Пцр мочи на туберкулез где сдать

Ольга, Вы большая молодец, что у вас дошли руки почитать эти приказы. Вот сижу сейчас и думаю, чтобы нас никто не обломал сейчас фразой, типа все это является лишь дополнительными методами диагностики ТБ. Вот, к примеру в 109 приказе от 2003 года, есть такая хрень:
«В качестве методов, альтернативных классическому культуральному исследованию, возможно использование автоматизированных и полуавтоматизированных систем ускоренной культуральной диагностики, основанной на использовании жидких питательных сред и различных способах индикации роста микобактерий.

С целью быстрой идентификации микобактерий туберкулезного комплекса в качестве дополнительных допускается использование методов, основанных на амплификации фрагментов генома микобактерий (полимеразная цепная реакция — ПЦР), других молекулярно-биологических методов. ПЦР-анализ может быть применен для исследования материала от больного (мокроты, промывных вод бронхов, мочи и спинномозговой жидкости), а также культур микроорганизмов.»

Наталья, вот. Держите. Это я только 2 пункта разжевывала.

А теперь подробнее.
5.6. В течение 6 дней с момента постановки пробы Манту (внимание. У ребенка отказ от манту) направляются на консультацию в противотуберкулезный диспансер (зачем? Если они не делали манту!) по месту жительства следующие категории детей:

— с впервые выявленной положительной реакцией (папула 5 мм и более), не связанной с предыдущей иммунизацией против туберкулеза;

— с длительно сохраняющейся (4 года) реакцией (с инфильтратом 12 мм и более);

— с нарастанием чувствительности к туберкулину у туберкулиноположительных детей — увеличение инфильтрата на 6 мм и более;

— увеличение менее чем на 6 мм, но с образованием инфильтрата размером 12 мм и более;

— с гиперреакцией на туберкулин — инфильтрат 17 мм и более;

— при везикуло-некротической реакции и лимфангите.

5.7. Дети, направленные на консультацию в противотуберкулезный диспансер (почему они направлены описано в пункте 5.6), родители или законные представители которых не представили в течение 1 месяца с момента постановки пробы Манту (опять 25! Манту то не ставили) заключение фтизиатра об отсутствии заболевания туберкулезом, не допускаются в детские организации.

Дети, туберкулинодиагностика которым не проводилась (это походу те 5%, которые не отказались, но у них медицинские противопоказания для постановки манту) допускаются в детскую организацию при наличии заключения врача-фтизиатра об отсутствии заболевания.
Т.е. отказ от медвмешательства — от пробы манту, отказ от противотуберкулезной помощи и есть основание не ходить по фтизиатрам и доказывать кому-то что он не верблюд.

Елена, Внимание! Человеческая просьба не писать вопросы в ЛС к автору темы. Все необходимые образцы отказов, а также советы и пути ведения диалогов имеются в теме и группе.

Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 22 октября 2013 г. № 60 “Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил СП 3.1.2.3114-13 “Профилактика туберкулеза”
(НЕ ВСТУПИЛО В СИЛУ!)
Зарегистрировано в Минюсте РФ 6 мая 2014 г.
Регистрационный № 32182

Текст обращения в ГенПрокуратуру по несоответствию с другими законами:
http://www.1796kotok.com/forum/viewtopic.php?f=26..

Наиболее интересующие нас пункты: V и VI
V. Организация раннего выявления туберкулеза у детей

5.1. В целях раннего выявления туберкулеза у детей туберкулинодиагностика проводится вакцинированным против туберкулеза детям с 12-месячного возраста и до достижения возраста 18 лет. Внутрикожную аллергическую пробу с туберкулином (далее — проба Манту) ставят 1 раз в год, независимо от результата предыдущих проб.

Ежегодный охват пробой Манту детей до 14 лет включительно должен составлять не менее 95%. В обязательном порядке обследуются дети из социально неблагополучных семей и проживающие на территории Российской Федерации дети иностранных граждан, прибывшие из неблагополучных по туберкулезу стран.

5.2. Проба Манту проводится 2 раза в год:

— детям, не вакцинированным против туберкулеза по медицинским противопоказаниям, а также не привитым против туберкулеза по причине отказа родителей от иммунизации ребенка, до получения ребенком прививки против туберкулеза;

— детям, больным хроническими неспецифическими заболеваниями органов дыхания, желудочно-кишечного тракта, сахарным диабетом;

— детям, получающим кортикостероидную, лучевую и цитостатическую терапию;

5.3. Постановка пробы Манту осуществляется средними медицинскими работниками детских, подростковых, амбулаторно-поликлинических и оздоровительных организаций, прошедших обучение в противотуберкулезных медицинских организациях и имеющих справку- допуск.

Средние медицинские работники детских, подростковых, амбулаторно-поликлинических и оздоровительных организаций проходят обучение в противотуберкулезных медицинских организациях не реже 1 раза в 2 года.

5.4. Не допускается проведение пробы Манту на дому, а также в детских и подростковых организациях в период карантина по инфекционным заболеваниям. Постановка проб Манту проводится до профилактических прививок.

5.5. Интервал между профилактической прививкой, биологической диагностической пробой и пробой Манту должен быть не менее одного месяца. В день постановки туберкулиновых проб проводится медицинский осмотр детей.

5.6. В течение 6 дней с момента постановки пробы Манту направляются на консультацию в противотуберкулезный диспансер по месту жительства следующие категории детей:

— с длительно сохраняющейся (4 года) реакцией (с инфильтратом 12 мм и более);

— увеличение менее чем на 6 мм, но с образованием инфильтрата размером 12 мм и более;

— с гиперреакцией на туберкулин — инфильтрат 17 мм и более;

— при везикуло-некротической реакции и лимфангите.

5.7. Дети, направленные на консультацию в противотуберкулезный диспансер, родители или законные представители которых не представили в течение 1 месяца с момента постановки пробы Манту заключение фтизиатра об отсутствии заболевания туберкулезом, не допускаются в детские организации.

Дети, туберкулинодиагностика которым не проводилась, допускаются в детскую организацию при наличии заключения врача-фтизиатра об отсутс

источник

Условия подготовки определяются лечащим врачом.

Моча: Провести туалет наружных половых органов. У женщин желательно закладывать тампон во влагалище перед сбором материала. У мужчин при мочеиспускании оттянув кожную складку освободить наружное отверстие мочеиспускательного канала. Моча собирается в стерильный контейнер (контейнер можно получить в регистратуре CMD).

Секрет предстательной железы: 2-3 дня половое воздержание, взятие осуществляется врачом-урологом.

