК «КДКБ» с ГБУЗ ПК «Детский пульмонологический санаторий «Светлана» и ГБУЗ ПК «Детский санаторий «Орлёнок».

Самое новейшее оборудование для проведения любых видов операций

Компьютерная и магнито-резонансная томография

Снимки самого высокого разрешения во всех плоскостях и разрезах

Реорганизация ГБУЗ ПК «КДКБ»

10 июля завершилась процедура реорганизации в форме слияния ГБУЗ ПК «КДКБ» с ГБУЗ ПК «Детский пульмонологический санаторий «Светлана» и ГБУЗ ПК «Детский санаторий «Орлёнок».

Самое новейшее оборудование для проведения любых видов операций

Компьютерная и магнито-резонансная томография

Снимки самого высокого разрешения во всех плоскостях и разрезах

Лаборатория проводит около 1500 анализов в год на наследственные нарушения обмена аминокислот, углеводов, мукополисахаридозы, проводит потовый тест на аппарате «Nanoduct» для диагностики муковисцидоза. Для обследования в лабораторию направляются дети – пациенты неврологического, пульмонологического, гастроэнтерологического отделений больницы, отделения патологии новорождённых и раннего возраста КДКБ и других учреждений Перми, а также дети и взрослые по направлению врачей-генетиков.

• Скринирование мочи на НБО (качественные реакции)
• Потовая проба по Гибсону-Куку (определение концентрации хлоридов в поте)
• Потовый тест на аппарате «Nanoduct» (определение проводимости пота)
• Тонкослойная хроматография углеводов
• Количественное определение гликозаминогликанов в моче
• Качественное определение гликозаминогликанов методом электрофореза
• Определение аммиака в плазме крови

ВНИМАНИЕ! ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ВРАЧЕЙ!

При несоблюдении следующих рекомендаций лабораторное отделение МГК не гарантирует качество выполняемых анализов.

ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ НА ПРАВИЛА ОФОРМЛЕНИЯ ОБРАЗЦА

На каждый образец исследуемого материала и каждый вид исследования должно быть оформлено отдельное направление в свободной форме с указанием ФИО, даты рождения пациента и направляющего отделения/врача. Также желательно указывать причину направления материала на исследование (клиническая картина кратко) и принимаемые на момент обследования лекарственные препараты, если отменить лек. терапию невозможно. Без направления образцы биоматериалов не могут быть приняты для проведения исследования! Баночку с биоматериалом тоже необходимо подписать (фамилия).

Образец мочи, поступающий в лабораторию, должен быть первой утренней порцией мочи, взятой натощак (не менее 25 мл). Лекарственная терапия должна быть отменена за 3 суток до исследования. Если медикаментозная терапия не может быть отменена ввиду состояния больного, принимаемые препараты указываются в направлении. Банка для сбора мочи должна быть чистой (приобретается в аптеке), т.к. остатки некоторых моющих средств на стенках могут вызывать ложные результаты анализа. Нельзя собирать мочу в пробирки для крови, содержащие гепарин, ЭДТА и др. наполнители! Баночка с материалом должна быть подписана (фамилия) и сопровождаться направлением в произвольной форме с указанием ФИО, даты рождения и отделения/врача.

За 3 дня до исследования рекомендуется бессолевая диета (не есть солёную пищу, не пить минеральную воду). Накануне исследования тщательно вымыть ребёнку спину мылом и мочалкой. С собой в лабораторию взять очень тёплые вещи (кофту, куртку), горячий чай, сменные сухие вещи – ребёнку необходимо будет вспотеть.

Лекарственная терапия отменяется за 3-7 суток до исследования во избежание получения ложных результатов. При отсутствии противопоказаний и с разрешения лечащего врача за день до сбора мочи рекомендуется углеводная нагрузка (молоко, овощи, фрукты).

Для анализа используют разовые и суточные образцы мочи. Разовые образцы мочи, должны быть первой утренней порцией мочи. Сбор суточной мочи: сбор мочи производится в течение суток с 7:00 часов одного дня до 7:00 часов следующего дня, моча собирается в одну чистую ёмкость без каких-либо наполнителей. В 7 часов утра сходить в туалет, но мочу не собирать. Следующие порции мочи собирать в одну и ту же ёмкость, которую необходимо хранить в прохладном месте (+2-+8 С) в течение всего времени сбора. Банка для сбора мочи должна быть чистой, т.к. остатки некоторых моющих средств на стенках могут вызывать ложные результаты анализа. Нельзя собирать мочу в пробирки для крови, содержащие гепарин, ЭДТА и др. наполнители! Последнюю порцию мочи собрать в 7 часов утра следующего дня. Тщательно перемешать собранную мочу за сутки. Отобрать из общего количества суточной мочи не более 50 мл и перелить в специальный контейнер для сбора мочи. Не нужно нести всю суточную мочу в лабораторию!

Для анализа используют разовые и суточные образцы мочи. Разовые образцы собирают в промежутке между 9 и 18 ч, так как моча, собранная в это время, имеет такое же количественное отношение ГАГ к креатинину, как и в суточной моче. Сбор суточной мочи см. выше . Суточные образцы собирают на холоду во избежание бактериального пророста. Инфицированные образцы и образцы с низким содержанием креатинина анализу не подлежат. Необходимый объём 10 мл. Банка должна быть подписана и сопровождаться направлением в произвольной форме с указанием ФИО, даты рождения и отделения/врача.

Для выполнения этого исследования необходимо предварительно договориться о времени проведения анализа с врачом-лаборантом МГК. Кровь берётся натощак из вены в вакуумную пробирку с ЭДТА (фиолетовая крышка) непосредственно в КДКБ. Пробирку желательно наполнить полностью, положить в лёд и сразу передать в лабораторию. Если транспортировка пациента в КДКБ невозможна, кровь берётся в другом учреждении, после чего её необходимо сразу поместить в лёд и незамедлительно (в течение получаса) доставить в лабораторию, где она сразу будет протестирована. Пробы с признаками гемолиза анализу не подлежат.

источник

Наш медицинский центр:
Москва, ул. Чертановская д.9, корпус 3 Схема проезда
E-mail: filatovec89@lecon.ru

© 1989 — 2018 ООО Филатовец-Д. Медицинский центр ЛЕКОН
Л ицензия ЛО-77-01-008508

источник

Показания к бх исследованиям нбо:

Неясные и затяжные формы желтухи у детей в период новорожденности и первые года жизни 2) Хр. Расстройства пищеварения не инфекционной природы (диарея, рвота, ранний цирроз) 3)Аномалии развития скелета нерахитического происхождения (нарушение походки, задержка физ развития,различные формы гипотрофий,не устраняющихся коррекцией питания) 4)Нарушение речи(алалия или дислексия) 5)Нарушение органов зрения()снижение остроты зрения,вывих и подвывих хрусталика, каатаракта, помутнение роговицы,нистагм) 6)Дефекты поведения (двигательная расторможенность, мышечная гипотония и гиперрефлексия) 7) снижение слуха или полная глухота 8) судорожный синдром, не поддающийся терапии 9) умственная отсталость(изолированная и в сочетании с патологией других органов) 10) необычные волосы, ногти, лицо,гипер-или гипопигентация, светочувствительность 11) стойкие изменения в моче- протеинурия, гематурия, лейкоцитурия,фосфатурия, гипо- или гипергликемия, необычный цвет и запах мочи

Группы населения подлежащих обследованию:

Новорожденные, дети из спец учреждений, дети направленные на обследование по поводу показаний.

