Количественные пробы для определения глюкозы в моче

1. Определение глюкозы в моче. Моча здорового человека содержит мини­мальное количество глюкозы (0,16—0,83 ммоль/л), которое нельзя обнару­жить обычными качественными пробами. Появление сахара в моче (глюкозу-рия) может быть физиологическим. При нормально функционирующих почках глюкозурия наблюдается только в тех случаях, когда увеличивается концентрация сахара в крови, т. е. появляется гипергликемия. Так назы­ваемый почечный порог глюкозы —концентрация сахара в крови, выше которой отмечается глюкозурия, обычно не превышает 9,9 ммоль/л (1,8 г/л).

Физиологическую глюкозурию можно наблюдать при введении с пищей большого количества углеводов (алиментарная), после эмоционального на­пряжения (эмоциональная), приема некоторых лекарств (кофеин, стероидные гормоны). Реже наблюдают почечную (ренальная) глюкозурию, обуславли­ваемую нарушением реабсорбции глюкозы в канальцах, когда глюкозурия по­является при нормальной концентрации сахара в крови. Как первичное забо­левание ренальную глюкозурию встречают в виде так называемого р е н а л ь -ного диабета. Вторичные ренальные глюкозурии могут встречаться при хронических нефритах, нефрозах, амилоидозе.

Патологическая глюкозурил чаще всего бывает диабетической (сахарный диабет), реже тиреогенной (тиреотоксикоз), гипофизарной (синдром Ицен-ко — Кушинга), печеночной (цирроз печени).

Для правильной оценки глюкозурии (особенно у больных диабетом) не­обходимо исследовать мочу, собранную за сутки, и вычислить суточную поте­рю сахара с мочой.

Большинство качественных проб, применямых для определения глюкозы в моче, основано на использовании редуцирующей способности глюкозы.

Проси Гайнеса. Основана на свойстве глюкозы восстанавливать гидрат окиси меди в основной среде в гидрат закиси меди (желтый цвет) или закись меди (красный цвет).

Проси Huлaндера. Основана на восстановлении глюкозой нитрата висму­та в металлический висмут. В присутствии сахара появляется окраска от ко­ричневой до черной.

При производстве редукционных проб моча не должна содержать белка. Если в моче есть белок, ею необходимо удалить. Посторонние восстанавли­вающие вещества (антипирин, бензойная кислота и др.). дающие ложную ре­акцию, могут быть удалены, если прибавить к 9 мл мочи 1 мл 95% спирта и небольшое количество животного угля, так как упомянутые посторонние ве­щества адсорбируются углем, а глюкоза не адсорбируется.

Наряду с редукционными пробами последнее время широко применяется глюкозооксидазная проба. Это энзимная проба, отличающаяся значительной специфичностью

и простой техникой. Глюкозооксидаза (нотатин) представляет собой ..—d-глюкозодегидрогеназу. На первом этапе пробы из глюкозы под воздействием фермента выделяется перекись водорода. На втором этапе устанавливается наличие перекиси водорода с помощью редокс-индикатора, подобно механизму бензидиновой пробы. Глюкозопероксидазная проба поло­жена в основу метода индикаторных бумажек. В мочу погружают бумажку, пропитанную нотатином, пероксидазой и каким-нибудь производным бен-зидина. Через 30 с при наличии глюкозы появляется синяя окраска.

Количественное определение глюкозы в моче. Поляри­метрическим методом по углу вращения поляризованного луча (глюкоза вра­щает поляризованный свет вправо) можно определить концентрацию глю­козы в моче. Аппараты, при помощи которых определяют угол вращения поляризованного света, называются поляриметрами. Поле зрения поляриме­тра разделено на две или три части. При отсутствии оптически активной жид­кости в трубке поляриметра анализатор не задерживает света и все части оди­наково освещены. При наличии в трубке оптически активной жидкости плоскость поляризованного света отклоняется, и часть зрительного поля за­темнена. Диском, к которому прикреплен анализатор, поворачивают его до тех пор, пока все зрительное поле не становится равномерно освещенным. Угол вращения анализатора отражает угол вращения плоскости поляризации, который пропорционален проценту содержания глюкозы в моче. Величину угла отмечают по шкале. Этот способ позволяет получить довольно точные данные.

Колориметрический метод Альтгаузена основан на цветной реакции, по­лучаемой при нагревании раствора глюкозы с раствором едкого натра. К 4 мл мочи добавляют 1 мл 10% раствора едкого натра или едкого кали и ки­пятят 1 мин. Через 10 мин цвет жидкости в пробирке сравнивают с рядом цветных стандартов, по которому определяют результат. Колориметрию можно производить не только визуально, но и при помощи фотометра.

Определение кетоновых (ацетоновых) тел. Содержание в моче кетоновых тел называется кетонурией. К кетоновым телам относятся три соедине­ния: ацетон, ацетоуксусная кислота и р-оксимасляная кислота. Большая часть жиров и некоторые белки способствуют образованию кетоновых тел. Кето­новые тела быстро окисляются в тканях до СО2 и воды, поэтому с мочой за сутки выводится около 20—50 мг кетоновых тел.

Кетонурия может быть следствием повышенного образования кетоновых тел и следствием нарушения их распада. Чаще всего кетонурию приходится наблюдать при тяжелом сахарном диабете, но она встречается и при углевод­ном голодании. Кетонурия на почве голода и истощения возможна при тя­желых токсикозах, продолжительных желудочно-кишечных расстройствах, ди­зентерии, а также может появляться в послеоперационном периоде, при сильном раздраженииЦНС.

В норме с мочой выделяются минимальные количества кетоновых тел, которые не обнаруживаются сущее твующими качественными пробами. Каче­ственные реакции на кетоновые тела основаны па появлении цветной реакции при их взаимодействии с нитропруссидом натрия в основной среде. Наиболь­шее распространение получила проба Ланге, которая заключается в том, что на исследуемую мочу после добавления к пей нитропруссида и уксусной кис­лоты наслаивают аммиак; при положительной пробе па границе жидкостей образуется фиолетовое кольцо.

