Таблица разведения мочи на белок

Моча – это важная биологическая жидкость в организме человека. Большая часть продуктов обмена удаляется именно с ней. У здорового человека ее состав имеет относительно фиксированные значения. При возникновении заболевания некоторые показатели изменяются, что дает возможность лечащим врачам уточнить поставленный диагноз. Выявить проблемы в работе почек поможет анализ суточной мочи на белок.

Это лабораторное исследование, с помощью которого определяют количество выделившейся жидкости за сутки. Такой метод применяется для оценки состояния функционирования почек. Состав урины:

• вода, которая составляет 97%;
• калий;
• натрий;
• креатинин;
• мочевина;
• соли в виде сульфатов, фосфатов и хлоридов.

Каждого компонента в норме должно содержаться определенное количество, отклонение от которого считается патологией. При исследовании суточного анализа мочи на белок норма для взрослых мужчин и женщин одинаковая. При нормальной работе почек это вещество не должно попадать в урину или его может содержаться незначительное количество 40-80 мг. Выделение 150 мг и более считается патологией. Однако с возрастом, особенно после 60 лет, допускается небольшое превышение допустимого показателя, и связано это с возрастными изменениями в организме. В некоторых случаях выявление белка объясняется неправильной подготовкой перед сбором биоматериала или погрешностями в питании. У детей норма зависит от возраста, веса и площади поверхности тела.

По результатам лабораторных исследований суточной урины получают следующие сведения:

• Объем жидкости, который выделяется в течение суток из организма. В среднем, он составляет 1750 мл и может колебаться как в меньшую, так и в большую сторону в зависимости от объема выпитой жидкости.
• Сахар. Особенно важен этот показатель для пациентов, страдающих сахарным диабетом.
• Оксалаты. Превышение сверх допустимых границ чревато образованием в почках песка и камней.
• Метанефрин. Это вещество образуется после распада гормонов. Отклонения от нормы в сторону увеличения – это признак патологии почек, сердечно-сосудистой системы и др.
• Белок. У здоровых людей этого показателя не должна наблюдаться в урине. Это один из важных параметров, который выявляется при суточном анализе мочи. Завышенный уровень свидетельствует о признаках патологии почек, болезнях центральной нервной системы. Помимо общего количества белка, лабораторное исследование биологической жидкости позволяет обнаружить и белковые соединения, которые также важны для правильной постановки диагноза.

Ввиду того что изменения в качественном и количественном составе урины начинаются раньше, чем симптомы болезни, анализ позволяет своевременно выявить патологию. Показаниями к назначению этого вида исследований у взрослых и детей является наличие следующих заболеваний:

• амилоидоза (нарушение обмена белков);
• сахарного диабета;
• нефропатии, которая проявляется отеками ног;
• ишемии сердца;
• почечной недостаточности.

Для большей информативности и получения наиболее объективной информации по итогам анализа суточной мочи на белок следует соблюдать определенные правила, которые обязательны для выполнения и заключаются в следующем:

• За сутки или более исключить употребление витаминных комплексов, антикоагулянтов и диуретических средств.
• За сутки изменить рацион. Отказаться от острой, жирной и сладкой пищи, а также алкогольных и кофейных напитков.
• Не сдавать биоматериал во время месячных.
• Для сбора урины приобрести в аптечном учреждении специальную тару или можно воспользоваться стеклянной банкой, объемом не менее трех литров.

Правила сбора биоматериала общие как для взрослых мужчин, так и для женщин и детишек, которые достигли определенного возраста и могут самостоятельно пользоваться горшком.

1. Непосредственно перед сбором урины необходимо выполнить туалет наружных половых органов.
2. Первая порция биоматериала не учитывается. Однако фиксируется время утреннего мочеиспускания.
3. Собирают всю выделяемую жидкость в течение 24 часов. В ночное время также продолжается сбор урины.
4. Тару с биоматериалом рекомендуется хранить при температуре не выше 8 градусов и не ниже 5.
5. Сразу после забора последней порции, собранную мочу следует тщательно перемешать.
6. Предварительно у доктора следует уточнить, как сдавать суточный анализ мочи на белок в лабораторию. Существует два способа. Около 100 мл биоматериала отливают в емкость маленького размера и относят в лабораторию или можно доставить весь суточный объем в большой таре.
7. В случае, когда имеет значение изменение диуреза за сутки, то доктор рекомендует фиксировать объем любой потребляемой жидкости в течение 24 часов.

Таким термином обозначают высокие показатели белковых веществ в урине. С ее помощью отслеживают работу почек. Различают протеинурию следующих видов. Легкая – не является предвестником заболеваний и возникает по естественным причинам. Умеренная и выраженная – эти виды свидетельствуют о проблемах в работе почек. В этих случаях, кроме белка в суточном анализе мочи, присутствуют такие симптомы, как:

• боли в костях;
• головокружение;
• потеря аппетита;
• сонливость;
• тошнота;
• рвота;
• сильная утомляемость.

Причины появления белка в урине:

• сердечная недостаточность;
• болезни центральной нервной системы;
• гипертиреоз;
• инфекционный эндокардит.

Основным фактором, оказывающим влияние на появление в урине белковых соединений, являются неполадки в усвоении этого вещества. Различают протеинурию:

• Канальцевую. При некоторых заболеваниях невозможно или затруднительно всасывание белков.
• Клубочковую. В этом случае белковые молекулы не задерживаются и вместе с жидкостью выводятся. Такое явление характерно при следующих патологиях: пиелонефрит, повреждение почек токсинами, гломерулонефрит.
• Экстраренальная. Присутствуют повреждения мочевыводящих путей, характерные для уретритов, кольпитов и циститов.

Белок – это строительный материал, принимающий участие в различных процессах в организме индивида. Выявление его в урине считается признаком развития патологических процессов. Почечные тельца теряют целостность и вместе с вредными веществами в мочу попадает белок, а причиной такого сбоя является воспалительный процесс в почках. Анализ урины позволяет своевременно распознать болезнь, удостовериться в правильной работе почек в самый ответственный и важный период в жизни женщины. Любое, даже самое незначительное выявление белка у беременных в суточном анализе мочи – это признак начала развития патологии. Причинами его появления являются следующие заболевания:

• гломерулонефрит;
• красная волчанка;
• нефрит;
• гипертония;
• диабет сахарный.

С целью диагностики заболеваний почек используют простой метод – это суточной анализ мочи на белок. Соблюдение условий для правильного сбора мочи является обязательным для любой женщины в положении.

1. Наружные половые органы должны быть чистыми. Подмываться можно с использованием обычного мыла. Использовать антисептики или травяные сборы запрещено, так как они исказят достоверность результатов.
2. Собирают урину в чистую сухую тару с широким горлом.

В случае обнаружения в моче белка доктор назначает лечение, которое защитит плод от отрицательного влияния заболевания, ставшего причиной появления веществ белковой природы в урине. Далее следует выяснить причину этого явления. В большинстве случаев она кроется в нарушении работы почек. Появление белка в биоматериале во второй половине беременности – это один из симптомов гестоза. Затем присоединяются отеки, перепады артериального давления.

Всем женщинам рекомендуется при беременности:

• суточный анализ мочи на белок;
• регулярное посещение доктора;
• контроль за давлением;
• питание, усиленное витаминными комплексами;
• умеренное потребление жидкости;
• отказ от специй и по возможности от соли или уменьшение ее количества до минимума.

Расшифровку анализов следует доверить своему доктору. В случае выявления патологических причин появления белковых веществ в урине необходимую терапию назначает только медицинский работник. Не рекомендуется самостоятельно лечиться и увлекаться нетрадиционными методами. При выявлении причин, не связанных с патологическими процессами, уделяют особое внимание рациону. Важно помнить, что эффективность терапии зависит от своевременной диагностики.