Туберкулез – хроническая инфекция, проявляющаяся поражением органов дыхания, суставов, костей, мочеполовых органов, кожи и т.д. Туберкулез у человека вызывают микобактерии туберкулеза (МБТ): M.tuberculosis, M.bovis, M.africanum, M.microti, M.canettii, M.caprae, M.pinnipedii, M. mungi, объединяемые в группу микобактерий, называемую Mycobacterium tuberculosis complex. Источником инфекции является больной человек, основной путь заражения – воздушно-капельный. В развитии инфекционного процесса большую роль играют неблагоприятные условия жизни, труда, а также факторы, влияющие на снижение иммунитета. При попадании микобактерий в организм, происходит их транспорт в региональные лимфатические узлы и формирование первичных туберкулезных комплексов с развитием гранулем, наиболее часто в легочной ткани. В ряде случаев возможно формирование очагов в почках, половых органах, костях. Клинически реактивный туберкулез характеризуется кашлем, часто с кровохарканием, субфебрильной температурой, снижением массы тела, слабостью.

Анализ на микобактерии туберкулеза методом ПЦР включает определение ДНК Mycobacterium tuberculosis-complex (M.tuberculosis, M.bovis, M.africanum, M.microti).

Референсные значения (вариант нормы):

Параметр	Референсные значения
ДНК Mycobacterium tuberculosis complex	Не обнаружено

Обнаружение ДНК свидетельствует о наличии инфекционного процесса.

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 года, должны производиться врачом соответствующей специализации.

» [«serv_cost»]=> string(3) «365» [«cito_price»]=> NULL [«parent»]=> string(2) «25» [10]=> string(1) «1» [«limit»]=> NULL [«bmats»]=> array(2) array(3) string(1) «N» [«own_bmat»]=> string(2) «12» [«name»]=> string(8) «Моча» > [1]=> array(3) string(1) «N» [«own_bmat»]=> string(2) «12» [«name»]=> string(54) «Секрет предстательной железы» > > >

Биоматериал и доступные способы взятия:

Тип	В офисе
Моча
Секрет предстательной железы

Подготовка к исследованию:

Условия подготовки определяются лечащим врачом.

Секрет предстательной железы: 2-3 дня половое воздержание, взятие осуществляется врачом-урологом.

Референсные значения (вариант нормы):

Параметр	Референсные значения
ДНК Mycobacterium tuberculosis complex	Не обнаружено

Обнаружение ДНК свидетельствует о наличии инфекционного процесса.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Центральный офис: 111123, Россия, Москва, ул. Новогиреевская, д.3а, метро «Шоссе Энтузиастов», «Перово»
+7 (495) 788-000-1, info@cmd-online.ru

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

источник

Туберкулез — опасное заболевание, которое успешно лечится при своевременной диагностике.

Одно из наиболее информативных исследований, позволяющих выявить недуг на ранней стадии, носит название метод ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Анализ ПЦР — не только самое информативное, но и одно из самых доступных исследований, которое позволяет выявить туберкулез на ранних стадиях.

Все живые микроорганизмы, включая вирусы и бактерии, содержат в своей структуре молекулы РНК и ДНК. Выделив эти кислоты, можно с большой достоверностью сказать, какие чужеродные агенты присутствуют в крови человека, и поставить точный диагноз.

Суть метода ПЦР заключается в особой обработке образцов биологических жидкостей, в результате чего можно определить, к какому виду относятся присутствующие в нем микроорганизмы.

Методика ПЦР применяется у людей с тяжелыми поражениями легких в тех случаях и респираторными проявлениями (сильный кашель, кровохаркание), когда точно диагностировать болезнь по клиническим симптомам невозможно.

Рекомендуется пройти исследование и после непосредственного контакта с носителем заболевания. В число преимуществ, которыми он обладает, входят:

скорость выполнения — для получения результата не нужно выращивать культуру возбудителя или проводить другие сложные процедуры;
высокая информативность — при диагностике туберкулеза точность анализа достигает 90% и выше;
высокая чувствительность и специфичность — для выявления возбудителей болезни в материале может содержаться всего одна клетка вируса;
универсальность — для анализа подходят практически любые биологические жидкости: мокрота, кровь, смывы бронхов.

Для сравнения: точность микроскопии мазков мокроты, которая используется для выявления туберкулеза, составляет всего 40-50%, а при низком количестве возбудителей снижается до 10% и меньше. Культуральные исследования мокроты более информативны, но для получения результатов требуется от 2 до 8 недель.

Можно использовать ПЦР на туберкулез вместо Манту, если у человека имеются какие-либо противопоказания к пробе.

К недостаткам методики относится риск получения ложноотрицательного результата. Иными словами, отсутствие в мокроте, крови или моче специфического ДНК еще не говорит об отсутствии туберкулеза у больного.

Важно. При диагностике туберкулеза у детей чувствительность анализа ПЦР ниже, чем у взрослых, и составляет около 25-83%.

Фото 1. Делать ПЦР вместо Манту ребенку, это хороший вариант, если он аллергик или часто болеет.

Процедура проведения анализа ПЦР проводится посредством специального прибора под названием амплификатор, и состоит из четырех этапов. Для проведения исследования необходимы участки ДНК, с которых начинается синтез молекул, нуклеотиды (основы молекул ДНК), а также полимераза, или фермент, ускоряющий проведение процедуры.

Забор биологического материала (мокрота, кровь, смывы бронхов).
Прогревание образца до температуры около 98% для разрушения первичной структуры цепочки ДНК.
Отжиг, или снижение температуры на несколько градусов, чтобы связать праймер с нитью ДНК.
Синтез молекул, необходимых для получения результата.

После проведения 25-30 подобных циклов образуется определенное количество копий ДНК вирусов, по которым легко определить возбудителя заболевания.

Внимание: анализ ПЦР не отличает «мертвые» микроорганизмы от «живых», поэтому результат может быть положительным в течение определенного времени после проведенного лечения.

Если сдается анализ крови ПЦР на туберкулез, то нет необходимости в специальной подготовке, но больным рекомендуется придерживаться общих правил: воздержаться от приема пищи не менее чем на 8 часов, исключить алкоголь и прием медикаментозных препаратов, не курить в течение часа перед забором материала.

Мокроту собирают в утреннее время после чистки зубов и тщательного полоскания полости рта.

Если экссудат выделяется плохо, накануне вечером следует принять отхаркивающий препарат или сделать ингаляцию. Диагностическую ценность имеет мокрота со слизью, гноем, белыми или желтоватыми вкраплениями.

Если взять мокроту на анализ невозможно, для выявления возбудителей заболевания используются смывы из бронхов. Такой анализ не требует подготовки, а забор материала выполняется следующим образом. С помощью гортанного шприца больному вливают в трахею раствор хлорида натрия, который вызывает сильный кашель — выкашлянная жидкость используется для исследования.