2. Отек легких:

— строфантин 0.05% — 0,25 мл до 1 мл

2. Диуретики: Диуретические и дегидратационные средства

· Фуросемид ( 20-60 мг до 160 мг)

Этакриновая кислота ( 50-100 мг в 50 – 100 мл 5% р-ра глюкозы)

3. Альфаадреноблокаторы: тропафен. Блокаторы альфа- адренорецепторов

4. Наркотические анальгетики:

— строфантин 0.05% — 0,25 мл до 1 мл

2. Альфаадреноблокаторы: тропафен.

3. ГК: Глюкокортикостероиды за 2-3 часа

преднизолон (60- 150 мг в 100 – 200 мл физ р-ра

studopedia.org — Студопедия.Орг — 2014-2019 год. Студопедия не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования (0.002 с) .

источник

Количественное определение глюкозы в моче по способу А. Я. Альтгаузена основано на качественной пробе Моора-Геллера. В основу этой пробы положено свойство глюкозы при кипячении в щелочной среде превращаться в буроокрашенные гуммиповые вещества и молочную кислоту. Интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию глюкозы в исследуемой моче. А. Я. Альтгаузен предложил шкалу цветных стандартов (рис. 3), соответствующих определенному процентному содержанию глюкозы в моче.

Для определения количества глюкозы в моче методом А. Я. Альтгаузена необходимо иметь: 1) 10% раствор едкого натра (10 г едкого патра растворяют в 70-80 мл дистиллированной воды и ею доводят объем раствора до 100 мл); 2) сахариметр Альтгаузена.

В пробирку помещают 4 мл нефильтрованной мочи, прибавляют 1 мл 10% раствора едкого натра, смешивают содержимое пробирки и кипятят над пламенем горелки в течение одной минуты. Чтобы избежать выбрасывания жидкости, пробирку периодически выносят из пламени. После кипячения пробу оставляют на 10 минут, а затем помещают в проходящем дневном свете на полоску сахариметра Альтгаузена, интенсивность окраски которой соответствует окраске пробы. При этом если окраска исследуемой пробы интенсивнее или слабее стандарта, то пробирку располагают между двумя полосками сахариметра, одна из которых окрашена слабее, а другая интенсивнее. Количество глю¬козы в моче в таком случае будет равно среднему содержанию глюкозы, указанному на этих полосках.

В случае, если цвет исследуемой пробы интенсивнее окраски последней полоски сахариметра, соответствующей 4% глюкозы, мочу разводят в 2 раза и более. Затем определение повторяют. При этом полученный результат умножают на степень разведения.

Этот метод основан на сравнении исследуемой мочи с искусственно приготовленными стандартами из мочи, не содержащей глюкозы, после добавления к ней определенного количества глюкозы.

Приготовление стандартных разведений. Разводят 1 г глюкозы в 25 мл мочи, не содержащей глюкозы (это будет основное 4% разведение), и из этого раствора готовят следующие разведения: 3 мл раствора + + 1 мл мочи (3% глюкозы); 2 мл раствора+ 2 мл мочи (2% глюкозы); 1,5 мл раствора + 2,5 мл мочи (1,5% глю¬козы); 1 мл раствора + 3 мл мочи (1% глюкозы); 0,5 мл раствора + 3,5 мл мочи (0,5% глюкозы).

Техника определения. В отдельную пробирку наливают 4 мл исследуемой мочи, а в остальные пробирки — стандартные разведения, затем прибавляют по 1 мл 10% раствора едкого натра во все пробирки.

Содержимое пробирок одновременно кипятят в течение одной минуты и определяют, к какой из стандартных пробирок с глюкозой подходит по цвету исследуемая пробирка с мочой.
В бланке анализа мочи отмечают количество глюкозы в процентах.

Для правильного суждения о количестве выделенной из организма глюкозы содержание последней высчитывают в суточной порции мочи. С этой целью одним из описанных выше способов определяют содержание глюкозы в порции мочи (в процентах), взятой из суточного ее количества, и, кроме того, определяют суточный диурез. Суточное количество глюкозы выражают в граммах. Для этого процентное содержание глюкозы умножают на число миллилитров суточной мочи и делят на 100.

Помимо глюкозы, в моче определяют и другие виды углеводов (молочный сахар, фруктозу и др.), но определение последних производят значительно реже, главным образом в детской практике и с целью идентификации отдельных углеводов.

источник

В норме у всех здоровых людей в обычных общих анализах мочи могут обнаружить лишь следы глюкозы. Стандартное ее содержание не превышает 0,7 ммоль/литр или 2,8 ммоль/сутки.

Если в результате исследования было обнаружено, что у вас повышена глюкоза в моче, то вначале следует просто пересдать анализ. Если вы повторно получите плохой результат, то следует начинать искать причины возникновения проблем.

Нередко появление сахара сопровождает острый панкреатит. Но он может появиться и вследствие развития других болезней. Например, глюкозурию центрального генеза может вызвать менингит, геморрагический инсульт, энцефалит, черепно-мозговая травма. Лихорадка также является причиной увеличения концентрации сахара в моче. Отдельно выделяют и эндокринную глюкозурию. Она может развиться в результате скачков уровня адреналина, увеличении тироксина, соматотропина, глюкокортикоидных гормонов.

Ренальная глюкозурия развивается из-за проблем с мочевыделительной системой. Это может быть последствием патологии клубочков и канальцев почек. Указанные поражения часто развиваются на фоне инфекционных заболеваний – гломерулонефрита или интерстициального нефрита. Отравление морфином, хлороформом, стрихнином, фосфором является токсической причиной появления сахара в исследуемом материале.

