Методика определения глюкозы в моче

В моче здорового человека глюкоза содержится в очень низкой концентрации (0,06 — 0,083 ммоль/л). Поэтому, а также из-за низкой чувствительности методов, она не выявляется при исследовании мочи в клинико-диагностических лабораториях. Появление глюкозы в моче называется глюкозурией. Глюкозурия обычно сопровождается полиурией при повышении осмолярности мочи, поскольку глюкоза — осмотически активное вещество. Между степенью глюкозурии и полиурии обычно наблюдается параллелизм.

Глюкоза является пороговым веществом, то есть для нее имеется «почечный порог выведения» — та концентрация вещества в крови и «первичной» моче, при которой оно уже не может быть полностью реабсорбировано в канальцах и появляется в конечной моче. Почечный порог определяется ферментной системой почечного эпителия и, следовательно, в значительной степени индивидуален. По данным разных авторов почечный порог для глюкозы у взрослого человека с нормально функционирующими почками составляет 8,8 — 10 ммоль/л и снижается с возрастом (из-за снижения реабсорбции). У ребенка почечный порог выше (10,45 — 12,65 ммоль/л).

Как для любого порогового вещества, появление глюкозы в моче зависит от трех факторов: от концентрации глюкозы в крови, от процесса фильтрации ее в клубочках (гломерулярный клиренс) и от реабсорбции глюкозы в канальцах нефрона.

В норме объем клубочковой фильтрации составляет 130 мл/мин. Реабсорбция глюкозы почечным эпителием за 1 мин колеблется от 200 до 350 мг. Если при таком же клубочковом фильтрате концентрация глюкозы в крови превысит 10 ммоль/л, то в канальцы поступит глюкозы больше и часть ее не сможет реабсорбироваться и выделится с мочой.

Снижение объема клубочковой фильтрации (например до 50 мл/мин) не будет сопровождаться глюкозурией даже при 15 ммоль/л (300 мг/%) глюкозы в крови, так как в канальцы поступает количество глюкозы, не превышающее их резорбционной способности. Поэтому при некоторых хронических заболеваниях почек порог глюкозы повышается. В случае нефропатии, сопровождающейся нарушением резорбции глюкозы (ренальный диабет) возможна глюкозурия и при нормальном или пониженном уровне глюкозы в крови.

1. Сахарный диабет — наиболее частая причина глюкозурии. При этом заболевании наблюдается абсолютная или относительная недостаточность инсулина — гормона, который определяет потребление глюкозы тканями (гликолиз) и образование гликогена из глюкозы в печени. Эти процессы поддерживают нормальный уровень глюкозы в крови. При дефиците инсулина гликолиз и синтез гликогена снижаются, что приводит к повышению глюкозы в крови и появлению ее в моче. Количество глюкозы в моче может колебаться в больших пределах от следов до 1,2%. Следует отметить, что глюкозурия у больных с инсулярной недостаточностью при нормально функционирующих почках наблюдается при гораздо меньших концентрациях глюкозы в крови, чем пороговая. Дело заключается в том, что почечный порог для глюкозы при диабете снижается. Процесс реабсорбции глюкозы в почечных канальцах не является простой диффузией: глюкоза переносится через почечные мембраны активно и первым этапом этого переноса является ее фосфорилирование, то есть превращение в глюкозо-6-фосфат. Данная реакция контролируется гексокиназой, активируемой инсулином. Поэтому при диабете снижается интенсивность реабсорбции глюкозы в почках и она появляется в моче при концентрации в крови, значительно меньшей, нежели соответствующей почечному порогу. Правда, при оценке этого явления следует помнить, что существуют здоровые люди с врожденным снижением почечного порога для глюкозы, у которых глюкозурия может возникнуть при приеме больших количеств углеводной пищи. Не следует также забывать, что встречаются больные сахарным диабетом с высоким уровнем глюкозы в крови, не сопровождающимся глюкозурией. Это объясняется тем, что на заключительной стадии сахарного диабета, когда к основному процессу присоединяются поражения почек, характеризующиеся в числе других проявлений и снижением уровня клубочковой фильтрации, уровень глюкозурии может снизиться вплоть до полного отсутствия глюкозы в моче.
2. Глюкозурия, наблюдающаяся при остром панкреатите, носит преходящий характер и исчезает при стихании воспалительного процесса.
3. Глюкоза появляется в моче при продолжительном голодании и прекращается через несколько дней после возобновления приема пищи.
4. У людей в преклонном и старческом возрасте возможно снижение функции поджелудочной железы, сопровождающееся глюкозурией.
5. Алиментарная глюкозурия, появляющаяся через 30 — 60 мин после приема пищи, богатой углеводами, исчезает через 3 — 5 часов. Наблюдается чаще у детей грудного возраста и при беременности.
6. Глюкозурия может наблюдаться после повышенной физической нагрузки.
7. Глюкозурия нервного происхождения возникает вследствие усиленного гликогенолиза в печени и гипергликемии. Она наблюдается при черепно-мозговых травмах, опухолях мозга, менингитах, токсикозах, энцефалитах, судорогах, внутричерепных кровоизлияниях, наркозе.
8. Эмоциональная глюкозурия — при плаче, страхе, истерике и т. д.
9. Токсическая глюкозурия возможна при отравлениях морфином, стрихнином, хлороформом, фосфором и др.
10. Глюкозурия после приема некоторых лекарств (диуретин, кофеин, фенамин, кортикостероиды).
11. Глюкоза может появляться в моче при лихорадочных состояниях (лихорадочная глюкозурия).
12. Глюкозурия при сильном психическом возбуждении.
13. Эндокринная глюкозурия возникает в результате нарушения секреции адреналина, тироксина, глюкокортикоидных гормонов, при акромегалии, синдроме Иценко-Кушинга, феохромоцитоме, гипернефроме, передозировке АКТГ, препаратов кортизола или их продолжительном приеме.
14. Почечная (ренальная) глюкозурия развивается в результате нарушения реабсорбции глюкозы в канальцах. Различают первичную и вторичную ренальную глюкозурию. Первичная глюкозурия, так называемый ренальный диабет — это аномалия механизма реабсорбции глюкозы в проксимальных канальцах почек. Почечный порог глюкозы снижается до 6,32 — 0,82 ммоль/л (125 — 25 мг/%) без нарушения промежуточного обмена углеводов. Наблюдается главным образом у детей. Для ренального диабета свойственна постоянная глюкозурия, нормальный или несколько сниженный уровень глюкозы крови, отсутствие патологических отклонений при сахарной нагрузке и других симптомов диабета. Вторичная ренальная глюкозурия может встречаться при различных органических поражениях почек (хронический нефрит, нефроз, острая почечная недостаточность, гликогеновая болезнь и др.).