источник

В состав рабочего места по определению белка в моче входят следующие элементы:

1. Пробирки химические, агглютинационные.
2. Набор градуированных пипеток.
3. Пипетки с узким оттянутым концом.
4. Спиртовки или газовая горелка.
5. Черная бумага.
6. Ледяная уксусная кислота.
7. Сульфосалициловая кислота.
8. Концентрированная азотная кислота.
9. Дистиллированная вода.

Все методики, применяющиеся для качественного определения белка в моче, основаны на свертывании белка. Свертывание белка проявляется выраженным в разной степени помутнением (от опалесценции до большой мутности) или выпадением хлопьев.

Качественное определение белка в моче может быть проведено одним из следующих способов:

1. кипячением с 10% раствором уксусной кислоты;
2. реакцией с 20% раствором сульфосалициловой кислоты;
3. реакцией с 50% раствором азотной кислоты (проба Геллера);
4. реакцией с 1% раствором азотной кислоты в насыщенном растворе поваренной соли (видоизмененная проба Геллера по Ларионовой).

Перед качественным определением белка в моче проводят следующую подготовительную работу:
1. Мутную мочу фильтруют через бумажный фильтр. Если получить прозрачный фильтрат не удается, производят повторное фильтрование через тот же фильтр или же смешивают мочу с небольшим количеством инфузорной земли или талька, после чего ее фильтруют.
2. Если моча имеет щелочную реакцию, ее подкисляют 10% раствором уксусной кислоты до слабокислой реакции под контролем лакмусовой или универсальной индикаторной бумажки.
3. При малом содержании солей (светло-желтая или бледно-желтая моча с малым удельным весом) к каждой
пробе добавляют несколько капель насыщенного раствора поваренной соли, так как недостаток солей обусловливает свертывание белка.
4. Степень помутнения наблюдают с помощью черного фона. В качестве фона используют черный картон или черную бумагу, применяемую в фотографии. Учет реакции на черном фоне позволяет выявить малейшую степень помутнения.

В отдельном штативе располагают пронумерованные пробирки. В них производят одну из описанных ниже реакций.

1. Проба кипячением с 10% раствором уксусной кислоты. Для постановки этой пробы необходим 10% раствор уксусной кислоты, который готовят следующим образом: 10 мл ледяной уксусной кислоты помещают в цилиндр и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл.

Техника определения белка. В химическую пробирку помещают 10—12 мл отфильтрованной мочи слабокислой реакции. Затем верхнюю часть пробирки с мочой осторожно нагревают до кипения и добавляют в нее 8—10 капель 10% раствора уксусной кислоты. Пробирку с мочой рассматривают на черном фоне в проходящем свете. При наличии белка в моче появляется мутность разной степени (от опалесценции до большой мутности) или выпадают хлопья. Контролем служит нижняя часть пробирки, не подвергавшаяся нагреванию. Этой пробой обнаруживают количество белка, начиная с 0,015%о (%о — promille).

2. Реакция с 20% раствором сульфосалициловой кислоты. 20 % раствор сульфосалициловой кислоты готовят следующим образом: 20 г сульфосалициловой кислоты растворяют в 70-80 мл дистиллированной воды, переводят в цилиндр емкостью 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки. Приготовленный реактив хранят в посуде из темного стекла.

Техника определения белка. В две пробирки одинакового диаметра помещают по 2—3 мл отфильтрованной мочи слабокислой реакции, в одну из пробирок к моче прибавляют 3—4 капли 20% раствора сульфосалициловой кислоты, другая пробирка служит контролем. При наличии белка в пробирке с реактивом появляется мутность или выпадают хлопья свернувшегося белка. В контрольной пробирке жидкость остается прозрачной. Сульфосалициловая кислота наряду с белком сыворотки осаждает альбумозы (пептиды), представляющие собой продукт распада белка. С целью уточнения причины помутнения мочи пробирку с мочой подогревают. Мутность, причиной образования которой оказались сывороточные белки, усиливается, мутность же, обусловленная присутствием альбумоз, исчезает. Эта проба имеет ту же чувствительность, что и предыдущая.

3. Реакция с 50 % раствором азотной кислоты (проба Геллера). 50% раствор азотной кислоты готовят следующим образом: к 50 мл азотной кислоты удельного веса 1,2-1,4 приливают 50 мл дистиллированной воды (разведение 1:1).

Техника определения белка. В узкую небольшую пробирку (тина агглютинационной) наливают 1 мл 50% азотной кислоты. В пипетку с узким оттянутым концом набирают 1 мл отфильтрованной исследуемой мочи, наслаивают на реактив и пробирку переводят в вертикальное положение. При наличии белка на границе жидкостей появляется белое кольцо. Время появления кольца, его свойства зависят от количества белка: если белка мало, то кольцо появляется не сразу, поэтому за его появлением следят в течение 2,5-3 минут. Минимальное количество белка, определяемое этим методом, 0,033°/оо. При меньшем содержании белка в моче кольцо не образуется. Учет результатов реакции производят на черном фоне в проходящем свете.

4. Реакция с 1% раствором азотной кислоты на насыщенном растворе поваренной соли — видоизмененная проба Геллера (по Ларионовой). Для проведения пробы используют 1 % раствор азотной кислоты, приготовленный на насыщенном растворе поваренной соли (реактив Ларионовой). 35 г поваренной соли растворяют в 100 мл дистиллированной поды, раствор фильтруют, к 1 мл концентрированной азотной кислоты удельного веса 1,2-1,4 приливают 99 мл приготовленного насыщенного раствора поваренной соли.

Техника определения белка такая же, как и при реакции с 50% раствором азотной кислоты (проба Геллера), но вместо 1 мл 50% раствора азотной кислоты в пробирку наливают 1 мл реактива Ларионовой и на него наслаивают 1 мл мочи. Появление белого кольца на границе жидкостей указывает на наличие белка в исследуемой моче. Проба по Ларионовой так же чувствительна, как и проба Геллера.

5. Колориметрическая (сухая) проба качественного определения белка. Колориметрическая (сухая) проба качественного определения белка в моче основана на воздействии, которое оказывает белок на цвет индикатора в буферном растворе.

Техника определения белка. Кусочек индикаторной бумаги, предназначенный для определения белка погружают в мочу на короткое время. Пробу считают положительной, если бумажка окрашивается в сине-зеленый цвет.

Количественное определение белка в моче основано на том, что при наслаивании мочи, содержащей белок, на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой на границе двух жидкостей образуется белое кольцо, причем если четкое белое кольцо появляется к 3 минутам, то содержание белка равно 0,033%о или 33 мг в 1000 мл мочи. Появление кольца ранее 3 минут свидетельствует о большем содержании белка в моче.
При количественном определении белка в моче выполняют следующие правила:

1. Количественное определение белка производят только в тех порциях мочи, где он был обнаружен качественно.
2. Определение производят с тщательно отфильтрованной мочой.
3. Точно соблюдают технику наслаивания исследуемой мочи на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой в соотношении реактива с мочой (1:1).
4. Время появления кольца определяют по секундомеру: при окончательном расчете количества белка учитывают время наслаивания мочи на азотную кислоту, которое равно 15 секундам.
5. Разведение мочи производят исходя из свойства кольца. При этом каждое последующее разведение мочи готовят из предыдущего.
6. Определение колец производят на черном фоне.

Наиболее распространены два метода количественно¬го определения белка в моче: метод Робертса — Стольникова — Брандберга и метод С. Л. Эрлиха и А. Я. Альтгаузена.