Двухэтапная система обследования на НБО: первый: Просеивающие программы. -массовый -селективный скрининг. Второй этап: -матоды подтверждающие диагноз

Скрининговые программы. Иммуноферментный анализ, биохимические методы и др.

Прямая – мутации определенного гена

Косвенная – семейный анализ различных полиморфных вариантов ДНК

Косвенная диагностика – исторически более ранний подход.

Методы прямой диагностики:

ПЦР-амплификация с последующим электрофорезом

Аллель-специфическая гибридизация (амплификация)

Определение статуса метилирования

Анализ экспансии тринуклеотидных повторов

Метод детекции ошибок спаривания

76. Просеивающие программы, скрининг.

Двухэтапное система обследования на НБО: 1) просеивающие программы (массовый скрининг, селективный) 2) исп методы подтверждающие диагноз

Массовый скрининг новорожденных:

Скрининг – предположительное выявление не диагностированных ранее болезней\дефекта с помощью тестов, обследований и других процедур, дающих быстрый ответ.

В практике для массового скрининга используют кровь из пяточки, высушенную на фильтровальную бумагу.

1)Доклиническое выявление, когда раннее лечение дает хороший эффект 2)изучение распространенности наследств аномалий обмена веществ (геногеографии) 3) популяционные исследования по определению частоты метаболического дефекта 4) углубление знаний о сущности уже известных НБО, описание семей, прогноз потомства 5) разработка методов диетотерапии 6) изучение особенности бх и клинических вариантов патологии в период новорожденности и др возрастных периодах 7) выявление гетерозиготного носительства мутантного гена.

Требования к НБО, которую целесообразно выявлять при МС:

1)Заболевания, приводящие без своевременного выявления и лечения к серьезному снижению качеству жизни и трудоспособности без лечения 2)заболевания, которые достаточно распространены в популяции(не менее 1:5090-20000) 3) заболевания, для которых существуют адекватный метод диагностики 4) заболевания, которые поддаются лечению с достижением принципиального эффекта для больного или общества и для которого разработаны четкие меры профилактики.

МС: фенилкетонурия (1:8000), врожденный гипотериоз 1:4000, адреногенитальный синдром, галактоземия, муковисцидоз

Требования к методам: 1) метод должен быть диагностически значимым(т.е. Положительные и отрицательные результаты полученные с его помошью, должны соответствовать наличию или отсутствию заболевания) 2) надежен и воспроизводим (Результаты его применения должны одинаково читаться различными его испольнителями на одном и то же образце, один и тот же образец при 2кратном не зависимой проверке должен одинаково оцениваться) 3)метод должен использовать легкодоступный материал в малых количествах (при чем желательно, чтобы исследуемый образец был пригоден для перессылки и длительного хранения) 4) экономически выгодный(должны входить все затраты включая перепроверку ложно положительных результатов, стоимость программы не должна превышать стоимости содержания невыявленных и нелеченных больных) 5) не должен давать ложноположительных результатов Основное требование к программам массового просеивания- обеспечение принципиальных преимуществ лицам- в терминах выживаемости, здоровья,благополучия физических, социальных и эмоционнальных функций.

Время диагностирования – промежуток между периодом когда можно диагностировать и лечение еще эффективно(ФКУ- 5-6 день после рождения ВГ- 10 день после рождения Адреногенитальный синдром-2 день после рождения)

77. Селективный скрининг на НБО

Под селективным скринингом понимают просеивание контингентов повышенного риска, в котором ожидается накопление исследуемых болезней обмена

-Начальные тесты с мочой(уринолизиз), -полуколичественные и количественные тесты. Самый полезный материал для выявления возможного метаболического нарушения при нбо – хронометрированная и измерительная проба мочи. Моча собирается в течении 24 часов без консервантов в холодильнике.

Качественные тесты с мочой: рН, белок, сахар.,Тест с FeCL ( р-в Фелига),Тест на гомогентизиновую к-ту,Тест на ксантуреновую к-ту,Тест на кетокислоты,Тест Бенедикта на редуцирующие вещества,Тест на цистин и гоцистин,Тест на пролин,Тест на α — азот,Определение креатинина

Цветные тесты с мочой: цпх тесты – Na и выделение гаг-ов гомоцистин (-электрофорез), тест бенедикта на редуцирующие вещества — тонкослойная хромотография – количественное определение выделение сахара, тест с нитропрусидом – количественное определение цистина и гомоцистина.

Хроматографические методы исследований Основаны на различном распределении аминокислот, углеводов и др.метаболитов из биологических жидкостей между неподвижной и подвижной фазами. Используются методы распределительной хроматографии на бумаге и в тонком слое селикагеля или целлюлозы.

Элюат наносится на стартовую дорожку, а рядом наносятся свидетели (стандартные растворы аминокислот или углеводов).

Разделение аминокислот достигается 1-2 кратным пропусканием через хроматограмму различных систем растворителей.

После высушивания хроматограмма окрашивается и читается. Тонкослойная хроматография (ТСХ)

двумерная ТСХ аминокислот на пластинах Merck (к,м), двумерная ТСХ фенольных кислот на пластинах Merck (м), одномерная ТСХ имидазолов на пластинах Merck (м), одномерная ТСХ моно- и дисахаридов на пластинах Merck (м), двумерная ТСХ моно- и,дисахаридов на пластинах Merck (м),одномерная ТСХ олигосахаридов на пластинах Merck (м), одномерная ТСХ сиаловых кислот на пластинах Merck (м) Количественные и полуколичественные тесты: Определение креатинина (м),Определение мочевой кислоты (м),Определение лактата (к,м),Определение пирувата (к,м),Определение кетоновых тел (к,м),Определение ионов аммония(к),Определение холестерина (к),Определение ионного состава (к,м)),Определение газового состава (к),Определение карнитина (к),Определение ГАГ-ов (м),Определение сиаловых кислот (м)

studopedia.org — Студопедия.Орг — 2014-2019 год. Студопедия не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования (0.003 с) .

источник

Наш медицинский центр:
Москва, ул. Чертановская д.9, корпус 3 Схема проезда
E-mail: filatovec89@lecon.ru

© 1989 — 2018 ООО Филатовец-Д. Медицинский центр ЛЕКОН
Л ицензия ЛО-77-01-008508

источник

Массовый скрининг. Селективный скрининг. Верифицирующая биохимическая диагностика наследственных болезней.