Оценка глюкозурии должна производиться с учетом принятых с пищей углеводов и количества суточной мочи.

• А. Я. Любина, Л. П. Ильичева и соавт. «Клинические лабораторные исследования», М., «Медицина», 1984 г.
• Фролов В. А., Дроздова Г. А., Казанская Т. А., Билибин Д. П., Демуров Е. А. Патологическая физиология. — М.: ОАО «Издательство «Экономика», 1999. — 616 с.
• Руководство к практическим занятиям по клинической лабораторной диагностике под редакцией Базарновой М. А., Морозовой В. Т. — Киев, «Вища школа», 1988 г.
• Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под редакцией Кост Е. А. — Москва, «Медицина», 1975 г.
• Морозова В. Т., Миронова И. И., Марцишевская Р. Л. — Исследование мочи — Москва, РМАПО, 1996 г.

Определение концентрации мочевины в крови широко используется в диагностике, применяется для оценки тяжести патологического процесса, для наблюдения за течением заболевания и оценки эффективности проводимого лечения.

Раздел: Клиническая биохимия

В нормальной моче содержится минимальное количество кетоновых тел (за сутки выделяется 20 — 54 мг), которое не обнаруживается обычными качественными пробами. При выделении с мочой большого количества кетоновых тел качественные реакции становятся положительными – это явление патологическое и называется кетонурией.

Раздел: Анализ мочи

Определение концентрации мочевины в моче проводится значительно реже, чем определение уровня мочевины в крови и используется обычно при при обнаружении повышенного уровня мочевины в крови и решении вопроса о состоянии выделительной функции почек. При этом определяют суточную экскрецию мочевины с мочой. Повышенное содержание мочевины крови при снижении суточной экскреции с мочой чаще свидетельствует о нарушении азотовыделительной функции почек.

Раздел: Клиническая биохимия

В настоящее время в моче обнаружено более 150 различных химических веществ. Одни из них (например, мочевина) присутствуют в нормальной моче в достаточном количестве и определяются обычными биохимическими методами. При патологии может наблюдаться как увеличение, так и снижение уровня этих веществ в моче.

Раздел: Анализ мочи

Запах особого диагностического значения не имеет. Свежевыпущенная нормальная моча без запаха.

Раздел: Анализ мочи

источник

Для определения глюкозы в моче рабочее место должно быть оснащено следующими элементами:

1. Набор пипеток и пробирок.
2. Воронки, колбы, фарфоровая ступка.
3. Фильтровальная бумага.
4. Спиртовка или газовая горелка.
5. Сегнетовая соль.
6. Сернокислая медь.
7. Едкий натр.
8. Лимоннокислый натрий.
9. Углекислый натрий.
10. Азотнокислый висмут.
11. Дистиллированная вода.

В основу методик, используемых для качественного определения глюкозы в моче, положены ее восстанавливающие свойства.

В результате взаимодействия глюкозы с реактивом образуется окрашенное соединение, выпадающее в осадок. В реакциях Фелинга, Гайнеса-Акимова, Бенедикта сернокислая медь последовательно восстанавливается в закись меди — кирпично-красного цвета и в гидрат закиси меди — желтого цвета. В реакции Нилендера азотнокислый висмут восстанавливается в металлический висмут — черного цвета. Перед качественным определением глюкозы в моче выполняют следующую работу:
1. Мутную мочу фильтруют.
2. При большом содержании в моче белка (свыше 1%о) его удаляют. Для этого подкисляют мочу до слабокислой реакции, нагревают до кипения, затем охлаждают и фильтруют. Фильтрат должен быть прозрачным и при прибавлении к нему 20% раствора сульфосалициловой кислоты не давать помутнения.

Примечание. В редких случаях при наличии в моче большого количества восстанавливающих веществ (мочевая кислота, индикан, креатиннн, желчные пигменты и др.) их удаляют следующим образом. В пробирку наливают 8 мл мочи, прибавляют 1 мл 96° спирта и небольшое количество животного угля. Восстанавливающие вещества адсорбируются углем, оседающим на дно пробирки; глюкоза не адсорбируется, она остается в растворе.
При проведении качественного определения глюкозы с обработанной таким образом мочой в реакцию вступает только глюкоза.

Для качественного определения глюкозы в моче применяют следующие реакции:

1. реакцию Фелинга;
2. реакцию Гайнеса-Акимова (модифицированный капельный способ);
3. реакцию Бенедикта;
4. реакцию Нилендера;
5. капельный способ качественного определения глюкозы в моче.

Рассмотрим данные реакции более подробно.

Для этой реакции готовят два реактива — № 1 и 2.

Реактив Фелинга № 1 (7% раствор сернокислой меди). 7 г сернокислой меди растворяют в дистиллированной воде, доводя объем растворителя до 100 мл. Реактив бледно-голубого цвета.

Реактив № 2. 8 г едкого натра и 35 г сегнетовой соли растворяют в воде, доведя объем растворителя до 100 мл. Реактив бесцветен.

Рабочий раствор реактива Фелинга готовят на 1-2 дня путем смешивания равных объемов реактива № 1 и 2.

Постановка реакции. 5-6 мл рабочего раствора реактива Фелинга помещают в химическую пробирку и смешивают с 5-6 мл профильтрованной мочи. Смесь приобретает синий цвет. Верхнюю часть пробирки с мочой нагревают над пламенем горелки и кипятят в течение 1-2 минут. При наличии глюкозы в нагретой части мочи образуется кирпично-красное окрашивание. При отсутствии глюкозы синий цвет не изменяется.