Внимание. Результат анализа искажают антибиотики, гепарин и другие препараты, использующиеся для местного лечения, поэтому исследование рекомендуется проводить через 10-14 дней после приема.

источник

Туберкулез – это невероятно распространенное заболевание, которому подвержено около трети населения нашей планеты. Количество больных увеличивается с каждым годом. В некоторых государствах с недостаточно развитой медициной количество больных превышает 80%.

Вместе с тем население даже развитых стран не может быть уверено в надежной защите от заболевания туберкулезом из-за целого ряда факторов. Среди них наиболее значимым является снижение иммунной защиты человека. Микобактерии туберкулеза попадают в наш организм, и иммунитет не в состоянии с ними в большинстве случаев бороться. К сожалению, у современного человека в большинстве случаев иммунная система не функционирует на должном уровне.

Туберкулез – это заболевание инфекционного характера. Оно вызывается некоторыми видами бактерий, чаще всего палочкой Коха. Болезнь поражает легкие, в редких случаях может развиваться и в других органах человека.

Наиболее опасным является то, что на ранних стадиях туберкулез протекает бессимптомно. В одном случае из десяти скрытая болезнь приобретает активную форму.

Симптомами туберкулеза являются:

длительный кашель, иногда с кровью;
стремительная потеря веса;
общая слабость;
ночная потливость.

Туберкулез протекает в двух формах, а именно:

открытой, когда палочка Коха активно выделяется в окружающую среду;
закрытой.

При открытой форме туберкулеза бактерии, вызывающие болезнь, имеются во всех выделениях больного: слюне, моче, в отделяемом свища, даже в кале. Микобактерии содержит также кровь больного. Требуется придерживаться максимальных мер предосторожности, чтобы избежать заражения.

Если заболевание туберкулезом протекает в закрытой форме, человек не представляет угрозы для окружающих.

Для диагностики туберкулеза используется большое количество методов. Наиболее эффективные данные обеспечивают следующие типы анализов на туберкулез:

рентгенография;
флюорография;
туберкулиновая проба кожи, именуемая иначе пробой Манту;
исследование биологического материала на микробиологическом уровне;
анализ крови на туберкулез.

В свою очередь, анализы крови на туберкулез бывают двух видов:

иммуноферментный анализ, или ИФА;
ПЦР диагностика.

В основе первого метода диагностирования туберкулеза лежит выявление антител к микобактериям, вызывающим заболевание. Преимуществом данной методики является возможность проведения большого количества анализов. Вместе с тем применение этого типа анализа наиболее целесообразно в регионах, где инфицированность населения является не слишком высокой.

ПЦР диагностика крови является более эффективным исследованием. Она применяется для того, чтобы выявлять заболевание, имеющее различную локализацию. Также ПЦР диагностика позволяет осуществлять контроль эффективности лечения.

Какой анализ крови является наиболее целесообразным в каждом конкретном случае, определяется врачом, лечащим туберкулез. Но вовремя сдавать анализы призывают все доктора: только так можно узнать количественный и качественный состав крови, диагноз и т. д.

Для анализа на наличие туберкулеза у человека наиболее часто применяется туберкулиновакцинация. Она обеспечивает возможность раннего выявления заболевания и своевременного реагирования. Данная методика основывается на том, что организм взрослых имеет определенную чувствительность к препарату туберкулина. Ее степень зависит от того, вступал ли человек в контакт с микобактериями. Если имеет место заражение, будет наблюдаться туберкулиновая аллергия (так имеется очень чувствительная реакция замедленного типа). Этот анализ именуется пробой Манту. Он вводится подкожно, благодаря чему обеспечивается гораздо большая точность исследований, чем при накожном исследовании.

Анализ туберкулиновых проб позволяет:

выделить группы риска;
осуществить своевременную диагностику первичного инфицирования;
осуществить исследование клинических форм туберкулеза дифференциальным методом.

Если человек ранее не контактировал с бактериями, вызывающими туберкулез, аллергическая реакция на туберкулин у него отсутствует. У зараженного человека образовывается папула (небольшая припухлость). Положительной считается такая проба Манту, при которой размер папулы превышает 5 мм. Подобный анализ является поводом для детального обследования человека на предмет выявления заболевания. Вместе с тем бывает и так, что у человека на пробу Манту положительная реакция говорит не о туберкулезе, а другом заболевании, к примеру простуде, глистной инвазии, хроническом тонзиллите. Для того чтобы минимизировать возможность подобной ошибки, врач-фтизиатр назначает дополнительные анализы крови. Ведь исследование крови чрезвычайно важно при подобном заболевании.

источник

Если Манту дала плохой результат прибегают к дополнительным методам диагностики. Главное выявить заболевание, а вопрос о том, сколько диагностическое обследование стоит, отходит на задний план. К одному из самых точных и разрешенных в любом возрасте относится ПЦР. Анализ мочи на туберкулез данным способом выявляет МКБ сразу же после их попадания в организм. Что собой представляет методика и в чем ее преимущества?

Полимеразная цепная реакция руководствуется принципом молекулярной биологии. Чтобы исследовать урину (или другой биоматериал) используют специальные ферменты. Они могут копировать ДНК микроорганизмов. Специалисты сравнивают материал с имеющейся базой и определяют, есть ли заражение. В случае положительного ответа выясняется степень инфицирования и тип возбудителя.

Тут важна точность, поэтому работники лаборатории должны иметь соответствующие знания и навыки.

Кроме туберкулеза с помощью ПЦР диагностируют и другие инфекционные болезни (гепатит, ИППП, ВИЧ, кандидоз, боррелиоз и др.).

Некоторые родители уверены, что такой метод можно использовать вместо Манту, но это не так. Даже его высокоэффективность не может заменить пробу, которая является утвержденной и обязательной во всех дошкольных и школьных учреждениях. Предоставления в детский сад или школу результата ПЦР может быть недостаточно для допуска ребенка в детский коллектив.

ПЦР мочи на туберкулез эффективный способ выявления патологии, но иногда бывают ложные результаты по отношению к маленьким детям. В этом случае наблюдаются неточности, так как в урине много примесей. Иногда для достоверности и подтверждения диагноза проводятся дополнительные обследования.

Насколько подходящий этот метод в конкретном случае подскажет фтизиатр. Именно у этого специалиста предварительно нужно пройти консультацию.

Какие-либо противопоказания отсутствуют. Делать анализ разрешено:

у детей;
при ОРЗ, ОРВИ, ГРИПпе, кори и пр.;
во время аллергий и др.

