Определение мочевины используется для диагностики, определения прогноза и тяжести течения заболевания, а также для контроля за лечением.
Определение мочевины в клинико-диагностических лабораториях проводится различными методами, однако все их многообразие можно разделить на три основные группы:
Каждая из вышеперечисленных групп, в свою очередь, включает в себя разнообразные методы, объединяемые общим принципом, но отличающиеся друг от друга применяемыми реактивами, ходом исследования и т. д. При этом каждый метод имеет свои преимущества и недостатки и может предъявлять особые требования к сбору биологического материала для исследования.
Как правило, сейчас большинство лабораторий для определения мочевины использует готовые наборы различных фирм-производителей. В инструкциях к набору обычно указываются требования при сборе биологического материала, условия проведения исследования, влияющие факторы, а также референтные значения для данного метода. При переходе с одного набора (метода) для определения мочевины на другой, необходимо тщательно ознакомиться с инструкцией во избежание возможных ошибок на всех трех этапах лабораторного исследования.
Для определения мочевины используют кровь (сыворотку или плазму) и суточную мочу. Важное внимание должно уделяться правильному сбору и хранению образцов для исследования.
Кровь для исследования берут утром натощак. При заборе крови для определения мочевины в ряде случаев нельзя использовать фторидные или аммиачные антикоагулянты, а также цитрат натрия (при использовании уреазных методов). Концентрация мочевины в сыворотке или плазме крови устойчива в течение 1 недели при хранении при 4 °C или не менее 6 месяцев при –20°C.
Нежелательно использовать гемолизированную, хилезную, липемическую или иктеричную сыворотку. Однако в ряде источников указывается, что на результаты исследований, проводимых в кинетическом варианте с большими разведениями образца, билирубин, гемоглобин или липемия, как правило, не влияют.
Мочу для определения мочевины используют суточную, собирая ее соответственно основным правилам сбора суточной мочи. Хранить мочу до анализа следует при температуре 4–8 °C.
Использовать для анализа мутные образцы крайне нежелательно. Для устранения мутности образцы желательно отцентрифугировать при 1500-3000 об/мин. При мутности мочи, связанной с бактериальным загрязнением образца или денатурацией белковых компонентов вследствие нарушения условий хранения, от анализа следует отказаться.
Следует помнить, что концентрация мочевины в моче высокая, а потому образцы мочи необходимо разводить перед исследованием (обычно используется разведение в 20 — 50 раз), а после определения мочевины результат умножить на коэффициент разведения.
При оценке результатов исследования следует учитывать, что в ряде случаев на определение уровня мочевины в материале in vitro могут влиять некоторые лекарственные препараты, применяемые пациентом, что в свою очередь может приводить к ложному занижению или завышению результатов (химическое влияние).
- Слепышева В. В., Балябина М. Д., Козлов А. В. — Методы определения мочевины
- Справочник «Лабораторные методы исследования в клинике» под редакцией Меньшикова В. В. — Москва, «Медицина», 1987 г.
Фотометрические методы определения мочевины основаны на реакции мочевины с различными веществами с образованием окрашенных соединений. Среди фотометрических методов определения мочевины наиболее распространенными являются методы, основанные на реакции мочевины с диацетилмонооксимом.
Раздел: Клиническая биохимия
Газометрические методы определения мочевины основаны на окислении мочевины гипобромитом натрия в щелочной среде. При этом мочевина подвергается окислению.
Раздел: Клиническая биохимия
Ферментативные методы определения мочевины приобрели наибольшее распространение в современной клинико-лабораторной практике. Эти методы определения мочевины называются также уреазными, так как в них в качестве реактива используется фермент уреаза. Для уреазы мочевина является единственным физиологическим субстратом, поэтому уреазные методы высокоспецифичны.
Раздел: Клиническая биохимия
Определение концентрации мочевины в моче проводится значительно реже, чем определение уровня мочевины в крови и используется обычно при при обнаружении повышенного уровня мочевины в крови и решении вопроса о состоянии выделительной функции почек. При этом определяют суточную экскрецию мочевины с мочой. Повышенное содержание мочевины крови при снижении суточной экскреции с мочой чаще свидетельствует о нарушении азотовыделительной функции почек.
Раздел: Клиническая биохимия
Мочевина является главным конечным продуктом обмена аминокислот. Синтезируется мочевина из аммиака, который постоянно образуется в организме при окислительном и неокислительном дезаминировании аминокислот, при гидролизе амидов глутаминовой и аспарагиновой кислот, а также при распаде пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов.
Раздел: Клиническая биохимия
источник
Определение содержания мочевины в моче является одним из важнейших показателей оценки обмена белков. Переизбыток белков в организме приводит к нарушениям в работе печени и почек, увеличению массы тела и развитию аллергических реакций. Именно мочевина является конечным продуктом распада белков.
Количество мочевины в моче учитывается во многих лабораторных исследований, расшифровкой которых занимаются врачи.
Показания к исследованию
Определение содержания мочевины в моче в обязательном порядке проводится у пациентов, страдающих острыми и хроническими заболеваниями печени и почек, а также женщин в период беременности. Немаловажную роль данное исследование играет при контроле эффективности соблюдения лечебной диеты, а также проводимой терапии хронических заболеваний.
Анализ позволяет оценить белковый баланс и выявить патологические изменения на ранних стадиях. Особо актуально исследование при подготовке пациентов к хирургическому вмешательству и при проведении реанимационных процедур.
Следует отметить, что мочевина присутствует в моче каждого из нас. Нормой для здорового человека является 2,5-6,4 ммоль/л, для детей – 1,8-6,4 ммоль/л. Физиологическое повышение уровня содержания мочевины отмечается у людей в возрасте старше 60 лет. В других случаях повышение мочевины может отмечаться при лихорадках, злокачественной анемии, в послеоперационный период и при чрезмерных физических нагрузках.
Снижение уровня мочевины в моче отмечается во время беременности, при кровотечениях и ожогах, сердечной и почечной недостаточности, заболеваниях ЖКТ и туберкулезе.
Для получения максимально достоверной информации о состоянии здоровья пациента необходимо проведение комплексного обследования, в том числе исследование на содержание мочевины в сыворотке крови.
Метод исследования
Для проведения анализа используется суточная моча, сбор которой проводится пациентом самостоятельно. Основным методом исследования является ферментативно-колориметрический, в ходе которого оценивается интенсивность окраски мочи, а также метод по технологии «сухой химии». Наиболее распространенным является количественное определение мочевины по методу Бородина, который предусматривает выделение азота и вычисление его объемов. Для проведения исследования используется специальный прибор и реактивы.
Следует отметить, что ферментативные методы достаточно разнообразны и многочисленны и включают в себя гидролиз мочевины и дальнейшее определение концентрации образовавшегося аммиака. Определение содержания мочевины в моче занимает не более 1-2 дня, на руки пациенту выдается результат исследования, который не является диагнозом.
На результат исследования влияет прием лекарственных препаратов (в том числе инсулина), злоупотребление пищей животного происхождения и употребление спиртных напитков.