1. Метод Робертса-Стольникова-Брандберга. По этому способу количество белка в моче определяют путем разведения ее до тех пор, пока при очередном наслаивании мочи на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой кольцо появится точно к 3 минутам. Расчет количества белка производят, умножая 0,033%о на степень разведения мочи. Полученный результат выражает количество белка в миллиграммах на 1000 мл мочи, т. е. в promille (%о).
2. Метод С. Л. Эрлиха и А. Я. Альтгаузена. В штатив помещают ряд агглютинационных пробирок, в которые предварительно наливают по 1 мл 50% раствора азотной кислоты или реактива Ларионовой. Исследуемую мочу берут отдельной чистой, сухой пипеткой с узким оттянутым концом и наслаивают на реактив, после чего включают секундомер. За временем появления кольца следят, располагая пробирку на черном фоне. При появлении кольца секундомер выключают.

При наслаивании мочи в зависимости от количества белка может появиться компактное, широкое или нитевидное кольцо. Компактное, широкое кольцо появляется тотчас же после наслаивания мочи на реактив. Нитевидное кольцо может появиться сразу, до истечения одной минуты, или в промежутке от одной до 4 минут.

При появлении нитевидного кольца в пределах от одной до 4 минут производить разведение мочи не нужно!
Для вычисления количества белка в этом случае достачно использовать предложенную авторами таблицу-план (табл. 1).

Пример 1. При наслаивании мочи на реактив нитевидное кольцо образовалось через 2 минуты. Если бы кольцо образовалось к 3 минутам, то количество белка было было бы равно 0,033%о.

В данном же случае кольцо образовалось раньше. Соответственная поправка, согласно таблице-плану, для времени в 2 минуты равна 1+1/8. Это значит, что белка в данной порции мочи будет в 1+1/8 раза больше, чем 0,033°/оо, т. е. 0,033%о X(1+1/8) = 0,037°/оо.

При появлении нитевидного кольца до 1 минуты, т. е. через 40-60 секунд, производят одно разведение мочи в 1,5 раза (2 части мочи + 1 часть воды), а затем вновь наслаивают разведенную мочу на реактив и регистрируют появление кольца. При расчете результатов учитывают, что моча была разведена в 1,5 раза.

Пример 2. После наслаивания разведенной в 1,5 раза мочи нитевидное кольцо появилось к 2 минутам. Если бы кольцо появилось к 3 минутам, то белка было бы 0,033%. Соответственная поправка согласно таблице-плану, для времени в 2 минуты равна 1+1/8. Белка в моче содержится 0,033%оX1,5X(1+1/8) = 0,056%о.

Если нитевидное кольцо появляется сразу, мочу разводят в 2 раза (1 часть мочи + 1 часть воды). Разведенную мочу вновь наслаивают на реактив и отмечают появление кольца по истечении 1 минуты.

Пример 3. При наслаивании разведенной в 2 раза мочи на реактив нитевидное кольцо появилось через 1 минуту 15 секунд. Тогда количество белка в исследуемой моче по аналогии с прежними расчетами будет равно
0,033%оХ2Х(1+3/8) = 0,091%.
В случае появления широкого кольца мочу разводят в 4 раза (1 часть мочи + 3 части воды).
При последующем наслаивании разведенной мочи нитевидное кольцо может образоваться как до, так и по истечении одной минуты. В таких случаях расчет количества белка производят по аналогии с предыдущими примерами, т. е. 0,033% о умножают на степень разведения и на соответственную поправку.

Пример 1. Кольцо после разведения мочи в 4 раза появилось сразу же. Мочу разводят в 2 раза. После наслаивания мочи, разведенной в 8 раз (4X2), нитевидное кольцо образовалось через 1,5 минуты. В таком случае количество белка равно 0,033%оХ8X1,25 = 0,33%о и т. д.
При появлении компактного кольца мочу разводят в 8 раз (1 часть мочи+ 7 частей воды). При последующем наслаивании разведенной мочи на реактив может образоваться либо компактное, либо широкое, либо нитевидное кольцо.

Пример 2. При наслаивании мочи на азотную кислоту тотчас же образовалось компактное кольцо. Мочу разводят в 8 раз (1 часть мочи + 7 частей воды) и вновь производят ее наслаивание. При этом опять получилось компактное кольцо. Тогда мочу разводят еще в 8 раз (для этого в цилиндр или в пробирку берут 1 часть разведенной мочи и прибавляют к ней 7 частей воды). После очередного наслаивания разведенной мочи нитевидное кольцо образовалось сразу. Мочу разводят в 2 раза (1 часть мочи + 1 часть воды). После очередного наслаивания разведенной мочи нитевидное кольцо образовалось к 2 минутам. Расчет количества белка данной порции мочи производят так: 0,033,%оX8X8X2X(1+1/8) = 4,8%о.

Помимо таблицы-плана, имеется таблица с рассчитанными цифрами белка (табл. 2). Если моча не разведена, то количество белка отыскивают в графе «Цельная неразведенная моча». При разведении мочи в целое число раз (8,4,2) используют табл. 1. При разведении мочи в 1,5 раза используют табл. 2.

В соответствующих графах таблицы наводят время появления кольца и степень разведения мочи.
Цифра, находящаяся в точке пересечения горизонтальной и вертикальной линий, проведенных от этих двух показателей, указывает на количество белка в исследуемой моче (%о).

Возможно, что при положительной качественной пробе на белок кольцо при наслаивании на 50% раствор азотной кислоты не образуется. Это значит, что в моче белка меньше 0,033%о. В таких случаях количество белка в бланке анализа обозначают термином «следы».

Если белок определен количественно, в бланке анализа мочи отмечают содержание белка в promille, например «белок — 0,66%о».

Помимо количественного определения белка в отдельной порции мочи, рассчитывают суточное его количество в граммах. С этой целью собирают суточную мочу, измеряют ее количество и определяют содержание белка в promille. Затем производят расчет. Например, суточное количество мочи равно 1800 мл, белок — 7°/оо. Значит, белка в суточном количестве мочи содержится: 1,8X7 = 12,6 г.

источник

Исследование мочи на белок имеет важное значение в диагностическом отношении. Белковые вещества в моче показывают на патологический процесс.

Небольшое количество белка может быть обнаружено сложными методами и у здоровых животных. Эти ничтожные следы белка не принимаются во внимание и мочу здоровых животных клинически принято считать свободной от белка.

При патологических состояниях почечный фильтр теряет способность задерживать белки крови и они начинают поступать в большом количестве в мочу. В зависимости от факторов, которые обусловливают появление белка в моче, различают альбуминурию—физиологическую и патологическую.

К физиологическим альбуминуриям принято относить: алиментарную альбуминурию, альбуминурию новорожденных и альбуминурию рожениц. Количество белка при физиологических альбуминуриях бывает незначительным, состояние это является переходящим и, кроме того, в моче обычно не обнаруживается других компонентов, свидетельствующих о поражении почек, а также нет и соответствующих клинических проявлений. При анализе альбуминурии, помимо количественного определения белка и микроскопии осадка, необходимо тщательное исследование животного и особенно самой почки, а также и органов, функционально с ней связанных.

Патологическая альбуминурия наблюдается при многих заболеваниях и служит не критерием болезни, а одним из признаков заболевания, часто не определяющим сущности страдания.