Также заболевание сопровождает акромегалию. Это непропорциональный рост внутренних органов, мягких тканей и скелета, вызванный избыточным продуцированием соматотропного гормона. При этом в общем анализе нередко наблюдается эозинофилия и анемия, а в моче — гиперкальциурия.

При феохромоцитоме также появляется глюкоза в моче. Причины кроются в том, что нарушается работа почек из-за развития опухоли мозгового слоя надпочечников.

Синдром Иценко-Кушинга характеризуется повышением функции надпочечников, они начинают продуцировать глюкокориткоиды в избыточном количестве. Это сопровождается появлением глюкозурии.

Также среди причин называют инфаркт, ожоги, демпинг-синдром.

Чаще всего повышение глюкозы в моче наблюдается у больных диабетом, гипертиреозом, у людей с тяжелыми поражениями печени. При этом процесс почечной фильтрации нарушается. Глюкоза, проходя через мембраны клубочков в почках, должна полностью всасываться обратно в канальцах и возвращаться в кровоток.

Для своевременного выявления заболеваний необходимо сдавать общий анализ мочи ежегодно. Ведь часто начало большинства болезней проходит практически бессимптомно.

Также важно знать, что существует 2 формы этого заболевания. Глюкоза в моче повышена может быть в результате наследственного дефекта, при котором нарушен механизм ее транспортировки. В таком случае говорят о первичной почечной глюкозурии. Схожий механизм развития наблюдается и при синдроме Фанкони или глюкоаминовом диабете. При первом заболевании нарушается работа почек, в моче обнаруживают глюкозу, избыток бикарбоната, аминокислот, фосфатов. Оно характеризуется повышенным выделением мочи, болями в костях, слабостью. Глюкоаминовый диабет проявляется сбоями в работе почек, при которых аминокислоты и сахар выводятся с мочой.

Вторичная форма может проявиться во время беременности или в результате отравления.

Для окончательной установки диагноза мало просто выслушать жалобы и собрать анамнез, необходимо достоверно определить, есть ли глюкоза в моче. Причины ее повышения устанавливаются позже. Сложность заключается в том, что глюкозурия часто протекает бессимптомно. Правда, при выраженной потере сахара с мочой некоторые пациенты жалуются на утомляемость, слабость, головокружения, чувство голода, повышение потоотделения. Также больные иногда отмечают боли в мышцах, увеличение суточной мочи, водянистый стул и нарушение сердцебиения.

Так, в рамках исследования назначаются дополнительные анализы. Проверяется количество сахара в сыворотке крови, исследуются все порции этой биологической жидкости, в том числе и суточная. Для анализов разработаны специальные методы определения глюкозы в моче.

Наиболее распространенным способом является выяснение концентрации сахара с помощью специальных полосок с реагентами. Также наличие глюкозы диагностируют, проведя пробу Гайнеса, исследование по методу Бенедикта, Нидлера. Выяснить точную концентрацию можно с помощью поляриметрического исследования или проведя анализ по Альтгаузену.

Если вам надо сдать обычный общий анализ или целенаправленно проверить наличие сахара в моче, то не забывайте об установленных правилах сбора биологического материала. Так, вначале необходимо провести тщательный туалет наружных половых органов с помощью нейтрального мыла. Иначе в биологический материал могут попасть вещества, способствующие быстрому разложению глюкозы.

Мочу необходимо собирать в чистую посуду, желательно использовать специальные аптечные контейнеры или тщательно вымытые и стерилизованные баночки. Закрыв емкость крышкой, ее необходимо доставить в лабораторию, в которой и будут определять содержание глюкозы в моче.

Если вам сказали собрать суточную мочу, то делается это следующим образом. Первая утренняя порция сливается. Сбор начинается со второго в день мочеиспускания в полном объеме. Не забудьте, что в суточный объем необходимо собрать утреннюю мочу следующего дня. Обязательно подмывайтесь перед каждым походом в туалет. Но не надо нести всю бутыль в лабораторию для того, чтобы определить, если ли у вас глюкоза в моче, повышена она или нет. Замеряйте общий объем, перемешайте биологическую жидкость в емкости и отберите до 100 мл в чистую баночку. На специальном листе необходимо указать ваш рост, вес и общее количество собранной мочи. Кстати, на протяжении суток хранить емкость необходимо в холодильнике. Это нужно для того, чтобы не снижалась концентрация глюкозы в моче.

Для диагностики предназначены особые полоски «Глюкотест» длиной 5 см и шириной 0,5 см со специальной светло-желтой полосой. Именно этот участок пропитан ферментами и красителями, он и окрашивается в случае возникновения реакции.

Определение глюкозы в моче проводится следующим образом. Индикаторная полоска помещается в биологическую жидкость так, чтобы реактивы полностью намокли, и сразу извлекается из нее. После этого ее оставляют на 2 минуты. Как пройдет указанное время, окрас полосы сравнивают со специальной шкалой, определяя приблизительную концентрацию сахара. Если она превышает 20 г/л, то цвет полоски становится предельно возможным и далее не изменяется.

Хранить полоски необходимо при температуре до +18 градусов так, чтобы на них не попадали солнечные лучи. Дотрагиваться до индикаторного участка нежелательно.

Для его проведения создают специальный реактив. В него входят кристаллический сульфат меди, едкий натр и глицерин, которые растворяются в дистиллированной воде по отдельности, а затем смешиваются.

Проводят исследование следующим образом: 20 капель реактива прибавляют к 8 мл мочи в пробирке. В результате должен появиться голубоватый окрас. Верхнюю часть пробирки греют до начала кипения. Нижний ее отдел остается холодным для контроля. Если при этом в нагретой части пробирки голубой окрас сменяется на желтый, то, значит, глюкоза в моче повышена.