Подготовка к исследованию
Сбор суточной мочи необходимо осуществлять на протяжении 24 часов. Первое опорожнение мочевого пузыря не учитывается (производится в унитаз). Вся моча на протяжении суток собирается в одну стерильную емкость, которую необходимо хранить в холодильнике. После сбора мочу необходимо перемешать и измерить объем, отмерить 10-20 мл и поместить их в стерильный контейнер, на котором отметить суточный объем, Ф.И.О. пациента, пол, возраст, вес и рост.
Накануне сбора материала из рациона питания рекомендуется исключить такие продукты, как свекла, морковь, черника, копчености и соленья. По возможности исключите прием лекарственных препаратов, а в случае невозможности их отмены на бланке направления должна быть указана информация о наименовании и дозировке препарата.
источник
Основные группы методов определения содержания мочевины подразделяют на:
- Ксантгидроловые : гетероциклический спирт ксантгидрол вступает в реакцию с мочевиной и образует нерастворимую диксантилмочевину, которую в дальнейшем определяют гравиметрически, нефелометрически, колориметрически или титрометрически. Методы точны, но трудоемки.
- Гипохлоритные – метод Б.А.Рашкована, состоящий в появлении характерной окраски при взаимодействии мочевины с гипохлоритом натрия и фенолом, практически не применяется из‑за разного оттенка опытных и контрольной проб, частого появления мути при добавлении HCl.
- Диацетилмонооксимные методы основаны на реакции Фирона – взаимодействии мочевины и диацетилмонооксима с образованием окрашенных продуктов, отличаются хорошей воспроизводимостью, высокой чувствительностью, большой специфичностью.
- Полуколичественные методы с использованием индикаторной бумаги.
- Методы с использованием ионоселективных электродов .
- Ферментативные методы базируются на гидролизе мочевины уреазой (оптимум pH 6,0‑8,0). Образовавшийся аммиак определяют с помощью различных реакций (фенолгипохлоритная, с помощью глутаматдегидрогеназы, салицилатно‑гипохлоритная).
- Газометрические (гипобромитные), основаны на окислении и разложении мочевины гипобромитом натрия в щелочной среде:
Выделяющуюся углекислоту поглощает раствор, свободным остается только азот, объем которого измеряют. Метод неспецифичен (так как гипобромит реагирует не только с мочевиной, но и другими веществами, содержащими аминогруппы), неточен, плохо воспроизводим и трудоемок.
В качестве унифицированных методов определения мочевины утверждены фенолгипохлоритный, диацетилмонооксимный и уреазный методы, экспресс‑метод с использованием индикаторной бумаги «Уреатест».
Методы этой группы основаны на реакции Фирона, протекающей в два этапа. Первый этап заключается в гидролизе диацетилмонооксима с образованием диацетила и гидроксиламина. На втором этапе гидроксиламин взаимодействует с мочевиной с образованием окрашенного диазинового производного. Для окисления гидроксиламина могут применяться: персульфат натрия, мышьяковая кислота, хлорная кислота, феназон, катионы. Для интенсификации окраски и ее стабильности применяются: тиосемикарбазид, фенилантраниловая кислота, глюкуронолактон, катионы, триптофан, нитриты.
Ферментативные методы базируются на гидролизе мочевины уреазой в инкубационной среде с pH=6,0‑6,5 (ЭДТА‑буфер) или pH=6,9‑7,0 (фосфатный буфер) на углекислый газ и аммиак. Образовавшийся аммиак можно определить по высокочувствительной и специфичной реакции с фенолгипохлоритом и катализатором нитропруссидом, по салицилатно‑гипохлоритной реакции, по реакции с реактивом Несслера (является в 10 раз менее чувствительной по сравнению с фенолгипохлоритной, малоспецифична), по дихлоризоциануратной реакции (наличие белка мешает определению).
| Сыворотка | (по реакции с диацетилмонооксимом) | |
| новорожденные | 1,4‑4,3 ммоль/л | |
| дети | 1,8‑6,4 ммоль/л | |
| взрослые | 2,5‑8,3 ммоль/л | |
| (по реакции с реактивом Несслера) | 2,5-8,3 ммоль/л | |
| (по реакции с фенолгипохлоритом) | 3,3-8,3 ммоль/л | |
| Моча (по реакции с диацетилмонооксимом) | 330‑580 ммоль/сут | |
| Моча (по реакции с реактивом Несслера) | 430‑710 ммоль/сут | |
| Слюна | около 1,83 ммоль | |
При необходимости сопоставления концентрации остаточного азота с содержанием азота мочевины концентрацию последней следует разделить на 2,14.
- in vivo: увеличение — нефротоксичные препараты, кортикостероиды, избыток тироксина; снижение – увеличение концентрации соматотропного гормона,
- in vitro: снижение (метод с уреазой) – цитрат натрия.
Уровень мочевины зависит от скорости ее синтеза в печени и выделения через почки, а также от величины белкового катаболизма.
Повышение уровня мочевины может наблюдаться при нарушении функции почек (острые и хронические заболевания, обтурация мочевых путей), нарушении почечной перфузии (застойная сердечная недостаточность), истощении запасов воды в организме (рвота, понос, повышенный диурез или потоотделение), повышенном катаболизме белка (острый инфаркт миокарда, стресс, ожоги, желтая атрофия печени, желудочно‑кишечные кровотечения), при диете с высоким содержанием белка. В тяжелых случаях острой почечной недостаточности выявлено 10‑кратное возрастание уровня мочевины. Так как водовыделительная функция почек восстанавливается быстрее, чем концентрационная способность, то нормальное выделение мочевины с мочой наступает значительно позднее, чем восстановление диуреза.
Снижение отмечается при диете с низким содержанием белка, при повышенной утилизации белка в тканях (поздние сроки беременности), тяжелых заболеваниях печени, сопровождающихся нарушением синтеза мочевины (паренхиматозная желтуха, цирроз печени).
Повышение количества мочевины в моче связано с гипертиреозом, злокачественной анемией, лихорадкой, при отравлении фосфором, отмечается при диете с высоким содержанием белка, в послеоперационном периоде.
Снижение наблюдается у больных с нефритом и другими заболеваниями почек, уремией, паренхиматозной желтухой, циррозом или дистрофией печени, также у здоровых растущих детей и при низкобелковой диете.
источник
Синонимы: Мочевина в моче, Urea
Мочевина – амид угольной кислоты, азотосодержащий продукт белкового метаболизма – образуется в печени и выводится из организма с мочой. Изменение концентрации мочевины в ту или другую сторону может свидетельствовать о нарушении азотистого баланса и, как следствие, о наличии ряда заболеваний (в основном, почек и органов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Анализ на мочевину в моче позволяет оценить процесс синтеза и распада белков, а также провести дифференциальную (сравнительную) диагностику патологий почек от заболеваний печени.
В результате последовательных биохимических процессов (цикл мочевины), происходящих при участии специальных ферментов, в печени образуется водорастворимая и слаботоксичная мочевина, которая и выводится с мочой. Ее объем составляет до 90% всех продуктов белкового обмена.
Концентрация мочевины в моче напрямую зависит от количества поступивших в организм с продуктами питания белков. Это и есть азотистый баланс, который в норме у взрослого человека соответствует 500 ммоль (14 г) мочевины на 100 г потребляемого белка.