Нецелесообразно проводить возрастной категории от 0 до 3-ех лет из-за получения недостоверных результатов.

Данный метод обследования выбирают чаще других из-за отсутствия в нем противопоказаний и высокого процента получения достоверных результатов.

Практика показывает, что метод оправдывает свою стоимость. Плюсы ПЦР мочи:

чтобы вынести «вердикт» не нужно вводить в организм никакие препараты, так как анализ производят в пробирке в условиях лаборатории;
безболезненный;
для получения результатов не нужно ждать несколько дней, достаточно считанных часов, максимум одного дня (чего нельзя ожидать, если делать посев мочи);
выявляет возбудитель даже тогда, когда другие методы не принесли результата;
обнаружить болезнь можно на ранней стадии;
анализ высокочувствителен, поэтому пропустить туберкулез сложно;
ложные результаты наблюдаются редко (обычно вина некомпетентности медработника или неправильный сбор урины самим пациентом);
инфекционный агент выявляется, даже если биоматериала содержится минимальное количество.

к содержанию ↑

высокая цена (но она колеблется в зависимости от курса доллара и других факторов);
бывают ложные результаты (около 10%).

Ложные ответы появляются по разным причинам.

Если сбор урины осуществлялся неверно, были нарушены рекомендации.
Когда работник лаборатории не имеет нужных знаний для проведения анализа или им была нарушена техника исследования материала.
Если в собранную порцию мочи не попали микобактерии.
В моче много сторонних примесей, которые искажают результат (обычно у малышей).

Все вышеперечисленное – повод использовать дополнительные диагностические мероприятия.

Как сдавать мочу? Чтобы урина не стала причиной неверного ответа, нужно осуществить правильный ее сбор. Немаловажна подготовка.

Если анализ планируется взрослому человеку, то за 1-2 суток до него нужно забыть о половых контактах.
Важно сказать врачу об антибактериальной терапии (если таковая была за последние недели). Нужно выждать не менее месяца и только потом приступать к обследованию. Любые медикаментозные препараты повлияют на результат анализа.
Лучшее время для сбора – утро. Предварительно не допускается употребление пищи и каких-либо напитков.
Половые органы предварительно не обмываются.
Важно приобрести специальный вакуумный набор, в который будет собираться моча. Поместить ее в обычную баночку, а потом перелить не выйдет. Вследствие этого в урину попадут бактерии или вирусы из внешней среды, которые помешают получить достоверный результат. Контакта с внешней средой нужно избегать. Специальный набор состоит из стерильной баночки с крышкой, пробирки и трубки.
В баночку человек опорожняет мочеиспускательный пузырь. Важно собрать первую порцию урины.
После контейнер закрывается и вставляется пробирка. Она наполнится содержимым самостоятельно. Повлияет на это отрицательное давление.
После наполнения пробирки контейнер и трубка утилизируются.
Полученный биоматериал отвозится в лабораторию, где проведут сам анализ. Доставляется только пробирка с имеющейся в ней мочой.

Если обследуемый по каким-то причинам не в состоянии сам собрать мочу, ему придет на помощь специалист из клиники. Специально обученные люди приедут со всем необходимым и сделают все без ошибок.

Проведение ПЦР при туберкулезе проводится в несколько этапов. Рассмотрим каждый детально.

Сначала молекулы ДНК делятся на компплементарные нити путем нагревания до высоких температур.
Потом в полученный материал вводят праймеры. Один их тип комплементарен ДНК 1-ой цепи (ее началу), второй ДНК 2-ой (ее концу). Тут же добавляют состав из четырех типов DDNTP. Далее происходит соединение всех компонентов.
Состав нагревается и в него вводится термостабильная полимераза ДНК. После исследуемые пробы охлаждаются. Все это происходит в термостатах (термальных циклерах).
В конце специалист оценивает полученные результаты. Это делается с использованием специального геля при светящихся лучах ультрафиолета. Электрофореграмму, которую получают, анализируют и результат фиксируют.

Оборудование, с помощью которого проводится анализ дорогостоящее и присутствует не везде.

Расшифровать результат сможет только квалифицированный специалист. При этом учитывается возраст пациента. Ответ основывается на количестве имеющихся в пробе патогенных микроорганизмов.

Положительный значит, что в моче имеются МБК. Это повод либо пройти дополнительную диагностику (при необходимости), либо начинать лечение туберкулеза. У детей обычно бывают ложные результаты, поэтому назначают иные методы обследования, которые подтвердят диагноз.

При получении отрицательного ответа можно быть спокойным, инфицирования нет. При наличии симптоматики, которая говорит об обратном, обследование не заканчивается.

После того, как работник лаборатории расшифровал результат, бумага, на которой указывается ответ, направляется узкому специалисту, тому, кто давал направление на анализ. Фтизиатр изучает данный документ, на основе которого решает, что дальше делать.

Ниже можно ознакомиться с информацией о том, какие приблизительные цены на ПЦР мочи в медицинских лабораториях. Для сравнения представляем три популярных учреждения.

Наименование медицинского центра	Адрес	Стоимость анализа
Инвитро	г. Москва, Алексеевский, Кулаков переулок, 13	365 рублей
Медлайн-сервис	г. Москва, Пятницкое шоссе, д. 41	390 рублей
Центр Роса	г. Москва, улица Гвоздева, д. 5	564 рубля

Из вышеописанного можно сделать вывод, что стоимость на анализ не превышает 400 рублей. Такая сумма не может остановить больного при необходимости подтверждения диагноза.

Имейте в виду! Иногда в клиниках присутствуют акции и скидки. Следить за ними можно на сайтах лабораторий, узнать в телефонном режиме или не ресепшене в самом офисе.

Анализ мочи на ПЦР – методика, которую можно применять всем без исключения. Она не рекомендована малышам, так как результат может быть ложным. Важно правильно подготовиться к анализу и собрать материал. Сбор осуществляется в домашних условиях самостоятельно, допускается помощь специалиста и забор в условиях клиники (при необходимости). Нельзя помещать урину в контейнеры, непредназначенные для анализа. Тут приобретается специальный набор. Проводят саму диагностику квалифицированные работники лаборатории, придерживаясь всех правил. Без наличия дорогостоящего оборудования исследовать урину на ПЦР будет невозможно.

Методика эффективна и способна выявить туберкулез даже тогда, когда количество микобактерий в организме минимально. Но, несмотря на это пробу Манту им заменить нельзя. Подобным способом целесообразно подтверждать диагноз или контролировать, нет ли рецидива.