Существует и другой метод проверки наличия избыточного количества сахара в моче, основанный на тех же свойствах глюкозы восстанавливать закись меди или гидрат закиси меди из гидрата окиси меди в щелочной среде. Для этих целей готовят специальный реактив из цитрата натрия, безводного карбоната натрия, сульфата меди и воды. Из них делают растворы, которые потом смешивают.

Для проведения исследования необходимо до 10 капель мочи и 5 мл готового реактива. Их смешивают в пробирке, нагревают ее на протяжении пары минут и дожидаются остывания. Если в результате появляется осадок, а жидкость окрашивается в желтый, красный или зеленый цвет, то глюкоза в моче есть.

Этот метод считается одним из самых надежных среди качественных исследований.

Метод разработан на основе того, что глюкоза может восстанавливать нитрат висмута в металлический. Для проведения исследования готовят специальный реактив. В него входит нитрат висмута, который растирается в сегнетовой соли, 10% едкий натр. Хранится приготовленный реактив только в бутылках из темного стекла.

Проводится анализ следующим образом. Моча и реактив смешиваются в соотношении 2:1 и варятся на протяжении 3-х минут. Если присутствует глюкоза в моче, то цвет поменяется на коричневый или даже черный, а при стоянии будет виден темный осадок. Но иногда положительный результат может возникнуть не из-за наличия сахара, а в результате реакции на белок или ряд лекарственных препаратов.

С помощью указанного метода проводится не только определение глюкозы в моче, но и выяснение ее концентрации. Делается это в специальном приборе – поляриметре.

Для проведения исследования биологическую жидкость обесцвечивают и удаляют из нее белок. После этого ее заливают в аппарат, ждут несколько минут для затихания колебаний частиц и определяют концентрацию глюкозы. С помощью такого метода можно определить даже значимое повышение глюкозы в моче, ведь оно основано на свойствах этого вещества поворачивать поляризованный луч вправо. Угол вращения будет зависеть от концентрации раствора. Правда, на результаты могут повлиять β-оксимолярная кислота, стрептомицин, тетрациклиновые препараты.

Указанный способ позволяет достаточно точно определить, присутствует ли в глюкоза в моче. Для этого в биологическую жидкость добавляют 10% раствор едкого натра и кипятят ее в течение минуты. После этого ее цвет сравнивают со шкалой стандартов, приготовленной в пробирках. Этот способ используют как альтернативу полиметрическому исследованию, когда необходимо быстро выяснить уровень сахара, а необходимого оборудования нет.

Причиной появления глюкозы в моче у малышей может стать диабет. При этом у новорожденных снижена масса тела, а при появлении проблем замечается отставание в развитии. Но по одному анализу мочи диагноз не ставится, малыша тщательно обследуют, чтобы исключить другие возможные причины развития болезни.

Обнаруженная глюкоза в моче у ребенка вынуждает родителей более тщательно следить за питанием малыша. В его организм должно поступать достаточное количество углеводов, они необходимы для полноценного развития. Также важно следить, чтобы концентрация глюкозы в сыворотке крови находилась в пределах 3,5-5,5 ммоль/л. Для этого необходимо не только правильное питание, но и физические нагрузки.

Многие пациенты не знают, что значит глюкоза в моче. Они начинают паниковать и требовать назначения каких-то препаратов для нормализации состояния. Но наличие сахара в биологической жидкости является лишь сигналом проблем. Это значит, что необходимо проверить, нет ли у вас диабета, проблем с почками или надпочечниками. Также необходимо проконтролировать работу щитовидной железы. Не стоит забывать, что глюкозурия может развиться и из-за отравлений рядом веществ.

Если вы страдаете от глюкозурии и хотите узнать, как предотвратить развитие болезни у детей, то медицина тут бессильна. Никакой специфической профилактики не существует. Важно просто следить за питанием, давать необходимую физическую нагрузку, и тогда есть шанс, что организм будет работать нормально, несмотря на предрасположенность к развитию заболевания. Ведь чаще всего глюкоза в моче у ребенка появляется вследствие генных мутаций. А избежать этого нельзя. Как правило, ломается ген, отвечающий за белок, который необходим для всасывания в кровь сахара в почках. Даже если у родителей нет проблем, но у них есть малыш с глюкозурией, то при планировании следующих беременностей им в обязательном порядке необходимо посетить генетика для оценки возможных рисков.

источник

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫ В МОЧЕ, ПОЛУЧЕННЫХ РАЗНЫМИ МЕТОДАМИ

Смирнов Илья Алексеевич

студент 2 курса отделения Лабораторной диагностики ГБОУ СПО «Медицинское училище № 4 ДЗМ», РФ, г. Москва

Меклер Наталия Николаевна

научный руководитель, канд. биол. наук, доцент, преподаватель ПМ01 ГБОУ СПО «Медицинское училище № 4 ДЗМ», РФ, г. Москва

Исследование мочи часто позволяет выявить как заболевания мочевых путей, так и протекающие без первичного поражения почек, заболевания внутренних органов, метаболические расстройства.

Анализируя состав и свойства мочи в динамике, можно получить информацию о состоянии различных систем органов пациента, оценить степень тяжести заболевания, а также сделать заключение об эффективности проводимого лечения.

Одним из важнейших показателей анализа мочи, который исследуется в условиях лаборатории, является глюкоза.

Стратегия получения этой информации менялась в ходе развития медицины. В 1776 году Мэттью Добсон определил, что моча диабетиков содержит сахар. В 1815 году Джин Биот предложил поляриметрический способ определения содержания оптически активных веществ в жидкости, что позволило измерять содержание глюкозы в растворах. В 1908 году американский химик Стенли Бенедикт предложил метод, обнаружения в моче глюкозы, основанный на ее способности восстанавливать окись меди в щелочной среде сопровождающаяся появлением красного, синего или зеленовато-желтого осадка. В 1911 году американский химик Хейнц Гайнес, основываясь на способности глюкозы восстанавливать в щелочной среде при нагревании гидрат окиси меди (синего цвета) в гидрат закиси меди (желтого цвета) и закись меди (красного цвета), предложил способ определения глюкозы в моче, названный в его честь пробой Гайнеса. В 1959 г советским ученым А.Я. Альтгаузеном, предложен метод количественного определения сахара в моче, который основан на взаимодействии глюкозы со щелочью при нагревании с образованием окрашенных соединений. В 1972 в Советском Союзе был унифицирован метод, основанный на использовании свойства раствора глюкозы вращать плоскость поляризованного луча вправо, угол вращения которого зависит от концентрации вещества [3].