Отрицательный
При отрицательном азотистом балансе наблюдается повышение концентрации мочевины в моче. Это состояние характерно для послеоперационного и посттравматического периода, патологий щитовидной железы (гиперфункция), нарушения всасывания в кишечнике аминокислот и белков в результате внутреннего кровотечения из верхних отделов ЖКТ.
Положительный
Если с мочой выделяется малое количество мочевины, то азотистый баланс расценивается как положительный. В этом случае можно подозревать нарушения работы почек и/или печени. Также снижение концентрации мочевины провоцируют гормональные препараты. В редких случаях наблюдается наследственная патология, когда из-за врожденной ферментативной недостаточности синтез мочевины замедляется или вовсе прекращается.
Снижение экскреции (выделения) мочевины также фиксируется в случае:
- усиленной пассивной реабсорбции (2-я фаза мочеобразования) в почечных канальцах;
- сильного обезвоживания или интоксикации организма;
- гиповолемии (сокращение объема циркулирующей крови);
- нарушения кровообращения в почках вследствие массовых ожогов, обильных кровотечений, шока, сердечной недостаточности и т.д.;
- ослабления почечного кровотока у пожилых пациентов с атеросклерозом (отложение холестериновых бляшек) артерий почек.
Анализ мочи на содержание мочевины позволяет оценить процесс белкового обмена у тяжелых пациентов, находящихся в реанимации. Особенно важно определить азотистый баланс у тех больных, которые получают зондовое или парентеральное (вне желудочного тракта) питание, что позволяет наиболее точно определить дозировку поставляемых белковых препаратов.
Также необходимо установить точную концентрацию мочевины в моче, если ее уровень в крови повышен. Это позволит разносторонне оценить работу выделительной системы в целом и почек в частности.
- Отклонение от нормы в результатах анализа на мочевину в крови;
- Оценка азотистого баланса и всех процессов синтеза/распада белков в организме;
- Определение точного количества белковых препаратов для тяжелобольных, получающих питание через зонд;
- Выявление нарушений в работе выделительной системы;
- Диагностика заболеваний почек:
- почечная недостаточность;
- пиелонефрит;
- амилоидоз;
- гломерулонефрит;
- туберкулез почек и т.д.;
- Подозрение на желудочно-кишечное кровотечение;
- Диагностика нарушений почечного кровотока и т.д.
Расшифровку результатов анализа на мочевину в моче может проводить нефролог, уролог, реаниматолог, гастроэнтеролог, терапевт, хирург, семейный врач, педиатр и т.д.
Факторы влияния
На результаты исследования могут повлиять следующие факторы:
- нарушение режима питания: диеты (в том числе белковые и лечебные), голодание, разгрузочные дни, посты, переход на вегетарианство и т.д.;
- медикаментозное лечение (прием диуретиков — мочегонных средств, хинина, гормонов, нефротоксических препаратов, анаболиков и пр.);
- наличие в моче примесей (белковые бляшки, кровяные сгустки, гной, слизь, частички кала и т.д.);
- нарушение правил подготовки к анализу (физические нагрузки, употребление алкоголя накануне сбора мочи);
- нарушение требований к хранению и транспортировке биоматериала.
- Анемия (малокровие) злокачественно характера, провоцирующая сдвиг азотистого баланса в отрицательную сторону;
- Лихорадка (повышение температуры тела до индивидуально высоких цифр);
- Нарушение работы щитовидной железы, сопровождающееся гиперсекрецией тиреоидных гормонов;
- Сахарный диабет;
- Реабилитация пациента после тяжелой операции или травмы;
- Реабсорбция (нарушение всасывания) аминокислот и белков в результате желудочно-кишечных кровотечений.
Уменьшение концентрации мочевины в моче в норме происходит при повышенной (активной) выработке белка. Как правило, этот процесс наблюдается у беременных и у детей/подростков.
Патологически сниженный уровень мочевины может свидетельствовать о следующих состояниях:
- потеря белков на фоне низкобелкового и высокоуглеводного питания;
- период ремиссии, выздоровления, реабилитации;
- заболевания почек:
- пиелонефрит (воспаление почечных лоханок);
- гломерулонефрит (поражение клубочков почек);
- туберкулез (инфекция почечной паренхимы);
- амилоидоз (отложение в почках крахмала) и т.д.;
- паренхиматозная желтуха (поражение печени и желчных капилляров);
- другие патологии печени:
- острая дистрофия (истощение печеночной ткани);
- дисфункция;
- прогрессирующий цирроз (изменение структуры органа);
- гепатит (вирусное поражение) и т.д.;
- врожденная недостаточность ферментов, участвующих в производстве мочевины;
- синдром мальабсорбции (нарушение процессов расщепления и всасывания в кишечнике);
- кишечная непроходимость;
- токсемия (интоксикация крови бактериями) и т.д.
Для проведения исследования используется суточная моча. Перед ее сбором необходимо соблюдать следующие рекомендации:
- За 2-3 дня из рациона выводятся овощи и фрукты, которые могут изменить цвет мочи (ягоды, свекла, морковь и т.д.);
- В этот же период времени не рекомендуется принимать лекарственные препараты:
- мочегонные;
- аспирин;
- антипирин;
- фурагин;
- гормоны;
- кортикостероиды;
- витамины группы В и др.;
- За день запрещены физические нагрузки, подъем тяжестей, волнения и эмоциональные переживания;
- За сутки нельзя употреблять алкогольные напитки;
Сбор мочи не проводится во время менструации.
Суточная моча собирается с самого утра в емкость объемом 2-3 литра.
- Ночная порция мочи (около 6.00) сливается в унитаз. Затем выполняется гигиенический туалет зоны половых органов с применением нейтрального мыла (без ароматизаторов) и кипяченой воды.
- Все последующие (в течение суток) порции мочи собираются в подготовленную стерильную емкость. Последнее мочеиспускание должно произойти ровно через сутки (в 6.00 следующего дня).
- В течение суток (весь период сбора мочи) биоматериал необходимо хранить в холодильнике при температуре 4-8°С.
- Перед отправкой в лабораторию содержимое емкости необходимо перемешать и в специальный контейнер слить только 40-50 мл мочи.
- На контейнере указывается информация о пациенте (ФИО, возраст), дата сбора материала, общий объем суточной мочи и количество мочеиспусканий.
- Материал должен быть направлен в лабораторию в тот же день, когда собрана последняя порция. В случае длительного хранения мочи изменяются ее физические показатели, растет число бактерий, разрушается осадок и т.д.
Важно! Все материалы носят справочный характер и ни в коей мере не являются альтернативой очной консультации специалиста.
Этот сайт использует cookie-файлы для идентификации посетителей сайта: Google analytics, Yandex metrika, Google Adsense. Если для вас это неприемлемо, пожалуйста, откройте эту страницу в анонимном режиме.
источник
Мочевинаявляется основной фракцией остаточного азота, определение которой используется в диагностических целях. Синтез ее происходит в печени из аммиака, который образуется при дезаминировании аминоктислот, распада пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов.
