Анализатор для количественного определения белка в моче

В состав рабочего места по определению белка в моче входят следующие элементы:

Пробирки химические, агглютинационные.
Набор градуированных пипеток.
Пипетки с узким оттянутым концом.
Спиртовки или газовая горелка.
Черная бумага.
Ледяная уксусная кислота.
Сульфосалициловая кислота.
Концентрированная азотная кислота.
Дистиллированная вода.

Все методики, применяющиеся для качественного определения белка в моче, основаны на свертывании белка. Свертывание белка проявляется выраженным в разной степени помутнением (от опалесценции до большой мутности) или выпадением хлопьев.

Качественное определение белка в моче может быть проведено одним из следующих способов:

кипячением с 10% раствором уксусной кислоты;
реакцией с 20% раствором сульфосалициловой кислоты;
реакцией с 50% раствором азотной кислоты (проба Геллера);
реакцией с 1% раствором азотной кислоты в насыщенном растворе поваренной соли (видоизмененная проба Геллера по Ларионовой).

Перед качественным определением белка в моче проводят следующую подготовительную работу:
1. Мутную мочу фильтруют через бумажный фильтр. Если получить прозрачный фильтрат не удается, производят повторное фильтрование через тот же фильтр или же смешивают мочу с небольшим количеством инфузорной земли или талька, после чего ее фильтруют.
2. Если моча имеет щелочную реакцию, ее подкисляют 10% раствором уксусной кислоты до слабокислой реакции под контролем лакмусовой или универсальной индикаторной бумажки.
3. При малом содержании солей (светло-желтая или бледно-желтая моча с малым удельным весом) к каждой
пробе добавляют несколько капель насыщенного раствора поваренной соли, так как недостаток солей обусловливает свертывание белка.
4. Степень помутнения наблюдают с помощью черного фона. В качестве фона используют черный картон или черную бумагу, применяемую в фотографии. Учет реакции на черном фоне позволяет выявить малейшую степень помутнения.

В отдельном штативе располагают пронумерованные пробирки. В них производят одну из описанных ниже реакций.

1. Проба кипячением с 10% раствором уксусной кислоты. Для постановки этой пробы необходим 10% раствор уксусной кислоты, который готовят следующим образом: 10 мл ледяной уксусной кислоты помещают в цилиндр и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл.

Техника определения белка. В химическую пробирку помещают 10—12 мл отфильтрованной мочи слабокислой реакции. Затем верхнюю часть пробирки с мочой осторожно нагревают до кипения и добавляют в нее 8—10 капель 10% раствора уксусной кислоты. Пробирку с мочой рассматривают на черном фоне в проходящем свете. При наличии белка в моче появляется мутность разной степени (от опалесценции до большой мутности) или выпадают хлопья. Контролем служит нижняя часть пробирки, не подвергавшаяся нагреванию. Этой пробой обнаруживают количество белка, начиная с 0,015%о (%о — promille).

2. Реакция с 20% раствором сульфосалициловой кислоты. 20 % раствор сульфосалициловой кислоты готовят следующим образом: 20 г сульфосалициловой кислоты растворяют в 70-80 мл дистиллированной воды, переводят в цилиндр емкостью 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки. Приготовленный реактив хранят в посуде из темного стекла.

Техника определения белка. В две пробирки одинакового диаметра помещают по 2—3 мл отфильтрованной мочи слабокислой реакции, в одну из пробирок к моче прибавляют 3—4 капли 20% раствора сульфосалициловой кислоты, другая пробирка служит контролем. При наличии белка в пробирке с реактивом появляется мутность или выпадают хлопья свернувшегося белка. В контрольной пробирке жидкость остается прозрачной. Сульфосалициловая кислота наряду с белком сыворотки осаждает альбумозы (пептиды), представляющие собой продукт распада белка. С целью уточнения причины помутнения мочи пробирку с мочой подогревают. Мутность, причиной образования которой оказались сывороточные белки, усиливается, мутность же, обусловленная присутствием альбумоз, исчезает. Эта проба имеет ту же чувствительность, что и предыдущая.

3. Реакция с 50 % раствором азотной кислоты (проба Геллера). 50% раствор азотной кислоты готовят следующим образом: к 50 мл азотной кислоты удельного веса 1,2-1,4 приливают 50 мл дистиллированной воды (разведение 1:1).

Техника определения белка. В узкую небольшую пробирку (тина агглютинационной) наливают 1 мл 50% азотной кислоты. В пипетку с узким оттянутым концом набирают 1 мл отфильтрованной исследуемой мочи, наслаивают на реактив и пробирку переводят в вертикальное положение. При наличии белка на границе жидкостей появляется белое кольцо. Время появления кольца, его свойства зависят от количества белка: если белка мало, то кольцо появляется не сразу, поэтому за его появлением следят в течение 2,5-3 минут. Минимальное количество белка, определяемое этим методом, 0,033°/оо. При меньшем содержании белка в моче кольцо не образуется. Учет результатов реакции производят на черном фоне в проходящем свете.

4. Реакция с 1% раствором азотной кислоты на насыщенном растворе поваренной соли — видоизмененная проба Геллера (по Ларионовой). Для проведения пробы используют 1 % раствор азотной кислоты, приготовленный на насыщенном растворе поваренной соли (реактив Ларионовой). 35 г поваренной соли растворяют в 100 мл дистиллированной поды, раствор фильтруют, к 1 мл концентрированной азотной кислоты удельного веса 1,2-1,4 приливают 99 мл приготовленного насыщенного раствора поваренной соли.

Техника определения белка такая же, как и при реакции с 50% раствором азотной кислоты (проба Геллера), но вместо 1 мл 50% раствора азотной кислоты в пробирку наливают 1 мл реактива Ларионовой и на него наслаивают 1 мл мочи. Появление белого кольца на границе жидкостей указывает на наличие белка в исследуемой моче. Проба по Ларионовой так же чувствительна, как и проба Геллера.

5. Колориметрическая (сухая) проба качественного определения белка. Колориметрическая (сухая) проба качественного определения белка в моче основана на воздействии, которое оказывает белок на цвет индикатора в буферном растворе.

Техника определения белка. Кусочек индикаторной бумаги, предназначенный для определения белка погружают в мочу на короткое время. Пробу считают положительной, если бумажка окрашивается в сине-зеленый цвет.

Количественное определение белка в моче основано на том, что при наслаивании мочи, содержащей белок, на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой на границе двух жидкостей образуется белое кольцо, причем если четкое белое кольцо появляется к 3 минутам, то содержание белка равно 0,033%о или 33 мг в 1000 мл мочи. Появление кольца ранее 3 минут свидетельствует о большем содержании белка в моче.
При количественном определении белка в моче выполняют следующие правила:

Количественное определение белка производят только в тех порциях мочи, где он был обнаружен качественно.
Определение производят с тщательно отфильтрованной мочой.
Точно соблюдают технику наслаивания исследуемой мочи на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой в соотношении реактива с мочой (1:1).
Время появления кольца определяют по секундомеру: при окончательном расчете количества белка учитывают время наслаивания мочи на азотную кислоту, которое равно 15 секундам.
Разведение мочи производят исходя из свойства кольца. При этом каждое последующее разведение мочи готовят из предыдущего.
Определение колец производят на черном фоне.

Наиболее распространены два метода количественно¬го определения белка в моче: метод Робертса — Стольникова — Брандберга и метод С. Л. Эрлиха и А. Я. Альтгаузена.