Указанные физико-химические исследования мочи представляют собой достаточно длительный и, в целом, сложный процесс, требующий множества реактивов, лабораторной посуды и другого оборудования. Сегодня исследование мочи на содержание глюкозы упростилось, стало легко выполнимым, благодаря появлению тест-полосок для исследования мочи, и более объективным благодаря применению анализаторов мочи, которые заменили процедуру визуальной оценки тест-полосок. Скрининговое исследование с помощью тест-полосок на анализаторе позволяет быстро выявить патологические образцы мочи, требующие последующего количественного определения концентрации белка, глюкозы и обязательного тщательного микроскопического анализа. Такой порядок работы сокращает общее время исследования и повышает ее качество. Простота работы на приборе и его обслуживания, в сочетании с доступностью расходных материалов и технической поддержкой производителя делают данный прибор весьма привлекательным [2].

Цель работы: сопоставимость результатов определения концентрации глюкозы в моче методом «сухой химии» (тест-полоски Uriscan10) визуально и с помощью анализатора DocUReader (Венгрия).

1. Проанализировать сведения об истории исследования изучаемого показателя в моче;

2. Освоить алгоритм проведения исследования концентрации глюкозы в моче с помощью «сухой химии» и на анализаторе DocUReader;

3. Провести исследования концентрации глюкозы в моче заявленными способами;

4. Сравнить результаты, полученные при проведении исследований.

Материалы и методы

Изучен показатель состава мочи — глюкоза в пяти пробах, отобранных случайным образом, поступивших на исследование в клинико-диагностическую лабораторию ГБУЗ «ГП № 67» 28 апреля 2015 года. Анализ проводили в течение 1-го часа после поступления биологического материала в лабораторию. Сначала исследования проводили визуально, а затем на анализаторе DocUReader.

Определение глюкозы основано на специфической глюкозооксидазной реакции. D-глюкоза при участии фермента глюкозоксидазы превращается в глюконовую кислоту с образованием перекиси водорода, которая в присутствии пероксидазы окисляет индикатор с образованием окрашенного соединения.

Анализ мочи с применением диагностических тест-полосок визуально.

Исследования проводились в соответствии с положениями инструкции к тест-полоскам. Каждую пробу мочи тщательно перемешивали перед анализом. Диагностическую полоску Uriscan10 погружали в мочу. Избыток мочи удаляли прикосновением к мягкой бумаге, далее тест-полоску соотносили с оценочной шкалой и фиксировали результат.

Анализ мочи с применением диагностических тест-полосок на анализаторе DocUReader

Исследования проводились в соответствии с положениями инструкции к анализатору и тест-полоскам. Каждую пробу мочи тщательно перемешивали перед анализом. Диагностическую полоску Uriscan10 погружали в мочу. Избыток мочи удаляли прикосновением к мягкой бумаге, далее диагностическую полоску помещали на направляющую панель анализатора DocUReader. Принцип действия прибора: интенсивность света, отраженного от поверхности полоски, регистрируется специальными датчиками прибора. В отраженном свете определяется доля трех основных цветовых составляющих, которая, наряду с компенсационной цветовой составляющей, используется для расчета изменения коэффициента отражения (КО в %). Последний показатель преобразуется в соответствующий интервал (в условных единицах +,-), который и выводится на чек [2; 3].

Интервалы диагностических полосок Uriscan10 и соответствующие им концентрационные диапазоны определяемых показателей представлены в таблице 1.

Интервалы тест-полосок Uriscan10 (в условных единицах +,-) и соответствующие им концентрационные диапазоны, определяемые в моче

источник

Методическая разработка № 5 по учебной практике на тему занятия: «Выполнение клинического анализа мочи -качественные и количественные методы определения глюкозы в моче

Для дошкольников и учеников 1-11 классов

16 предметов ОРГВЗНОС 25 Р.

Государственное автономное образовательное учреждение

среднего профессионального образования Республики Крым

«Евпаторийский медицинский колледж»

План занятия (практическое) № 5

Тема занятия: Выполнение клинического анализа мочи — количественные методы определения глюкозы в моче

Дисциплина (МДК) 01.01. Теория и практика лабораторных общеклинических исследований

Специальность: 31.02.03. Лабораторная диагностика

Приобрести первоначальный практический опыт работы при проведении лабораторных общеклинических исследований

Отработать практические навыки и умения

Развивать навыки самообразования, творческие способности студентов

Продолжить развитие учебно-интеллектуальных умений;

Устанавливать причинно-следственные связи

продолжить формирование эволюционных представлений о развитии органического мира, передачи наследственного материала

воспитывать уважение к людям, науки, их достижениям

продолжить формирования умения работать в коллективе, принимать совместные решения

продолжить формирования здорового образа жизни

Анатомия и физиология человека

Физико-химические методы исследования и техника лабораторных работ

Место проведения: лаборатория 405

Количество часов: 4 академических

Обеспечение занятия: стол лаборанта, оборудование для проведения всех этапов общеклинического исследования, реактивы посуда; мультимедийное оснащение, таблицы, схемы, алгоритмы.