Отклонения от нормального содержания мочевины в сыворотке крови зависит от скорости процессов синтеза мочевины и ее выделения. Увеличение содержания мочевины в сыворотке крови является одним из главных признаков нарушения почек. Из фракций остаточного азота раньше всего повышается уровень мочевины. При почечной недостаточности азот мочевины может составлять до 90% фракций остаточного азота.
Повышение уровня мочевины сыворотки крови может носить и внепеченочный характер: при потере жидкости, при усиленном распаде белков (острая атрофия печени, тяжелые печени) из-за нарушения синтеза мочевины в печени.
Принцип метода: Мочевина под действием уреазы разлагается с образованием аммиака и углекислого газа. Для уреазы мочевина является единственным субстратом, поэтому уреазные методы высокоспецифичны. Выделившийся аммиак образует с гипохлоритом натрия и фенолом окрашенный продукт – индофенол (синего цвета). Интенсивность окраски пропорциональна содержанию мочевины.
2. Этилендиамин-N (N-тетрауксусной кислоты динатриевая соль).
3 ЭДТА – буфер рН 6,5: 0,6 г трилона В растворяют в 30-40 мл воды, доводят до рН 6,5 раствором едкого натра и доливают водой до 50 мл.
4. Основной раствор уреазы в буфере: 20 мг уреазы растворяют в 10 мл буфера.
5. Рабочий раствор уреазы — перед началом определения берут необходимое количество основного раствора и разводят бидистиллированной водой в отношении 1:4.
7. Натрия нитропруссид 2-водный.
8. Цветной реактив: фенол – 0,11 моль/л, нитропруссид натрия – 0,18 моль/л: 0,0263 г нитропруссида натрия помещают в мерную колбу на 500 мл, приливают примерно 300 мл воды, растворяют при перемешивании. Затем добавляют 5,18 г фенола и доливают водой до метки.
9. Натр едкий 1 моль/л; 0,26 моль/л.
10. Гипохлорид натрия:10 г хлорной извести размешивают в течение 15 минут с 17 мл воды, затем добавляют раствор, состоящий из 17 мл воды и 7 г карбоната натрия. Масса сначала густеет, а затем разжижается. Надосадочную жидкость сливают и фильтруют через промытый водный фильтр. Как только раствор приобретает слабо желтую окраску, добавляют 10 капель 1%-ного раствора крахмала и титруют до обесцвечивания.
11. Основной раствор гипохлорита натрия разводят водой так, чтобы концентрация хлора составляла 0,78 г/л, смешивают с равным объемом 0,26 моль/л раствором едкого натрия (100мл+100мл).
13. Бензойная кислота, 2 г/л (кислоту растворяют при нагревании).
14. Калибровочный раствор мочевины, 0,5 ммоль/л: 15 мг мочевины растворяют в мерной колбе на 500 мл в 2 г/л растворе бензойной кислоты.
Ход определения: Перед определением сыворотку разводят 0,154 моль/л раствором хлорида натрия в отношении 1:9.
Опытная проба: 100 мкл рабочего раствор уреазы вносят в пробирку, добавляют 20 мкл разведенной сыворотки. Закрывают пробкой, перемешивают и инкубируют в течение 15 минут при 37 °С. После инкубации добавляют 300 мкл цветного реактива и 300 мкл рабочего раствора гипохлорита натрия. Перемешивают и инкубируют в течение 20-30 минут при 37 °С. Измеряют экстинкцию в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) против холостой пробы.
Холостую пробу обрабатывают так же, как опытную, но вместо сыворотки берут 0,154 моль/л раствор.
Калибровочную пробу обрабатывают так же, как опытную, но вместо сыворотки берут калибровочный раствор мочевины. Измеряют при тех же условиях против холостой пробы.
Количество мочевины, ммоль/л = ——— х 0,5 х 10
Где Еоо — экстинкция опытной пробы, Ек – экстинкция калибровочной пробьы: 0,5 — концентрация мочевины в калибровочном растворе ммоль/л, 10 – коэффициент разведения.
Нормальные величины. Сыворотка крови – 2, 5-8,3 ммоль/л , или 20-50 мг/100мл.
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:
Лучшие изречения: Да какие ж вы математики, если запаролиться нормально не можете. 8378 — 
| 7302 — 
или читать все.
195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.
Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно
источник
Практическое занятие. «Конечные продукты обмена простых белков. Методы определения мочевины и креатинина».
Учебные вопросы для самоподготовки студентов
1. Использование аминокислот в тканях.
2. Пути распада аминокислот (в виде формул):
2.1. Трансаминирование, роль АСТ и АЛТ.
2.2. Непрямое дезаминирование, роль глутаматдегидрогеназы.
2.3. α-Декарбоксилирование, образование биогенных аминов (гистамина, ГАМК и др.), обезвреживание биогенных аминов.
3. Роль витамина В6 в обмене аминокислот.
4. Реакции образования аммиака в организме. Токсичность аммиака.
5. Способы обезвреживание аммиака в организме. Орнитиновый цикл. Энзимопатии цикла синтеза мочевины. Диагностическое значение определения мочевины.
6. Обмен креатина. Синтез креатина, образование креатинфосфата и креатинина. Биологическая роль креатинфосфата. Диагностическое значение определения креатина, креатинина и креатинкиназы.
7. Наследственные болезни обмена аминокислот (ФКУ, алкаптонурия, альбинизм, болезнь Хартнупа и др.).
Тема реферативного сообщения «Энзимопатии обмена аминокислот. Генетический скрининг новорожденных»
Лабораторные работы, выполняемые на занятии: 1) определение концентрации мочевины в сыворотке крови и моче; 2) определение концентрации креатинина в сыворотке крови и моче. 3) расчет клиренса креатинина.
На занятии студенты пишут обучающий тест и решают проблемные задачи.
Литература: Кухта В.К. и соав. Основы биохимии. М., Медицина, 2007, с.246-262, 394-397. Пустовалова Л.М. Основы биохимии для мед. Колледжей. Ростов н/Д: Феникс, 2004. С.234-249. Пустовалова Л.М. Практические работы по биохимии. Ростов н/Д. 2004. с.181-188. Лекции по курсу биохимии.
Методическое пособие для самостоятельной работы студентов.
Мочевина – конечный азотсодержащий продукт обмена веществ. Синтез моче-вины в печени – основной путь обезвреживания аммиака в организме. В норме кон-центрация мочевины в сыворотке/плазме крови – 2,61-8,35 ммоль/л (уреазный метод), 15-38,5 мг%. Азот мочевины – 7-18 мг% или 2,5-6,4 ммоль/л. Коэффициент перевода для азота мочевины: мг% в ммоль/л 0,357, обратно – 2,8.
Мочевина выводится из организма с мочой. Азот мочевины составляет 85-90% от общего азота мочи. В норме у взрослых выводится мочевины 20-35 г/сут (330-580 ммоль/сут), или азота мочевины – 710-1049 ммоль/сут.
Методы определения мочевины.
· Колориметрический химический. Принцип метода:мочевина образует с диацетилмонооксимом в присутствии тиосемикарбозида и ионов Fe 3+ в сильнокислой среде комплекс красного цвета; интенсивность окрашивания оценивают фотометрически при длине волны 525 нм.