Для реакции готовят реактив Гайнеса (по прописи Акимова). Для этого 13,3 г химически чистой кристаллической сернокислой меди растворяют в 400 мл дистиллированной воды, в другой посуде растворяют 50 г едкого натра в 400 мл дистиллированной воды, в третьей — разводят 15 г глицерина в 200 мл дистиллированной воды. Смешивают первый и второй растворы и к этой смеси при постоянном помешивании прибавляют небольшими порциями третий реактив. Реактив Гайнеса синего цвета. Годен в течение длительного срока.

Постановка реакции. В пробирку помещают 8 капель реактива Гайнеса и 2 капли мочи. Пробирку нагревают над пламенем до закипания мочи или прогревают в кипящей водяной бане в течение 1-2 минут. При наличии глюкозы на дне пробирки образуется зеленоватый, коричнево-зеленоватый или красноватый осадок, а при ее отсутствии синий цвет реактива Гайнеса не изменяется.

В реакции применяют реактив Бенедикта, который готовят следующим образом. В мерную колбу помещают 86,5 г лимоннокислого натрия и 100 г кристаллического углекислого натрия и растворяют при нагревании примерно в 350 мл дистиллированной воды. В другой посуде растворяют 8,65 г сернокислой меди в 50 мл дистиллированной воды. Оба раствора смешивают в мерной 500-миллилитровой колбе и доливают дистиллированной водой до метки. Реактив имеет синий цвет, достаточно стоек.

Постановка реакции. В пробирку наливают 5 мл реактива Бенедикта, прибавляют 8 капель мочи и кипятят над пламенем горелки 2 минуты или в кипящей бане 5 минут. При наличии глюкозы образуется зеленоватый желтый или красный осадок. При отсутствии глюкозы синий цвет реактива не изменяется. Пробу Бенедикта считают наиболее чувствительной и самой лучшей из проб, основанных на восстанавливающих свойствах глюкозы, ее отличает большая специфичность.

Для постановки реакции готовят реактив Нилендера. Для этого 2 г азотнокислого висмута и 4 г сегнетовой соли растирают в фарфоровои ступке, а затем растворяют в 1 мл 10% раствора едкого натра, который приливают небольшими порциями в ступку.

После этого реактив фильтруют в склянку из темного стекла и хранят на холоде, так как он нестоек. Годность реактива периодически проверяют. С этой целью 3 мл реактива разводят в 10 мл дистиллированной воды и 4 мл разведенного реактива нагревают в пробирке до кипения. Если жидкость не буреет, значит реактив годен для употребления.

Постановка реакции. В пробирку помещают 6 мл мочи, предварительно освобожденной от белка, прибавляют 3 мл реактива и перемешивают. Затем верхнюю часть пробирки нагревают и кипятят в течение 2-3 минут, пробе дают постоять в штативе в течение 10 минут, после чего учитывают результаты. При наличии глюкозы в моче образуется темно-бурый или черный осадок, а при ее отсутствии цвет смеси не изменяется.

В последнее время нашел применение сухой способ определения глюкозы в моче. Для этой реакции готовят следующий реактив: 1 г мелкорастертого медного купороса и 10 г углекислого натрия тщательно перемешивают и хранят в темной склянке с притертой пробкой при комнатной температуре. Щепотку порошкообразного реактива помещают на предметное стекло и пипеткой добавляют 2-3 капли исследуемой мочи. Затем смесь подогревают над пламенем горелки до закипания. Голубой цвет указывает на отсутствие глюкозы, зеленый — на содержание глюкозы около 0,1 %, желто-зеленый — на присутствие около 0,5 % глюкозы, желтый — около 1 %, коричневый — около 2% и кирпично-красный — около 3-4% глюкозы и более.
В последнем случае анализ мочи на глюкозу повторяют после разведения мочи в 2 раза.

Содержание глюкозы в моче можно установить с помощью индикаторной бумаги «глюкофан». В специальной инструкции, прилагаемой к каждой партии бумаги, подробно изложена техника определения. Кроме того, в настоящее время применяют индикаторную бумагу отечественного производства «глюкотест».

источник

1. Определение глюкозы в моче. Моча здорового человека содержит мини­мальное количество глюкозы (0,16—0,83 ммоль/л), которое нельзя обнару­жить обычными качественными пробами. Появление сахара в моче (глюкозу-рия) может быть физиологическим. При нормально функционирующих почках глюкозурия наблюдается только в тех случаях, когда увеличивается концентрация сахара в крови, т. е. появляется гипергликемия. Так назы­ваемый почечный порог глюкозы —концентрация сахара в крови, выше которой отмечается глюкозурия, обычно не превышает 9,9 ммоль/л (1,8 г/л).

Физиологическую глюкозурию можно наблюдать при введении с пищей большого количества углеводов (алиментарная), после эмоционального на­пряжения (эмоциональная), приема некоторых лекарств (кофеин, стероидные гормоны). Реже наблюдают почечную (ренальная) глюкозурию, обуславли­ваемую нарушением реабсорбции глюкозы в канальцах, когда глюкозурия по­является при нормальной концентрации сахара в крови. Как первичное забо­левание ренальную глюкозурию встречают в виде так называемого р е н а л ь -ного диабета. Вторичные ренальные глюкозурии могут встречаться при хронических нефритах, нефрозах, амилоидозе.

Патологическая глюкозурил чаще всего бывает диабетической (сахарный диабет), реже тиреогенной (тиреотоксикоз), гипофизарной (синдром Ицен-ко — Кушинга), печеночной (цирроз печени).

Для правильной оценки глюкозурии (особенно у больных диабетом) не­обходимо исследовать мочу, собранную за сутки, и вычислить суточную поте­рю сахара с мочой.

Большинство качественных проб, применямых для определения глюкозы в моче, основано на использовании редуцирующей способности глюкозы.

Проси Гайнеса. Основана на свойстве глюкозы восстанавливать гидрат окиси меди в основной среде в гидрат закиси меди (желтый цвет) или закись меди (красный цвет).

Проси Huлaндера. Основана на восстановлении глюкозой нитрата висму­та в металлический висмут. В присутствии сахара появляется окраска от ко­ричневой до черной.