Методы лабораторной диагностики наследственных болезней.

Методы биохимической диагностики наследственных болезней направлены на описание биохимического фенотипа организма. Выбор биохимического метода может быть различным – от определения первичного биохимического продукта (полипептида) до исследования конечных продуктов метаболизма (в крови, моче, поте и других биологических жидкостях).

Лабораторная диагностика наследственных болезней проводится по определенному плану и поэтапно. Стратегия лабораторной диагностики основана на данных клинического обследования больного (клинический критерий) и выборе биохимической тактики. На основе поэтапного обследования постепенно исключаются определенные классы болезней.

В зависимости от класса выявляемых болезней лабораторная биохимическая диагностика наследственных болезней часто носит дифференцированный характер. Она может включать следующие пути и методы.

1. Массовый скрининг (просеивающие программы) – выявление наследственных болезней преимущественно наследственных дефектов метаболизма) путем массового обследования определенных детских контингентов, главным образом, новорожденных, независимо от пола, возраста и состояния здоровья. Целью массового скрининга является выявление наследственных заболеваний в досимптоматической стадии, до развития клинической картины заболевания.

При организации массового скрининга новорожденных необходимо строго соблюдать определенные требования, каждое из которых имеет важное значение в процессе его проведения. При этом необходимо руководствоваться международными требованиями Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ):

1. Обследование проводится на заболевание ребенка, которое развивается постепенно и в манифестной фазе делает его инвалидом; при этом имеются проверенные методы предупреждения формирования патологического фенотипа.

2. Тип наследования болезни и ее патогенез должны быть четко установлены, а для семьи – доступна медико-генетическая консультация.

3. Методы скрининга, подтверждающая диагностика и превентивного лечения должны быть доступны для практического здравоохранения.

4. Ложноположительные результаты методов скрининга должны быть редкими, ложноотрицательные – исключены.

5. Стоимость программ массового скрининга не должна превышать расходов на содержание и лечение детей, ставших инвалидами из-за данного заболевания.

6. Права семьи и самого ребенка, у которого, по данным скрининга, обнаружено наследственное (врожденно) заболевание, должны быть защищены (полная информация родителей о скрининг-программе, право на отказ от включения их новорожденного в число обследуемых, конфиденциальность при подтверждении диагноза, сохранение врачебной тайны).

Скрининг новорожденных позволяет рано, еще на доклинической стадии, выявить наследственное заболевание и рано начать лечение, предупредить тяжелые поражения центральной нервной системы и другие тяжелые инвалидизирующие расстройства.

Наибольшее распространение в медицинской практике получили скринирующие программы на следующие наследственные заболевания: фенилкетонурию, врожденный гипотиреоз, муковисцидоз, галактоземию, адреногенитальный синдром. В России обязательными являются массовый скрининг новорожденных на 3 заболевания: фенилкетонурию, врожденный гипотиреоз и муковисцидоз.

Массовый скрининг на фенилкетонурию (ФКУ). Забор образцов крови на фильтровальную бумагу проводится у новорожденного на 4 – 5 день жизни. Образцы взятой крови отправляются в медико-генетические консультации или медико-генетические центры, где осуществляется определение концентрации фенилаланина в крови, взятой на фильтровальную бумагу. Основным биохимическим маркером ФКУ, выявляемым при использовании любых методов, является увеличение концентрации фенилаланина в крови более 120 мкмоль/л (более 2 мг%).

В программах массового скрининга на ФКУ и другие дефекты обмена используются, главным образом три метода:

1) микробиологический тест Гатри — основан на принципе молекулярного антагонизма, когда микробный рост наблюдается только вокруг дисков, содержащих избыточное количество фенилаланина;

2) хроматография на бумаге или другом носителе (селикагель и др.);

3) флюорометрический метод (более чувствительный), основанный на образовании флюоресцирующего комплекса фенилаланина с лейцилаланином. В России для применения этого метода используются аппараты типа Флюороскан, Дельфия, Victor.

В настоящее время перечисленные методы начинает заменять тендемная масс-спектрометрия. Это наиболее чувствительный и дающий меньше всего ложноположительных результатов метод выявления ФКУ в первые 24 часа жизни новорожденного.

Массовый скрининг на врожденный гипотиреоз.Во взятой на фильтровальную бумагу (карту Гатри) крови новорожденного, определяется содержание тиреотропного гормона (ТТГ). Содержание ТТГ в крови здоровых новорожденных – менее 20 мкЕд/мл. При повышении данного уровня проводится повторное обследование ребенка через 3 – 4 недели. При содержании ТТГ свыше 50 мкЕд/мл определяют содержание ТТГ, тироксина (Т4) и трийодтиронина (Т3) в плазме крови.

Ранняя диагностика и заместительная терапия L-тироксином позволяет полностью предупредить отставание ребенка в нервно-психическом развитии.

Массовый скрининг на муковисцидоз.На первом этапе проводится тест на содержание иммунореактивного трипсина в капле крови, взятой на фильтровальную бумагу (карту Гатри). Пороговая концентрация иммунореактивного трепсина составляет 750 нг/мл. При превышении порового уровня проводится повторное обследование ребенка через 4-6 недель.

При положительном результате повторного исследования проводится проба на содержание хлора и натрия в поте. Пороговый уровень хлора и натрия в поте составляет при 60 ммоль/л. В настоящее время для обследования новорожденных был разработан аппарат Nanoduct, объединяющий систему для стимуляции потоотделения путем электрофореза 0,1% раствора пилокарпина и анализатор проводимости пота. При данном обследовании положительными считаются результаты выше 80 ммоль/л, показатели 60-80 ммоль/л являются пограничными, менее 60 ммоль/л — отрицательными.

Для полного подтверждения диагноза муковисцидоза рекомендуется провести молекулярно-генетическую идентификацию мутантного гена дельта-F-508.

2. Селективный скрининг– предусматривает обследование определенных детских коллективов с отклонениями в состоянии здоровья для выявления наследственной патологии. Например, обследований всех детей с отклонениями в нервно-психическом развитии для диагностики наследственных дефектов обмена веществ. Цель селективного скрининга – выявить необычные метаболиты или избыток их накопления и/или выделения (биологическая жидкость) для диагностики наследственного заболевания обмена веществ. Чаще для этих целей используют качественные, полуколичественные и количественные методы исследования мочи или крови.

а) Анализ крови. Важное значение имеет визуальная оценка взятой в пробирку крови ребенка. Кровь цвета молока (хилезная кровь может свидетельствовать о накоплении в организме и тканевой жидкости хиломикронов и пре-β-липопротеидов, что определяет направление дальнейших диагностических поисков на пути исследования состояния липидного обмена.