Истинная, или реальная, альбуминурия встречается при острых воспалительных и дегенеративных заболеваниях почек. Количество белка, поступающего в мочу, зависит от степени поражения и распространенности. При диффузных поражениях, охватывающих равномерно почечную паренхиму, обычно отмечается большое количество белка в моче, в то время как одностороннее поражение или очаговое заболевание почек протекает с незначительной альбуминурией. При нефрозах количество белка достигает высокой сте-

Пени, в то время как хроническое заболевание почек протекает с незначительной альбуминурией, а в ряде случаев белок в моче не отмечается совсем.

Застойная гиперемия почек, возникающая на почве некомпенсированного порока сердца, сопровождается умеренной альбуминурией.

Из патологических процессов, не связанных непосредственно с почками, можно назвать заболевание крови паразитарного характера, лейкемии, первичные и вторичные анемии, тяжелые заболевания кишечника, такие, как энтерит, микозы кишечника, паратуберкулез крупного рогатого скота, тяжелые инфекционные и лихорадочные заболевания, при которых имеет место понижение кровяного давления и дегенерация почечного эпителия.

Скопление углекислоты в крови может при тяжелых страданиях легких служить причиной появления альбуминурии, которая является быстро-проходящей.

Кроме истинной альбуминурии, необходимо учитывать альбуминурию ложную или случайную, которая является следствием примеси белка в нижних мочевых путях—мочевом пузыре или уретре.

Для исследования мочи на белок необходимо, чтобы она была свободной от различных примесей (истечение из влагалища, фекалий и т. д.) и прозрачной.

Просветление мочи достигается различными способами—отстаиванием, фильтрованием и центрифугированием. Наиболее быстро просветление мочи достигается центрифугированием, после чего моча становится обычно совершенно прозрачной и только в отдельных случаях слегка опалесцирует. При незначительном помутнении мочи достаточно бывает отстаивания в течение одного часа.

Сильно мутную мочу можно просветлить фильтрованием через бумажный фильтр. При аммиачном брожении мутную мочу взбалтывают с животным углем, инфузорной землей или углекислым барием. При малых альбуминуриях этот метод непригоден, так как часть белка адсорбируется. Шпет в этих случаях рекомендует для объективной оценки полученных результатов сравнивать испытуемую мочу с нативной, не подвергавшейся обработке.

Для просветления мутной и слизистой мочи лошади очень удобен метод Кулакова. Моча наливается в узкий стеклянный цилиндр, закрывается ватной пробкой, которая стеклянной палочкой или специальными щипцами продавливается через слой мочи до дна цилиндра. Над пробкой после этого про-давливания появляется совершенно прозрачная моча, пригодная для химического исследования на белок.

Качественное исследование на белок. В ветеринарной практике нашли широкое применение следующие пробы.

Проба кипячением. В пробирку набирается 5—10 мл испытуемой мочи. Щелочная моча подкисляется несколькими каплями 10%-ной азотной или уксусной кислоты до нейтральной или слабокислой реакции и на пламени горелки нагревается до кипения.

Помутнение жидкости или выпадение хлопчатого осадка указывает на присутствие белка. При отрицательном результате можно добавить к горячей моче равный объем насыщенного раствора поваренной соли. Моментально^ помутнение всей жидкости свидетельствует о наличии в моче белка. В комбинат ции с реакцией на высаливание проба с кипячением является достаточно чувствительной и довольно простой.

Проба Геллера. В пробирку наливают прозрачную испытуемую мочу. С помощью пипетки под мочу подслаивается концентрированная азотная кислота. Синев рекомендует мочу наслаивать на кислоту. В присутствии белка на границе двух жидкостей получается белое рыхлое кольцо различной толщины в зависимости от количества белка, находящегося в моче. При незначительных альбуминуриях кольцо возникает спустя 2—3 минуты после подслаивания или наслаивания жидкостей. Проба с азотной кислотой дает положительный результат при наличии в моче 0,033% белка.

Проба концентрированной азотной кислотой дает положительный результат не только с сывороточными белками, но и с альбумозой, бальзамическими веществами и нуклеоальбуминами. В присутствии мочекислых солей и красящих веществ в моче на границе двух жидкостей получаются цветные кольца. Осадок из альбумоз исчезает при нагревании и вновь появляется при охлаждении испытуемой порции мочи, а нуклеоальбумин растворяется в избытке азотной кислоты. Муть с бальзамических и смолистых веществ растворяется после прибавления двойного объема спирта или больших количеств эфира.

Проба Бедекера. Мочу предварительно необходимо разбавить водой в равных количествах, чтобы исключить возможность осаждения мочекислых солей. Затем к 5 мл мочи добавляют по каплям 10%-ный раствор уксусной кислоты до совершенно ясной кислой реакции. Если после этого появляется муть, то мочу необходимо профильтровать, чтобы избавиться от нуклеоальбумина, муцина или уратов. Затем в мочу добавляют 3—4 капли 10%-ного раствора железосинеродистого калия (избыток реактива растворяет белок). В зависимости от количества белка появляется опалесценция, муть или хлопчатый осадок. Эта проба выявляет сывороточный белок и альбумозу. Последняя растворяется при кипячении и вновь появляется после охлаждения.

Эта проба может быть видоизменена следующим образом. Непосредственно перед исследованием смешивают в равных объемах 10%-ный раствор уксусной кислоты и 10%-ный раствор железосинеродистого калия и на эту смесь наслаивается прозрачная разбавленная пополам моча. Положительная реакция характеризуется появлением белого хлопчатого осадка на границе двух жидкостей. Проба с железосинеродистым калием обнаруживает белок в количестве 0,002% (моча не должна содержать цинка).

Проба Танрета. Реактив состоит из 1,35 сулемы, 3,32 йодистого калия, 20,0 уксусной кислоты и 60,0 дистиллированной воды. Реактив добавляют к профильтрованной моче по каплям. Положительная реакция характеризуется появлением мути или белого хлопчатого осадка. Пробой с сулемой выявляется сывороточный белок и альбумоза. Если при нагревании мочи осадок исчезает, а после охлаждения появляется вновь, то это говорит о наличии в моче альбумозы. Проба с сулемой особенно пригодна для обнаружения в моче альбумозы.

Проба Роча и Вильяма. В качестве реактива используется 20%-ный раствор сульфосалициловой кислоты (по нашим наблюдениям, вполне пригоден для использования и 10%-ный раствор). В профильтрованную мочу реактив добавляют по каплям. При наличии сывороточного белка получается муть или выпадает белый хлопчатый осадок. Эта проба обладает большой чувствительностью, давая положительную реакцию при разведении белка в моче 1 : 50 000.

Рухлядев эту пробу особенно рекомендует для исследования мочи лошади. Ют реактива растворяются углекислые соли, находящиеся в большом количестве в моче лошади, моча просветляется, избавляя тем самым от предварительного фильтрования или отстаивания в спешных случаях.

Приблизительное определение количества белка в моче возможно при известном навыке по интенсивности получаемой реакции. Более точные результаты получаются при проведении количественных проб. Аналитический способ по весу хлопотлив для клинической практики и требует большой осмотрительности.

Наиболее простым и широко распространенным способом количественного определения белка является метод Эсбаха и скоростной метод Ауфрехта.

Метод Эсбаха. Для определения количества белка по этому методу необходимо иметь специальный альбуминометр, предложенный автором, который представляет собой толстостенную, градуированную, с закруглен ым или коническим дном пробирку на ножке или в специальной подставке. Кроме альбуминометра, необходимо иметь также реактив Эсбаха следующего состава: 1,0 пикриновой кислоты, 2,0 лимонной кислоты и 100,0 дистиллированной воды.

Моча высокого удельного веса разбавляется пополам дистиллированной водой, моча щелочная подкисляется раствором виннокаменной кислоты.