· Колориметрический ферментативный уреазный метод. Принцип метода:
Мочевина + Н2О уреаза NH3 + CO2
NH3 + салицилат натрия + гипохлорит натрия нитропруссид натрия продукт зеленого цвета
Интенсивность окраски продукта реакции пропорциональна концентрации мочевины.
· Спектрофотометрический (УФ), ферментативный уреазный метод. Принцип метода:
Мочевина + Н2О уреаза NH3 + CO2
NH3 + α-кетоглутарат + НАДН2глутаматдегидрогеназа глутамат + НАД + + Н2О (непрямой тест Варбурга).
Скорость окисления НАДН попорциональна концентрации мочевины.
Клинико-диагностическое значение исследования концентрации мочевины в сыворотке крови и моче.
Определение концентрации мочевины в сыворотке крови используется для оценки функции печени и выделительной функции почек. Критическая концентрация мочевины в крови: ˃28,0 ммоль/л. Причины увеличения концентрации мочевины в сыворотке крови:острые или хронические заболевания почек; обтурация мочевыводящих путей; снижение тока крови через почечные клубочки (застойная сердечная недостаточность, обширные ожоги, тяжелая диарея и рвота, инфаркт миокарда и др.); повышенный катаболизм белков (длительное голодание, кровотечения в ЖКТ, инфекции, канцерогенез, сахарный диабет и др.); снижение концентрации Cl — . Причины снижения концентрации мочевины в сыворотке крови:функциональная недостаточность печени (гепатит, цирроз, отравления мышьяком и др.); энзимопатии синтеза мочевины; повышенная скорость клубочковой фильтрации, обусловленная беременностью, чрезмерным объемом внутривенных инфузий, неадекватной секрецией антидиуретического гормона; мальабсорбция (целиакия). Влияющие факторы. Увеличение концентрации: диета с высоким содержанием белка, прием нефротоксичных лекарств, повышенный распад тканей при гипертиреозе, приеме глюкокортикоидов. Уменьшение концентрации:вегетарианская диета.
Определение концентрации мочевины в моче позволяет контролировать азотистый баланс у больных в тяжелом состоянии, получающих зондовое энтеральное и парентеральное питание. Корректно оценить азотистый баланс с использованием этого теста можно лишь при отсутствии тяжелой печеночной или почечной патологии. Увеличением концентрации мочевины в моче, указывающим на отрицательный азотистый баланс, сопровождаются: послеоперационный период, лихорадка; гипертиреоз; тяжелые острые или хронические соматические заболевания. Уменьшением, указывающим на положительный азотистый баланс, сопровождаются: беременность; период роста у детей; период восстановления после тяжелых заболеваний. Азотистый баланс может быть рассчитан по формуле:
АБ (г) = [поступивший белок : 6,25] – [общий азот мочи + 4]
где 6,25 – коэффициент пересчета количества белка в количество азота: 6,25 г белка = 1 г азота; 4 г – поправка на дополнительные потери азота организмом.
Креатинин– это конечный продукт неферментативного превращения креатина и креатинфосфата, участвующих в энергообеспечении мышечного сокращения. Креатинин выводится из организма через почки с мочой, относится к беспороговым веществам, которые поступают в мочу путем фильтрации и не реабсорбируются в канальцах. Нормы креатинина в сыворотке крови у взрослых: мужчины – 40-100 мкмоль/л (или 8-13 мг/л), женщины – 44-88 мкмоль/л (6-10 мг/л) (колориметри-ческий химический метод с пикриновой кислотой, метод Поппера); креатинина в моче у взрослых -4,4-17,7 ммоль/сут (тот же метод).
источник
Анализ на мочевину в моче – клинико-лабораторное исследование, направленное на определение концентрации конечного продукта метаболизма белков, который выводится через почки и является маркером нарушений их функции. Исследование назначается вместе с общим анализом мочи с микроскопией осадка, анализом мочи по Нечипоренко, пробой Реберга, определением мочевины и креатинина в сыворотке. Результаты применяются в нефрологии, диетологии, реаниматологии. Они необходимы для диагностики и мониторинга заболеваний почек и печени, контроля строгих диет и течения беременности, оценки белкового баланса при назначении препаратов реанимационным и тяжелобольным пациентам. Материалом исследования является суточная моча. Для определения концентрации мочевины используется энзиматический кинетический УФ метод. Нормальные значения – от 428 до 714 ммоль/сут. Анализ выполняется в течение 1 дня.
Анализ на мочевину в моче – клинико-лабораторное исследование, направленное на определение концентрации конечного продукта метаболизма белков, который выводится через почки и является маркером нарушений их функции. Исследование назначается вместе с общим анализом мочи с микроскопией осадка, анализом мочи по Нечипоренко, пробой Реберга, определением мочевины и креатинина в сыворотке. Результаты применяются в нефрологии, диетологии, реаниматологии. Они необходимы для диагностики и мониторинга заболеваний почек и печени, контроля строгих диет и течения беременности, оценки белкового баланса при назначении препаратов реанимационным и тяжелобольным пациентам. Материалом исследования является суточная моча. Для определения концентрации мочевины используется энзиматический кинетический УФ метод. Нормальные значения – от 428 до 714 ммоль/сут. Анализ выполняется в течение 1 дня.
Мочевина в моче является лабораторным показателем особенностей белкового обмена. В медицинской практике анализ часто используется для дифференциальной диагностики болезней почек и печени. По своему химическому строению мочевина – карбамид. Она представляет собой конечный продукт белкового метаболизма. Разложение аминокислот в организме происходит с образованием углекислого газа, воды и аммиака. Последний является токсичным веществом, которое при накоплении оказывает негативное воздействие на весь организм, в особенности на нервную систему. В печени воспроизводится цикл мочевины – последовательная цепочка биохимических процессов, в результате которых токсичный аммиак обезвреживается. Образовавшаяся мочевина растворима в воде и не оказывает негативного влияния на состояние здоровья.
Вместе с током крови мочевина поступает в почечные клубочки, где частично реабсорбируется, частично выводится с мочой. Количество выведенной мочевины, соотношение ее уровня в крови и в моче позволяет оценить азотистый баланс, выявить нарушения в работе почек, печени и эндокринной системы. В условиях клинических лабораторий концентрация мочевины определяется в сыворотке венозной крови и в порции суточной мочи. Анализ выполняется уреазным кинетическим УФ методом. Полученные данные наиболее широко используются в нефрологической и урологической практике, а также в реаниматологии.
Исследование мочевины в моче выполняется для оценки процессов образования и распада белков. Анализ показан пациентам, находящимся в тяжелом состоянии – реанимационным больным, получающим питание через зонд и парентерально. Результаты позволяют определить преобладание катаболизма или анаболизма, рассчитать дозировку препаратов с протеинами. Еще одним показанием для назначения анализа являются заболевания почек. Исследование позволяет оценить, насколько нарушена выделительная функция почек у пациентов с острой и хронической почечной недостаточностью, пиелонефритом, гломерулонефритом, амилоидозом, туберкулезом почек, а также у беременных на поздних сроках гестации. Основанием для проведения процедуры служат повышенные показатели теста на мочевину в крови, жалобы на отеки, одышку, боли в поясничной области, нарушения мочеиспускания. Данные анализов крови и мочи на мочевину необходимы для дифференциации патологий печени и почек.