При производстве редукционных проб моча не должна содержать белка. Если в моче есть белок, ею необходимо удалить. Посторонние восстанавли­вающие вещества (антипирин, бензойная кислота и др.). дающие ложную ре­акцию, могут быть удалены, если прибавить к 9 мл мочи 1 мл 95% спирта и небольшое количество животного угля, так как упомянутые посторонние ве­щества адсорбируются углем, а глюкоза не адсорбируется.

Наряду с редукционными пробами последнее время широко применяется глюкозооксидазная проба. Это энзимная проба, отличающаяся значительной специфичностью

и простой техникой. Глюкозооксидаза (нотатин) представляет собой ..—d-глюкозодегидрогеназу. На первом этапе пробы из глюкозы под воздействием фермента выделяется перекись водорода. На втором этапе устанавливается наличие перекиси водорода с помощью редокс-индикатора, подобно механизму бензидиновой пробы. Глюкозопероксидазная проба поло­жена в основу метода индикаторных бумажек. В мочу погружают бумажку, пропитанную нотатином, пероксидазой и каким-нибудь производным бен-зидина. Через 30 с при наличии глюкозы появляется синяя окраска.

Количественное определение глюкозы в моче. Поляри­метрическим методом по углу вращения поляризованного луча (глюкоза вра­щает поляризованный свет вправо) можно определить концентрацию глю­козы в моче. Аппараты, при помощи которых определяют угол вращения поляризованного света, называются поляриметрами. Поле зрения поляриме­тра разделено на две или три части. При отсутствии оптически активной жид­кости в трубке поляриметра анализатор не задерживает света и все части оди­наково освещены. При наличии в трубке оптически активной жидкости плоскость поляризованного света отклоняется, и часть зрительного поля за­темнена. Диском, к которому прикреплен анализатор, поворачивают его до тех пор, пока все зрительное поле не становится равномерно освещенным. Угол вращения анализатора отражает угол вращения плоскости поляризации, который пропорционален проценту содержания глюкозы в моче. Величину угла отмечают по шкале. Этот способ позволяет получить довольно точные данные.

Колориметрический метод Альтгаузена основан на цветной реакции, по­лучаемой при нагревании раствора глюкозы с раствором едкого натра. К 4 мл мочи добавляют 1 мл 10% раствора едкого натра или едкого кали и ки­пятят 1 мин. Через 10 мин цвет жидкости в пробирке сравнивают с рядом цветных стандартов, по которому определяют результат. Колориметрию можно производить не только визуально, но и при помощи фотометра.

Определение кетоновых (ацетоновых) тел. Содержание в моче кетоновых тел называется кетонурией. К кетоновым телам относятся три соедине­ния: ацетон, ацетоуксусная кислота и р-оксимасляная кислота. Большая часть жиров и некоторые белки способствуют образованию кетоновых тел. Кето­новые тела быстро окисляются в тканях до СО2 и воды, поэтому с мочой за сутки выводится около 20—50 мг кетоновых тел.

Кетонурия может быть следствием повышенного образования кетоновых тел и следствием нарушения их распада. Чаще всего кетонурию приходится наблюдать при тяжелом сахарном диабете, но она встречается и при углевод­ном голодании. Кетонурия на почве голода и истощения возможна при тя­желых токсикозах, продолжительных желудочно-кишечных расстройствах, ди­зентерии, а также может появляться в послеоперационном периоде, при сильном раздраженииЦНС.

В норме с мочой выделяются минимальные количества кетоновых тел, которые не обнаруживаются сущее твующими качественными пробами. Каче­ственные реакции на кетоновые тела основаны па появлении цветной реакции при их взаимодействии с нитропруссидом натрия в основной среде. Наиболь­шее распространение получила проба Ланге, которая заключается в том, что на исследуемую мочу после добавления к пей нитропруссида и уксусной кис­лоты наслаивают аммиак; при положительной пробе па границе жидкостей образуется фиолетовое кольцо.

2. Отек легких:

— строфантин 0.05% — 0,25 мл до 1 мл

2. Диуретики: Диуретические и дегидратационные средства

· Фуросемид ( 20-60 мг до 160 мг)

Этакриновая кислота ( 50-100 мг в 50 – 100 мл 5% р-ра глюкозы)

3. Альфаадреноблокаторы: тропафен. Блокаторы альфа- адренорецепторов

4. Наркотические анальгетики:

— строфантин 0.05% — 0,25 мл до 1 мл

2. Альфаадреноблокаторы: тропафен.

3. ГК: Глюкокортикостероиды за 2-3 часа

преднизолон (60- 150 мг в 100 – 200 мл физ р-ра

studopedia.org — Студопедия.Орг — 2014-2019 год. Студопедия не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования (0.002 с) .

источник

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫ В МОЧЕ, ПОЛУЧЕННЫХ РАЗНЫМИ МЕТОДАМИ

Смирнов Илья Алексеевич

студент 2 курса отделения Лабораторной диагностики ГБОУ СПО «Медицинское училище № 4 ДЗМ», РФ, г. Москва

Меклер Наталия Николаевна

научный руководитель, канд. биол. наук, доцент, преподаватель ПМ01 ГБОУ СПО «Медицинское училище № 4 ДЗМ», РФ, г. Москва

Исследование мочи часто позволяет выявить как заболевания мочевых путей, так и протекающие без первичного поражения почек, заболевания внутренних органов, метаболические расстройства.

Анализируя состав и свойства мочи в динамике, можно получить информацию о состоянии различных систем органов пациента, оценить степень тяжести заболевания, а также сделать заключение об эффективности проводимого лечения.

Одним из важнейших показателей анализа мочи, который исследуется в условиях лаборатории, является глюкоза.