источник

Название	Стоимость	Срок выполнения	Код
Квантифероновый тест. Альтернатива реакции Манту. Диагностика туберкулеза.	3980	3-4 дня	22044
T-SPOT (Т-СПОТ) Альтернатива реакции Манту/Диагностика туберкулеза.	6000	5 суток	H-1
Определение суммарных антител класса IgG, IgM, IgА к Mycobacterium tuberculosis в сыворотке крови.	520	4 дня	1088
Выявление в биоматериале ДНК М.tuberculosis.	690	4 дня	673
Исследование мочи на M. tuberculosis (ВК).	340	1 день	1090
Исследование мокроты на ВК.	340	1 день	770

Туберкулез является одним из самых распространенных и опасных заболеваний во всем мире. На разработку эффективных и быстрых методов диагностики данной патологии ежегодно тратятся огромные суммы денег и усилия множества ученых разных национальностей. Главные проблемы выявления туберкулеза на сегодня:

Отсутствие специфических клинических проявлений заболевания (кашель, субфебрильная температура, бледность и слабость не могут точно подтвердить наличие туберкулезного процесса);
Отказ от ежегодных флюорографий взрослыми и запреты родителей делать их детям Манту;
Увеличивающаяся распространенность туберкулеза во всех регионах страны;
Отсутствие простых и быстрых методов исследования бактерий в организме человека.

Сдать современные анализы на туберкулез предлагает медицинский центр «МедПраксис Клиник» в Кудорово, недалеко от станции Дыбенко. Здесь используются качественные зарубежные реактивы, быстро предоставляются результаты, а их точность гарантируется в зависимости от возможностей самого метода.

Инъекция Манту, которая предполагает внедрение специального вещества, содержащего бактериальный материал внутрикожно, известна всем как единственно возможный скрининг-метод туберкулеза детям до 14 лет, а также пациентам, у которых заподозрили заболевание. Данное исследование является бесплатным и простым в применении, но имеет ряд недостатков:

Большой процент ложных результатов из-за неправильной техники выполнения или ухода за папулой;
Нецелесообразно выполнение исследования пациентам с ослабленным иммунитетом;
Противопоказания к Манту такие же, как для вакцинации живыми и убитыми вакцинами.

Современная медицина предлагает альтернативный T-SPOT анализ крови на туберкулез, который является заменой Манту. Единственная проблема данного обследования – его высокая стоимость. Его не получится применить всем группам населения, требующим проведения пробы туберкулином, но пациенты, знающие о существовании такого исследования, смогут сами обратиться в лабораторию.

T-SPOTанализ позволяет выявить иммунологический ответ человека на попадание в организм микобактерий туберкулеза (палочки Коха). Суть исследования: материал (кровь) капают на специальный реагент, после чего ожидают окончания реакции. Анализ работает с неспецифическими клетками иммунной системы – интерфероном. Ложноположительные результаты при данном исследовании возможны лишь при наличии сопутствующего заболевания ВИЧ-инфекции.

Стандартом обследования пациентов с подозрением на туберкулез по-прежнему остается рентгенологическое исследование. Однако дополнительные лабораторные анализы позволяют подтвердить наличие микобактерий в организме человека. К ним относятся:

Серологический анализ крови при туберкулезе легких и других локализаций. Не самый точный метод диагностики, который используется только для выявления активных форм. Используется редко, но иногда остается единственным вариантом подтвердить наличие микобактерий в организме.
ПЦР (полимеразная цепная реакция). Данное исследование позволяет обнаружить ДНК возбудителя в организме человека. Его неоспоримое достоинство – возможность подсчета количества микобактерий в организме, что позволяет отслеживать динамику терапевтических мероприятий.
Исследование мокроты на наличие бактерий туберкулеза. Очень распространенное исследование, которое имеет смысл только в том случае, если процесс локализуется в легких. Чувствительность метода не очень высокая, но в большинстве случаев его достаточно для подтверждения диагноза.
Анализ мочи на туберкулез. Выявление специфических бактерий в моче не столь эффективно, как в крови, но иногда бывает полезным и единственным методом, где они обнаруживаются.

Диагностика туберкулеза обязательно должна быть комплексной, поэтому сдачи одних лишь анализов явно недостаточно для выставления полноценного диагноза. Получить результаты в нашей лаборатории около метро Дыбенко, вы сможете в течение 5 дней (зависит от вида исследования, иногда достаточно суток). Затем необходимо продолжить обследование у врача общего профиля или фтизиатра.

Чтобы сдать общий анализ крови при туберкулезе и другие более специфические исследования, следует обратиться в лабораторию при центре семейной медицины «МедПраксис Клиник» в Кудрово. Преимущества нашей работы:

Клиника выдает бесплатные контейнеры для сдачи анализа;
Исследования выполняются максимально быстро;
Сообщение о готовности результатов в телефонном режиме;
Возможность выбрать удобное время для сдачи анализа;
Наличие современных тестов, которые не найти в других лабораториях.

Что касается те-спот (T-SPOT) анализа крови, то его цена очень высока. Это обусловлено маленьким сроком использования метода, из-за чего еще не было разработано более дешевых аналогов реактивов. Стоимость этого исследования полностью оправдана, ведь специфичность метода поражает.

источник

Что такое ПЦР диагностика
Ответственность перед сдачей анализов
Процесс сбора анализов
Как расшифровываются результаты

В последнее время ПЦР на туберкулез считается наиболее точным анализом, хотя и существуют другие методы. Данное заболевание набирает обороты, поэтому специалисты стараются изобрести новые технологии по выявлению палочки Коха в организме. Всем известно, что туберкулез является инфекционной болезнью, которая может передаваться как воздушно-капельным путем, так и через насекомых и т.д. поэтому крайне важно проводить периодические обследования.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет всего в течение нескольких часов обнаружить возбудителя инфекции, причем выявить можно даже 1-2 молекулы среди огромного количества. Данный тест имеет массу достоинств, которые проявляются в следующем:

100%-ное выявление, так как в биологической пробе определяется от 10 до 100 клеток;
специфичность ДНК МБТ является очень высокой;
скорость анализ имеет от 4 до 4,5 часа;
диагностика туберкулеза легких, что практически нереально для других методов;
выявляется особенный фрагмент, который имеется только в конкретном возбудителе.

С помощью этой диагностики можно своевременно не только обнаружить инфекцию, но и изолировать человека и назначить ему соответствующее лечение. Особенно это касается туберкулеза, потому что точное расположение палочки Коха выявить проблематично. Кроме того, данный анализ способен исследовать устойчивость микобактерий к определенному медицинскому препарату, тем самым определяется метод лечения. Чтобы провести полимеразную цепную реакцию на устойчивость, используют гены, запоминающие невосприимчивость к некоторым лекарствам, после чего через двое суток можно получить результат. Это благотворно сказывается на профилактике заболевания.