Испытуемая моча наливается до метки—И (метка И—моча) и затем до метки Р наливается реактив. Альбуминометр затем закрывается резиновой пробкой и осторожно, чтобы не вспенивать мочу, поворачивается несколько раз (2—3 минуты). В присутствии белка получается или помутнение или взвешенный в жидкости рыхлый белый осадок. После этого альбуминометр оставляют стоять при комнатной температуре на 24 часа, после чего количество белка определяется по шкале, нанесенной на стенке альбуминометра.

Каждое деление нижнего конца альбуминометр а соответствует разведению белка 1 : 1 000. Если проба ставилась с мочой, разведенной водой, то показания альбуминометра следует умножить на степень разведения.

Следует учесть, что при лечении хинином, антипирином и бальзамическими веществами может выпадать осадок и при отсутствии в моче белка.

Метод Ауфрехта является ускоренным методом определения количества белка в моче. Для постановки пробы необходимо иметь альбуминометр Ауфрехта, представляющий собой градуированную центрифужную пробирку, центрифугу и реактив следующего состава: 1,5 пикриновой кислоты, 3,0 лимонной кислоты и 100,0 дистиллированной воды.

В альбуминометр наливают 4 мл кислореагирующей или подкисленной мочи и 3 мл реактива. Пробирка закрывается резиновой пробкой и медленно несколько раз переворачивается. Центрифугирование производится в течение 2—3 минут, после чего определяется количество выпавшего осадка. Разведения мочи водой при этом методе не требуется.

В практическом отношении очень удобной является следующая количественная проба: в градуированную центрифужную пробирку наливают 10 мл профильтрованной и подкисленной мочи и затем последовательно добавляют 1 мл уксусной кислоты, 1 мл воды и 3 мл 10%-ного раствора желтой кровяной соли. После 3-минутного центрифугирования при 2 000 оборот определяется процент содержания белка из расчета 0,5% белка на каждые 0,25 мл осадка.

Из других методов определение количества белка в моче заслуживает внимания метод Робертса—Стольникова.

Метод Робертса — Стольников а. Метод количественного определения белка по Стольникову основан на наблюдении над предельной чувствительностью пробы с концентрированной азотной кислотой, по которой ровно через 3 минуты после наслаивания мочи на реактив появляется белое кольцо. Количество белка, при котором появляется положительная реакция, равняется 0,033%. Задача заключается в том, чтобы приготовить такое разведение мочи, которое дало бы положительную реакцию ровно через 3 минуты после наслаивания. В этом разведении количество белка и будет равно 0,033%.

Техника определения. В один ряд пробирок набирают по 2 мл крепкой азотной кислоты, а в другой по 2 мл мочи, разведенной в 10 раз (1 мл мочи на 9 мл воды). Затем делается новое разведение мочи добавлением дистиллированной мочи в количествах, указанных в таблице. После этого разбавленная моча наслаивается на кислоту и по часам учитывается разведение, которое дает положительную реакцию ровно через 3 минуты. По прилагаемой таблице нетрудно найти содержание белка в неразбавленной моче.

источник

Цель занятия. Освоить методы определения реакции мочи, научиться исследовать мочу на белок, альбумозы, сахар, кетоновые тела, кровь, кровяные пигменты, миоглобин, индикан, желчные пигменты и желчные кислоты.

Объекты исследования и оборудование. Пробы мочи, дающие положительные и отрицательные реакции на белок, альбумозы, сахар, кетоновые тела и т.п.

Индикаторная бумага, pH-метры, фотоэлектроколориметр, реактивы для определения белка, альбумоз, сахара, кетоновых тел, кровяных пигментов, индикана, желчных пигментов и кислот.

Химическое исследование мочи включает установление ее pH, пробы на белок, альбумозы, сахар, кетоновые тела, кровь и кровяные пигменты, миоглобин, индикан, желчные пигменты и желчные кислоты.

Определение pH. Реакцию мочи определяют с помощью рН-мет- ра или индикаторной бумаги («Рифан», «Фан» универсальная), а также полифункциональных полосок-индикаторов, которые позволяют устанавливать также и другие характеристики мочи (наличие белка, глюкозы, кетоновых тел, уробелина, билирубина, аскорбиновой кислоты, следов крови и т.п.).

В норме pH мочи зависит от состава кормов. У травоядных животных реакция щелочная или нейтральная, у плотоядных умеренно кислая. Резко кислую реакцию наблюдают при заболеваниях, сопровождающихся лихорадкой, а также при голодании, почечной недостаточности; резко щелочную — при циститах, рассасывании экссудатов и транссудатов, после рвоты.

Определение белка. Белок в моче выявляют качественными и количественными пробами.

Качественная проба с сульфосалициловой кислотой. Это одна из самых чувствительных проб. В пробирку вносят 2—3 мл мочи с кислой реакцией, затем 5—6 капель 20%-го раствора сульфосалициловой кислоты. При наличии белка в моче в содержимом пробирки появляется помутнение, не исчезающее при подогревании (при наличии альбумоз помутнение исчезает при подогревании).

Качественная проба с азотной кислотой. В пробирку с 1—2 мл 50%-го раствора азотной кислоты осторожно приливают по стенке мочу так, чтобы эти две жидкости не смешивались. В случае присутствия белка в моче на границе между жидкостями появляется белое кольцо (диск), представляющее собой слой белка, свернувшегося под действием азотной кислоты. Кольцо может появиться также при реакции кислоты с другими составными частями мочи: например, моча, богатая уратами, также дает кольцо, состоящее из мочевой кислоты и уратов, но оно появляется не на границе азотной кислоты и мочи, а выше. При легком подогревании уратное кольцо исчезает. Кроме того, кольцо образуется в результате осаждения муцина, но значительно выше границы между мочой и реактивом, и оно не так резко выражено.

Количественная проба Робертса — Стольникова. В пробирку вносят 2 мл 50%-го раствора азотной кислоты и осторожно наслаивают такое же количество исследуемой мочи. Появление серого кольца на границе между кислотой и мочой в течение первых 2 мин указывает, что белка в пробе содержится более 0,033 г/л. В этом случае мочу разводят дистиллированной водой. Количество белка вычисляют, умножая 0,033 на степень разведения мочи. Содержание белка в моче при ее различных разведениях проще вычислять с помощью специальной таблицы (табл. 5.1).

Определение содержания белка в моче, разведенной в различных соотношениях

Моча, разведенная 1: 10 (3 мл мочи + 27 мл дистиллированной воды), мл

Количество добавляемой дистиллированной воды, мл

Количество белка в моче, г/л

Количественная проба с сульфосалициловой кислотой. В пробирку вносят 1,25 мл прозрачной мочи и добавляют 5 мл 3%-го раствора сульфосалициловой кислоты. Через 5 мин определяют оптическую плотность пробы в кюветах с рабочей гранью шириной 5 мм при светофильтре с длиной волны 650—590 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля, который готовят следующим образом.

В центрифужную пробирку вносят 1,25 мл исследуемой прозрачной мочи и добавляют 5 мл 0,9%-го раствора хлорида натрия. Оптическую плотность контрольной пробы измеряют при тех же условиях, что и плотность опытной. Из оптической плотности опытной пробы вычитают оптическую плотность контроля. Показатель рассчитывают по калибровочному графику, который строят на основании разведения стандартного альбумина 0,9%-м раствором хлорида натрия с концентрацией 5, 10, 50 и 100 мг в 100 мл раствора. Из каждого стандартного разведения берут 1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы.

Появление белка в моче называется протеинурией. Последняя по своему происхождению может быть внепочечной (неренальной) и почечной (ренальной).