Стратегия получения этой информации менялась в ходе развития медицины. В 1776 году Мэттью Добсон определил, что моча диабетиков содержит сахар. В 1815 году Джин Биот предложил поляриметрический способ определения содержания оптически активных веществ в жидкости, что позволило измерять содержание глюкозы в растворах. В 1908 году американский химик Стенли Бенедикт предложил метод, обнаружения в моче глюкозы, основанный на ее способности восстанавливать окись меди в щелочной среде сопровождающаяся появлением красного, синего или зеленовато-желтого осадка. В 1911 году американский химик Хейнц Гайнес, основываясь на способности глюкозы восстанавливать в щелочной среде при нагревании гидрат окиси меди (синего цвета) в гидрат закиси меди (желтого цвета) и закись меди (красного цвета), предложил способ определения глюкозы в моче, названный в его честь пробой Гайнеса. В 1959 г советским ученым А.Я. Альтгаузеном, предложен метод количественного определения сахара в моче, который основан на взаимодействии глюкозы со щелочью при нагревании с образованием окрашенных соединений. В 1972 в Советском Союзе был унифицирован метод, основанный на использовании свойства раствора глюкозы вращать плоскость поляризованного луча вправо, угол вращения которого зависит от концентрации вещества [3].

Указанные физико-химические исследования мочи представляют собой достаточно длительный и, в целом, сложный процесс, требующий множества реактивов, лабораторной посуды и другого оборудования. Сегодня исследование мочи на содержание глюкозы упростилось, стало легко выполнимым, благодаря появлению тест-полосок для исследования мочи, и более объективным благодаря применению анализаторов мочи, которые заменили процедуру визуальной оценки тест-полосок. Скрининговое исследование с помощью тест-полосок на анализаторе позволяет быстро выявить патологические образцы мочи, требующие последующего количественного определения концентрации белка, глюкозы и обязательного тщательного микроскопического анализа. Такой порядок работы сокращает общее время исследования и повышает ее качество. Простота работы на приборе и его обслуживания, в сочетании с доступностью расходных материалов и технической поддержкой производителя делают данный прибор весьма привлекательным [2].

Цель работы: сопоставимость результатов определения концентрации глюкозы в моче методом «сухой химии» (тест-полоски Uriscan10) визуально и с помощью анализатора DocUReader (Венгрия).

1. Проанализировать сведения об истории исследования изучаемого показателя в моче;

2. Освоить алгоритм проведения исследования концентрации глюкозы в моче с помощью «сухой химии» и на анализаторе DocUReader;

3. Провести исследования концентрации глюкозы в моче заявленными способами;

4. Сравнить результаты, полученные при проведении исследований.

Материалы и методы

Изучен показатель состава мочи — глюкоза в пяти пробах, отобранных случайным образом, поступивших на исследование в клинико-диагностическую лабораторию ГБУЗ «ГП № 67» 28 апреля 2015 года. Анализ проводили в течение 1-го часа после поступления биологического материала в лабораторию. Сначала исследования проводили визуально, а затем на анализаторе DocUReader.

Определение глюкозы основано на специфической глюкозооксидазной реакции. D-глюкоза при участии фермента глюкозоксидазы превращается в глюконовую кислоту с образованием перекиси водорода, которая в присутствии пероксидазы окисляет индикатор с образованием окрашенного соединения.

Анализ мочи с применением диагностических тест-полосок визуально.

Исследования проводились в соответствии с положениями инструкции к тест-полоскам. Каждую пробу мочи тщательно перемешивали перед анализом. Диагностическую полоску Uriscan10 погружали в мочу. Избыток мочи удаляли прикосновением к мягкой бумаге, далее тест-полоску соотносили с оценочной шкалой и фиксировали результат.

Анализ мочи с применением диагностических тест-полосок на анализаторе DocUReader

Исследования проводились в соответствии с положениями инструкции к анализатору и тест-полоскам. Каждую пробу мочи тщательно перемешивали перед анализом. Диагностическую полоску Uriscan10 погружали в мочу. Избыток мочи удаляли прикосновением к мягкой бумаге, далее диагностическую полоску помещали на направляющую панель анализатора DocUReader. Принцип действия прибора: интенсивность света, отраженного от поверхности полоски, регистрируется специальными датчиками прибора. В отраженном свете определяется доля трех основных цветовых составляющих, которая, наряду с компенсационной цветовой составляющей, используется для расчета изменения коэффициента отражения (КО в %). Последний показатель преобразуется в соответствующий интервал (в условных единицах +,-), который и выводится на чек [2; 3].

Интервалы диагностических полосок Uriscan10 и соответствующие им концентрационные диапазоны определяемых показателей представлены в таблице 1.

Интервалы тест-полосок Uriscan10 (в условных единицах +,-) и соответствующие им концентрационные диапазоны, определяемые в моче

источник

· Автоматизированные методы определения глюкозы. Уникальную специфичность глюкозооксидазной реакции использовали для создания анализатора ЭКСАН-Г и ЭКСАН-ГМ. Принцип метода: при иммобилизации глюкозооксидазы на одной стороне мембраны с небольшим размером пор и ее размещении поверх рабочего платинового электрода система начинает функционировать как биосенсор глюкозы: диффузия глюкозы через наружную мембрану к слою фермента приводит к образованию потока перекиси водорода к поверхности электрода, ее количество оценивается по увеличению тока электрода. Скорость нарастания тока прямо пропорциональна концентрации глюкозы.

· Определение глюкозы в крови с использованием портативных глюкометров. В настоящее время можно насчитать более 25 разных моделей глюкометров, которые широко используются больными сахарным диабетом для контроля глюкозы в крови. Большая часть глюкометров основана на технологии«сухой химии» и отражательной фотометрии. В данных анализаторах используются тест-полоски, содержащие глюкозооксидазу или гексокиназу. Каплю цельной крови наносят на полоску, которая содержит все реактивы, необходимые для реакции. Сам анализатор представляет собой миниатюрный фотометр, определяющий величину отраженного светового потока от реактивной зоны полоски, обусловленную изменением ее окраски в ходе ферментативной реакции. Вне зависимости от конструктивных особенностей анализатора, ход определения глюкозы с его помощью является несложной процедурой и состоит в получении капли крови пациента путем укола в палец, нанесением ее на полоску и размещением полоски в глюкометре. Через 20-30 с на экране указывается концентрация глюкозы. Большинство глюкометров способны определять концентрацию глюкозы в крови в пределах 1,7-33,3 ммоль/л. Широко популярными во всем мире в настоящее являются глюкометры One Touch и тест-полоски к ним производства компании Life Scan (США), которые удачно сочетают в себе аналитическую точность количественного ферментативного метода со скоростью и простотой «сухой химии».