Анализ на мочевину в моче является надежным диагностическим инструментом при нарушениях выделительной функции почек. Результаты отличаются высокой чувствительностью, а сама процедура требует минимальных временных затрат, что особенно важно при обследовании пациентов в тяжелом состоянии. Однако данный тест не дает полной информации о причинах патологии, поэтому интерпретация полученных данных должна производиться в комплексе с результатами биохимического анализа крови и мочи.
При исследовании мочи на мочевину анализу подвергается порция материала, собранного в течение 24 часов. Чтобы результаты оказались максимально информативными, требуется придерживаться некоторых ограничений: за 12 часов до сбора первой порции нужно отказаться от острой и соленой пищи, от продуктов, окрашивающих мочу, за сутки воздержаться от употребления алкогольных напитков, за 2 суток прекратить прием мочегонных средств (после обсуждения этого вопроса с врачом). В течение суток сбора мочи следует ограничить физическую нагрузку, влияние стрессовых факторов. За неделю до исследования необходимо сообщить врачу о принимаемых препаратах, так как некоторые из них влияют на уровень мочевины в моче.
Первое мочеиспускание с утра производится в унитаз, время отмечается. Сбор мочи начинают со второго мочеиспускания, продолжают в течение суток. Последний раз моча собирается утром следующего дня, в то же время, что было отмечено ранее. В процессе сбора емкость должна храниться при температуре от 2 до 8° C. В лабораторию сдают небольшую порцию в 30-50 мл. Исследование мочи чаще всего выполняется кинетическим УФ методом. Он основан на способности мочевины гидролизоваться в присутствии уреазы с выделением аммония и углекислого газа. При введении дополнительных реагентов ионы аммония образуют окрашенные комплексы, по нарастанию интенсивности окраски (оптической плотности) определяется концентрация мочевины в пробе. Анализ выполняется в течение 1 дня, в экстренных ситуациях – за 2 часа.
В норме концентрация мочевины в моче у детей первого года жизни составляет от 10 до 100 ммоль/сут, с 1 года до 4 лет – от 50 до 200 ммоль/сут, с 4 до 8 лет – от 130 до 280 ммоль/сут, с 8 до 14 лет – от 200 до 450 ммоль/сут, с 14 лет – от 428 до 714 ммоль/сут. Референсные значения могут несколько отличаться, так как зависят от особенностей реагентов и аппаратуры, используемой в лаборатории. Физиологическое снижение показателей теста наблюдается при беременности и недостатке белков в рационе. Причиной повышения может стать интенсивная физическая нагрузка и избыточное употребление белковых продуктов.
Причиной повышения уровня мочевины в моче может стать усиленный распад белка. Преобладание процессов катаболизма возникает на фоне общего увеличения количества белка в организме при его чрезмерном поступлении с пищей, при реабсорбции аминокислот вследствие кровотечений из верхних отделов пищеварительного тракта. Распад протеинов в организме ускоряется при гиперфункции щитовидной железы, при злокачественных анемиях, при лихорадочных состояниях, а также в послеоперационном периоде. Другой причиной повышения уровня мочевины в моче является прием лекарственных средств: ацетилсалициловой кислоты, салицилата натрия, хинина, кортикостероидных гормонов.
Двумя главными причинами снижения уровня мочевины в моче являются заболевания почек и печени. Развивается либо нарушение выведения мочевины (при этом ее уровень в сыворотке становится повышенным), либо снижение ее синтеза (концентрация соединения уменьшается и в крови, и в моче). Таким образом, сниженные показатели анализа определяются у пациентов с почечной недостаточностью различного генеза, пиелонефритом, гломерулонефритом, амилоидозом, туберкулезом почек, циррозом, гепатитом. Другой причиной снижения уровня мочевины в моче может стать недостаток белка в организме, вызванный особенностями питания, нарушением всасывания в кишечнике (синдромом мальабсорбции), массивными кровотечениями, шоковыми состояниями, дегидратацией, ожогами. Среди лекарственных препаратов уменьшению показателей анализа способствуют все нефротоксичные средства, а также некоторые гормональные.
Анализ на мочевину в моче является важным диагностическим тестом при подозрении на заболевания почек, их дифференциации от патологий печени, а также при мониторинге состояния пациентов в реанимации. Если результаты отклоняются от нормальных, за уточнением диагноза и назначением лечения необходимо обратиться к терапевту либо к нефрологу (урологу). Для исключения влияния физиологических факторов на показатели анализа нужно придерживаться сбалансированного рациона с умеренным поступлением белков (0,8-1,2 г/кг массы тела), а также подбирать физическую нагрузку согласно уровню общей подготовленности организма.
источник
Для правильного функционирования человеческого организма почки имеют очень большое значение. Основные функции почек:
• очистительная — выведение из организма ненужных и вредных для организма веществ (конечные продукты обмена, особенно белкового, соли, краски, лекарственные и ядовитые вещества и пр.);
• гомеостатическая — сохранение постоянства внутренней среды организма путем регулирования постоянного состава крови, постоянства осмотического давления, основного КОС;
• регуляция АД;
• внутрисекреторная;
• эритропоэтическая.
Для выявления нарушенных функций почки применяются функциональные пробы, которые позволяют выявить не только суммарную функцию обеих почек (или функцию каждой почки в отдельности), но и определять локализацию и степень структурных изменений почечной паренхимы, поскольку в зависимости от характера патологического процесса и его локализации в почечной паренхиме отмечается нарушение определенных функций нефрона.
Методы включают исследование содержания в крови конечных продуктов белкового обмена; экскреционные пробы с нагрузкой различными веществами; пробы на очищение (клиренс-тесты).
Поскольку азотистые шлаки выводятся из организма почками, знание степени азотемии позволяет судить об их функции. В практической работе часто прибегают к определению в крови остаточного азота. Под остаточным азотом понимают безбелковый азот, т.е. азот веществ, которые содержатся в фильтрате крови после осаждения белков. По Й.Тодорону (1963), остаточный азот при нормальных условиях включает азот мочевины приблизительно 50 %, аминокислот 25 %, эрготионеина 8 %, креатина 5 %, мочевой кислоты 4 %, креатинина 2,5 %, аммиака и индикана 0,5 %, остальных небелковых веществ (полипептиды, нуклеотиды и др.) 5 %.
Определение остаточного азота в крови обычно проводится по Кьельдалю, Бородину и Фолину или микроопределением остаточного азота колориметрическим способом по Аселю.
В норме содержание остаточного азота в крови находится в пределах 20—40 мг %. Азот мочевины составляет приблизительно 50 % остаточного азота. При нарушении функции почек процент содержания мочевины в остаточном азоте увеличивается. Поэтому определение содержания мочевины в крови более показательно, чем измерение остаточного азота. Содержание мочевины в крови определяют газометрическими, прямыми фотометрическими и ферментативными методами. Наиболее удобно для практических целей проводить определение мочевины в аппарате Бородина. В норме в сыворотке крови содержится мочевины 2,5—8,3 ммоль/л.