б) Анализ мочи. Для предварительной диагностики наследственных болезней рекомендуется обращать внимание на простую визуальную оценку цвета и запаха мочи. Так, при алкаптонурии моча при стоянии или добавлении щелочи приобретает черно-коричневый цвет, при порфирии моча имеет красный или коричневый цвет, при наследственном дефекте транспорта триптофана – голубой, а при липидурии моча молочно-белого цвета. Мышиный запах мочи определяется при фенилкетонурии, запах кленового сиропа – при одноименном заболевании (болезнь с запахом мочи кленового сиропа), сернистый запах мочи – при цистинурии, запах «кипящей капусты» или прогорклого масла – при тирозинемии 1 типа.

Наряду с клинической характеристикой состояния цвета и запаха мочи, большую роль в диагностике наследственной патологии играют результаты качественных лабораторных исследований, с помощью которых можно выявить ряд веществ (метаболитов), характерных, как правило, для целой группы заболеваний. Среди них используются скрининг-тесты:

· Экспресс-тесты (капельные и цветные реакции мочи) с хлористым железом (FeCl₃) для ориентировачной диагностики наследственных болезней обмена аминокислот. При добавлении к моче хлористого железа моча окрашивается в темно-зеленый цвет (при фенилкетонурии) или в цвет хаки (при болезни кленового сиропа).

· Тест Милона: при добавлении к моче, высушенной на фильтровальной бумаге , 1 капли реактива Милона, образуется красно-оранжевая окраска (положительный тест). Тест положителен при тириозинозе, болезни Вильсона, галактоземии, цистинозе.

· Тест на кетоновые тела (ацетоацетат) – появление красной окраски свидетельствует о положительной реакции – может использоваься для диагностики острых нарушений обмена органических кислот, болезни кленового сиропа, митохондриальных болезней, гликогенозе I, III и IV типа.

· Тест Бери(с толуидиновым синим) положителен при некоторых типах мукополисахаридозов, с помощью этого теста определяют повышенную экскрецию гликозаминогликанов.

Предложены и другие мочевые экспресс тесты для ранней диагностики наследственных болезней обмена веществ.

К полуколичественным методам диагностики наследственных болезней относятся: бумажная хроматография (качественный метод) и жидкостная хроматография (количественный метод). Используется для выявления нарушений аминокислот, органических кислот, нарушения цикла мочевины, митохондриальных болезней. Этот метод предполагает одновременное исследование аминокислот крови.

Среди количественных методов можно выделить:

· определение экскреции органических кислот с мочой с помощью метода газовой и масс-спектрометрии – проводят при подпзрении на наследственные нарушения аминокислот, органических кислот, обмена жирных кислот, митохондриальные болезни;

· определение ацилкарнитина и ацилглицина – выполняется при подозрении на дефицит карнитина, дефекты метаболизма органических кислот;

· тонкослойная хроматография– чувствительный и специфический метод скрининга, направленный на выявление нарушений обмена гликозаминогликанов, олигосахаридов, аминокислот;

· методы исследования тканевых культур(нативных и культивированных)- направлены на определение активности ферментов (флюорометрическим методом);

· биохимические методы– применяются также для диагностики гетерозиготного носительства (болезнь Вильсона_коновалова, недостаточность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и др.)

Современная диагностика наследственных болезней у детей базируется не только на методах массового и селективного скрининга, но и связана с внедрением новых высокоразрешающих молекулярных и аналитических технологий, в частности, с внедрением капиллярного электрофореза, гель-электрофореза белков и нуклеиновых кислот, блоттинг-белков, жидкостной хроматографии с использованием хроматографов среднего и низкого давления, тандемной хроматографии с масс-спектрометрией и др.

3. Верифицирующая (подтверждающая) биохимическая диагностика имеет целью подтвердить или опровергнуть диагноз у лиц с клиническими симптомами болезней или у лиц с подозрением на наследственные болезни, выявленные при массовом или селективном скрининге. Для диагностики могут использоваться различные биологические материалы (кровь, сыворотка крови, плазма, моча, пот, спинномозговая жидкость), культура клеток (фибробласты, лимфоциты, гепатоциты). Для верификации наследственной патологии применяются соответствующие методы и лабораторная аппаратура.

Среди количественных лабораторных методов диагностики наследственных болезней в медико-генетической практике нашли широкое применение следующие методы подтверждающей диагностики: аналитической биохимической диагностики, цитогенетической диагностики (для выявления хромосомных болезней), молекулярно-генетической, молекулярно-цитогенетической диагностики и исследование кариотипа тканевых культур (культура фибробластов и др.). Так, в диагностике умственной отсталости, связанной с нарушением обмена веществ, могут использоваться определенные качественные мочевые экспресс-тесты на выявление отдельных метаболитов, обусловленных дефектами аминокислот (с использованием методов селективного с5крининга), а также комплексы исследований для верификации классов наследственных болезней обмена веществ, которые осуществляются в специализированных медико-генетических центрах и лабораториях.

Разработки новых высоких технологий исследования ДНК и РНК, аналитической биохимии, иммунологии, энзимологии, на основе которых были разработаны новые или более совершенные методы диагностики наследственных болезней, расширили диагностические возможности клинической генетики и медико-генетической практики. Созданы целые программы диагностики наиболее распространенных моногенных наследственных заболеваний, определены показания для целенаправленного обследования больного.

источник

Показания к бх исследованиям нбо:

Неясные и затяжные формы желтухи у детей в период новорожденности и первые года жизни 2) Хр. Расстройства пищеварения не инфекционной природы (диарея, рвота, ранний цирроз) 3)Аномалии развития скелета нерахитического происхождения (нарушение походки, задержка физ развития) 4)Нарушение речи 5)Нарушение органов зрения 6)Дефекты поведения (леши-нихана) 7) снижение слуха или полная глухота 8) судорожный синдром, не поддающийся терапии 9) умственная отсталость 10) необычные волосы, ногти, лицо 11) стойкие изменения мочи, необычный цвет и запах мочи

Группы населения подлежащих обследованию:

Новорожденные, дети из спец учреждений, дети направленные на обследование по поводу показаний.

Скрининговые программы. Иммуноферментный анализ, биохимические методы и др.

Прямая – мутации определенного гена

Косвенная – семейный анализ различных полиморфных вариантов ДНК

Косвенная диагностика – исторически более ранний подход.

Методы прямой диагностики:

ПЦР-амплификация с последующим электрофорезом

Аллель-специфическая гибридизация (амплификация)

Определение статуса метилирования

Анализ экспансии тринуклеотидных повторов

Метод детекции ошибок спаривания

76. Просеивающие программы, скрининг.

Двухэтапное система обследования на НБО: 1) просеивающие программы (массовый скрининг, селективный) 2) исп методы подтверждающие диагноз

Массовый скрининг новорожденных:

Скрининг – предположительное выявление не диагностированных ранее болезней\дефекта с помощью тестов, обследований и других процедур, дающих быстрый ответ.

В практике для массового скрининга используют кровь из пяточки, высушенную на фильтровальную бумагу.