Метод Робертса-Стольникова-Брандберга. По этому способу количество белка в моче определяют путем разведения ее до тех пор, пока при очередном наслаивании мочи на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой кольцо появится точно к 3 минутам. Расчет количества белка производят, умножая 0,033%о на степень разведения мочи. Полученный результат выражает количество белка в миллиграммах на 1000 мл мочи, т. е. в promille (%о).
Метод С. Л. Эрлиха и А. Я. Альтгаузена. В штатив помещают ряд агглютинационных пробирок, в которые предварительно наливают по 1 мл 50% раствора азотной кислоты или реактива Ларионовой. Исследуемую мочу берут отдельной чистой, сухой пипеткой с узким оттянутым концом и наслаивают на реактив, после чего включают секундомер. За временем появления кольца следят, располагая пробирку на черном фоне. При появлении кольца секундомер выключают.

При наслаивании мочи в зависимости от количества белка может появиться компактное, широкое или нитевидное кольцо. Компактное, широкое кольцо появляется тотчас же после наслаивания мочи на реактив. Нитевидное кольцо может появиться сразу, до истечения одной минуты, или в промежутке от одной до 4 минут.

При появлении нитевидного кольца в пределах от одной до 4 минут производить разведение мочи не нужно!
Для вычисления количества белка в этом случае достачно использовать предложенную авторами таблицу-план (табл. 1).

Пример 1. При наслаивании мочи на реактив нитевидное кольцо образовалось через 2 минуты. Если бы кольцо образовалось к 3 минутам, то количество белка было было бы равно 0,033%о.

В данном же случае кольцо образовалось раньше. Соответственная поправка, согласно таблице-плану, для времени в 2 минуты равна 1+1/8. Это значит, что белка в данной порции мочи будет в 1+1/8 раза больше, чем 0,033°/оо, т. е. 0,033%о X(1+1/8) = 0,037°/оо.

При появлении нитевидного кольца до 1 минуты, т. е. через 40-60 секунд, производят одно разведение мочи в 1,5 раза (2 части мочи + 1 часть воды), а затем вновь наслаивают разведенную мочу на реактив и регистрируют появление кольца. При расчете результатов учитывают, что моча была разведена в 1,5 раза.

Пример 2. После наслаивания разведенной в 1,5 раза мочи нитевидное кольцо появилось к 2 минутам. Если бы кольцо появилось к 3 минутам, то белка было бы 0,033%. Соответственная поправка согласно таблице-плану, для времени в 2 минуты равна 1+1/8. Белка в моче содержится 0,033%оX1,5X(1+1/8) = 0,056%о.

Если нитевидное кольцо появляется сразу, мочу разводят в 2 раза (1 часть мочи + 1 часть воды). Разведенную мочу вновь наслаивают на реактив и отмечают появление кольца по истечении 1 минуты.

Пример 3. При наслаивании разведенной в 2 раза мочи на реактив нитевидное кольцо появилось через 1 минуту 15 секунд. Тогда количество белка в исследуемой моче по аналогии с прежними расчетами будет равно
0,033%оХ2Х(1+3/8) = 0,091%.
В случае появления широкого кольца мочу разводят в 4 раза (1 часть мочи + 3 части воды).
При последующем наслаивании разведенной мочи нитевидное кольцо может образоваться как до, так и по истечении одной минуты. В таких случаях расчет количества белка производят по аналогии с предыдущими примерами, т. е. 0,033% о умножают на степень разведения и на соответственную поправку.

Пример 1. Кольцо после разведения мочи в 4 раза появилось сразу же. Мочу разводят в 2 раза. После наслаивания мочи, разведенной в 8 раз (4X2), нитевидное кольцо образовалось через 1,5 минуты. В таком случае количество белка равно 0,033%оХ8X1,25 = 0,33%о и т. д.
При появлении компактного кольца мочу разводят в 8 раз (1 часть мочи+ 7 частей воды). При последующем наслаивании разведенной мочи на реактив может образоваться либо компактное, либо широкое, либо нитевидное кольцо.

Пример 2. При наслаивании мочи на азотную кислоту тотчас же образовалось компактное кольцо. Мочу разводят в 8 раз (1 часть мочи + 7 частей воды) и вновь производят ее наслаивание. При этом опять получилось компактное кольцо. Тогда мочу разводят еще в 8 раз (для этого в цилиндр или в пробирку берут 1 часть разведенной мочи и прибавляют к ней 7 частей воды). После очередного наслаивания разведенной мочи нитевидное кольцо образовалось сразу. Мочу разводят в 2 раза (1 часть мочи + 1 часть воды). После очередного наслаивания разведенной мочи нитевидное кольцо образовалось к 2 минутам. Расчет количества белка данной порции мочи производят так: 0,033,%оX8X8X2X(1+1/8) = 4,8%о.

Помимо таблицы-плана, имеется таблица с рассчитанными цифрами белка (табл. 2). Если моча не разведена, то количество белка отыскивают в графе «Цельная неразведенная моча». При разведении мочи в целое число раз (8,4,2) используют табл. 1. При разведении мочи в 1,5 раза используют табл. 2.

В соответствующих графах таблицы наводят время появления кольца и степень разведения мочи.
Цифра, находящаяся в точке пересечения горизонтальной и вертикальной линий, проведенных от этих двух показателей, указывает на количество белка в исследуемой моче (%о).

Возможно, что при положительной качественной пробе на белок кольцо при наслаивании на 50% раствор азотной кислоты не образуется. Это значит, что в моче белка меньше 0,033%о. В таких случаях количество белка в бланке анализа обозначают термином «следы».

Если белок определен количественно, в бланке анализа мочи отмечают содержание белка в promille, например «белок — 0,66%о».

Помимо количественного определения белка в отдельной порции мочи, рассчитывают суточное его количество в граммах. С этой целью собирают суточную мочу, измеряют ее количество и определяют содержание белка в promille. Затем производят расчет. Например, суточное количество мочи равно 1800 мл, белок — 7°/оо. Значит, белка в суточном количестве мочи содержится: 1,8X7 = 12,6 г.

источник

Качественный, удобный и легкий в применении анализатор белка в моче «Белур 600» популярен среди аналогов. Интерфейс взят с прибора по измерению гемоглобина «МиниГЕМ+» и изготовлен на его основе. Прибор работает в широком диапазоне благодаря использованию реагентов стандартного и современного образца. Доступен для любого пользователя.

Прибор применяется для получения уровня фермента в урине, используя биораствор с применением химических веществ (сульфосалициловой кислоты, пирогаллолового красного), а также метод Бредфорд. Производителями веществ для анализа служат западные и отечественные фирмы. Основа аппарата изготовлена из пластика, обладающего стойкостью химических структур. Внешняя сторона анализатора белка в моче «Белур 600» имеет пленку на поверхности для удобной и быстрой антибактериальной обработки. В приборе присутствует фотометрическая система защиты от скопления пыли. Чтобы аппарат не скользил, есть накладки из резины.

Аппарат заряжается от розетки либо можно использовать бататейки. Вес прибора небольшой — 400 г, размеры — 178×128×43 мм. Степень чувствительности определяется используемыми реагентами. Показатели представлены в таблице:

источник

Белур 600 — это зарегистрированная торговая марка анализатора белка в моче

Анализатор белка в моче Белур 600 имеет регистрационное удостоверение Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития (N ФС 022а2004/0919-04 от 20 декабря 2004 года) и сертификат об утверждении типа средств измерений Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии (RU.C.39.003A № 19858 от 20 февраля 2005 года).