В начальном периоде почечной недостаточности раньше других азотистых веществ начинает увеличиваться содержание в крови мочевой кислоты, затем индикана, мочевины и в конце всего креатинина. Поэтому определение содержания индикана в крови имеет большое значение для более раннего выявления почечной недостаточности, а определение креатинина имеет большое прогностическое значение. Содержание индикана в крови в норме незначительное и не обнаруживается качественными пробами. Количество индикана в крови определяют по методу Альтгаузена или Обермейера.
Содержание креатинина в крови в норме составляет 0,044—0,088 ммоль/л и определяется мышечной массой. В качестве унифицированного метода определения креатинина в 1972 г. утвержден метод Попера, основанный на цветной реакции М.Яффе, направленный на выявление Яффе-положительных хромогенов.
В моче азотистые вещества (мочевина, креатинин и др.) содержатся в весьма больших количествах, превышающих их содержание в крови в 100 и более раз. Определение мочевины и креатинина в моче проводится теми же методами, что и в крови. При этом мочу перед исследованием разводят в 10-100 раз.
Определение концентрации в крови остаточного азота или отдельных его ингредиентов не всегда отражает функциональное состояние почек, поскольку при нарушении их функций азотистые шлаки выделяются другими органами: печенью, легкими, кожей, слюнными и потовыми железами, желудочно-кишечным трактом и т.д. Поэтому некоторые авторы для более точного определения функции почек предложили сравнивать концентрацию данного вещества в крови и в моче. Амбар (Ambard, 1910) предложил метод определения коэффициента отношения мочевины крови и мочевины в моче.
Больного взвешивают. Мочевой пузырь опорожняют катетором Через 10 мин из вены берут 10 мл крови. Через 1 ч после опорожнения мочевого пузыря мочу выпускают вновь и измеряют ее количество. Определяют содержание мочевины в крови и в собранной порции мочи. Вычисляют так называемый константный коэффициент (константа Амбара) по формуле:
где К — константный коэффициент; Мк — концентрация мочевины в крови (г/л); См — количество мочевины, вьделенной с мочой за сутки (г); Мм — содержание мочевины в моче (г/л); 70 — условная средняя масса тела взрослого человека (кг); В — масса тела больного (кг); 5 — расчетный коэффициент.
При нормальной функции почек константный коэффициент колеблется от 0,06 до 0,08. При почечной недостаточности величина константы превышает 0,1. В ряде случаев константа Амбара дает более раннее представление относительно начинающейся почечной недостаточности, чем простое определение содержания мочевины в сыворотке крови.
Проба с феноловым красным была предложена Роунтри и Джерати (Rowntree, Geragthy) в 1910 г. Утром натощак после опорожнения мочевого пузыря больному дают выпить 300— 400 мл (2 стакана) жидкости. Вводят внутривенно 1 мл раствора фенолового красного, содержащего 6 мг фенолсульфофталеина, и определяют через 15, 60 и 120 мин абсолютное количество красителя, выделенного с мочой за это время.
В норме за первые 15 мин выделяется 25—35 %, за 60 мин — 40— 60 %, за 120 мин — 60—80 % всего количества введенного фенолсульфофталеина. Краситель секретируется канальцами и лишь в очень небольших количествах фильтруется клубочками. При нарушении секреторной функции канальцев наблюдается уменьшение количества выводимой с мочой краски пропорционально степени морфологических изменений в почках.
Наиболее ценными и специфичными из всех проб для функциональною исследования почек является определение коэффициента очищения, или клиренса, так называемые клиренс-тесты, которые позволяют исследовать самую важную функцию почек — очищение. Впервые клиренс-тест как метод количественной оценки функции почек был введен в практику Ребергом [Rehberg, 1926] — клиренс креатинина и Ван-Слайком и соавт. [Moller, Mclntoch, Van Slyke, 1929] — клиренс мочевины.
Под термином коэффициент очищения, или клиренс, понимают объем плазмы (в мл), который полностью освобождается от экзогенного или эндогенного вещества за 1 мин (т.е. выражается в мл/мин). Таким образом, клиренс-тест характеризует степень очищения крови, протекающей через почки в единицу времени от определенных веществ. Поскольку функция почек осуществляется путем клубочковой фильтрации, канальцевой реабсорбции и секреции, в зависимости от механизма выделения исследуемого вещества почками можно получить представление о функциональном состоянии разных отделов нефрона.
Клубочковая фильтрация определяется по показателям очищения ряда веществ, которые выделяются из крови почками только путем клубочковой фильтрации и не подвергаются в канальцах процессам реабсорбции и секреции. К таким веществам относятся инулин, тиосульфат натрия, креатинин. Самым точным является определение клиренса по инулину, но наиболее простым и удобным на практике является определение клиренса эндогенного креаьтнина по методу Реберга—Тареева.
Пробу проводят при соблюдении больным постельного режима. Во время пробы запрещают прием пищи и воды. Утром в определенное время больной опорожняет мочевой пузырь. Спустя 1 ч после мочеиспускания получают кровь из вены для определения содержания в ней креатинина. Спустя еще 1 ч больной опорожняет мочевой пузырь. Измеряют объем мочи, выделенной за 2 ч, и определяют уровень креатинина в ней. Коэффициент очищения (клиренс) эндогенного креатинина определяют по формуле, общей для всех клиренсов:
где С — клиренс (мл/мин), U — концентрация исследуемого вещества в моче (ммоль/л), V — диурез в 1 мин (мл), Р — концентрация данного вещества в плазме крови (ммоль/л).
Клубочковый клиренс представляет в сущности клубочковую фильтрацию (первичную мочу) в мл за 1 мин. Величина почечного клиренса зависит от площади поверхности тела исследуемого. Поэтому необходимо проводить перерасчет этих показателей на стандартную поверхность тела взрослого человека, равную 1,73 м2. Тогда
Поверхность тела больного определяют по формуле Дюбуа или по номограмме. Величина клиренса по эндогенному креатинину зависит от возраста человека.
Принято считать, что при нормальной деятельности почки величина клубочковой фильтрации варьирует от 90 до 130 мл/мин и, как правило, составляет 120—130 мл/мин.
| Возраст | Клиренс креатинина, мл/мин |
| 1 — 14 дней | 30 (25-35) |
| 14 дней | 37 (25-55) |
| 2 мес — 1 год | 60 (35-80) |
| Cтарше 1 года | 80 (60-100) |
| Взрослые | 100 (80-150) |
Исследование клиренса инулина проводится натощак. Препарат вводят внутривенно и течение всего периода исследования или однократно. Мочу собирают путем катетеризации мочевого пузыря после предварительного его опорожнения. Мочу и кровь исследуют через равные промежутки времени. В норме клиренс инулина равен 130 мл/мин.
Точно так же определяют коэффициент очищения по тиосульфату натрия, который также полностью фильтруется в клубочках. Техника йодометрического определения тиосульфата более точна, чем колориметрического метода определения креатинина и инулина. В норме клиренс тиосульфата натрия составляет 127 мл/мин.