При внепочечных протеинуриях белок к моче примешивается в мочевых путях, что чаще бывает при циститах, уретритах, пиелонефритах, воспалении половых органов.

При почечных протеинуриях белок в мочу попадает непосредственно из почек. Почечные протеинурии бывают функционального и органического происхождения. Функциональные развиваются вследствие нарушения проницаемости капилляров почек. Их отмечают у коров в день родов, у новорожденных жеребят в течение первых 3 сут жизни. Органические протеинурии — это результат поражения паренхимы почек и увеличения проницаемости капилляров клубочков. Почечную протеинурию наблюдают при гломерулонефритах, нефрозах, застойных явлениях, интоксикациях, часто при инфекционных заболеваниях. Почечная и внепочечная протеинурии нередко комбинируются.

Определение альбумоз. Альбумозы в моче выявляют с помощью биуретовой реакции и пробой с сульфосалициловой кислотой.

Биуретовая реакция. К 3 мл подкисленной мочи добавляют около 1 мл насыщенного раствора хлорида натрия, кипятят, а затем горячую пробу фильтруют. К фильтрату добавляют 1 /₂ объема концентрированного раствора гидроксида натрия и несколько капель сульфата меди. При положительной реакции появляется красно-фиолетовое окрашивание.

Проба с сульфосалициловой кислотой. К 2—3 мл исследуемой мочи прибавляют 5—6 капель 20%-го раствора сульфосалициловой кислоты. Наличие в моче альбумоз подтверждается появившимся помутнением, которое исчезает при подогревании пробирки.

Альбумозы в моче обнаруживают при гнойных, некротических процессах, в послеродовом периоде, при заболеваниях, сопровождающихся усиленным клеточным распадом.

Определение сахара. На сахар нужно исследовать свежую мочу. При ее хранении в теплом месте (не в холодильнике) глюкоза разлагается под действием ферментов, бактерий, грибов.

Проба Бенедикта. Реактив Бенедикта готовят следующим образом. В мерную колбу на 1000 мл наливают 700 мл дистиллированной воды, добавляют 173 г цитрата натрия и 100 г безводного (или 200 г кристаллического) карбоната натрия. Смесь нагревают до растворения всех ее компонентов. Отдельно растворяют 17,3 г сульфата меди в 100 мл дистиллированной воды. Оба раствора смешивают в мерной колбе и после остывания их общий объем доводят дистиллированной водой до 1000 мл.

В пробирку вносят 5 мл реактива и прибавляют 8—10 капель мочи. Пробу нагревают 2 мин над пламенем спиртовки или 5 мин на кипящей водяной бане. Дают остыть в течение 5—7 мин. При окрашивании содержимого пробирки в синий цвет пробу считают отрицательной. При наличии сахара в моче (более 0,5 г в 100 мл) отмечают зеленое, желтое или красное окрашивание жидкости и осадок на дне пробирки. Причем при содержании в 100 мл мочи от 0,05 до 0,5 г глюкозы цвет пробы зеленый, от 0,5 до 1 г — желто-зеленый, от 1 до 2 г — желтый и больше 2 г — красный.

Проба Ниляндера. Реактив Ниляндера (нитрат висмута —2 г, сегнетовая соль — 4 г, 10%-й раствор гидроксида натрия — 100 мл) — бесцветный раствор, хорошо сохраняющийся в склянке из темного стекла. При продолжительном хранении реактива его качество следует проверять перед постановкой опыта. Для этой цели в пробирку наливают реактив Ниляндера, разбавленный в 10 раз водой, и нагревают. Если реактив не испорчен, то при кипении жидкость не должна темнеть.

Проба заключается в следующем: к 3—4 мл реактива Ниляндера добавляют около 2 мл мочи и нагревают смесь в течение 3—4 мин над пламенем спиртовки. При положительной реакции смесь мутнеет и приобретает окраску от коричневой до черной. Чувствительность пробы довольно высокая, она выявляет содержание 0,1 г сахара в 100 мл мочи. Однако при наличии в моче значительного количества мочевой и салициловой кислот, а также гемоглобина проба дает ложноположительную реакцию.

Экспресс-метод. Для экспресс-определения сахара в моче используют специальную индикаторную бумагу «Глюкотест» или по- лифункциональные диагностические полоски. Определить содержание сахара в моче можно с помощью орто-толуидинового метода (см. исследование крови).

В норме моча содержит незначительное количество глюкозы, которое не удается обнаружить обычными качественными реакциями. Если способность почечных канальцев реабсорбировать глюкозу нарушается, то в моче появляется глюкоза — развивается глюкозурия. Последняя может быть физиологической и патологической. Физиологическая глюкозурия возникает при даче животным кормов, богатых углеводами, иногда в результате испуга, а также при беременности. Патологическую глюкозурию наблюдают при сахарном диабете, отравлениях соединениями тяжелых металлов, хлоралгидратом, скипидаром и другими токсичными веществами, при дистрофии печени, воспалительных процессах в головном и спинном мозге.

Определение кетоновых тел. Их обнаруживают с помощью пробы Лестраде. Готовят реактив следующего состава: нитропруссид натрия — 1 г, сульфат аммония — 20 г, карбонат натрия (безводный) — 20 г. Навески тщательно растирают в фарфоровой ступке, смешивают и хранят в хорошо закупоренной стеклянной банке.

На белую кафельную плитку насыпают небольшое количество сухого порошка, который увлажняют двумя-тремя каплями исследуемой мочи. При наличии кетоновых тел в моче реактив приобретает цвет от розового до темно-фиолетового. Окраска может появиться через 2—3 мин.

В норме моча содержит очень мало кетоновых тел, и они не улавливаются пробой Лестраде. Положительная реакция на кетоновые тела в моче — кетонурия — встречается чаще всего при кетозе молочных коров, кетонурии суягных овец, листериозе, продолжительных желудочно-кишечных расстройствах.

Определение крови и кровяных пигментов. Кровь в свежей моче можно легко обнаружить под микроскопом. Кровяные пигменты (гемоглобин и его дериваты — метгемоглобин, сульфгемоглобин, гемосидерин), а также миоглобин выявляют с помощью специальных проб.

Бензидиновая проба. К 2 мл 3%-го раствора пероксида водорода добавляют 10—15 капель свежеприготовленного насыщенного раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте, размешивают и затем по каплям вносят исследуемую мочу. Окрашивание смеси вначале в зеленый, а затем в синий цвет указывает на наличие в моче кровяных пигментов. Моча здоровых животных дает отрицательную реакцию на кровяные пигменты.

Гематурию — появление крови в моче — наблюдают при нефритах, нефрозонефритах, инфарктах почек, мочекаменной болезни, цистите, С-гиповитаминозе, распаде опухолей в мочевой системе. Гемоглобинурию — появление гемоглобина в моче — отмечают при гемоглобинемиях, которые чаще всего развиваются как следствие кровепаразитарных болезней, острых отравлений, ожогов, тяжелых инфекционных заболеваний.

Проба с сульфатом аммония. В 5 мл исследуемой мочи вносят 2,8 г кристаллического сульфата аммония, после чего смесь фильтруют. Красно-коричневый цвет фильтрата свидетельствует о наличии мио- глобина, отсутствие окраски — гемоглобина.

Моча здоровых животных не содержит миоглобина. Его появление в моче — миоглобинурию — наблюдают при механических повреждениях мышц, паралитической миоглобинурии лошадей.

Определение индикана. В моче здоровых животных индикан содержится в незначительном количестве. Повышенное выделение индикана с мочой — индиканурию — наблюдают при интенсивном гниении белковых веществ в кишечнике (непроходимость кишечника, копростазы, перитонит), а также при усиленном распаде белков в организме (абсцессы, опухоли и др.). Индикан в моче выявляют с помощью специальных проб.