Доклиническое выявление, когда раннее лечение дает хороший эффект 2)изучение распространенности аномалий 3) популяционные исследования по определению частоты метаболического дефекта 4) углуюление знаний о сущности уже известных НБО 5) разработка методов диетотерапии 6) изучение особенности бх и клинических вариантов патологии в период новорожденности и др возрастных периодах 7) выявление гетерозиготного носительства

Требования к НБО, которую целесообразно выявлять при МС:

1)Заболевания, приводящие к серьезному уменьшению качеству жизни и трудоспособности без лечения 2)заболевания, которые достаточно распространены в популяции 3) заболевания, для которых существуют методы диагностики 4) заболевания, которые поддаются лечению с достижением принципиального эффекта для больного и общества, разработаны четкие методики профилактики.

МС: фенилкетонурия (1:8000), врожденный гипотериоз 1:4000, адреногенитальный синдром, галактоземия, муковисцидоз

Требования к методам: 1) метод должен быть диагностически значимым 2) надежен и воспроизводим 3)использует легкодоступный материал 4) экономически выгодный 5) не должен давать ложноположительных результатов.

Время диагностирования – промежуток между периодом когда можно диагностировать и лечение еще эффективно

источник

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК МЕДИКО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР РАМН

на правах рукописи УДК 575.599.9

Журкова Наталия Вячеславовна

Программа селективного скрининга на наследственные болезни обмена веществ с острым течением и ранним летальным исходом.

Автореферат диссертации на соискании ученой степени кандидата медицинских наук

Работа выполнена в лаборатории наследственных болезней обмена веществ Медико-генетического научного центра РАМН

доктор биологических наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор Н.И. Капранов кандидат медицинских наук, доцент А.Н. Прытков

Институт педиатрии и детской хирургии МЗ РФ

Защита диссертации состоится 2000 г.

в /¿часов на заседании Диссертационного совета Д. 001.16.01 при Медико-генетическом научном центре РАМН (115478, Москва, Москворечье, 1)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Медико-генетического научного центра РАМН

Автореферат разослан «_»_2000 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета Д.001.16.01 доктор биологических наук, профессор Л.Ф. Курило

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Наследственные болезни обмена веществ (НБО) имеют большое значение в патологии человека (более 500 нозологических единиц) [McKusick et al., 1994]. Нет такой медицинской специальности, которая не имела бы дело с некоторыми из НБО. Многие заболевания этой группы сопровождаются тяжелой инвалидизацией и преждевременной смертью. Суммарная доля НБО среди всей педиатрической патологии составляет 0,13% [ Wilson et al., 1968]. Более 140 нозологических единиц из группы характеризуется острым течением и ранним (до 3-5 лет) летальным исходом (лНБО).

За последние десятилетия достигнуты беспрецедентные успехи в диагностике, лечении и профилактике лНБО. Следует особенно подчеркнуть, что многие из этих заболеваний поддаются эффективной терапии [Scriver et al., 1995, Краснопольская,1997] и почти все -пренатальной диагностике [Connor,1989, Scriver et al., 1995]. Однако, как правило, лНБО слабо распознаются в практике отечественной неонатологии и педиатрии, а семья остается без медико-генетического консультирования [Краснопольская, 1997].

До 1985 г. в нашей стране отсутствовали программы биохимической диагностики НБО. Программа селективного скрининга на НБО, утвержденная МЗ СССР в 1985 г., даже в то время не соответствовала мировым стандартам, так как использовала только отечественные реактивы, качество большинства из которых было не высоко, что повышало процент ложноположительных результатов, а в ряде случаев приводило к появлению ложноотрицательных результатов. Это существенно затрудняло раннюю диагностику лНБО, а, следовательно, и своевременное начало терапии курабельных лНБО.

В связи с появлением в последние годы методов специфической терапии для многих лНБО, быстрым обновлением технологической базы [Green et al., 1999], появлением новых методов дородовой диагностики стала актуальной задача разработки целостной программы селективного биохимического скрининга (СБС) на лНБО с учетом мирового опыта и особенностей организации здравоохранения в стране и внедрения ее в практику медико-генетического консультирования в стране.

Цель работы: разработка программы селективного биохимического скрининга (СБС) на наследственные болезни обмена веществ с острым течением и ранним летальным исходом (лНБО) и апробация ее на больных детях в возрастной группе 0-3 года и в группах высокого риска. Задачи исследования.

1. Разработать программу СБС на лНБО на основе аналогичных программ, используемых мировой медициной.

2. Оценить влияние лекарственной терапии на результаты СБС на лНБО.

3. Апробировать программу СБС на лНБО на контингенте детей от 0 до 3 лет , направляемых на скрининг-обследование врачами педиатрических стационаров и МГК.

4. Оценить эффективность отбора пациентов на СБС на лНБО педиатрами, невропатологами, врачами МГК и высококвалифицированным врачом, специализирующимся по наследственным болезням обмена веществ.

5. Провести СБС на лНБО среди пациентов отделений интенсивной терапии новорожденных . Определить необходимость проведения СБС у всех пациентов отделений интенсивной терапии новорожденных.

6. Определить спектр лНБО среди детей от 0 до 3-х лет, выявляемых с помощью данной программы.

Впервые в России создана программа СБС на лНБО, позволяющая выявлять основные классы наследственных болезней обмена веществ (более 140 нозоологических единиц).

Оценена эффективность отбора пациентов для диагностики на лНБО педиатрами, невропатологами, врачами МГК по сравнению с высококвалифицированным врачом, специализирующимся по НБО. Количественно охарактеризовано преимущество врача, специализирующегося в биохимической генетике, в диагностике НБО.

Составлен перечень лекарственных препаратов и пищевых добавок, влияющих на результаты скрининга, и описан характер их влияния.

Впервые показано, что в группу риска для выявления лНБО и проведения СБС могут быть включены пациенты отделений интенсивной терапии новорожденных с выраженными дыхательными и неврологическими расстройствами.

С помощью данной программы впервые в России выявлены синдром Лоу (2 случая) и пропионовая ацидемия (1 случай).

Практическая значимость. Данная работа решает ряд задач медико-генетического консультирования: раннюю диагностику лНБО; возможность предотвращения развития клинических проявлений заболевания при выявлении лНБО в пресимптоматической стадии; профилактику лНБО , т.е. возможность для многих заболеваний дородовой диагностики в семьях с некурабельными , остротекущими НБО.

Разработанная программа СБС на лНБО соответствует

основным требованиям, предъявляемым к программам селективного скрининга, что дает возможность ее внедрения в практику МГК России.

Положения выносимые на защиту

1. Программа селективного скрининга на наследственные болезни обмена веществ с острым течением и ранним летальным исходом.

2. Оценка эффективности отбора пациентов на СБС на лНБО врачами-генетиками МГК и педиатрами по сравнению с квалифицированным специалистом, специализирующимся по ИБО.