Путем сопоставления различных клиренсов или путем изменения условий проб можно получить новые показатели функции почки.
где RH2O — реабсорбция воды в канальцах (%), С — клиренс (величина клубочковой фильтрации, мл/мин), V— диурез (мл/мин).
В норме процент реабсорбции воды канальцами почки составляет 97—99 %.
Кроме реабсорбции воды, для определения функции проксимальных отделов канальцев почки применяют определение реабсорбции глюкозы, фосфатов, аминокислот.
где Rгл — реабсорбция глюкозы (мг/мин); Uкр — содержание глюкозы в 1 мл плазмы крови (мг); С — клиренс (клубочковая фильтрация в мл/мин); Uм — содержание глюкозы в 1 мл мочи (мг); V- диурез (мл/мин).
При нормальном содержании глюкозы в плазме крови или умеренной гипергликемии глюкоза реабсорбируется полностью и в моче не появляется. Концентрация глюкозы в крови, при которой она может быть полностью реабсорбирована канальцами, обозначается как пороговая величина. Для определения максимальной канальцевой реабсорбции содержание глюкозы в крови должно быть выше пороговой величины (около 7 г/л). Необходимую концентрацию глюкозы в крови создают путем внутривенного введения в течении 8—10 мин 80—100 мл 40 % раствора глюкозы.
Затем поддерживают эту высокую концентрацию глюкозы в крови в течение всего исследования путем введения раствора глюкозы со скоростью 4—5 мл в 1 мин. Мочевой пузырь опорожняют через 20—25 мин после начала вливания «поддерживающей» дозы раствора и собирают по введенному в мочевой пузырь катетеру мочу в течение двух 15-минутных периодов. В середине каждого периода рассчитывают клубочковую фильтрацию по клиренсу эндогенного креатинина. Максимальная реабсорбция глюкозы в норме составляет 367 ± 6,4 мг/мин. Снижение максимальной реабсорбции глюкозы указывает на нарушение функции проксимального отдела канальцевого аппарата.
Почти все свободные аминокислоты, профильтровавшиеся в просвет канальца, подвергаются интенсивной реабсорбции в проксимальных его отделах при активном участии многих ферментативных систем. Однако если максимальная концентрация аминокислот превышает максимальный порог (Tмакс), то полной реабсорбции не происходит и аминокислоты выделяются с мочой. Для выявления причины гипераминоацидурии необходимо определение концентрации аминокислот в крови и моче и вычисление их клиренса. Клиренс большинства аминокислот колеблется в пределах 1—2 мл/мин, но имеются аминокислоты с величинами клиренса больше 2—4 мл/мин, в частности глицерин, гистидин, цистин и др.
Определение общего азота аминокислот в крови осуществляется газометрическим, колориметрическим и титрационным методами. В клинической практике наиболее широкое применение получил колориметрический метод в основе которого лежит реакция нингидрина с аминогруппой аминокислот, в результате которой получается фиолетовое окрашивание раствора. По интенсивности окраски судят о количестве азота аминокислот. В норме содержание азота аминокислот в крови у новорожденных и детей грудного возраста составляет 5,35—6,78 ммоль/л, у более старшего возраста — 3,21—5,35 ммоль/л. Снижение содержания аминокислот в крови наблюдается при многих заболеваниях почек как врожденного, так и приобретенного характepa.
Выделение азота аминокислот с мочой преобладает у детей грудного возраста (4—5 мг на 1 кг массы тела и больше в сутки), после года показатели идентичны взрослым (не больше 1—2 мг на 1 кг массы тела в сутки). Увеличение содержания аминокислот в моче определяется термином гипераминоацидурия. При анализе причин увеличенной экскреции аминокислот почкой следует учитывать ряд факторов: концентрацию аминокислот в крови и загрузку нефрона аминокислотами, возможность отсутствия в организме ферментов катаболизма некоторых аминокислот, нарушение систем реабсорбции отдельных аминокислот и, наконец, наследственный дефект клеток, участвующих в их реабсорбции [Woolf, 1961].
Различают генерализованную аминоацидурию, при которой наблюдается повышенная экскреция большинства аминокислот, и селективную, при которой происходит выделение с мочой какой-то одной аминокислоты. Для суждения о характере и локализации патологического процесса большое значение имеет определение концентрации отдельных аминокислот в крови и моче. С этой целью применяют методы разделения аминокислот на фильтровальной бумаге, методы высоковольтного электрофореза, хроматографии аминокислот на колонке ионообменных смол, метод газовой хроматографии и др.
Наибольшее распространение получила хроматография по IIасхиной, при которой удается выделить до 17 аминокислот. Содержание различных аминокислот в моче меняется в зависимости от возраста. У новорожденных и детей первых месяцев жизни отмечается выделение с мочой значительного количества некоторых аминокислот (глицерин, серин, аспарагин, лизин, гистидин, треонин, пролин и др.), что указывает на несовершенство транспортных систем почечных канальцев для аминокислот.
Об этом следует помнить при диагностике первичных тубулопатий [Вельтищев Ю.Е., 1979]. Известны заболевания наследственного характера, в основе которых лежит нарушение транспортных систем отдельных аминокислот, составляющих основу патофизиологического процесса (цистинурия, болезнь Хартнапа, синдром Дебре—де Тони—Фанкони и др.).
Определение эффективного почечного кровотока (ЭПК) впервые предложили Эльзом, Ботт и Лендис [Elsom, Bott, Landis, 1934]. Установлено, что парааминогиппуровая кислота (ПАГК), фенолрот, диодраст и некоторые другие вещества, введенные в организм, почти полностью выделяются путем канальцевой секреции и коэффициент очищения их не зависит от величины диуреза. Указанные вещества выделяются полностью при однократном прохождении крови через почки.
Клиренс ПАГК и диодраста равен 600— 700 мл/мин и состоит только из плазменной части крови, что практически приближается к величине почечного плазмотока, т.е. к количеству плазмы, которое за 1 мин проходит через почки. Таким образом, по клиренсу этих веществ можно определить величину почечного плазмотока и только ту часть плазмы, которая циркулирует по сосудам, проходящим через функционально активную часть почечной паренхимы, но нельзя определить плазмоток, проходящий через артериально-венозные анастомозы. Поэтому почечный плазмоток, определенный при помощи клиренса, называется эффективным (ЭПП):
где U — концентрация исследуемого вещества в моче, V — минутный диурез (мл); Р — концентрация данного вещества в плазме крови.
Определение ЭПП с помощью ПАГК — один из наиболее точных методов исследования. Определение проводят с помощью постоянного капельного внутривенного введения ПАГК, концентрация которого в крови не должна превышать 0,03—0,04 г/л. Достаточный диурез (3—4 мл/мин) создают предварительной водной нагрузкой. Мочу получают путем катетеризации мочевого пузыря. Точность результатов увеличивается при определении клиренсов за несколько 20-минутных промежутков, В норме коэффициент очищения ПАГК и диодраста составляют 500—600 мл/мин.
ЭПК определяют путем деления величины ЭПП на процентный объем плазмы, измеренный с помощью гематокрита (в процентах) по формуле:
источник