Анализатор белка в моче Белур 600 разработан и изготавливается в НПП «Техномедика». Обозначение прибора при его заказе и в документации других изделий:
«Анализатор общего белка в моче фотометрический портативный АОБМФ-01-«НПП-ТМ» ТУ 9443-020- 11254896-2004″.
Медицинским соисполнителем разработки является кафедра клинической лабораторной диагностики Российской медицинской академии последипломного образования (зав. кафедрой профессор Долгов В.В.).
Анализатор Белур 600 обеспечивает определение белка с точностью соответствующей нормам, утвержденным приказом Минздрава РФ N220 от 26.05.2003 г.

Анализатор белка в моче Белур 600 получил высокую оценку специалистов ведущих клиник Москвы и главных специалистов регионов, в чьи клиники прибор передавался на апробацию.

Прибор предназначен для определения концентрации общего белка в моче современными и традиционными методами: с пирогаллоловым красным, с сульфосалициловой кислотой и Бредфорд. Могут использоваться реагенты любых отечественных и зарубежных производителей.

Информация по вопросам приобретения анализатора белка в моче Белур 600 здесь .

ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ АНАЛИЗАТОРА БЕЛУР 600

Диапазон измерения концентрации общего белка — от 0 до 10 г/л.
Чувствительность определяется применяемыми реагентами и составляет — 0,020 г/л для методов пирогаллолового красного и Бредфорд; 0,080 — для сульфосалицилового.
Для фотометрирования используются стандартные кюветы или пробирки из боросиликатного стекла.
Габариты 178х128х43 мм.
Вес 400 г.
Питание от сети или 3-батареек в течение нескольких лет.
Гарантийный срок 4 года.
Прибор прост в эксплуатации и не требует специальной подготовки персонала и технического обслуживания.

ДОСТОИНСТВА АНАЛИЗАТОРА БЕЛКА В МОЧЕ БЕЛУР 600 И ЕГО ПРЕИМУЩЕСТВА

1. ТОЧНОСТЬ ИЗМЕРЕНИЙ
Точность измерений соответствует нормам, утвержденным приказом Минздрава РФ N200 от 26.03.2003 г.

2. КАЧЕСТВЕННАЯ КОНСТРУКЦИЯ
Прибор разработан НПП «Техномедика» — крупнейшим производителем медицинских фотометров в России. Продукция с торговой маркой ТЕХНОМЕДИКА хорошо известна и во многих странах мира. Среди них Великобритания, Швеция, Италия, Норвегия, США, ЮАР, Малайзия, Египет, Индия, Иран, Казахстан, Молдавия, Украина.
Фирма создана в 1990 году. С тех пор произведено свыше 9 тысяч фотометров.
Наиболее известные гемоглобинометры МиниГЕМ и неинвазивные неонатальные билирубинометры Билитест награждены
ЗОЛОТЫМИ ЗНАКАМИ «ВСЕРОССИЙСКАЯ МАРКА (III ТЫСЯЧЕЛЕТИЕ). ЗНАК КАЧЕСТВА ХХI ВЕКА».
В 2003 году гемоглобинометры МиниГЕМ награждены дипломом 1 степени в программе «100 ЛУЧШИХ ТОВАРОВ РОССИИ».

3. ВЫСОКАЯ НАДЕЖНОСТЬ
Анализатор белка в моче Белур 600 создан на основе гемоглобинометров МиниГЕМ, опыт десятилетней эксплуатации которых подтвердил качество и надежность конструктивных решений фотометра.
ГАРАНТИЙНЫЙ СРОК — 4 ГОДА

4. ЛЕГКОСТЬ В ОБУЧЕНИИ
Отличительным признаком анализатора Белур 600 являются простые и понятные алгоритмы обращения с ним. Для работы с анализатором белка в моче Белур 600 требуется освоить 2 простейшие процедуры — обнуления прибора (бланк) и изменения численных значений фактора или концентрации калибратора. Эти процедуры производятся всего 2 кнопками.

5. ПРОСТОТА И УДОБСТВО В ЭКСПЛУАТАЦИИ
Анализатор белка в моче Белур 600 имеет размеры 178х128х43 мм. Питание от внутренних батарей или от сети через адаптер. Малое энергопотребление гарантирует работу прибора от внутренних батарей в течение 2-4 лет. Автономное питание и миниатюрные размеры прибора дают возможность организовать измерения непосредственно на рабочем месте (например, в вытяжном шкафу).
В анализаторе используются стеклянные прямоугольные кюветы и цилиндрические пробирки, а также прямоугольные пластиковые одноразовые кюветы.
Поскольку кюветы свободно вставляются и вынимаются из прибора, это проделывается одной рукой, не удерживая легкий прибор на столе другой рукой.
Высокая производительность измерений — время фотометрирования не превышает 2 секунд.
В анализаторе концентрация и оптическая плотность растворов измеряется одновременно, без перекалибровки прибора.

6. ВЫСОКАЯ СТЕПЕНЬ АВТОМАТИЗАЦИИ
— автоматическое определение и сохранение в памяти значения фактора по концентрации белка в калибраторе
— автоматическое определение при необходимости значения фактора с повышенной в 4 раза точностью
— автоматическое переключение диапазонов измерения концентраций

7. НЕ ТРЕБУЕТСЯ ТЕХНИЧЕСКОЕ ОБСЛУЖИВАНИЕ
С устройством и принципом работы анализатор белка в моче Белур 600 можно ознакомиться здесь .

8. КОНТРОЛЬ ПАРАМЕТРОВ ПРИБОРА ПРОИЗВОДИТСЯ БЕЗ ПОКУПНЫХ КОНТРОЛЬНЫХ МАТЕРИАЛОВ
Контроль прибора в процессе эксплуатации осуществляется самим медицинским персоналом с помощью прилагаемых оптических мер.

9. СОЧЕТАНИЕ СОВРЕМЕННЫХ И ТРАДИЦИОННЫХ ТЕХНОЛОГИЙ
Определение белка в анализаторе Белур 600 производится фотометрическим методом на длине волны 600 нм: с пирогаллоловым красным, с сульфосалициловой кислотой, с Кумасси бриллиантовым синим (Бредфорд).

10. ШИРОКИЙ ДИАПАЗОН КОНЦЕНТРАЦИЙ И ВЫСОКАЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
Анализатор общего белка в моче Белур 600 имеет измерительный диапазон концентраций от 0 до 10 грамм/литр с минимальным дискретом 0,001 грамм/литр. Измерение производится без дополнительных разведений.
Чувствительность ограничивается только используемыми реагентами (от 0,02 г/л для пирогаллолового красного).

11. ОТКРЫТАЯ СИСТЕМА
Открытая система избавляет пользователя от необходимости использовать реагенты лишь одного производителя (далеко не всегда оптимальных по цене и качеству).
В анализаторе применяются РЕАГЕНТЫ РАЗЛИЧНЫХ АВТОРИТЕТНЫХ ОТЕЧЕСТВЕННЫХ И ЗАРУБЕЖНЫХ ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ («Вектор-Бест», «Диакон Диагностикс», «Bayer Diagnostics», «Beckman», «Biocon Diagnostic», «Biodirect», «Bio-Rad», «Kone», «Merck», «Randox», «Sigma», «Chronolab», «DiaSys», «Serono», «Sentinel CH», «Sigma»).
Разработанный в ЗАО «Вектор-Бест» набор «Белок-ПГК- Ново» сравним по правильности определения белка в моче с наборами реагентов фирм «Biocon», «Bio-Rad» и «Chronolab».