3. Оценка целесообразности проведения СБС на лНБО среди пациентов интенсивной терапии новорожденных.

4. Изучение влияния лекарственных препаратов и пищевых добавок на результаты СБС на лНБО.

Апробация работы. Результаты исследования доложены на межлабораторном семинаре Института клинической генетики МГНЦ РАМН (2000). Материалы работы были представлены на Втором (четвертом) Российском съезде медицинских генетиков (2000) и на Российской научно-практической конференции «Медико-генетическое консультирование в профилактике наследственных болезней» (1997). Публикации: по теме диссертации опубликовано 7 работ. Структура и объем диссертации. Работа изложена на страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, трех глав результатов, заключения, выводов и списка литературы (21 отечественных и 82 зарубежных работ). В тексте диссертации 4 рисунка и 27 таблиц.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. Всего было обследовано 275 детей в возрасте от 0 до 3-х лет: — пациенты, в возрасте от 0 до 3 лет , направляемые на СБС врачами МГК, а также педиатрами и невропатологами различных

педиатрических стационаров — 119 человек;

— пациенты , в возрасте от 0 до 3 лет, направленные на СБС со специализированных биохимических приемов профессором Краснопольской К. Д. — 8(5 человек;

— пациенты отделения интенсивной терапии новорожденных ММА им. М.И.Сеченова массой не менее 1,9 кг, поступившие в отделение на 1-5 сутки после родов — 68 человек.

Материалом для исследования служила венозная кровь, разовые и суточные образцы мочи и, при необходимости, образцы цереброспинальной жидкости и кала.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Разработка программы СБС на лНБО

При разработке программы СБС были учтены следующие требования: возможность скрининг- оценки максимального числа лНБО; диагностическая значимость, т.е. недопустимость ложноотрицательных результатов; воспроизводимость, т.е. возможность воспроизвести результаты методов другими исполнителями; надежность, т.е. недопустимость ложной оценки результата, воспроизведение результатов теста с одним и тем же биологическим материалом при повторных исследованиях; использование малого количества биологического материала (1,5 мл крови и 5 мл мочи); простота проведения скрининг-тестов для исполнителей, персонала стационаров; возможность внедрения в практику МГК (возможность закупки материалов и реактивов, обучение специалистов); быстрота проведения скрининг-тестов; длительность проведения обследования не превышает 3 дней (при назначении дополнительных методов — 1 неделю); экономичность.

Структура программы СБС на лНБО, а также программа подтверждения диагноза лНБО, осуществляемая в лаборатории

наследственных болезней обмена веществ МГНЦ РАМН, приведена на рис. I.

Рисунок 1. Программа СБС на лНБО

1 .А. Качественные тесты с мочой:

— тест на цистин н гомоцистин;

— тест на редуцирующие в-ва (тест Бенедикта);

1.В. Количественные и полуколичественные тесты:

— определение креатинина (моча);

— определение мочевой кислоты (моча);

— определение ионов аммония (кровь).

2. Тонкослойная хроматография и электрофорез:

— двумерная ТСХ аминокислот (кровь, моча);

— двумерная ТСХ фенольных кислот (моча);

— одномерная и двумерная ТСХ моно- и дисахаридов( кровь, моча);

— одномерная ТСХ олигосахаридов (моча);

— одномерная ТСХ сиаловых кислот (моча);

— одномерная ТСХ имидазолов (моча);

— одномерный и двумерный электрофорез гликозаминогликан, (моча)

Данная программа позволяет выявлять следующие классы НБО:

3. лизосомные болезни накопления;

4. болезни углеводного обмена;

5. болезни обмена металлов;

6. болезни пуринового и пиримидинового обмена;

7. наследственные болезни метаболического транспорта;

8. наследственные болезни желудочно-кишечного тракта;

9. наследственные болезни нейротрансмиттерного обмена;

10. наследственные болезни обмена витаминов;

11. митохондриальные болезни* ;

12. болезни р-окисления жирных кислот*;

13. пероксисомные болезни**_

* Основное обследование проводится в рамках программы скрининга на митохондриальные болезни врачом-лаборантом-генетиком лаборатории НБО Захаровой Е.Ю..

** Проводится количественное определение ОЦД ЖК старшим научным сотрудником лаборатории НБО к.х.н. Шехтер О.В.

Одной из важнейших проблем, возникающих при создании программы СБС на лНБО, является влияние лекарственных препаратов, их метаболитов и пищевых добавок, получаемых обследуемыми больными детьми, на результаты скрининга.

Для изучения влияния наиболее часто применяемых лекарственных препаратов на результаты ряда тестов был проведен биохимический анализ мочи пациентов, получающих финлепсин, препараты вальпроевой кислоты, циннаризин, парацетамол, канвинтон, когитум и различные аминокислотсодержащие препараты.

На основании проведенных исследований, а также литературных данных, был составлен перечень препаратов, влияющих на результаты скрининга, и описан характер их влияния (табл. 1.).

Влияние лекарственной терапии на результаты

Препарат Изменения результатов скрининга, вызванные данным препаратом или его метаболитом

Ацетилсалициловая кислота, салицилаты Пурпурное окрашивание теста на фенолы¡ые кислоты

Фенотиазины Коричнево-зеленое окрашивание теста на феяольные кислоты, белый осадок в тесте на цистин, гомоцистин

Антипирин Оранжевый осадок теста на фенольные кислоты

Аскорбиновая кислота Светло-коричневая окраска сульфитного теста, положительный результат теста на кетокислоты

Изониозид Серый осадок в тесте на фенольные кислоты, мутный осадок теста на гомогентнзиновую кислоты

Вальпроевая кислота Малиновое окрашивание (при больных дозах) теста на ММК, положительный результат теста на кетокислоты

Фенобарбитал Положительный результат теста на кетокислоты, выявление дополн. Пятна на ТСХ фенольных кислот

Финлепсин Положительный результат теста на кетокислоты, белый осадок в тесте на ГГК

Гипотиазид, фуросемид При введении больших доз дает картину гипераминоадурии на ТСХ аминокислот

Реополиглюкин, изотонический р-р №С1 При длительном применении -гипоаминоацидемия на ТСХ аминокислот плазмы

Канвинтой Белый осадок теста на фенольные кислоты

Церебролизнн После первой недели лечения — слабая гиперами-ноацидурия на ТСХ аминокислот мочи

Пищевые добавки, содержащие аминокислоты (типа «Олимпик») На второй день после применения выраженная гипераминоадиурия, при длительном использовании положительный результат теста на ММК.