· Применение тест-полосок.Для экспресс-выявления глюкозы в моче и ее полуколичественного определения используются тест-полоски: «Глюкотест» фирмы «Рош-Диагностика»; «Глюкофан» чешской фирмы «Лахема»; «Уритест-1», «Уритест-2» фирмы «Кормэй» и др. Для полуколичественного визуального определения глюкозы в капиллярной крови (1-14 ммоль/л) используют диагностические полоски: «ТриФАН», «Пентафан», «ГексаФАН», «Нона-ФАН», «МилиФАН», «Гемо-Глюкотест» и др. В основе определения лежит методология «сухой химии»: реагентные зоны тест-полосок содержат сухие реактивы (ферменты и/или неферменты), которые воздействуют на определяемое вещество с изменением окраски индикаторной зоны. Из использующих методологию «сухой химии» настольных, малогабаритных приборов известны анализаторы: “Reflotron Y”, “Clinitek”, «Мидитрон» и др., которые позволяют выполнить исследование как отдельных тестов (глюкозы, АЛТ, АСТ, ЩФ, α-амилазы, мочевины и др.), так и профилей: кардиального, печеночного и других.

3.Качественные реакции на глюкозу, фруктозу, пентозы и дисахариды в моче.

3.1. Реакция Троммера. Принцип метода:реакция основана на способности глюкозы (сахара) восстанавливать гидрат меди Cu(OH)₂ в гидрат закиси CuOH и закись меди Cu₂O – желто-красный осадок в щелочной среде при нагревании. Гидрат меди образуется при смешивании раствора CuSO₄ с раствором NaOH:CuSO₄ + 2 NaOH → Cu(OH)₂ + Na₂SO₄
затем C₆H₁₂O₆ + 2 Cu(OH)₂ → C₆H₁₂O₇ + Cu₂O + 2H₂O
Реакция Троммера лежит в основе пробы Фелинга и пробы Гайнеса-Акимова, которые используются для открытия глюкозы в моче.

3.2. Реакция Ниляндера. Принцип метода: реакция основана на способности сахара (глюкозы) восстанавливать азотнокислый висмут в металлический висмут, при этом образуется темно-бурый или черный осадок: Bi(OH₎₂N_O3 + NaOH → Bi(OH₎₃ + NaNO₃ затем 3C₆H₁₂O₆ + 2 Bi(OH)₃ →3 C₆H₁₂O₇ + 2Bi + 3H₂O. Реакция проводится при 100 о С. Реакция Ниландера используется для открытия глюкозы в моче.

3.3. Экспресс-метод с применением готового набора реактивов.

3.4. Экспресс-тесты с использованием диагностических полосок. Диагностическое значение определения глюкозы в моче. В моче здорового человека содержится минимальное количество глюкозы, которое не обнаруживается качественными пробами. Глюкозурия – это выделение глюкозы с мочой. Появление глюкозы в моче зависит от ее концентрации в крови, от скорости клубочковой фильтрации и от состояния реабсорбции глюкозы в тубулярной части нефрона. Глюкоза появляется в моче, когда ее концентрация в крови превышаетпочечный порог, т.е. когда в крови ее больше8,88 — 9,99 ммоль/л (для взрослых). Глюкозурия может быть физиологической, обусловленной употреблением большого количества углеводов с пищей. Глюкозурия наблюдается после эмоциональных возбуждений, стрессовых состояний, после обширных хирургических вмешательств. Глюкозурия может быть инсулярной и экстраинсулярной. Инсулярная глюкозурия наблюдается при сахарном диабете и заболеваниях поджелудочной железы. Экстраинсулярная глюкозурия наблюдается при гиперпродукции АКТГ, глюкокортикоидов, адреналина, травмах ЦНС, судорогах и др. Глюкозурии почечной природы, связанные с нарушением реабсорбции глюкозы в проксимальном канальце могут носить наследственный характер или являться следствием хронических заболеваний почек, ОПН и др.

3.5. Проба Селиванова на фруктозу. Принцип метода: метод основан на превращении фруктозы при нагревании и в присутствии соляной кислоты в гидроксиметилфурол, который конденсируется с резорцином, образуя соединение красного цвета. Оценку пробы проводят в момент закипания, при более длительном нагревании положительную реакцию может давать и глюкоза. Проба Селиванива используется для обнаружения фруктозы в моче при наследственных нарушениях обмена фруктозы.

3.6. Проба Биаля на пентозы. Принцип метода: метод основан на образовании яркой желто-зеленой окраски при взаимодействии пентоз с орциновым реактивом при нагревании. Проба Биаля используется для открытия пентоз в моче. Пентозурия возникает из-за недостатка белка, участвующего в транспорте пентоз и способствующего их реабсорбции в канальцах почек.

3.7. Обнаружение лактозы и мальтозы в моче. Проба Велька. Принцип метода:лактоза и мальтоза в щелочной среде образуют при нагревании соединения красно-коричневого цвета. В работе используют концентрированный раствор аммиака и 20% раствор KOH. Лактоза (молочный сахар) и мальтоза появляются в моче при нарушении переваривания этих дисахаридов под действием кишечных ферментов: лактазы и мальтазы, соответственно (как правило, недостаточность пищеварительных ферментов носит врожденный характер).

источник

В норме у всех здоровых людей в обычных общих анализах мочи могут обнаружить лишь следы глюкозы. Стандартное ее содержание не превышает 0,7 ммоль/литр или 2,8 ммоль/сутки.

Если в результате исследования было обнаружено, что у вас повышена глюкоза в моче, то вначале следует просто пересдать анализ. Если вы повторно получите плохой результат, то следует начинать искать причины возникновения проблем.

Нередко появление сахара сопровождает острый панкреатит. Но он может появиться и вследствие развития других болезней. Например, глюкозурию центрального генеза может вызвать менингит, геморрагический инсульт, энцефалит, черепно-мозговая травма. Лихорадка также является причиной увеличения концентрации сахара в моче. Отдельно выделяют и эндокринную глюкозурию. Она может развиться в результате скачков уровня адреналина, увеличении тироксина, соматотропина, глюкокортикоидных гормонов.