Следует отметить, что ПЦР выявляет возбудителей не только туберкулезной палочки, но и многих других заболеваний и даже ВИЧ. Анализ проводится с любой биологической жидкостью. Это могут быть:

кровь;
моча;
кал;
выделения половых органов;
мокрота;
жидкость спинномозговая;
соскоб со всех органов.

Собранный материал помещается в специальный амплификатор, то есть реактор, где находятся некоторые ферменты, благодаря которым идет цепная реакция по удвоению ДНК инфекции. После этого производится расшифровка. Результат, как правило, бывает либо положительный, либо отрицательный.

Назначается диагностика туберкулеза в тех случаях, когда, во-первых, существуют основные симптомы болезни, во-вторых, человек очень длительное время болеет острыми заболеваниями дыхательных путей и, в-третьих, люди контактируют с больными туберкулезом. Но врач может провести данный анализ и при наличии сомнительных снимков после рентгенологического обследования.

На полимеразную цепную реакцию могут направить такие специалисты, как пульмонолог, фтизиатр, терапевт, а детей — педиатр. Конечно, есть правила, которые необходимо соблюдать пациенту перед сдачей, например, крови на туберкулез. Прежде всего, нельзя употреблять пищу за 4-5 часов до сдачи, а за сутки до этого нужно исключить из своего рациона жирные и аллергенные продукты. Также желательно не использовать антибиотики и личные средства гигиены в виде гелей.

Но не только больной обязан соблюдать необходимые условия. То же относится и к врачам. Чтобы забор анализов на туберкулез был проведен правильно, нужно делать это только в стерильных условиях, иначе в жидкую среду могут попасть другие микроорганизмы, следовательно, интерпретация будет неверной. Все инструменты, приборы и контейнеры тоже должны быть в стерильном виде.

Итак, материал собирается в специальные контейнеры, которые при необходимости специалист дает пациенту. Например, моча собирается только первая после пробуждения человека утром. Но при этом необходимо провести утренние водные процедуры в соответствующих местах. Мочи для сбора достаточно от 20 до 30 мл. А вот синовиальную жидкость из спинного мозга и прочие сложные анализы берет только высококвалифицированный специалист, находящийся в стационарных условиях.

У женской половины человечества мазок берет только гинеколог на специализированном кресле, а у мужчин соскоб или мазок забирается из мочеиспускательного канала (из наружной части). Из зева мазок берет врач специальной лопаткой или другими инструментами. Кровь берется непосредственно из вены стерильными шприцами.

На последнем этапе сбора доктор с учетом всех требований транспортировки и хранения направляет образец в специальную лабораторию для дальнейшего исследования. Для этого персонал лаборатории помещает кровь или прочие мазки в пробирку, в которую заблаговременно добавлено вещество, препятствующее преждевременному старению образца.

В случае с кровью, что особенно важно, данное вещество не позволяет ей свернуться, следовательно, наличие сгустков исключено. Пробирки при этом не встряхиваются, так как можно повредить состояние эритроцитов. Это все нужно для того, чтобы легче и быстрее было определить все компоненты крови.

Потом кровь на туберкулез центрифугируют, чем отделяют от плазмы клеточный осадок, который и изучается под микроскопом. Изучив первоначальные данные, добавляют фермент (транскриптазу) и при определенном температурном режиме проводят следующую цепную реакцию. Благодаря этому образуются фрагменты генетического материала, которые и подвергаются расшифровке.

Не всегда анализ бывает правдивым. Ложноположительный результат бывает только в том случае, если не соблюдены все требования по подготовке и сдаче мазков и т.д. Именно поэтому следует как пациенту, так и врачам строго придерживаться всех правил, о которых говорилось выше.

Расшифровка может быть как простой, так и сложной. К первой относится определение «отрицательно» или «положительно», что свидетельствует о том, что при отрицательной расшифровке пациенту не о чем беспокоиться, т.к. инфекций не обнаружено.

При положительных результатах простой формы количество содержащихся возбудителей является ничтожно малым. Дело в том, что в медицине существуют определенные нормы, благодаря которым можно определить степень устойчивости к заболеваниям.

Но в сложной расшифровке теста определяется конкретное содержание тех или иных микроорганизмов, что позволяет сделать самые точные выводы. Естественно, ни один пациент не сможет самостоятельно расшифровать все эти цифры, а врач способен подробно объяснить больному.

Именно эти цифры показывают, где расположены очаги, на какой стадии находятся и что является причиной возникновения заболевания туберкулезом.

На основании расшифровки специалисты назначают метод лечения и пр. Никогда не стоит забывать о том, что малейшее наличие возбудителей свидетельствует об их присутствии в организме. Поэтому рано или поздно инфекция может распространиться дальше и стадия туберкулеза увеличится. Не следует безответственно относиться к собственному здоровью, всегда следуйте рекомендациям специалистов.

источник

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

Кровь.
Слюна.
Мокрота.
Выделения из половых органов.
Смывная жидкость бронхов.
Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.

Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.

ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).

Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:

Длительный контакт с больным туберкулезом.
Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
ВИЧ-инфекция.
Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).

Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.

Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:

Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употреблять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.

ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.

Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.

Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.

В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:

Зона приемки и сортировки проб.
Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
Зона проведения реакционных проб.
Зона для учета результатов и расшифровки анализов.

Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.

Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.

В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.

В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.

Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).

Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).

Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.

В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

источник

Наборы реагентов «Амплитуб» для быстрой диагностики туберкулёза, в том числе с множественной и широкой лекарственной устойчивостью (МЛУ-ТБ, ШЛУ-ТБ).

В 2004 году по инициативе д.м.н., профессора Михаила Александровича Владимирского, заведующего сектором молекулярной диагностики туберкулёза НИИ Фтизиопульмонологии Первого МГМУ им. И.М.Сеченова, мы начали разработки в области ПЦР-диагностики туберкулёза.
«Амплитуб» — технология быстрой молекулярно-генетической диагностики туберкулёза для выявления микобактерий туберкулёзного комплекса, определения инфекционной опасности больного, определения антибиотикоустойчивости к препаратам I и II ряда, идентификации и генотипирования микобактерий.

Технология «Амплитуб» состоит из 3-х основных этапов: пробоподготовки, выделения ДНК и полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени. Оригинальные технологические разработки нашей компании применяются на каждом из этих этапов и в совокупности обеспечивают высочайшую чувствительность, специфичность и информативность анализа, быстроту получения результатов и их высокую достоверность.

Пробоподготовка: в процессе инкубации с «Амплитуб-Преп» происходит инактивация микобактерий, разжижение и гомогенизация респираторных образцов.