Глюкоза, сахароза Полозки гельный тест на кетокислоты, положительный тест Бенедикта, изменения на ТСХ моно- и дисахаридов мочи

Когитум Увеличение серина, аланина, глицина, глютамина после 2-й недели лечения на ТСХ аминокислот

Парацетамол Зеленое окрашивание теста на фенольные кислоты; положительный результат теста на кетокислоты; изменения на ТСХ фенольных кислот мочи (в виде пятен розового цвета)

Представленные в таблице данные убедительно свидетельствуют о том, что лекарственные препараты, их метаболиты и пищевые добавки существенно изменяют результаты скрининг-тестов. В связи с этим СБС целесообразно проводить до назначения лекарственной терапии или после 3-дневной ее отмены. Если препараты не могут быть отменены по состоянию здоровья больного, их перечень необходимо указывать в сопровождающем документе. Проведение СБС у пациентов, принимающих пищевые аминокислотные добавки, целесообразно лишь спустя месяц после отмены биодобавок.

СБС на лНБО у детей в возрасте 0-3 года, направленных па диагностику лНБО

Основной выборкой детей в возрасте 0-3 лет, у которых проведен СБС, были пациенты, направленные в лабораторию наследственных болезней обмена МГНЦ РАМН врачами различных учреждений с подозрением на НБО после клинического и медико-генетического обследования. Распределение детей по группам дано на рисунке 2. Всего СБС проведен у 205 детей.

Данные по распределению детей с положительным и отрицательным результатами СБС приведены в таблице 2. Хотя эти показатели несколько различались у детей, направленных МГК и направленных специалистами больниц , различия между ними были статистически не значимы. Это позволило объединить детей из 2 потоков в одну группу (группа I).

Рисунок 2. Распределение детей в возрасте 0-3 года, обследованных по программе селективного биохимического скрининга на лНБО, в зависимости от направляющего учреждения.

В группе I у 24,3% детей был положительный результат селективного скрининга. В группе II доля детей с положительным результатом скрининга составила 48,8%.

Доля детей «скрининг+» в группе II в 2 раза превышала таковую в группе I (различие статистически значимо: х2=12,6, п %*> п %**) п %**>

1 26 9 34,6 17 65,4 11 64,7 6 35,3

II 42 12 28,4 30 71,4 23 76,7 7 23,3

Всего 68 21 30,9 47 69,1 34 72,3 13 27,2

*) Процент от общего числа детей, показавших положительный результат при селективном скрининге.

**) Процент от общего числа детей, прошедших полную диагностику.

Хотя число детей в группе III мало для установления строгих заключений (Табл. 4), высокая доля детей с положительный результатом СБС (11 детей из 12) позволяет включить группы (пациенты отделений патологии новорожденных) в группу детей повышенного риска.

Таблица 4. Распределение детей группы III по результатам селективного скрининга и полной биохимической диагностики

Общее число детей Скрининг отрицательный Скрининг положительный

Всего детей Отсутствие или неполная диагностика Полная биохимическая диагностика

Всего детей Диагноз подтвержден Диагноз не подтвержден

Характеристика лНБО, выявленных у детей в возрасте 0-3 года представлена в таблице 5 .

Таблица 5. Характеристика лНБО, выявленных у детей в возрасте 0-3 года._

Название Класс лНБО Количество пациентов

Мукополисахаридоз, тип 1 лизосомные болезни накопления 4

Мукополисахаридоз, тип 2 лизосомные болезни накопления 6

Мукополисахаридоз, тип ЗА лизосомные болезни накопления 1

Мукополисахаридоз, тип ЗС лизосомные болезни накопления 1

Муколипидоз, тип 2 лизосомные болезни накопления 2

ОМ 1 -ганглиозидоз лизосомные болезни накопления 1

Метахроматическая лейкодистрофия лизосомные болезни накопления 1

ОМ2- ганглиозидоз лизосомные болезни накопления 1

Нарушение митохонд-риальгного р-окислеиия жирных кислот нарушение митохонд-риальгного (5-окисления жирных кислот 1

Митохондриальные болезни митохондриальные болезни 3

Гипер-бета-аланинемия аминоацидопатии 1

Гиперглицинемия аминоацидопатии 1

Кленового сиропа мочи болезнь аминоацидопатии 1

Тирозинемия, Тип 2 аминоацидопатии 1

Злокачественная ФКУ аминоацидопатии 1

Н епереносимосгь лактозы вторичная болезни метаболитного транспорта 2

Синдром Лоу болезни метаболитного транспорта 2

Лактазная недостаточность болезни метаболитного транспорта 1

Метнгилмалоновая ацидемия органические ацидурии 1

Пропионовая ацидемия органические ацидурии 1

Галактоземия болезни углеводного обмена 1

Всего диагноз был подтвержден у 34 пациентов, показавших положительный результат при СБС : лизосомные болезни накопления — у 17 пациентов, аминоацидопатии — у 5 пациентов, болезни

метаболитного транспорта — у 5 пациентов, митохондриальные болезни — у 3 пациентов, нарушение митохондриального ß-окисления жирных кислот у 1 пациента, органические ацидурии — у 2 пациентов, болезни углеводного обмена- у 1 пациента.

СБС на лНБО у пациентов отделения интенсивной терапии новорожденных.

Следующей группой детей, обследованной по программе СБС на лНБО являются пациенты отделения интенсивной терапии новорожденных, которых мы обозначили как предположительную группу риска в связи с их тяжелым состоянием, включающим в себя дыхательную патологию, мышечную гипотонию, ГИЭ и др.

Нами было обследованы безотборно 68 пациентов, поступивших в отделение интенсивной терапии новорожденных ММА им И.М.Сеченова. В проведении работы участвовали зав. отделением интенсивной терапии новорожденных Гаркуша В. Е., врач невропатолог Дмитриенкова Н. Н., врач-генетик Никифорова О. К. Дети с положительным результатом СБС проходили дальнейшее биохимическое обследование в лаборатории наследственных болезней обмена веществ МГНЦ РАМН

У ряда детей на 1 этапе скрининга были выявлены положительные результаты скрининг-тестов и ТСХ ‘ (таблица 6). Подробный клинико-биохимический анализ показал, что в большинстве случаев отмеченные изменения обусловлены интенсивной лекарственной терапией. После проведения подтверждающей диагностики не было выявлено НБО.

Поскольку лактат-ацидоз и гиперкетонемия являются симптомами ряда лНБО (органические ацидурии, митохондриальные болезни, аминоацидопатии и другие), у детей проведено количественное определение лактата и кетоновых тел в крови.

Таблица 6. Результаты СБС на лНБО пациентов отделения интенсивной терапии новорожденных.

Качественные тесты с мочой Число положительных результатов Результаты тонкослойной хроматографии

Вид ТСХ Найденные изменения

тест на фенольные КИСЛОТЬ! 9 ТСХ аминокислот крови гипоаминоацидемия- 5 повышение аланина, метионина-1

тест на кетокислоты 19 ТСХ аминокислот мочи гипераминоацидурия- 2

тест на метилмалоновую кислоту 0 ТСХ углеводов мочи глюкозурия- 20

тест на гомогентизинову ю кислоту 0 ТСХ фенольных кислот мочи аномальный спектр фенольных кислот — 1

сукцинилпуринов ый тест 0

тест на цистин и гомоцистин 0

Более 50% обследованных детей имели лактат-ацидоз и/или гиперкетонемию . У детей с одновременным наличием лактат-ацидоза и гиперкетонемии концентрации лактата и кетоновых тел в крови были максимальны. Анализ распределения детей с различными диагнозами по наличию лактат-ацидоза и гиперкетонемии позволил выделить 3 группы пациентов (таблица 7).