Ренальная глюкозурия развивается из-за проблем с мочевыделительной системой. Это может быть последствием патологии клубочков и канальцев почек. Указанные поражения часто развиваются на фоне инфекционных заболеваний – гломерулонефрита или интерстициального нефрита. Отравление морфином, хлороформом, стрихнином, фосфором является токсической причиной появления сахара в исследуемом материале.

Также заболевание сопровождает акромегалию. Это непропорциональный рост внутренних органов, мягких тканей и скелета, вызванный избыточным продуцированием соматотропного гормона. При этом в общем анализе нередко наблюдается эозинофилия и анемия, а в моче — гиперкальциурия.

При феохромоцитоме также появляется глюкоза в моче. Причины кроются в том, что нарушается работа почек из-за развития опухоли мозгового слоя надпочечников.

Синдром Иценко-Кушинга характеризуется повышением функции надпочечников, они начинают продуцировать глюкокориткоиды в избыточном количестве. Это сопровождается появлением глюкозурии.

Также среди причин называют инфаркт, ожоги, демпинг-синдром.

Чаще всего повышение глюкозы в моче наблюдается у больных диабетом, гипертиреозом, у людей с тяжелыми поражениями печени. При этом процесс почечной фильтрации нарушается. Глюкоза, проходя через мембраны клубочков в почках, должна полностью всасываться обратно в канальцах и возвращаться в кровоток.

Для своевременного выявления заболеваний необходимо сдавать общий анализ мочи ежегодно. Ведь часто начало большинства болезней проходит практически бессимптомно.

Также важно знать, что существует 2 формы этого заболевания. Глюкоза в моче повышена может быть в результате наследственного дефекта, при котором нарушен механизм ее транспортировки. В таком случае говорят о первичной почечной глюкозурии. Схожий механизм развития наблюдается и при синдроме Фанкони или глюкоаминовом диабете. При первом заболевании нарушается работа почек, в моче обнаруживают глюкозу, избыток бикарбоната, аминокислот, фосфатов. Оно характеризуется повышенным выделением мочи, болями в костях, слабостью. Глюкоаминовый диабет проявляется сбоями в работе почек, при которых аминокислоты и сахар выводятся с мочой.

Вторичная форма может проявиться во время беременности или в результате отравления.

Для окончательной установки диагноза мало просто выслушать жалобы и собрать анамнез, необходимо достоверно определить, есть ли глюкоза в моче. Причины ее повышения устанавливаются позже. Сложность заключается в том, что глюкозурия часто протекает бессимптомно. Правда, при выраженной потере сахара с мочой некоторые пациенты жалуются на утомляемость, слабость, головокружения, чувство голода, повышение потоотделения. Также больные иногда отмечают боли в мышцах, увеличение суточной мочи, водянистый стул и нарушение сердцебиения.

Так, в рамках исследования назначаются дополнительные анализы. Проверяется количество сахара в сыворотке крови, исследуются все порции этой биологической жидкости, в том числе и суточная. Для анализов разработаны специальные методы определения глюкозы в моче.

Наиболее распространенным способом является выяснение концентрации сахара с помощью специальных полосок с реагентами. Также наличие глюкозы диагностируют, проведя пробу Гайнеса, исследование по методу Бенедикта, Нидлера. Выяснить точную концентрацию можно с помощью поляриметрического исследования или проведя анализ по Альтгаузену.

Если вам надо сдать обычный общий анализ или целенаправленно проверить наличие сахара в моче, то не забывайте об установленных правилах сбора биологического материала. Так, вначале необходимо провести тщательный туалет наружных половых органов с помощью нейтрального мыла. Иначе в биологический материал могут попасть вещества, способствующие быстрому разложению глюкозы.

Мочу необходимо собирать в чистую посуду, желательно использовать специальные аптечные контейнеры или тщательно вымытые и стерилизованные баночки. Закрыв емкость крышкой, ее необходимо доставить в лабораторию, в которой и будут определять содержание глюкозы в моче.

Если вам сказали собрать суточную мочу, то делается это следующим образом. Первая утренняя порция сливается. Сбор начинается со второго в день мочеиспускания в полном объеме. Не забудьте, что в суточный объем необходимо собрать утреннюю мочу следующего дня. Обязательно подмывайтесь перед каждым походом в туалет. Но не надо нести всю бутыль в лабораторию для того, чтобы определить, если ли у вас глюкоза в моче, повышена она или нет. Замеряйте общий объем, перемешайте биологическую жидкость в емкости и отберите до 100 мл в чистую баночку. На специальном листе необходимо указать ваш рост, вес и общее количество собранной мочи. Кстати, на протяжении суток хранить емкость необходимо в холодильнике. Это нужно для того, чтобы не снижалась концентрация глюкозы в моче.

Для диагностики предназначены особые полоски «Глюкотест» длиной 5 см и шириной 0,5 см со специальной светло-желтой полосой. Именно этот участок пропитан ферментами и красителями, он и окрашивается в случае возникновения реакции.

Определение глюкозы в моче проводится следующим образом. Индикаторная полоска помещается в биологическую жидкость так, чтобы реактивы полностью намокли, и сразу извлекается из нее. После этого ее оставляют на 2 минуты. Как пройдет указанное время, окрас полосы сравнивают со специальной шкалой, определяя приблизительную концентрацию сахара. Если она превышает 20 г/л, то цвет полоски становится предельно возможным и далее не изменяется.

Хранить полоски необходимо при температуре до +18 градусов так, чтобы на них не попадали солнечные лучи. Дотрагиваться до индикаторного участка нежелательно.

Для его проведения создают специальный реактив. В него входят кристаллический сульфат меди, едкий натр и глицерин, которые растворяются в дистиллированной воде по отдельности, а затем смешиваются.