Камышников В. С. «Методы клинических лабораторных исследований», «Мединформ», Москва, 2015г

А. А. Кишкун «Клиническая лабораторная диагностика», «ГОТАР – Медиа» — 2011 г

Профильные web — c айты интернет — ресурсы:

http://www.labnbo.narod.ru — сайт лаборатории наследственных болезней обмена содержит информацию о лабораторной диагностике редких наследственных заболеваний, их клинических проявлениях и возможностях лечения.

http://www.medlab.scn.ru — онлайн журнал для специалистов, нормативные документы, методические рекомендации, эксперт-клуб, выставка лабораторных фирм, форум, полезная информация о лабораторных анализах.

Проводить работы с соблюдением правил работы в КДЛ, санитарно-противоэпидемиологического режима, техники безопасности.

Готовить биологический материал, реактивы, лабораторную посуду, оборудование;

4. Проводить общий анализ мочи: определять ее физические и химические свойства, исследовать под микроскопом осадок;

5. Проводить функциональные пробы;

6. Проводить дополнительные химические исследования мочи (определение пигментов мочи, кетоновых тел и прочее);

7. Проводить количественные исследования осадка мочи;

8. Работать на анализаторах мочи;

задачи, структуру, оборудование, правила работы и технику безопасности в лаборатории клинических исследований;

основные методы и диагностическое значение исследований физических, химических показателей мочи;

морфологию клеточных и других элементов мочи;

Этапы обработки лабораторной посуды и критерии унификации

ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.

ОК 3. Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них ответственность.

ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для эффективного выполнения возложенных на него профессиональных задач, а также для своего профессионального и личностного развития.

ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в профессиональной деятельности.

ОК 8. Самостоятельно определять задачи профессионального и личностного развития, заниматься самообразованием, осознанно планировать и осуществлять повышение своей квалификации.

ОК 9. Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной деятельности.

ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.

ПК 1.1. Готовить рабочее место для проведения лабораторных общеклинических исследований.

ПК 1.2 . Проводить лабораторные общеклинические исследования биологических материалов; участвовать в контроле качества.

ПК 1.3. Регистрировать полученные результаты лабораторных общеклинических исследований.

ПК 1.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.

Организационный момент 2 мин.

Мотивация (цели) занятия 3 мин.

Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний) 15 мин.

Инструктаж самостоятельной работы студентов 15 мин.

Практическая часть 135 мин.

Подведение итогов занятия, оценка работы студентов 8 мин.

(Приветствие, проверка присутствующих, внешнего вида студентов, сообщение темы, учебных целей занятия)

Инструктаж по охране труда ( роспись в журнале по технике безопасности )

Формирование общих и профессиональных компетенций, приобретение первоначального практического опыта работы по специальности в части освоение основного вида профессиональной деятельности.

Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний) :

1. тесты по пройденному материалу (с применением web -сервиса Kahoot . it или Plickers )

б) подведение итогов контроля:

Оценивание, замечания по работе.

а) подготовка студентов к самостоятельной работе ( проведение инструктажа по выполнению заданий):

В течении рабочего времени обучающиеся должны отработать навыки по подготовке лабораторной посуды к проведению исследований.

б) самостоятельная работа студентов: (алгоритмы выполняемых работ)

Промаркировать полученный биоматериал пробирки, направления и бланки анализов

Организовать рабочий стол лаборанта для проведения физического исследования мочи

Организовать рабочий стол для качественного определения глюкозы реакцией Гайнеса-Акимова, «глюкотестом»

Организовать рабочий стол для количественного определения глюкозы в моче ортотолуидиновым методом

Организовать рабочий стол для количественного определения глюкозы в моче глюкозооксидазным методом

Выполнить клинический анализ мочи — ОАМ

Составить схему определения глюкозы методом ортотолуидиновым методом

Составить схему определения глюкозы глюкозооксидазным методом

в) подведение итогов самостоятельной работы

Записать в дневники выводы о проделанной работе

Проверка преподавателем работ студентов

Подведение итогов занятия, оценка работы студентов

Преподаватель высшей квалификационной категории, кандидат биологических наук Зейналиева Э. Н.

Алгоритм качественного определения глюкозы в моче Реакция Гайнеса-Акимова

Принцип. В основу большинства методов положены восстанавливающие свойства глюкозы. В реакции Гайнеса-Акимова восстанавливается сульфат меди последовательно в гидроксид меди желтого цвета и в оксид меди кирпично-красного цвета. Реакция протекает при нагревании в щелочной среде.

Реактив : (по прописи Акимова): 13,3 г химически чистого сульфата меди растворяют в 400 мл дистиллированной воды (раствор 1); в другой посуде растворяют 50 г гидроксида натрия в 400 мл дистиллированной воды (раствор 2); далее разводят 15 г глицерина в 200 мл дистиллированной воды (раствор 3). Смешивают растворы 1 и 2, и к этой смеси при постоянном помешивании прибавляют небольшими порциями раствор 3. Получают готовый реактив синего цвета. Он годен в течение длительного времени.

Ход определения : 1. В пробирку помещают 3 – 4 мл реактива Гайнеса- Акимова и 8 – 12 капель мочи, нагревают ее над пламенем до закипания смеси,

2. Затем кипятят в течение 1 – 2 мин или кипятят на водяной бане.

3. При наличии глюкозы голубой цвет переходит в желтый, а при отсутствии цвет реактива Гайнеса-Акимова не изменяется. 4. На практике чаще к 1 капле мочи прибавляют 9 капель реактива и кипятят на водяной бане 1 – 2 мин. 5. На результаты анализов могут влиять и другие редуцирующие вещества мочи (ацетилсалициловая кислота, ПАСК, кофеин, антибиотики, поливитамины, аскорбиновая кислота, хлорамин, желчные кислоты, билирубин), от которых необходимо избавляться.

Определение глюкозы с использованием методов «сухой» химии

Методология «сухой» химии реализуется с применением специальных полосок, реагентные зоны которых содержат сухие реактивы (ферменты и/или неферменты), способные воздействовать на определенные метаболиты биологических жидкостей с изменением окраски индикаторной зоны.