12. МИНИМАЛЬНЫЙ РАСХОД РЕАГЕНТОВ
Объем реакционной смеси 1 мл. Объем фотометрируемой пробы — от 0,8 мл.

Отзывы об анализаторе белка в моче Белур 600
Белур 600 получил одобрительную оценку в Санк-Петербурге и Ленинградской области

Белур 600 апробирован на кафедре КДЛ МАПО СПб. Заключение заведующего кафедрой Козлова А.В. положительное. По его оценке прибор прост в освоении, прост и удобен в работе. А, главное, — полезен в лабораторной практике.
Получен также отзыв по апробации, проведенной под эгидой отделения Российской ассоциации медицинской лабораторной диагностики по Санкт-Петербургу и Ленинградской области.
Высокая производительность исследований на анализаторе подтверждена использованием в рабочем режиме в КДЛ стационара Ленинградской областной клинической больницы (1000 коек) и в Центре лабораторной диагностики С-Петербургского Государственного медицинского Университета (1500 коек).
В отзыве особо отмечены эргономические свойства анализатора, которые позволяют использовать его не только в условиях стационара, но и при выездной работе (профосмотры, диспансеризация и т.д.).
Отзыв подписан Главным специалистом по клинической лабораторной диагностике Ленинградской области Ворониной Е.А.
и заведующей лабораторией контроля качества и методического развития лабораторных исследований СПбГМУ Бондаренко И.Б.

ТАМБОВСКАЯ ОБЛАСТНАЯ БОЛЬНИЦА

В соответствии с договором № 11511/04 от 15 ноября 2004 г. клинико-диагностической лабораторией ГУЗ «Тамбовская областная больница» была проведена апробация анализатора общего белка в моче «БЕЛУР 600» (фотометрический портативный АОБМФ-01-«НПП-ТМ» ТУ 9443-020-11254896-2004).
Все исследования были выполнены в соответствии с приказами МЗ РФ №50 от 07.02.2000 г. и №220 от 26.05.2003 г.
Для апробации был применен фотометрический метод определения белка в моче с 3% раствором сульфосалициловой кислоты и с пирогаллоловым красным фирмы «Вектор-Бест».
Исследования проводились параллельно на анализаторе «БЕЛУР 600» и на КФК-2, который по настоящее время используется в КДЛ ГУЗ ТОБ для выполнения данного вида исследований.
Для построения калибровочных кривых и контроля качества на сходимость, воспроизводимость и правильность исследований были использованы: набор контрольных растворов белка мочи «БМ-контроль» (с калибраторами) производства ООО «Медлакор» г. Санкт-Петербург и набор «БЕЛОК-ПГК-НОВО» ЗАО «Вектор-Бест» Новосибирская область.
ВЫВОДЫ:
1. По результатам статистической обработки проведенных исследований анализатор мочи «БЕЛУР 600» имеет большую чувствительность и аналитическую надежность по сравнению с наиболее часто применяемыми в лабораторной практике фотоэлектроколориметрами.
2. При работе на анализаторе «БЕЛУР 600» в 2,5 раза снижается расход реактивов для одного исследования методом с 3% раствором сульфосалициловой кислоты, что пропорционально снижает себестоимость анализа.
3. Время, затраченное на одно измерение, выполненное на анализаторе «БЕЛУР 600» приблизительно в 2-2,5 раза меньше, чем на фотоэлектроколориметре, что сокращает затраты рабочего времени сотрудника и ускоряет время выдачи результатов исследований.
4. Метод определения белка с применением красителя пирогаллолового красного обладает ещё большей точностью по сравнению с сульфосалициловым методом, т.к. позволяет определять белок при микроальбуминурии (чувствительность метода по данным инструкции — 0,06 г/л).

Определение концентрации белка пирогаллоловым методом позволяет использовать одну контрольную пробу на всю серию опытных исследований (с сульфосалициловой кислотой — на каждое исследование свой контроль), что экономит расход реактивов, количество химических пробирок и время выполнения исследования. Таким образом, результаты апробации работы анализатора белка «БЕЛУР 600» показали необходимость приобретения данного аппарата для ежедневной работы в клинико-диагностических лабораториях и отказа от определения белка в моче более дешевым методом с 3% раствором сульфосалициловой кислоты в пользу метода с использованием красителя пирогаллолового красного, который максимально соответствует современным требованиям качества лабораторных исследований.

Главный врач ГУЗ «Тамбовская областная больница»,
заслуженный врач РФ
Буркин А.И.
Главный специалист по клинической
лабораторной диагностике Тамбовской области,
заведующая КДЛ ГУЗ ТОБ
Семенова Е.Н.
Врач-лаборант по контролю и качеству КДЛ ГУЗ ТОБ
Бобровских Е.И.

ВОЛОГОДСКАЯ ОБЛАСТНАЯ БОЛЬНИЦА №1

С октября по декабрь 2004 года в ГУЗ «Вологодская областная больница №1» в клинико-диагностической лаборатории прошел апробацию портативный анализатор белка в моче Белур 600.
Было проведено более 2000 определений белка в моче пирогаллоловым методом.
Отзыв о работе прибора – положительный.
Прибор прост в обращении, результаты исследований удовлетворили как специалистов КДЛ, так и лечащих врачей.
Можно рекомендовать данный аппарат для работы в КДЛ любого уровня.

Главный внештатный специалист
по клинической лабораторной диагностике
Вологодской области
Каргольцева Т.А.

РЕСПУБЛИКАНСКАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ БОЛЬНИЦА им. Г.Г.КУВАТОВА
РЕСПУБЛИКА БАШКОРТОСТАН

Анализатор белка в моче Белур 600 был апробирован на базе клинического отдела КДЛ РКБ им. Г.Г.Куватова с 14 по 31 января 2005года.
Было сделано более 100 исследований мочи с пирогаллоловым красным фирмы Вектор Бест.
Аппарат понравился тем, что он:
1. Прост и удобен в работе: позволяет начать работать на приборе после небольшого обучения; работает как от сети, так и от батареек, может использоваться и на выезде.
2. Для фотометрирования требуется малый объем исследуемого материала, быстрота проводимого исследования — 2 сек.
3. Анализатор не требует длительной предварительной подготовки всегда готов к работе и поэтому подходит как для одиночных, так и для серийных исследований, что делает оптимальным его использование в экспресс-лабораториях.
4. Может быть использован для исследования белка в моче различными методами (сульфосалициловым, пирогаллоловым красным).

Заведующий КДЛ
Панкратов А.В.