Таблица 7. Распределение пациентов интенсивной терапии новорожденных с различными диагнозами по наличию лактатацидоза и гиперкетонемии.

Лактат- Гиперке- СДР и/ или ГИЭ Пороки сердца Про чие

ацидоз тонемия число % число % число %

Всего детей 47 100,0 7 100,0 15 100,0

В первую группу (47 новорожденных), вошли дети, у которых в диагнозе имеется синдром дыхательных расстройств (СДР) и/или гипоксически-ишемическая энцефалопатия (ГИЭ). 70% детей этой группы имели повышенный уровень лактата и/или кетоновых тел в крови.

Вторая группа включала 7 детей с пороками сердца. В этой группе не выявлено детей с нормальным уровнем кетоновых тел в крови: у 4 — гиперкетонемия, у 3 — гипокетонемия.

Третья группа — 15 детей с диагнозами гемолитическая болезнь, морфофункциональная незрелость, внутриутробная инфекция, хромосомная патология, не сопровождающимися диагнозами СДР и/или ГИЭ. Концентрации лактата и кетоновых тел в крови детей этой группы были в основном в пределах нормы.

Результаты обследования показали, что значимые метаболические изменения у пациентов отделения интенсивной терапии новорожденных отмечаются в основном у больных с выраженной неврологической и дыхательной патологией. Эта часть больных может формировать группу риска по лНБО.

На основании вышеприведенных данных можно сделать заключение, что проведение СБС на лНБО необходимо среди детей группы риска, либо при наличии у ребенка клинической симптоматики, характерной для лНБО.

В результате проделанной работы была создана программа СБС, позволяющая проводить первичное биохимическое обследование детей с подозрением на лНБО. Программа может быть внедрена в практику работы МГК.

Полученные результаты позволяют сделать ряд практических рекомендаций:

— необходима организация на Федеральном уровне специальной лаборатории проводящей и координирующей работы по селективному биохимическому скринингу и полной биохимической диагностике ИБО, с проведением медико-генетического приема квалифицированным врачом-генетиком, специализирующимся по наследственным болезням обмена веществ;

— для повышения эффективности выявления пациентов с ИБО необходимо обеспечение врачей МГК и педиатрических стационаров ИПДС, разработанной проф. К.Д.Краснопольской и к.т.н. Евдокименковым В.Н.;

— при проведении курса повышения квалификации врачей генетиков МГК и педиатрических стационаров необходима организация курса по ИБО;

— необходима организация СБС в региональных и областных МГК.

1. Разработана СБС на лНБО, включающая: 1 этап — качественные и количественные тесты с мочой и кровью (14 тестов) ; 2 этап — методы тонкослойной хроматографии (аминокислот, фенольных кислот, моно- и дисахаридов, олигосахаридов, сиаловых кислот) мочи и крови и электрофореза гликозаминогликан мочи. Программа СБС позволяет выявлять основные классы ИБО у детей ( около 140 нозоологических единиц).

2. СБС на лНБО проведен у 205 детей в возрасте 0-3 года, направленных после клинического и медико-генетического обследования врачами МГК и специалистами педиатрами. Положительный результат СБС выявлен у 25% детей, направленных из МГК и педиатрических клиник, эта цифра может возрасти вдвое при

дополнительном консультировании врачом-генетиком,

специализирующимся по НБО.

3. Среди детей с положительным результатом СБС при полной биохимической и молекулярно-генетической диагностике диагноз лНБО установлен у 72%. Эта величина не зависела от квалификации врачей, направивших детей на СБС.

4. Проведение СБС на лНБО целесообразно среди пациентов интенсивной терапии новорожденных с выраженными неврологическими и дыхательными расстройствами (группа риска) или при наличии характерных клинических признаков лНБО.

5. Показана значимость влияния лекарственных препаратов и пищевых добавок на результаты СБС на лНБО. Составлен перечень лекарственных препаратов, влияющих на результаты СБС. Проведение СБС на лНБО оптимально через 3 дня после отмены лекарственных препаратов и через 1 месяц после отмены бнодобавок. Список публикаций по теме диссертации.

1. Краснопольская К.Д., Евдокименков В.Н., Захарова Е.Ю., Журкова Н.В., Букина Т.М. Новые подходы к диагностике и профилактике наследственных болезней обмена. // В сб.: Принципы организации и методические основы профилактики инвалидизирующих наследственных болезней. / Москва, 1996,

2. Журкова Н.В., Краснопольская К.Д., Покровская А.Я., Галкина В.А. Синдром Jloy- наследственное заболевание метаболитного транспорта, манифестирующее в раннем возрасте. // Медико-генетическое консультирование в профилактике наследственных болезней. / Москва, 1997, с. 127-128.

3. Журкова Н.В., Краснопольская К.Д., Никифорова O.K., Покровская А.Я. Программа биохимической диагностики

наследственных болезней обмена веществ с острым течением и ранним летальным исходом. // Медико-генетическое консультирование в профилактике наследственных болезней. / Москва , 1997, с. 128-129.

4. Журкова Н.В., Краснопольская К.Д., Кириллова Е.А., Покровская

A.Я., Гаркуша В.Е., Дмитриенкова H.H., Букина Т.М., Никифорова O.K. Разработка и апробация программы селективного скрининга и методов подтверждения диагноза на наследственные болезни обмена веществ с острым течением и ранним летальным исходом. // Актуальные проблемы диагностики, лечения и профилактики наследственных болезней у детей. Тезисы докладов. / Москва, 1998, с. 24-25.

5. Журкова Н.В. Краснопольская К.Д., Покровская А .Я., Дмитриенкова H.H., Никифорова O.K., Кириллова Е.А., Гаркуша

B.Е.. Анализ частоты лактатацидоза и гиперкетонемии у пациентов отделения интенсивной терапии новорожденных в рамках программы селективного скриннинга на наследственные болезни обмена веществ с острым течением и ранним летальным исходом. // Второй (четвертый) российский съезд медицинских генетиков. Тезисы докладов. / Курск , 2000, Часть 1, с. 236-237

6. Некрасова Н.Ю., Петрин А.Н., Кулешов Н.П., Журкова Н.В., Ржаницина Н.Ф. Результаты клинико-генетического обследования учащихся вспомогательных школ и школ-интернатов. // Второй (четвертый) российский съезд медицинских генетиков. Тезисы докладов. / Курск, 2000, Часть 2, с. 45-46.

источник