Выделение ДНК: использование оригинальных реагентов и магнитных частиц обеспечивает получение максимального количества чистой ДНК и позволяет автоматизировать процесс выделения ДНК.

ПЦР в реальном времени: одновременная детекция нескольких различных участков генома комплекса микобактерий туберкулёза (МБТ) увеличивает информативность и достоверность анализа.

Преимущества технологии «АМПЛИТУБ»

Скорость
Технология «Амплитуб» позволяет сократить время, необходимое для обнаружения M.tuberculosis complex и определения лекарственной устойчивости с 1-3 месяцев до 1 дня в сравнении с традиционными культуральными методами.

Высокая достоверность результатов
Высокая достоверность результатов обеспечивается как на этапе обнаружения МБТ, так и на этапе определения антибиотикоустойчивости. Применение технологии «Амплитуб» позволяет обнаружить МБТ с высокой чувствительностью (не более 100 КОЕ/мл мокроты) и 100% специфичностью. Точное определение мутаций в наиболее значимых кодонах основных генов, ассоциирующихся с лекарственной устойчивостью к рифампицину и изониазиду, позволяет определить 90% антибиотикоустойчивых образцов со специфичностью, близкой к 100%

Безопасность
Клинические образцы инактивируются с помощью «Амплитуб-Преп» уже на этапе взятия и транспортировки биологического материала.

Возможность работы с клиническими образцами
Важным преимуществом технологии «Амплитуб» является возможность исследования не только культур микобактерий, но и непосредственно клинического материала (мокроты, промывных вод бронхов, спинномозговой жидкости, экссудата, пунктата, биоптата, мочи, отделяемого половых путей).

Автоматизация
Роботизированная станция TECAN и набор реагентов «М-Сорб-Туб-Автомат» позволяют полностью автоматизировать наиболее трудоёмкий этап выделения ДНК. Технология «Амплитуб» обеспечивает автоматический расчет результатов ПЦР-анализа с указанием количества выявленного возбудителя в образце и конкретных мутаций, определяющих устойчивость к антибиотикам.

I этап – Пробоподготовка, инактивация

«Амплитуб-Преп» (инактивирующий реагент) специально адаптирован для обработки мокроты. Обладает исключительными муколизирующими свойствами, благодаря которым может использоваться вместо раствора NALC-NaOH для обработки мокроты перед молекулярно-генетическими исследованиями.

Клинические и технические испытания «Амплитуб-Преп» (инактивирующего реагента) проводились в ЦНИИ туберкулёза (Москва). 118 образцов мокроты от тяжёлых бациллярных больных с острым течением туберкулёза делили на две части, обрабатывали одну часть «Амплитуб-Преп», другую — NALC-NaOH.
Все образцы тестировали на BACTEC MGIT 960 и методом ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ). Рост микобактерий наблюдался только в контрольной группе, обработанной NALC-NaOH. В образцах, обработанных «Амплитуб-Преп», рост микобактерий не обнаружен. Результаты ПЦР-анализа образцов из обеих групп были положительными.

Компанией «Синтол» разработан ряд наборов реагентов для выделения ДНК микобактерий.

«М-Сорб-Туб» («Амплитуб-РВ» комплект №1)

набор реагентов для выделения ДНК (на магнитных частицах)

Адаптирован для выделения ДНК микобактерий из мокроты, промывных вод бронхов, спинномозговой жидкости, экссудата, пунктата, биоптата, мочи, отделяемого половых путей, культур клеток.
Набор «М-Сорб-Туб» обеспечивает лизис клеток, сорбцию ДНК на магнитных частицах, осаждение ДНК центрифугированием, промывку и элюцию ДНК.
Предлагаемая компанией «Синтол» методика выделения ДНК сочетает в себе достоинства сорбционного метода и метода осаждения спиртом.
Использование в качестве сорбента покрытых оксидом кремния магнитных частиц более удобно в сравнении с использованием других сорбентов, позволяет максимально стандартизировать и автоматизировать методику выделения ДНК.
В каждый исследуемый образец добавляется внутренний положительный контроль (ВПК), по реакции амплификации ВПК судят о наличии/отсутствии ингибиторов ПЦР и эффективности выделения ДНК.

«М-Сорб-Туб-Автомат» («Амплитуб-РВ» комплект №1а; №1в)

набор реагентов для выделения ДНК микобактерий из клинических образцов и культур клеток на автоматизированных станциях TECAN

Набор представляет собой модификацию набора реагентов «М-Сорб-Туб», разработанную специально для использования на автоматизированных станциях фирмы TECAN, что обеспечивает ряд следующих преимуществ.

Снижение риска контаминации во время выделения ДНК практически до нуля.
Значительное уменьшение трудоёмкости процесса выделения ДНК.
Стандартизированное выделение ДНК из клинических образцов.
Экономическая выгода: низкий расход пластика и реактивов.

набор реагентов для ускоренной пробоподготовки и выделения ДНК микобактерий из образцов мокроты

Совмещение процесса пробоподготовки и выделения ДНК из образцов мокроты позволяет провести эти два этапа работы за 1 час.
Минимальное количество манипуляций при пробоподготовке и выделении ДНК. Набор состоит из 3 рабочих растворов: «Амплитуб-Преп», лизирующего и элюирующего растворов.
Использование «Амплитуб-Преп» в составе набора «Экстра-Туб» позволяет увеличить выход ДНК в 5‑10 раз.

III этап – ПЦР в реальном времени

Обнаружение и количественное определение комплекса МБТ

Набор реагентов АМПЛИТУБ-РВ — это:

высокая достоверность анализа благодаря одновременному обнаружению двух специфичных генов M.tuberculosis complex: IS6110 и regX3;
оценка пригодности образца ДНК для определения антибиотикоустойчивости;
высокая чувствительность (не более 100 КОЕ/мл мокроты или 1–10 копий фрагментов ДНК в реакции) и 100%‑ая специфичность, подтверждённые на панели QCMD (Quality Control for Molecular Diagnostics) Mtb EQA (UK).

Определение антибиотикоустойчивости МБТ к препаратам I и II ряда

Наборы реагентов АМПЛИТУБ-МЛУ-РВ, АМПЛИТУБ-FQ-РВ — это:

диагностика форм туберкулеза с лекарственной устойчивостью, в том числе множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) и широкой лекарственной устойчивостью (ШЛУ);
быстрая детекция мутаций M.tuberculosis, ассоциирующихся с устойчивостью к антибиотикам первого и второго ряда (рифампицину, изониазиду, этамбутолу, фторхинолонам);
достоверность результатов, ежегодно подтверждаемая при проведении Федеральной службой внешней оценки качества (ФСВОК) Росздравнадзора испытаний шифрованных тест-культур и образцов.