КОГАЛЫМСКАЯ ГОРОДСКАЯ БОЛЬНИЦА
ХАНТЫ-МАНСИЙСКИЙ АВТОНОМНЫЙ ОКРУГ
ТЮМЕНСКАЯ ОБЛАСТЬ

Анализатор белка в моче «Белур-600» был предоставлен для апробации в клинико-диагностическую лабораторию МЛПУ «Когалымская городская больница» (г. Когалым, Тюменская обл., ХМАО) в октябре 2004 г.
Анализ белка проводили пирогаллоловым методом с реагентами ООО «Вектор-Бест» и ООО «Юнимед».
В работе были использованы стандартные калибраторы ООО «Вектор-Бест» и ООО «Медлакор».
В соответствии с Инструкцией, калибровку прибора осуществляли растворами двух концентраций: 0,4 г/л и 0,6 г/л. Это наиболее часто встречающийся диапазон концентрации белка в опытных пробах.
Измерение белка проводили параллельно на приборе «Белур-600» и КФК-3. На анализаторе «Белур-600» выполнялось измерение белка в опытных образцах мочи и контрольном материале для внутрилабораторного контроля качества, что составило 980 проб.
Построение калибровочной кривой для белка в моче на КФК-3 всегда было большой проблемой, поскольку разброс факторов при низких, средних и высоких концентрациях белка (в пределах 1 г/л) колебался от 1,9 до 9,8. Т.о., рассчитать единый фактор на всем протяжении кривой и не ошибиться с результатом в опытной пробе, было практически невозможно.
Результаты измерений с помощью «Белур-600» показали, что прибор довольно точно определяет фактор и удерживает его в памяти без отклонений.
Построение калибровочной кривой достаточно проводить с какой-либо одной приемлемой концентрацией белка (в наших условиях 0,4 г/л или 0,6 г/л), и пропорциональная зависимость сохраняется до концентрации 1 г/л.
Сравнение параллельных измерений на КФК-3 и «Белур-600» в опытных образцах мочи показали, что более точными были результаты с помощью «Белур-600».
Особенно хорошо это проявилось при наблюдениях за определенной группой больных и беременными с нефропатией в динамике лечения.
Результаты проведенного контроля качества в серии из 20 проб на КФК-3 дали для уровня 0,6 г/л S1 = 0,057, S2 = 0,114 или CV=19%.
Для того же уровня на «Белуре 600» получено S1 = 0,029, S2 = 0,058 или CV = 9,6%.

То-есть измерения на «Белуре 600» в 2 раза точнее, чем на КФК-3.

У прибора «Белур-600» имеется и ряд других преимуществ, которые делают его более рациональным для использования в лабораториях:
1. Размеры прибора достаточно малы, что позволяет использовать его непосредственно на рабочем месте (разделка мочи и ее обработка проводится в вытяжном шкафу);
2. Простота в эксплуатации, легкость в обучении лаборантов;
3. Не требует подключения к сети;
4. Простота получения калибровочного фактора и быстрой перекалибровки прибора в случае необходимости;
5. Длительность гарантийного срока.

На протяжении пяти лет в клинико-диагностической лаборатории и отделении новорожденных «Роддома» МЛПУ «Когалымская городская больница» используются приборы НПО «Техномедика»: «Билимет», «Билитест» (два варианта), «МиниГем» (два прибора).
Отзывы о них самые положительные, каких-либо нареканий относительно плохой работы, некачественных результатов не было.
Надеемся, что прибор «Белур-600» займет достойное место в ряду приборов, изготовленных вами.

Заведующая клинико-диагностической лабораторией
МЛПУ «Когалымская городская больница»,
врач-лаборант высшей категории,
кандидат биологических наук
Петренко Е.П.

Выдержки из протоколов клинических испытаний

Институт Клинической Кардиологии им. А.Л. Мясникова
Российского Кардиологического Научно-Производственного Комплекса МЗ РФ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Результаты медицинских испытаний показали, что анализатор общего белка в моче фотометрический портативный АОБМФ-01-«НПП-ТМ», производства НПП» Техномедика» г. Москва , является удобным прибором для измерения белка в моче и может быть рекомендован для применения в клинико-диагностических лабораториях поликлиник, экспресс-лабораторий стационаров и ЛПУ РФ.

Состав и последовательность испытаний.
1. Определить возможности применения прибора для определения белка мочи.
Мы проводили испытания прибора, определяя общий белок мочи методом с пирогаллолом красным производства ЗАО » Вектор-Бест» » Белок-ПКГ-Ново».
Контролями служили контрольные образцы мочи производства » Био-Рад» и «Биосистемс» с содержанием белка в диапазоне от 0.04 г/л до 1. 44 г/ л, т.е. в диапазоне линейности определения белка данным реактивом.
Данные воспроизводимости и правильности в одной серии ( п= 10) представлены в таблице 1.

источник

Нормальные показатели: белок в норме в моче содержится в минимальных количествах, которые не обнаруживаются обычными качественными реакциями. Верхняя граница нормы белка в моче – 0,033 г/л. Если содержание белка выше этого значения, то качественные пробы на белок становятся положительными.

Клиническое значение определения:

Появление белка в моче называется протеинурия. Протеинурии могут быть ложными и почечными. Экстраренальные протеинурии могут быть при наличии примесей белкового происхождения из половых органов (вагинитах, уретритах и др.), количество белка при этом незначительно – до 0,01 г/л. Почечные протеинурии могут быть функциональными (при переохлаждении, физических нагрузках, лихорадке) и органическими — при гломерулонефрите, пиелонефрите, нефрите, нефрозах, почечной недостаточности. При почечных протеинуриях содержание белка может быть от 0,033 до 10 – 15 г/л, иногда выше.

Принцип метода: основан на том, что белок под действием неорганических кислот коагулирует (становится видимым). Степень помутнения зависит от количества белка.

Обнаружение белка в моче с 20% сульфосалициловой кислотой.

Реактивы: 20% р-р сульфосалициловой кислоты. Оборудование: темный фон.

1. Требования к моче: моча должна быть кислой (или слабокислой) рН, должна быть прозрачной, для этого мочу центрифугируют. Щелочную мочу подкисляют до слабокислой реакции среды, используя для контроля индикаторную бумагу.

2. В 2 пробирки одинакового диаметра наливают по 2 мл подготовленной мочи. 1 пробирка – контроль, 2 – опыт. В опытную пробирку добавляют 4 капли 20% сульфосалициловой кислоты.

3. Результат отмечают на темном фоне.

4. При наличии белка, моча в опытной пробирке мутнеет.

Качественное определение белка в моче тест – полосками.

Для выявления протеинурий используют различные монотест – полоски: Альбуфан, Альбустикс, Биофан Е и политесты: Трискан, Нонафан и др.

Обнаружение белка в моче по методу Робертса – Стольникова.

Принцип метода: основан на том, что белок под действием неорганических кислот коагулирует (становится видимым). Степень помутнения зависит от количества белка (т.е. кольцевая проба Геллера). При концентрации белка в моче 0,033 г/л к концу 3 минуты после наслаивания мочи появляется тонкое нитевидное белое кольцо.

Реактивы: 50% р-р азотной кислоты или реактив Робертса (98 частей насыщенного раствора поваренной соли и 2 части концентрированной соляной кислоты) или реактив Ларионовой (98 частей насыщенного р-ра поваренной соли и 2 части концентрированной азотной кислоты).

2. В пробирку наливают 2 мл 50% р-ра азотной кислоты или один из реактивов, затем осторожно по стенке пробирки с помощью пипетки наслаивают такой же объем подготовленной мочи

3. Пробу оставляют на 3 минуты

4. Через 3 минуты отчитывают результат. Результат отмечают на темном фоне в проходящем свете. Если кольцо широкое, компактное, то мочу разводят дистиллированной водой и вновь наслаивают на реактив.

5. Мочу разводят до тех пор, пока через 3 минуты не образуется тонкое нитевидное кольцо.

6. Расчет содержания белка в моче производят по формуле:

С = 0,033г/л х степень разведения.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: На стипендию можно купить что-нибудь, но не больше. 8888 — | 7203 — или читать все.

195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник

Белур 600 — это единственный в России универсальный анализатор общего белка в моче.

Белур 600 разработан на основе гемоглобинометра МиниГЕМ+ и имеет аналогичный ему интерфейс пользователя. Владельцы МиниГЕМ+ могут работать на анализаторе Белур 600 без какой-либо подготовки.

Гемоглобинометры МиниГЕМ – уникальная разработка мирового уровня (фото).

Белур 600 – экспортная продукция.

Определение общего белка в моче.