Проводят исследование следующим образом: 20 капель реактива прибавляют к 8 мл мочи в пробирке. В результате должен появиться голубоватый окрас. Верхнюю часть пробирки греют до начала кипения. Нижний ее отдел остается холодным для контроля. Если при этом в нагретой части пробирки голубой окрас сменяется на желтый, то, значит, глюкоза в моче повышена.

Существует и другой метод проверки наличия избыточного количества сахара в моче, основанный на тех же свойствах глюкозы восстанавливать закись меди или гидрат закиси меди из гидрата окиси меди в щелочной среде. Для этих целей готовят специальный реактив из цитрата натрия, безводного карбоната натрия, сульфата меди и воды. Из них делают растворы, которые потом смешивают.

Для проведения исследования необходимо до 10 капель мочи и 5 мл готового реактива. Их смешивают в пробирке, нагревают ее на протяжении пары минут и дожидаются остывания. Если в результате появляется осадок, а жидкость окрашивается в желтый, красный или зеленый цвет, то глюкоза в моче есть.

Этот метод считается одним из самых надежных среди качественных исследований.

Метод разработан на основе того, что глюкоза может восстанавливать нитрат висмута в металлический. Для проведения исследования готовят специальный реактив. В него входит нитрат висмута, который растирается в сегнетовой соли, 10% едкий натр. Хранится приготовленный реактив только в бутылках из темного стекла.

Проводится анализ следующим образом. Моча и реактив смешиваются в соотношении 2:1 и варятся на протяжении 3-х минут. Если присутствует глюкоза в моче, то цвет поменяется на коричневый или даже черный, а при стоянии будет виден темный осадок. Но иногда положительный результат может возникнуть не из-за наличия сахара, а в результате реакции на белок или ряд лекарственных препаратов.

С помощью указанного метода проводится не только определение глюкозы в моче, но и выяснение ее концентрации. Делается это в специальном приборе – поляриметре.

Для проведения исследования биологическую жидкость обесцвечивают и удаляют из нее белок. После этого ее заливают в аппарат, ждут несколько минут для затихания колебаний частиц и определяют концентрацию глюкозы. С помощью такого метода можно определить даже значимое повышение глюкозы в моче, ведь оно основано на свойствах этого вещества поворачивать поляризованный луч вправо. Угол вращения будет зависеть от концентрации раствора. Правда, на результаты могут повлиять β-оксимолярная кислота, стрептомицин, тетрациклиновые препараты.

Указанный способ позволяет достаточно точно определить, присутствует ли в глюкоза в моче. Для этого в биологическую жидкость добавляют 10% раствор едкого натра и кипятят ее в течение минуты. После этого ее цвет сравнивают со шкалой стандартов, приготовленной в пробирках. Этот способ используют как альтернативу полиметрическому исследованию, когда необходимо быстро выяснить уровень сахара, а необходимого оборудования нет.

Причиной появления глюкозы в моче у малышей может стать диабет. При этом у новорожденных снижена масса тела, а при появлении проблем замечается отставание в развитии. Но по одному анализу мочи диагноз не ставится, малыша тщательно обследуют, чтобы исключить другие возможные причины развития болезни.

Обнаруженная глюкоза в моче у ребенка вынуждает родителей более тщательно следить за питанием малыша. В его организм должно поступать достаточное количество углеводов, они необходимы для полноценного развития. Также важно следить, чтобы концентрация глюкозы в сыворотке крови находилась в пределах 3,5-5,5 ммоль/л. Для этого необходимо не только правильное питание, но и физические нагрузки.

Многие пациенты не знают, что значит глюкоза в моче. Они начинают паниковать и требовать назначения каких-то препаратов для нормализации состояния. Но наличие сахара в биологической жидкости является лишь сигналом проблем. Это значит, что необходимо проверить, нет ли у вас диабета, проблем с почками или надпочечниками. Также необходимо проконтролировать работу щитовидной железы. Не стоит забывать, что глюкозурия может развиться и из-за отравлений рядом веществ.

Если вы страдаете от глюкозурии и хотите узнать, как предотвратить развитие болезни у детей, то медицина тут бессильна. Никакой специфической профилактики не существует. Важно просто следить за питанием, давать необходимую физическую нагрузку, и тогда есть шанс, что организм будет работать нормально, несмотря на предрасположенность к развитию заболевания. Ведь чаще всего глюкоза в моче у ребенка появляется вследствие генных мутаций. А избежать этого нельзя. Как правило, ломается ген, отвечающий за белок, который необходим для всасывания в кровь сахара в почках. Даже если у родителей нет проблем, но у них есть малыш с глюкозурией, то при планировании следующих беременностей им в обязательном порядке необходимо посетить генетика для оценки возможных рисков.

источник

Метод основан на цветной реакции, получаемой при нагревании раствора глюкозы со щелочью. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию глюкозы в моче.

Реактивы: 10% раствор едкого натра, дист. вода.

Ø К 2 мл мочи в пробирке добавить 1 мл 10% р-р едкого натра

Ø Выдержать 5 минут на кипящей водяной бане. При наличии глюкозы в моче образуется окрашивание (от жёлтого до бурого).

Ø Добавить 4 мл дист. воды

Ø ФЭК: кювета 10 мм, зеленый светофильтр, контроль дист. вода

Ø Расчет по калибровочному графику

Можно приготовить цветную шкалу в пробирках (стандарты). Готовят следующие растворы глюкозы: 0,5; 1; 1,5; 2; 3 и 4% и обрабатывают их так же, как исследуемую мочу.

БИОМЕДИЦИНСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ: Фотоэлектроколориметрический метод анализа относится к методам определения концентрации вещества в окрашенном растворе по интенсивности окраски. Метод широко применяется в медицине для определения концентраций окрашенных веществ в биологических жидкостях и тканях. Он может быть использован для измерения концентраций и неокрашенных веществ, если эти вещества могут быть переведены в окрашенное состояние с помощью подходящего реагента.

Самостоятельная работа с исследовательским этапом

ü прочитать и законспектировать методы определения глюкозы в моче в рабочих тетрадях;

ü затем получить у преподавателя образцы биологического материала;

ü провести самостоятельную исследовательскую работу пользуясь методическим материалом;

ü полученные результаты исследования оформить согласно требованиям заполнения бланков анализа.