Наборы АМПЛИТУБ-МЛУ-РВ и АМПЛИТУБ-FQ-РВ основаны на использовании оригинальной мультиконкурентной аллель-специфичной методики ПЦР в реальном времени, позволяющей выявлять мутации в генах микобактерий туберкулеза, ответственных за устойчивость к конкретным антибиотикам.

Ниже представлен перечень производимых нами наборов серии «Амплитуб»

Амплитуб-Преп — реагент для предобработки образцов, предположительно содержащих ДНК микобактерий (кат.№R-001) Регистрационное удостоверение № РЗН 2017/6634
АМПЛИТУБ-РВ — набор реагентов для для выделения, обнаружения и количественного определения ДНК микобактерий туберкулезного комплекса (кат. № ОМ-200а и ОМ-200ат (для автоматизированной станции TECAN)) Регистрационное удостоверение № ФСР 2010/07635.
Амплитуб МБТК + НТМБ — набор реагентов для обнаружения ДНК микобактерий туберкулёзного комплекса (МБТК) и нетуберкулёзных микобактерий (НТМБ)
АМПЛИТУБ-МЛУ-РВ — набор реагентов для определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулёзного комплекса к рифампицину и изониазиду методом ПЦР в реальном времени (кат. № ОМ-400) Регистрационное удостоверение № ФСР 2010/07636.
АМПЛИТУБ-FQ-РВ — набор реагентов для выявления генетических маркеров ДНК микобактерий туберкулёзного комплекса, ассоциированных с устойчивостью к фторхинолонам, методом ПЦР в реальном времени (кат. № ОМ-800) Регистрационное удостоверение № РЗН 2017/5772
АМПЛИТУБ-ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ — набор реагентов для дифференциации видов микобактерий, входящих в M.tuberculosis complex (M.tuberculosis, M.bovis, M.bovis BCG и др. виды) (кат. № ОМ-114)
АМПЛИТУБ-Beijing — набор реагентов для определения генотипа Beijing микобактерий туберкулёза (кат.№ ОМ-115)
«Экспресс-Туб» — набор реагентов для быстрого выделения ДНК микобактерий из культур клеток (кат. № ОМ-518)

В 2006 году в НИИ Фтизиопульмонологии Первого МГМУ им. И.М.Сеченова совместно с ЗАО «Синтол» был проведен скрининг более 2000 клинических образцов культур МБТ из 25 регионов Российской Федерации. Процент МЛУ-MБТ штаммов (к рифампицину и изониазиду), полученных от впервые выявленных пациентов, составил 21,9%, а процент MЛУ-MБТ штаммов, полученных от ранее леченных больных, был 58,5%. Совпадение результатов с данными микробиологическогоанализасоставило 94%. В рамках мониторинга был проведен молекулярно-генетический анализ диапазона и частоты встречаемости различных кодонов и мутаций в генах МБТ, ответственных за устойчивость к рифампицину и изониазиду.
В 2007 году проведены клинические испытания наборов по определению устойчивости к рифампицину и изониазиду.
В 2008–2011 годах проведена апробация наборов по определению устойчивости к препаратам резервного ряда (фторхинолонам, капреомицину, амикацину). В 2010 году разработан и испытан «Инактивирующий реагент А».
В настоящее время он продаётся под торговой маркой «Амплитуб-Преп».
В 2014–2017гг. в сотрудничестве с ФГБНУ «ЦНИИТ» разработан набор «Амплитуб-МБТК+НТМБ», позволяющий в 1 пробирке обнаружить ДНК микобактерий туберкулёзного комплекса и ДНК нетуберкулёзных микобактерий (без определения конкретного вида НТМБ).
В настоящее время ведётся разработка набора, позволяющего определять наиболее актуальные для российской популяции виды НТМБ.

Принцип мультиконкурентной аллель-специфичной методики ПЦР в реальном времени

В формате одной пробирки используются 5’-флуоресцентно-меченые аллель-специфичные праймеры с общим комплементарным им 3’-меченым олигонуклеотидом-гасителем и контрольный флуоресцентный зонд, комплементарный участку ДНК без мутаций.
При отсутствии мутаций в ДНК нарастание флуоресценции в ходе ПЦР-РВ наблюдается только по флуорофору зонда.
При наличии мутаций в ДНК нарастание флуоресценции в ходе ПЦР-РВ наблюдается как по флуорофору зонда, так и по флуорофору 5’-флуоресцентно-меченого аллель-специфичного праймера. Данный метод позволяет определить не только точку мутации, но и процент устойчивого мутантного штамма МБТ на фоне дикого.

Интерпретация результатов выявления мутаций на примере
531 кодона rpoB гена M.tuberculosis

Гены, кодоны, замены, используемые в наборах реагентов
АМПЛИТУБ-МЛУ-РВ при определении антибиотикоустойчивости

Использование автоматизированных станций Freedom EVO (TECAN, Швейцария) для молекулярно-генетической диагностики туберкулёза

В 2011 году по инициативе сотрудников лаборатории молекулярно-генетических методов исследования ЦНИИТ РАМН группа разработчиков из ЦНИИТ под руководством профессора Черноусовой Ларисы Николаевны и «Синтола» впервые в России внедрила в лабораторную практику высокопроизводительную автоматизи-рованную систему выделения ДНК микобактерий на платформе Freedom EVO (TECAN) с использованием наборов реагентов «Амплитуб». Это позволило значительно сократить трудоёмкость ПЦР-диагностики туберкулёза и увеличить поток анализов.

Время анализа МБТ при использовании автоматизированных станций Freedom EVO («TECAN», Швейцария) и наборов реагентов «Амплитуб» («СИНТОЛ», Россия)

Трудозатраты — 1 час
Продолжительность выделения ДНК — не более 2 часов
Подготовка к амплификации и ПЦР-РВ — 1,5 часа

ИТОГО: результаты анализа будут готовы через 3,5 часа
Оператор затратит 1 час своего рабочего времени.

Устройство автоматизированной станции Freedom EVO («TECAN», Швейцария) показано ниже:

Выбирая технологию «Амплитуб» («Синтол») на платформе
Freedom EVO («TECAN»), Вы получаете:

Обнаружение возбудителя туберкулёза — 48 образцов за 3 часа.
Определение лекарственной устойчивости к препаратам I и II ряда за 1 день.
Уменьшение трудозатрат в 6 раз.
Увеличение производительности лаборатории.
Безопасность работы благодаря «Амплитуб-Преп».
Стандартизованное выделение ДНК.
Снижение риска контаминации лаборатории.
Низкую себестоимость 1 анализа.
Признательность фтизиатров за быструю и точную диагностику!

источник