Определение белка в анализаторе Белур 600 производится фотометрическими методами на длине волны 600 нм: с пирогаллоловым красным, с сульфосалициловой кислотой, с Кумасси бриллиантовым синим (Бредфорд).

Пирогалоловый метод обладает высокой линейной зависимостью оптической плотности от концентрации общего белка, что позволяет проводить измерения с единственной калибровкой по фактору во всем диапазоне концентраций (0-10 г/л с минимальным дискретом 0,001 грамм/литр). Этим Белур 600 отличается от ближайших аналогов.

В анализаторе Белур 600 предусмотрена калибровка по фактору с повышенной в 4 раза точностью.

Для измерений сульфосалициловым методом требуется калибровка по нескольким значениям концентрации.

Для измерения пирогаллоловым методом необходимо 20 мкл биопробы.

Открытая система избавляет лабораторию от использования реагентов лишь одного производителя (далеко не всегда оптимальных по цене и качеству). В анализаторе применяются РЕАГЕНТЫ РАЗЛИЧНЫХ АВТОРИТЕТНЫХ ОТЕЧЕСТВЕННЫХ И ЗАРУБЕЖНЫХ ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ: «Вектор-Бест», «Диакон Диагностикс», «Bayer Diagnostics», «Beckman», «Biocon Diagnostic», «Biodirect», «Bio-Rad», «Kone», «Merck», «Randox», «Sigma», «Chronolab», «DiaSys», «Serono», «Sentinel CH», «Sigma». Разработанный в ЗАО «Вектор-Бест» набор «Белок-ПГК- Ново» сравним по правильности определения белка в моче с наборами реагентов фирм «Biocon», «Bio-Rad» и «Chronolab».

При выборе реагентов необходимо обращать внимание на значение оптической плотности холостой пробы, которое должно находиться в пределах 0.12 — 0.35 Б, а также на значение получающегося после калибровки фактора, которое не должно превышать 4 при разведении 1:50. Несоответствие этим требованиям может привести к неправильным результатам измерений.

Для измерения концентрации общего белка достаточно опустить в фотометрическую ячейку прибора кювету с приготовленным раствором биопробы и через мгновение на дисплее появится значение концентрации. Пересчет оптической плотности раствора в концентрацию гемоглобина производится автоматически. Прибор не нужно включать, «прогревать. При опускании кюветы в фотометрическую ячейку Белур 600 автоматически включается, производит измерение и индицирует измеренную концентрацию. После извлечения кюветы из фотометрической ячейки, анализатор переходит в режим «ожидания» до следующего измерения.

Повторные измерения возможны через каждые 2 секунды.

Автокалибровка.

Анализатор Белур 600 обладает функцией автоматической подстройки оптико-электронных параметров (автокалибровки).

Белур 600 сохраняет калибровку (фактор) неограниченно долго, в том числе при отключении питания. Это позволяет изменять калибровку только при смене партии используемых реагентов.

Экономичность.

Белур 600 потребляет энергию только во время измерения, что обеспечивает долговременное использование элементов питания — до 1 миллиона измерений от одного комплекта из 3 свежих элементов DURASEL в течение срока службы элементов (4-5 лет). Элементы питания размещены в корпусе анализатора Белур 600 (фото), однако при желании можно использовать сетевой адаптер, для которого имеется гнездо подключения на тыльной стороне прибора (фото).

Контроль работоспособности анализатора Белур 600 производится посредством оптических контрольных мер (фото). Свойства стеклянных мер отличаются многолетней стабильностью. Никакие традиционные средства — возобновляемые жидкие контрольные растворы с незначительным временем годности — не нужны.

Средство измерения.

Белур 600 является средством измерения. Для поверки анализатора используется набор стеклянных мер оптической плотности НОСМОП-7. Поверка производится метрологическими службами, которые обеспечены этим набором мер. Набор выпускается ЗАО НПП «ТЕХНОМЕДИКА».

Удобная конструкция.

Белур 600 имеет привлекательный внешний вид. Корпус выполнен из светлого химически стойкого пластика. Лицевая панель покрыта износоустойчивой ламинирующей пленкой, легко поддающейся стандартной санитарной обработке. В анализаторе Белур 600 используется высококонтрастный жидкокристаллический индикатор с крупными цифрами (фото). Для защиты от возможного загрязнения фотометрическая ячейка снабжена удобной задвижкой. Размеры Белур 600 составляют 178х128х43 мм, масса без батарей не превышает 300 граммов. Несмотря на малые размеры и вес прибор надежно фиксируется на рабочем столе резиновыми ножками. Для фотометрирования используются стандартные стеклянные фотометрические кюветы с длиной оптического пути 10 мм. Допускается использование одноразовых пластиковых кювет и стеклянных пробирок. В корпус анализатора Белур 600 встроен выдвигающийся пенал для хранения кюветы и контрольных мер (фото).

Минимум обслуживания.

Тщательное соблюдение указаний по эксплуатации анализатора Белур 600, своевременный уход за его оптическими поверхностями обеспечивают многолетнюю безотказную работу прибора без привлечения сервисных инженеров.

Обозначение прибора при его заказе и в документации других изделий:

Анализатор общего белка в моче фотометрический портативный АОБМФ-01-«НПП-ТМ»ТУ 9443-020- 11254896-2009, торговое наименование «Белур 600».

Смотрите также:

МиниГЕМ+. Гемоглобинометр с расширенными возможностями определения гемоглобина любыми методами на рабочей длине волны 540 нм.

МиниГЕМ 540. Измерение общего гемоглобина в крови гемиглобинцианидным методом АГФ-03/540-«Минигем» на рабочей длине волны 540 нм.

МиниГЕМ 523. Измерение общего гемоглобина в крови модифицированным методом Дервиза-Воробьёва АГФ-03/523-«Минигем» на рабочей длине волны 523 нм.

Микрола. Микрофотометр для лабораторных исследований.

Рабочая длина волны определяется спектральной полосой излучения светодиода: (600 ± 5) нм.
Прибор определяет концентрацию общего белка в моче с реагентами различных производителей, использующих фотометрирование на длине волны 600 нм с калибровкой по стандарту или калибратору или фактору, указанному в инструкции на набор.
Диапазон измерений:
- Нормированный диапазон измерений зональной оптической плотности составляет от 0 до 0,999 Б (бел — единица оптической плотности). Ненормированный диапазон составляет от 1 до 3 Б.
- Вывод на индикацию концентрации общего белка и оптической плотности раствора.
- Автоматическое вычисление фактора по стандартному раствору или калибратору с известной концентрацией белка (калибровка по стандартному образцу или калибратору).
Предел допускаемой погрешности при измерении оптической плотности стеклянных мер из набора НОСМОП-7 составляет ±0,04 Б — в диапазоне от 0 до 0,999 Б. В диапазоне от 1 до 3,0 Б погрешность не нормируется.
Прибор работает от источника питания ДГВИ.436615.004, преобразующего сетевое переменное напряжение (220±22 В) в постоянное напряжение (5±1) В, 0,3 А или от трех элементов питания 1,5 В типоразмера АА.
Ток потребления прибора при напряжении питания 6 В — не более 20 мА.
Порог срабатывания индикации разряда внутреннего источника питания -от 2 В до 3,6 В.
Примечание. Индикацией разряда внутреннего источника питания является показания приборов «ЦЦЦ».
Длительность измерения не более 2 секунд.
Объем пробы для фотометрирования — не менее 1 мл.
Длина оптического пути кюветы: 10,0 ±0,1 мм.
Габаритные размеры прибора, не более — 130x180x50 мм.
Масса прибора без комплекта запасных частей и принадлежностей (ЗИП) не более 0,5 кг, в полном комплекте поставки — не более 2 кг.
Средний срок службы прибора — не менее 4 лет. Время непрерывной эксплуатации прибора -7 ч. в сутки.
Гарантийный срок 4 года.