Для экспресс-выявления глюкозы в моче и ее полуколичественного определения используются тест-полоски ФАН чешской фирмы «Лахема»; «Уритест-1», «Уритест-2» фирмы «Кормэй»; «Глюкотест» фирмы «Рош-Диагностика» («Берингер-Мангейм») и др.

Реакция при помощи индикаторной бумаги «Глюкотест»

Пр инцип. Метод основан на специфическом окислении глюкозы с помощью фермента глюкозооксидазы. Образовавшаяся при этом перекись водорода разлагается вторым ферментом — пероксидазой – и окисляет добавленный краситель (ортотолуидин, бензидин). В результате краситель изменяет свой цвет, что свидетельствует о наличии глюкозы в моче.

Выпускается индикаторная бумага «Глюкотест» для полуколичественного определения глюкозы в моче. На этикетке упаковки обозначены условия хранения, срок годности, дата выпуска и др. Каждый комплект содержит 100 полосок индикаторной бумаги, пластмассовую пластинку белого цвета, цветную шкалу и инструкцию по проведению исследования. Индикаторная бумага имеет размер 0,5×5 см и поперечную полосу светло-желтого цвета. Эта полоса нанесена вблизи одного из краев бумаги и пропитана раствором ферментов и красителя.

При проведении качественной реакции на присутствие глюкозы в моче при помощи индикаторной бумаги «Глюкотест» рекомендуют выполнять следующие методические указания: исследовать свежесобранную мочу, полученную до приема пищи; индикаторную бумагу хранить в темном закрытом пенале при температуре 8°С; использовать индикаторную бумагу в течение оптимального срока годности (8 мес. со дня выпуска).

Ход определения . 1.Из пенала извлекают пластмассовую пластинку, цветную шкалу и одну полоску индикаторной бумаги. 2 – 3 капли исследуемой мочи наносят на индикаторную полоску светло-желтого цвета так, чтобы она была полностью увлажнена, или опускают полоску в мочу. 2. Затем полоску бумаги кладут на пластмассовую пластинку белого цвета и оставляют на 2 мин при комнатной температуре, после чего сравнивают окраску поперечной полосы на бумаге с цветной шкалой. Если первоначальный цвет полосы на бумаге существенно не меняется, то глюкоза в моче отсутствует. 3. При наличии глюкозы (от 5,55 до 111 ммоль/л) цвет полосы меняется от светло-зеленого до интенсивно-зеленого. При содержании глюкозы в моче более 111 ммоль/л максимальная интенсивность окраски цветной полосы на реактивной бумаге остается без изменений. При высоком содержании глюкозы в моче ее необходимо развести и полученный результат умножить на степень разведения.

Количественное определение глюкозы

Унифицированые способы количественного определения глюкозы в моче по цветной реакции с ортотолуидином и глюкозооксидазный метод.

Количественное определение глюкозы производят только в тех порциях мочи, в которых она была обнаружена качественно. При определении глюкозы в суточном количестве мочи у больных сахарным диабетом исследуют три порции мочи, собранные через каждые 8 часов. Во избежание ложноположительных результатов перед определением глюкозы приостанавливают лечение тетрациклином, хлортетрациклином, так как они выделяются с мочой и искажают результаты определений.

Алгоритм Количественное определение глюкозы в моче ортотолуидиновым методом

Принцип. Глюкоза образует с ортотолуидином в кислой среде при нагревании зелено-синее окрашивание, интенсивность которого пропорциональна концентрации глюкозы.

Оборудование: штатив, пробирки, ФЭК Реактивы:

1. Раствор трихлоруксусной (ТХУ) кислоты (30 г/л): 3 гТХУ доводят дистиллированной водой до 100 мл.

2. Стабилизированный раствор ортотолуидина в ледяной уксусной кислоте (в 94 мл ледяной уксусной кислоты растворяют 0,15 г тиомочевины и добавляют 6 мл ортотолуидина). Реактив стоек при хранении в холодильнике.

3. Стандартный раствор глюкозы: в мерную колбу на 100 мл вносят 50 мл раствора бензойной кислоты (2 г/л), прибавляют 500 мг высушенной до постоянной массы глюкозы; после полного растворения глюкозы доливают раствором бензойной кислоты (2 г/л) до метки. Концентрация глюкозы в приготовленном растворе равна 5 г/л (27,5 ммоль/л). Из стандартного раствора готовят рабочий раствор, содержащий 1 г/л (5,5 ммоль/л) глюкозы.

Ход определения . 1. Мочу разбавляют в 2 – 10 раз. В пробирку для центрифугирования наливают 0,1 мл мочи, добавляют 1,0 мл раствора ТХУ (30 г/л). 2. Хорошо перемешивают содержимое, центрифугируют 5 мин при 1500 об./мин. 3. В опытную пробирку приливают 0,5 мл надосадочной жидкости, добавляют 4,5 мл ортотолуидина, смесь нагревают точно 8 мин в хорошо кипящей водяной бане. 4. Пробирки необходимо покрывать фольгой и строго соблюдать временной и температурный режим. 5. Пробирку вынимают, охлаждают под водопроводной водой до комнатной температуры (18-22°С) и фотометрируют окрашенный раствор опытной пробы по отношению к холостой пробе (длина волны 590-650 нм с оранжевым или красным светофильтром) и толщине слоя 1 см не позже, чем через 20 мин после обработки. 6. Снимают показания абсорбции (экстинкции, или оптической плотности).

7.Раствор для контроля (достаточно одного раствора для целой серии определений). К 0,5 мл раствора ТХУ (30 г/л) добавляют 4,5 мл ортотолуидинового реактива. Смесь не центрифугируют, но обрабатывают так же, как и опытные пробы.