Проба Обермайера. В пробирку вносят 6 мл мочи и 6 мл раствора хлорида железа III [0,2-0,4 г хлорида железа 111 растворяют в 100 мл концентрированной хлороводородной (соляная) кислоты]. Через 5 мин добавляют 1—2 мл хлороформа, после чего содержимое пробирки встряхивают. При наличии индикана хлороформ в нижней части пробирки окрашивается в синий цвет. Интенсивность окраски зависит от количества индикана.

Проба Яффе. В пробирку вносят сначала 2—3 мл профильтрованной мочи, затем равный объем концентрированной соляной кислоты, 2—3 мл хлороформа и 1—2 капли 2%-го раствора перманганата калия. Содержимое пробирки перемешивают. Реакцию оценивают после оседания хлороформа. При наличии индикана хлороформ окрашивается в голубой или розовый цвет.

Определение желчных пигментов и желчных кислот. Из желчных пигментов в моче могут присутствовать билирубин и уробилиноге- новые (уробилиновые) тела, которые обнаруживают соответствующими пробами или с помощью диагностических полосок.

Проба на билирубин (по Розину). В пробирку вносят 3—4 мл исследуемой мочи и наслаивают водный раствор йода (1 г кристаллического йода, 2 г йодида калия и 30 мл дистиллированной воды) или 1%-й спиртовой раствор йода. При положительной реакции на границе между слоями жидкостей появляется зеленое кольцо.

В норме моча содержит билирубин в малых количествах, не выявляемых существующими реакциями. Билирубин в моче — би- лирубинурию — обнаруживают при механической и паренхиматозной желтухе.

Проба на уробилиногеновые (уробилиновые) тела (по Богомолову). В химический стакан вносят 10-15 мл мочи и 2—3 мл насыщенного раствора сульфата меди. В случае помутнения мочи в нее добавляют несколько капель концентрированной соляной кислоты до просветления раствора. Через 5 мин в стакан вносят 2—3 мл хлороформа и содержимое взбалтывают. При наличии уробилиногеновых тел слой хлороформа приобретает цвет от розово-красного до медно- красного.

С мочой здоровых животных выводится незначительное количество уробилиногеновых тел, которые при хранении мочи переходят в уробилиновые тела. Повышенное содержание уробилиногеновых тел — уробилиногенурию (уробилинурию) — наблюдают при гемолизе эритроцитов в кровяном русле, например при кровепаразитарных болезнях, отравлениях гемолитическими ядами, болезнях печени и кишечника. Полное отсутствие уробилиногеновых тел указывает на механическую желтуху.

Проба на желчные кислоты с серным цветом. В колбу вносят 40— 60 мл мочи и выдерживают при комнатной температуре в течение 20—30 мин, после чего на поверхность содержимого колбы насыпают порошок серного цвета. Если порошок не тонет, то проба отрицательная; если тонет — положительная. Проба бывает положительной при содержании желчных кислот и солей в моче выше 0,01%. Более четкие результаты получают, если мочу разводят до относительной плотности 1,015.

Проба на желчные кислоты с метиленовым синим. Пробу выполняют в двух пробирках: в одну — контрольную — вносят 2 мл дистиллированной воды, в другую — 2 мл исследуемой мочи. В обе пробирки добавляют по одной капле 0,2%-го раствора метиленового синего. При положительной реакции в пробирке с исследуемой мочой появляется зеленое окрашивание.

Количество желчных кислот в моче значительно увеличивается при механической и паренхиматозной желтухе.

источник

Р-вы 50% р-р азотной к-ты или р-в ларионовой. Ход определения: в штатив ставят ряд пробирак и наливают по 1 мл р-ра азотной к-ты доб-ть 1 мл мочи наслаивают на реактив и засекают время, при появлении кольца записываем время появления кольца. Если кольцо широкое делают разведение мочи.

4.Определение концентрации белка в моче с 3% сульфосалициловой кислотой.

Р-вы: 3% сск, хлорид натрия 9%, ст р-р альбумина 10%.Ход определения: В две мерные центрифужные пробирки «О» – опыт и «К» — контроль помещают по 1,25мл прозрачной мочи. В опытную прибавляют 3,75мл 3% раствора сульфосалициловой кислоты, в контрольную 3,75мл 0,9% раст-вора хлорида натрия. Оставляют на 5 мин., а затем фотометрируют на ФЭКе при длине во-лны 590 – 650нм (оранжевый или красный светофильтр) в кювете с толщиной слоя 5мм опыт против контроля. Расчет ведут по калиб-ровочному графику ил таблице. Принцип метода основан на том, что белок с сульфосалици-ловой кислотой дает помутне-ние, интенсивность которого прямо пропорционально концентрации белка.

5.обнаружение глюкозы в моче проба Гайнеса-Акимова. Принцип: Глюкоза при нагревании в щелочной среде восстанавливает дигидроксид меди (желтого цвета) в моногидроксид меди (оранжево-красного цвета).Приготовление реактива: 1) 13,3 г хим. чистого кристаллического сульфата меди(СиSO₄. 5 Н₂О) раствор. в 400мл воды. 2) 50г едкого натра растворяют в 400мл воды. 3) 15г чистого глицерина разводят в 200мл воды. Смешивают первый и второй растворы и тотчас приливают третий. Реактив стоек. Ход определения: В пробирку вносят 1 каплю мочи и 9 капель реактива и кипятят на водяной бане 1-2 мин. Положительная проба: желтая или оранжевая окраска жидкости или осадка.

6. Качественное определение глюкозы в моче глюкооксидазным методом. Принцип метода: глюкоза окисляется в присутствии глюкозооксидазы, согласно реакции: Глюкоза + О₂ гликонолантом + Н₂О₂.Образующаяся перекись Н под действием перексидазы окисляет субстрат с образованием окрашенного продукта.

Приливаем и инкубируем 15 минут при 37 0 С. Смотреть на КФК, кювета 5мм.

Затем производят расчёты по формуле: С _оп = Ext _оп. Cст/ Ect _cт.

7.Обнаружение кетоновых тел в моче пробой Лестраде. На предметное стекло наносят (на кончике скальпеля) порошка или таблетку р-ра Лестраде, а на него 2-3 капли мочи. При наличии кетоновых тел появится окраска от розового до фиолетового. Пробу оценивают на белом фоне.

8.Обнаружение кровяного пигмента в моче пробой с 5 % спиртовым раствором амидопирина.

1.5% спиртовой р-р амидопирина(0,5 г амидопирина растворяют в 10 мл спирта 96%)2.3% р-р перекиси водорода 1,5 г гидропирита растворяют в 50 мл воды)Ход методики:в пробирку наливают 2-3 мл уксусно-эфирной вытяжки или взболтанной не фильтрованной мочи.добавляют 8-10 капель 5 % р-ра амидопирина и 8-10 капель 3% р-ра перекиси водорода;учитывают результат не позднее 2-3 мин.Проба считается положительной при наличии серо-фиолетового окрашивания.

Обнаружение уробилина в моче пробой Нейбауэра.

Основана на цветной реакции уробилиногена с реактивом Эрлиха,который сост.из 2 г парадиметиламинобенальдегида и 100 мл р-ра хлористоводородной к-ты(200 г.л).Ход определения.К нескольким мл свежевыделенной мочи приливают несколько капель р-ра Эрлиха(на 1 мл мочи и на 1 мл р-ра.Появление красного цв.в первые 30 с указывает на повыш.сод.уробилиногена.В норме окраска появляется позже или вообще отсут.При стоянии мочи уробилиноген превращается в уробилин и проба может быть ложноотрицательной.Пробу нельзя нагревать,т.к можно могут образоваться побочные комплексные соед,альдегида с порфиринами,индолом и лек.препаратами.