Базовый комплект поставки

Принадлежности

Кювета 10 мм оптическая стеклянная

Эксплуатационная документация

№	Наименование	Шифр конструкторской документации	Кол-во
1	Анализатор общего белка в моче фотометрический портативный АОБМФ-01-«НПП-ТМ»	ТУ 9443-020-11254896-2009	1
7	Руководство по эксплуатации с методикой поверки	ДГВИ.941416.011 РЭ	1

Заключения испытательных медицинских центров.

Институт Клинической Кардиологии им. А.Л. Мясникова
Российского Кардиологического Научно- Производственного Комплекса МЗ РФ

Состав и последовательность испытаний.
1. Определить возможности применения прибора для определения общего белка мочи.
Мы проводили испытания прибора, определяя общий белок мочи методом с пирогаллолом красным производства ЗАО » Вектор-Бест» » Белок-ПКГ-Ново».
Контролями служили контрольные образцы мочи производства » Био-Рад» и «Биосистемс» с содержанием белка в диапазоне от 0.04 г/л до 1. 44 г/ л, т.е. в диапазоне линейности определения белка данным реактивом.
Данные воспроизводимости и правильности в одной серии ( п= 10) представлены в таблице 1.

источник

Патологическая протеинурия является одним из наиболее важных и постоянных признаков заболеваний почек и мочевых путей. Определение концентрации белка в моче является обязательным и важным элементом исследования мочи. Выявление и количественная оценка протеинурии важна не только в диагностике многих первичных и вторичных заболеваний почек, оценка изменения выраженности протеинурии в динамике несет информацию о течении патологического процесса, об эффективности проводимого лечения. Обнаружение белка в моче даже в следовых количествах должно настораживать в отношении возможного заболевания почек или мочевых путей и требует повторного анализа. Особо следует отметить бессмысленность исследования мочи и, в частности, определения белка мочи без соблюдения всех правил ее сбора.

Все методы определения белка в моче можно разделить на:

Качественные,
Полуколичественные,
Количественные.

Все качественные пробы на белок в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. При наличии белка в исследуемом образце мочи появляется либо помутнение, либо выпадение хлопьевидного осадка.

Условия определения белка в моче на основе реакции коагуляции:

Моча должна иметь кислую реакцию. Мочу щелочной реакции подкисляют несколькими (2 — 3) каплями уксусной кислоты (5 – 10%).
Моча должна быть прозрачной. Помутнение устраняется через бумажный фильтр. Если помутнение не исчезает, добавляют тальк или жженую магнезию (около 1 чайной ложки на 100 мл мочи), взбалтывают и фильтруют.
Качественную пробу следует проводить в двух пробирках, одна из них – контрольная.
Искать помутнение следует на черном фоне в проходящем свете.

К качественным методам определения белка в моче относятся:

Как показывают многочисленные исследования, ни один из большого числа известных методов качественного определения белка в моче не позволяет получать надежные и воспроизводимые результаты. Несмотря на это, в большинстве КДЛ в России эти методы широко используются в качестве скрининга – в моче с положительной качественной реакцией в дальнейшем проводят количественное определение белка. Из качественных реакций чаще используют пробу Геллера и пробу с сульфосалициловой кислотой, однако пробу с сульфосалициловой кислотой большей частью считают наиболее подходящей для выявления патологической протеинурии. Проба с кипячением в настоящее время практически не используется в связи с ее трудоемкостью и длительностью.

В основе метода Брандберга-Робертса-Стольникова лежит кольцевая проба Геллера, поэтому при данном методе наблюдаются те же ошибки, что и при пробе Геллера.

В настоящее время для определения белка в моче все чаще используются диагностические полоски. Для полуколичественного определения белка в моче на полоске в качестве индикатора чаще всего используется краситель бромфеноловый синий в цитратном буфере. О содержании белка в моче судят по интенсивности сине-зеленой окраски, развивающейся после контакта реакционной зоны с мочой. Результат оценивается визуально или с помощью анализаторов мочи. Несмотря на большую популярность и очевидные преимущества методов сухой химии (простота, скорость выполнения анализа) данные методы анализа мочи в целом и определения белка в частности не лишены серьезных недостатков. Одним из них, приводящих к искажению диагностической информации, является большая чувствительность индикатора бромфенолового синего к альбумину по сравнению с другими белками. В связи с этим, тест-полоски в основном приспособлены к обнаружению селективной гломерулярной протеинурии, когда практически весь белок мочи представлен альбумином. При прогрессировании изменений и переходе селективной гломерулярной протеинурии в неселективную (появление в моче глобулинов) результаты определения белка оказываются заниженными по сравнению с истинными значениями. Данный факт не дает возможности использовать данный метод определения белка в моче для оценки состояния почек (гломерулярного фильтра) в динамике. При тубулярной протеинурии результаты определения белка также оказываются заниженными. Определение белка с помощью диагностических полосок не является надежным индикатором низких уровней протеинурии (большинство выпускаемых в настоящее время диагностических полосок не обладают способностью улавливать белок в моче в концентрации ниже, чем 0,15 г/л). Отрицательные результаты определения белка на полосках не исключают присутствия в моче глобулинов, гемоглобина, уромукоида, белка Бенс-Джонса и других парапротеинов.

Хлопья слизи с высоким содержанием гликопротеидов (например, при воспалительных процессах в мочевых путях, пиурии, бактериурии) могут оседать на индикаторной зоне полоски и приводить к ложноположительным результатам. Ложноположительные результаты могут также быть связаны с высокой концентрацией мочевины. Плохое освещение и нарушение цветоощущения может быть причиной неточного результата.

В связи с этим, использование диагностических полосок следует ограничить скринирующими процедурами, а результаты, полученные с их помощью, следует рассматривать лишь как ориентировочные.

Корректное количественное определение белка в моче в ряде случаев оказывается непростой задачей. Трудности ее решения определяются следующим рядом факторов:

низким содержанием белка в моче здорового человека, часто находящимся на пороге чувствительности большинства известных методов;
присутствием в моче множества соединений, способных вмешиваться в ход химических реакций;
значительными колебаниями содержания и состава белков мочи при различных заболеваниях, затрудняющими выбор адекватного калибровочного материала.

В клинических лабораториях преимущественно применяются так называемые «рутинные» методы определения белка в моче, однако они далеко не всегда позволяют получать удовлетворительные результаты.

С точки зрения специалиста-аналитика, работающего в лаборатории, метод, предназначенный для количественного определения белка в моче, должен отвечать следующим требованиям:

обладать линейной зависимостью между поглощением образовавшегося в ходе химической реакции комплекса и содержанием белка в пробе в широком диапазоне концентраций, что позволит избежать дополнительных операций при подготовке пробы к исследованию;
должен быть прост, не требовать высокой квалификации исполнителя, выполняться при малом количестве операций;
обладать высокой чувствительностью, аналитической надежностью при использовании небольших объемов исследуемого материала;
быть устойчивым к воздействию различных факторов (колебаниям состава образца, присутствию лекарственных препаратов и др.);
обладать приемлемой стоимостью;
быть легко адаптируемым к автоанализаторам;
результат определения не должен зависеть от белкового состава исследуемого образца мочи.