8. Стандартный раствор. К 0,1 мл стандартного раствора глюкозы (концентрация 1,0 г/л) добавляют 1,0 мл раствора ТХУ (30 г/л), перемешивают, отбирают 0,5 мл, добавляют 4,5 мл ортотолуидинового реактива и обрабатывают параллельно с опытной пробой.

9. Расчет ведут по формуле:

где Соп– концентрация глюкозы в пробе в ммоль/л; Сст– концентрация глюкозы в стандартном растворе в ммоль/л; Еоп– оптическая плотность опытной пробы; Ест– оптическая плотность стандартной пробы. Полученный результат умножают на степень разведения.

Пример: Еоп=0,6. Ест=0,3. Сст=5,5 ммоль/л. Соп=0,6:0,3×5,5= 11,0 ммоль/л.

Коэффициенты пересчета: % глюкозы в моче × 55,5 = ммоль/л; мг% глюкозы в моче × 0,0555 = ммоль/л.

Для определения глюкозы мочу собирают за 24 ч и измеряют ее объем. Определяют содержание глюкозы вышеописанным способом. Например, содержание глюкозы составляет 4,1 ммоль/л, суточный диурез 1,5 л., следовательно, в суточном количестве мочи концентрация глюкозы равна 4,1 ммоль/л × 1,5=6,15 ммоль/л.

Количественное определение глюкозы в моче глюкозооксидазным методом

Принцип. Глюкоза в присутствии фермента глюкозооксидазы окисляется кислородом воздуха с образованием перекиси водорода. Образующаяся перекись водорода под действием пероксидазы окисляет субстрат с образованием окрашенного продукта, определяемого фотометрически.

Оборудование: штатив, пробирки, пипетки, ФЭК

2. Реагент (смесь ферментов).

3. Стандарт глюкозы 5,55 ммоль/л.

4. Стандарт глюкозы 16,0 ммоль/л

1.Приготовление рабочего реагента: за несколько часов до проведения анализа (рекомендуется за сутки) содержимое флакона 2 растворяют буферным раствором из флакона 1 (до полного растворения реагента), количественно переносят во флакон 1 и перемешивают. Внимание! Рабочий реагент хранится в темном месте при температуре 2-8°С в течение месяца.

2. Мочу перед анализом разводят дистиллированной водой в соотношении 1:5 или 1:10, в зависимости от качественной реакции, результат умножают на коэффициент разведения.

3. Реакционную смесь перемешивают и инкубируют 15 мин при 37°С на водяной бане или в термостате при предварительно прогретом рабочем реагенте. Измеряют оптическую плотность опытной пробы Апр и стандарта Аст против холостой пробы. Стабильность окраски – 15 мин.

4. Концентрацию глюкозы в моче С в ммоль/л определяют по формуле:

где Сст – концентрация одного из стандартов глюкозы, которому соответствует оптическая плотность Аст

5. Для определения глюкозы в суточной моче мочу собирают за 24 ч и измеряют ее объем. 6. Определяют содержание глюкозы вышеописанным способом. Например, содержание глюкозы составляет 3,2 ммоль/л, суточный диурез 1,3 л, следовательно, в суточном количестве мочи концентрация глюкозы равна 3,2 ммоль/л-1,3 = 4,16 ммоль/л.

Примечание: в настоящее время для определения глюкозы в моче используют сертифицированные коммерческие наборы реагентов.

источник

Западно-Казахстанский Высший медицинский колледж. Сайт преподавателя МКЛИ Байбулатовой Светланы Андреевны

Химическое исследование мочи включает в себя определение белка, глюкозы, ацетона и ацетоуксусной кислоты, желчных пигментов и уробилиноидов и некоторых других ингредиентов.

Важным условием химического исследования мочи, особенно определения белка, является ее прозрачность.

Прежде чем приступить к исследованию, необходимо провести центрифугирование мочи: 10,0 мл. мочи вносят в центрифужную пробирку. Пробирку ставят в центрифугу. Включают прибор на 10 минут соблюдая все необходимые правила безопасной работы с центрифугой. Необходимо помнить, что центрифуга включается тогда, когда в приборе находится только чётное количество центрифужных пробирок.

В моче здорового человека белок не выявляется, поскольку те методы, которые используются обычно в клинике (проба с сульфосалициловой кислотой и биуретовая реакция) не позволяют обнаружить небольшие количества низкомолекулярных сывороточных протеинов (около 10–50 мг в сутки), которые и в норме проникают через неповрежденный почечный барьер.

Для обнаружения белка в моче (протеинурии) используют качественные и количественные методы, большинство из которых основаны на его свертывании или осаждении специальными реактивами.

Проба с сульфосалициловой кислотой.

В 2 пробирки наливают по 3–4 мл профильтрованной мочи.

В опытную пробирку добавляют 6–8 капель 20% раствора сульфосалициловой кислоты.

На темном фоне в проходящем свете сравнивают обе пробирки.

При наличии белка в зависимости от его количества образуется помутнение или выпадают хлопья свернувшегося белка (рис. 1, а).

Результаты обозначают следующим образом: реакция слабоположительная (+), положительная (++), резко положительная (+++).

Проба с азотной кислотой (кольцевая проба Геллера).

В пробирку наливают 1–2 мл 30% азотной кислоты или реактива Ларионовой (1% раствор азотной кислоты в насыщенном растворе натрия хлорида) и осторожно по стенке наслаивают сверху такое же количество мочи.

При наличии белка через 2–3 мин (или раньше) на границе двух сред (кислоты и мочи) образуется тонкое белое кольцо свернувшегося белка (рис. 1, б).

Проба становится положительной даже при минимальной концентрации белка в моче — 0,033 г/л (0,033 о /_оо).

Следует, правда, помнить, что беловатое или красновато-фиолетовое кольцо при проведении этой пробы, располагающееся несколько выше границы между двумя жидкостями, может образовываться при наличии в моче большого количества уратов.

Однако уратное кольцо в отличие от белкового при легком нагревании растворяется.