Обнаружение билирубина в моче пробой Розина.

Спиртовой р-р йода(10г.л):1 г кристаллического йода растворяют в цилиндре вместимостью 100 мл в 20-30 мл 96 гр.спирта-ректификата,а затем доб.доливают спиртом до метки.Ход определения.В хим.пробирку наливают 4-5 мл исследуемой мочи и осторожно наслаивают на нее спиртовой р-р йода(если моча имеет низкую относительную плотность,то следует наслаивать ее на спиртовой р-р йода).При наличии билирубина на границе между жидкостями обр.зелёное кольцо(при приёме антипирина,а также при сод.в моче кровяного пигмента проба оказывается положительной).У здорового человека эта проба отрицательна.

Исследование мочи методом сухой химии (моно- политестами).

Принцип. Метод основан на воздействии, оказываемом белком на цвет индикатора, находящегося в буферном растворе, в результате чего краситель изменяет цвет с желтого на синий.

При проведении реакции на присутствие белка в моче и определении pH с помощью индикаторной бумаги рекомендуется выполнить следующие указания:

1. Собрать мочу в тщательно вымытую посуду.
2. Использовать свежесобранную, не содержащую консервантов мочу.
3. Тщательно закрыть пенал после извлечения из него необходимого количества индикаторных полосок бумаги.
4. Не захватывать пальцами индикаторные зоны.
5. Использовать только в пределах указанного на этикетке срока годности.
6. Соблюдать правила хранения индикаторной бумаги.
7. Проводить оценку результатов в соответствии с указаниями, имеющимеся в инструкции.

Выполнение анализа мочи на анализаторе сухой химии мочи.

Ход определения. Из пенала извлекают полоску индикаторной бумаги и погружают ее в исследуемую мочу так, чтобы одновременно смочить обе индикаторные зоны. Через 2-3 с полоску помещают на белую стеклянную пластинку. Немедленно проводят оценку pH, пользуясь цветной шкалой, нанесенной на пенале. Значение pH на цветной шкале соответствуют 6,0 (или меньше); 7,0; 8,0; 9,0.

Оценку содержания белка проводят через 60 с после смачивания полоски мочой, пользуясь цветной шкалой, нанесенной на пенале. Градациями цветной шкалы : 0 (отрицательная), 1 (следы), 2 (слабо положительная), 3 (положительная), 4 (резко положительная)- соответствуют концентрации белка : 0,1; 1; 3; 10 г/л.

Подготовка мочи, приготовление препаратов из осадка мочи микроскопического исследования ориентировочным способом.

Микроскопическое исследование осадка мочи проводят ориентировочным методом при общем анализе и количественным подсчетом форменных элементов для более точной оценки степени луйкоцитурии и гематурии.

Правила подготовки осадка мочи для микроскопирования.

Микроскопическому исследованию подлежит первая утренняя порция мочи.

После предварительного перемешивания берут 10 мл мочи, центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин.

Затем центрифужную пробирку с мочой резким движением опрокидывают, быстро сливают надосадочную жидкость в пустую банку.

Перемешивают, каплю помещают на предметное стекло и осторожно прикрывают покровным.

Если осадок состоит из нескольких слоев, то готовят препарат, а затем вновь центрифугируют и готовят препараты из каждого слоя в отдельности.

При отсутствии видимого на глаз осадка каплю мочи наносят на предметное стекло и мокроскопируют.

В начале материал рассматривают при малом увеличении (окуляр 7-10, обьектив 8), конденсор при этом опускают, несколько суживают диафрагму, затем препарат детально изучают при большом увеличении (окуляр 10,7 ; обьектив 40).

На малом увеличении обнаруживают цилиндры, комплексы клеток, яйца паразитов, крупные кристалы. Розовый осадок бывает за счет уратов, эритроцитов. Белый осадок может быть в присутствии аморфных фосфатов, лейкоцитов. Элементы осадка делятся на организованные (эпителий, элементы крови, цилиндры) и неорганизованные (соли).

14.Количественное исследование осадка мочи по Нечипоренко.

Метод используется при скрытых вялотекущих воспалительных процессах (пиелонефрит, гломерулонефрит), скрытая пиурия. Для исследования патологического процесса в динамике. Для оценки эффективности проводимого лечения. Достоинства метода: технически прост, не требует большого кол-ва мочи и длитель. его хранения, применяется в амбулаторной практике. Обяз. условия: утренняя моча, средняя порция, кислая р-ция (в щелочной может быть частичный расспад клеточных элементов). 1. Перемешивают мочу.2.В мерную центрифужную пробирку помещают 10 мл мочи и центрифугируют 10 мин 1500 об/мин. 3. После центриф. отсасыв. Пипеткой верхнюю часть жидкости, оставл. ровно 1 мл осадка. 4.Осадок тщательно перемешивают и заполняют камеру Горяева. 5. Через 3-5 мин после заполн, приступают к подсчёту форменных элементов. 6.Подсчёт лейкоцитов,Er, цилиндров с окуляром 15 объективом 8 при опущ. конденсоре, в 100 больших квадратах камеры. Считают отдельно лейкоциты, Er, цилиндры (счит. не менее 4 камер Горяева) выводят сред. ариф. Х=А х 0,25х 10 6 /л. Норма: лейк. 2-4х 10 6 /л, Er до 1 х 10 6 /л, цилиндров до 0,02 х 10 6 /л (один на 4 камеры). У детей: лейк. до 2-4х 10 6 /л, Er до 0,75 х 10 6 /л, цилиндров до 0,02 х 10 6 /л.

15. Исследование мочи по Зимницкому

Этой пробой устанавливают способность почек концентр. и разводить мочу. Сущность пробы закл. в динамическом определении относительной плотности и кол-ва мочи в трёхчасыв порциях в течение суток. Проведение пробы: после опорожнения мочевого пузыря в 6 часов утра в унитаз, пациент через каждые три часа собирает мочу в отдельные банки в течение суток. Всего 8 порций. Ход исслед.: 1. Доставл. Мочу расставляют по часам и в каждой порции определяют кол-во и относительную плотность. 2. Сравнивают суточное кол-во мочи и кол-во выпитой жидкости, чтобы опред. % её выведения. 3. Вычисляют дневной и ночной диурез, суммируют, получают суточный диурез. 4. Устанавливают диапазон колебаний кол-ва и относительн. плотности мочи за сутки т.е. какова разница между самой малой порцией и большой. Показ. пробы у здор. людей: 1. Суточный диурез 800-1500 мл. 2. Дневной диурез значительно преобладает над ночным. 3.Колебания объёма мочи в отдельных порциях значительные (от 50 до 400 мл). 4. Колебания р от 1,003 до 1,028, должно быть более 0,008. При функ. недостаточности почек: гипостенурия, гипоизостенурия, изостенурия, гиперстенурия, олигурия, анурия, никтурия.

16. Описание общих свойств кала.

В норме кал состоит из продуктов секреции и экскреции пищеварит тракта, остатков неперевар или частично перевар пищевых продуктов, микробной флоры. Количество кала 100-150 г. Консистенция-плотная. Форма-цилиндрическая. Запах-каловый обычный. Цвет-коричневый. Р-ция- нейтральная, слабощелочная или слабокислая (рН 6,5-7,0-7,5). Слизь-отсутствует. Кровь-отсутствует. Остатки непереваренной пищи-отсутствует.

источник