Ни один из известных к настоящему времени методов количественного определения белка в моче не может в полной мере претендовать на роль «золотого стандарта».

Количественные методы определения белка в моче можно разделить на турбидиметрические и колориметрические.

К турбидиметрическим методам относятся:

определение белка с сульфосалициловой кислотой (ССК),
определение белка с трихлоруксусной кислотой (ТХУ),
определение белка с бензетоний хлоридом.

Турбидиметрические методы основаны на снижении растворимости белков мочи вследствие образования суспензии взвешенных частиц под воздействием преципитирующих агентов. О содержании белка в исследуемой пробе судят либо по интенсивности светорассеяния, определяемого числом светорассеивающих частиц (нефелометрический метод анализа), либо по ослаблению светового потока образовавшейся суспензией (турбидиметрический метод анализа).

Величина светорассеяния в преципитационных методах обнаружения белка в моче зависит от множества факторов: скорости смешивания реактивов, температуры реакционной смеси, значения pH среды, присутствия посторонних соединений, способов фотометрии. Тщательное соблюдение условий реакции способствует образованию стабильной суспензии с постоянным размером взвешенных частиц и получению относительно воспроизводимых результатов.

Некоторые лекарственные препараты влияют на результаты турбидиметрических методов определения белка в моче, приводя к так называемым «ложноположительным», либо «ложноотрицательным» результатам. К ним относятся некоторые антибиотики (бензилпенициллин, клоксациллин и др.), рентгеноконтрастирующие йодсодержащие вещества, сульфаниламидные препараты.

Турбидиметрические методы плохо поддаются стандартизации, часто приводят к получению ошибочных результатов, но, несмотря на это, в настоящее время они широко используются в лабораториях из-за невысокой стоимости и доступности реактивов. Наиболее широко в России используется метод определения белка с сульфосалициловой кислотой.

Наиболее чувствительными и точными являются колориметрические методы определения общего белка мочи, основанные на специфических цветных реакциях белков.

биуретовая реакция,
метод Лоури,
методы, основанные на способности различных красителей образовывать комплексы с белками:
- Понсо S (Ponceau S),
- Кумасси бриллиантовый синий (Coomassie Brilliant Blue)
- пирогаллоловый красный (Pyrogallol Red).

С точки зрения исполнителя, в повседневной работе лаборатории при большом потоке исследований биуретовый метод является неудобным из-за большого числа операций. В то же время, метод характеризуется высокой аналитической надежностью, позволяет определять белок в широком диапазоне концентраций и выявлять альбумин, глобулины и парапротеины со сравнимой чувствительностью, вследствие чего биуретовый метод рассматривают в качестве референтного и рекомендуют для сравнения других аналитических методов обнаружения белка в моче. Биуретовый метод определения белка в моче предпочтительно выполнять в лабораториях, обслуживающих нефрологические отделения, и использовать в тех случаях, когда результаты определения с помощью других методов представляются сомнительными, а также для определения величины суточной потери белка у нефрологических больных.

Метод Лоури, обладающий более высокой чувствительностью по сравнению с биуретовым методом, сочетает биуретовую реакцию и реакцию Фолина на аминокислоты тирозин и триптофан в составе белковой молекулы. Несмотря на высокую чувствительность, данный метод не всегда обеспечивает получение надежных результатов при определении содержания белка в моче. Причиной тому служит неспецифическое взаимодействие реактива Фолина с небелковыми компонентами мочи (чаще всего аминокислотами, мочевой кислотой, углеводами). Отделение этих и других компонентов мочи путем диализа или осаждения белков позволяет с успехом использовать данный метод для количественного определения белка в моче. Некоторые лекарственные препараты – салицилаты, хлорпромазин, тетрациклины способны оказывать влияние на данный метод и извращать результаты исследования.

Достаточная чувствительность, хорошая воспроизводимость и простота определения белка по связыванию красителей делают эти методы перспективными, однако высокая стоимость реактивов препятствует более широкому их использованию в лабораториях. В настоящее время в России все большее распространение получает метод с пирогаллоловым красным.

Проводя исследование уровня протеинурии, нужно иметь ввиду, что различные методы определения протеинурии имеют разную чувствительность и специфичность к многочисленным белкам мочи.

Исходя из эмпирических данных, рекомендуется определять белок двумя разными методами и рассчитывать истинное значение по одной из приведенных формул:

протеинурия = 0,4799 B + 0,5230 L;
протеинурия = 1,5484 B – 0,4825 S;
протеинурия = 0,2167 S + 0,7579 L;
протеинурия = 1,0748 P – 0,0986 B;
протеинурия = 1,0104 P – 0,0289 S;
протеинурия = 0,8959 P + 0,0845 L;

где:
B – результат измерения с Кумасси G-250;
L — результат измерения с реактивом Лоури;
P — результат измерения с молибдатом пирогаллола;
S — результат измерения с сульфосалициловой кислотой.

Учитывая выраженные колебания уровня протеинурии в различное время суток, а также зависимость концентрации белка в моче от диуреза, различное его содержание в отдельных порциях мочи, в настоящее время при патологии почек принято оценивать выраженность протеинурии по суточной потере белка с мочой, то есть определять так называемую суточную протеинурию. Она выражается в г/сут.

При невозможности сбора суточной мочи рекомендуется определять в разовой порции мочи концентрации белка и креатинина. Поскольку скорость выделения креатинина в течение дня достаточно постоянна и не зависит от изменения скорости мочеотделения, отношение концентрации белка к концентрации креатинина постоянно. Данное отношение хорошо коррелирует с суточной экскрецией белка и, следовательно, может использоваться для оценки выраженности протеинурии. В норме отношение белок/креатинин должно быть менее 0,2. Белок и креатинин измеряют в г/л. Важным достоинством метода оценки выраженности протеинурии по соотношению белок-креатинин является полное исключение ошибок, связанных с невозможностью или неполным сбором суточной мочи.

О. В. Новоселова, М. Б. Пятигорская, Ю. Е. Михайлов, «Клинические аспекты выявления и оценки протеинурии», Справочник заведующего КДЛ, № 1, январь 2007 г.
А. В. Козлов, «Протеинурия: методы ее выявления», лекция, Санкт-Петербург, СПбМАПО, 2000 г.
В. Л. Эмануэль, «Лабораторная диагностика заболеваний почек. Мочевой синдром», — Справочник заведующего КДЛ, № 12, декабрь 2006 г.
В.И. Пупкова, Л.М. Прасолова — Определение белка в моче и спинномозговой жидкости. Кольцово, 2007 г.
Справочник по клиническим лабораторным методам исследования. Под ред. Е. А. Кост. Москва, «Медицина», 1975 г.

Для количественного определения белка пригоден любой образец мочи. Большинство исследователей для выяснения величины суточной потери белка предпочитают определять содержание белка в моче, собранной за сутки.

Раздел: Анализ мочи

Все качественные пробы на белок в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. При наличии белка в исследуемом образце мочи появляется либо помутнение, либо выпадение хлопьевидного осадка.

Раздел: Анализ мочи

Проба с 20% сульфосалициловой кислотой относится к качественным реакциям определения белка в моче. Так как она основана на реакции коагуляции, то исследуемая моча должна соответствовать определенным требованиям: быть прозрачной и иметь кислую реакцию.

Раздел: Анализ мочи

Кольцевая проба Геллера относится к качественным реакциям определения белка в моче. Так как она основана на реакции коагуляции, то исследуемая моча должна соответствовать определенным требованиям: быть прозрачной и иметь кислую реакцию.

Раздел: Анализ мочи

источник